Sản xuất streptomycin Nhóm 19 MỤC LỤC Giới thiệu chung 1.1 Khái niệm thuốc kháng sinh 1.2 Kháng sinh streptomycin -5 Nguyên liệu sản xuất -8 Giống vi sinh vật -10 3.1 Mô tả khái quát -10 3.2 Hình thái sinh lý học -10 3.3 Tiêu chuẩn chọn giống 11 Quy trình công nghệ 11 4.1 Qui trình theo sơ đồ khối 11 4.2 Qui trình dạng sơ đồ thiết bị 12 Giải thích quy trình công nghệ -13 1.Nhân giống 13 2.Lên men 13 3.Lọc 16 4.Xử lý enzyme -17 5.Tẩy màu 17 6.Trích ly -18 7.Kết tinh -19 8.Ly tâm 19 9.Sấy chân không -20 Sản phẩm kháng sinh streptomycin -21 6.1 Các tiêu chất lượng -21 6.2 Những lưu ý sử dụng kháng sinh streptomycin -22 Tài liệu tham khảo 23 Trang Sản xuất streptomycin Nhóm 19 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1: Công thức phân tử Streptomycin -6 Hình 2: Vị trí tác dụng số chất kháng sinh Hình 3: Vị trí tác dụng kháng sinh ức chế tổng hợp protein Hình 4: Sơ đồ chuyển hóa glucose thành streptomycin Str Streptomixini Hình 5: Vi khuẩn Streptomyces griseus 10 Hình 6: Động thái trình lên men streptomycin nhờ streptomyxini 14 Hình 7: Thiết bị lên men dạng xylanh 16 Hình 8: Thiết bị lọc thùng quay -17 Hình 9: Sơ đồ hệ trích ly gồm nhiều cặp khuấy lắng hoạt động nghịch dòng 19 Hình 10: Thiết bị trích ly có chén xoay dạng côn 20 Hình 11: Thiết bị sấy phun 21 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1: Một số chất kháng sinh sản xuất theo qui mô công nghiệp Bảng 2: Các tiêu chất lượng streptomycin sulfate thành phẩm 22 Trang Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Giới thiệu chung: 1.1 Khái niệm thuốc kháng sinh: Chất kháng sinh (antibiotic) hiểu chất hoá học xác định, chất enzym, có nguồn gốc sinh học (trong phổ biến từ vi sinh vật), với đặc tính nồng độ thấp (hoặc thấp) có khả ức chế mạnh mẽ tiêu diệt vi sinh vật gây bệnh mà đảm bảo an toàn cho người hay động vật điều trị Như chất hóa học gọi chất kháng sinh phải đảm bảo yêu cầu bản: a) Phải vi sinh vật tạo b) Với liều lượng nhỏ, có khả tiêu diệt vi sinh vật khác Trong thực tế có nhiều chất vi sinh vật tạo ra, muốn tiêu diệt vi sinh vật cần số lượng lớn Ví dụ 1: Cồn (C2H5OH) nấm men saccharomyces cerevisae tạo muốn tiêu diệt vi sinh vật khác cần phải có số lượng lớn Chính cồn không ghép vào nhóm chất kháng sinh Ví dụ 2: chất asen, chì, thủy ngân có khả tiêu diệt vi sinh vật nồng độ thấp chúng chất vi sinh vật tạo Do đó, chúng hoàn toàn chất kháng sinh Một vấn đề thứ hai phải hiểu rõ độc tố khác với kháng sinh chỗ nào? Về mặt kháng sinh độc tố giống chỗ: có số độc tố chất hữu cơ, kháng sinh chất hữu cơ, nhiều độc tố chất vô Điểm khác lớn độc tố chất kháng sinh tính gây độc đặc hiệu Do phát triển vi sinh vật môi trường, trải qua nhiều cọ xát với điều kiện môi trường nên vi sinh vật muốn tồn phải tiến hành trình cạnh tranh Đấu tranh sinh tồn chất sống Trong trình đấu tranh sinh tồn này, sinh vật có vũ khí riêng cho Riêng vi sinh vật tồn khả thích nghi mạnh, khả sinh sản phát triển mạnh, khả tạo độc tố kháng sinh Độc tố thường hoạt động riêng, hay nói cách khác tính đặc hiệu, kháng sinh chất vi sinh vật tạo ra, có tính đặc hiệu cao Kháng sinh tạo để chống lại vi sinh vật định đó, tạo thành chất kháng sinh thể mang tính chất loài Kháng sinh vi sinh vật tạo để chống lại vi sinh vật khác Hiện người ta tìm nhiều loại kháng sinh khác nhau, có 1% số có giá trị thực tiễn y học sản xuất theo quy mô công nghiệp Hiện người ta biết đến 8000 kháng sinh loại hàng năm có vài trăm chất kháng sinh tìm Các loại kháng chủ yếu tổng hợp từ: • Steptomyces Trang Sản xuất streptomycin • Penicillium • Bacillus Nhóm 19 Các loại kháng sinh sản xuất theo qui mô công nghiệp trình bày bảng 1: Bảng 1: Một số chất kháng sinh sản xuất theo qui mô công nghiệp STT 10 11 12 13 14 15 Chất kháng sinh Baxitracine Cephalosporin Cloramphenicol Ciclohecimit Ciclocerin Eritromicine Grizeofulvin Canamicine Lincomicine Neomicine Nistatin Penicillin Polimicine Streptomycin Tetracycline Vi sinh vật Bacillus licheniformis Cephalosporium Sp Hóa tổng hợp Streptomyces griseus S orchidaceus S erythreus Penicillium griseofulvin S kanamyceticus S lincolnensis S fradiae S.noursei Penicillium chrysogesrum Bacillucpolymyxa S griseus S rimosus Vi khuẩn gram (+) dễ mẫn cảm với kháng sinh vi khuẩn gram (-) Một số chất kháng sinh tác dụng với vi khuẩn gram (+) vi khuẩn gram (-) gọi kháng sinh có phổ rộng Những kháng sinh sử dụng nhiều y học • Đơn vị kháng sinh: Năng lực tích tụ kháng sinh chủng hay nồng độ chất kháng sinh thường biểu thị đơn vị là: mg/ml, µg/ml, hay đơn vị kháng sinh UI/ml (hay UI/g, International Unit ) Đơn vị kháng sinh định nghĩa lượng kháng sinh tối thiểu pha thể tích quy ước dung dịch có khả ức chế hoàn toàn phát triển chủng vi sinh vật kiểm định chọn, thí dụ, với penicillin số miligam penicillin pha vào 50 ml môi trường canh thang sử dụng Staphylococcus aureus 209P làm chủng kiểm định; với Streptomycin số miligam pha ml môi trường canh thang kiểm định vi khuẩn Escherichia coli) 1.2 Kháng sinh streptomycin: 1.2.1 Giới thiệu streptomycin: Trang Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Streptomycin bazơ hữu thuộc nhóm kháng sinh amynoglycoside chiết từ nấm streptomyces globisporus streptomyxini, từ loài sinh vật khác tổng hợp từ xạ khuẩn streptomyces griseus Streptomycin có khả hòa tan nước nên thường dùng dạng muối dễ tan Năm 1944, Walksman tìm mang nhiều tên khác như: streptomycin, Strepocvin, Strizolin Streptomycin ứng dụng nhiều điều trị bệnh cho người, động vật, chí cho thực vật Phạm vi tác dụng (phổ kháng khuẩn): Loại kháng sinh tiêu diệt nhiều vi sinh vật khác (cả gram (-) gram (+)) o Khuẩn gram (+): tụ cầu, phế cầu, liên cầu (có tác dụng hiệp đồng với kháng sinh nhóm β lactam) o Khuẩn gram (-): Salmonella, Shigella, Haemophilus, Brucella o Xoắn khuẩn giang mai o Là kháng sinh hàng đầu chống trực khuẩn lao Vi khuẩn kháng streptomycin : khuẩn kỵ khí, trực khuẩn màu xanh số nấm bệnh 1.2.2 Cấu tạo phân tử: Streptomycin thường tồn dạng muối sulphate Công thức hoá học streptomycin xác định từ năm 1946 -1948: (C21H39N7O12)2-3H2SO4 Streptomycin cấu tạo từ hai thành phần: - Streptidin Streptobizoamin Streptidin dẫn xuất inozit có chứa nhóm guanidin: 1,3 – diguanidino-2,4,5,6tretaoxy xiclohexan Streptobizoamin dissacharid bao gồm streptose (pentose) N – metyl – L – glucozamin Streptidin Streptobiozamin cầu nối glucozit nhờ hydroxyl glucozit N – metyl – L – glucozamin Trang Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Hình 1: Công thức phân tử Streptomycin 1.2.3 Tính chất streptomycin: Streptomycin có chứa nhiều nhóm hydroxyl amin Chúng hòa tan tốt nước Chúng có khả tác dụng với axit hữu vô để tạo muối tương ứng Streptomycin có hoạt tính phân tử nguyên vẹn Nếu cắt bỏ phần phân tử làm kháng sinh tác dụng Tuy nhiên khử nhóm aldehyd (bằng H2/Pd) thành nhóm alcol tạo dihydrostreptomycin lại có tác dụng mạnh trực khuẩn lao nên dihydrostreptomycin sử dụng điều trị lao Tuy nhiên sau người ta nhận thấy dihydrostreptomycin độc streptomycin lại dễ gây điếc nên không sử dụng Streptomycin bột trắng, không mùi, vị đắng, hút ẩm mạnh Dễ tan nước có nhiều nhóm hydroxyl vỡ amin, tan etanol, không tan ete vỡ cloroform Được sử dụng nhiều dạng muối sulfat Dạng muối bền không khí ánh sáng, vững bền nhiệt độ 25ºC pH = - Streptomycin có nhược điểm độc tính cao quan thính giác dùng lâu Người ta cho Streptomycin gây độc tiền đình, tất aminoglycosid có khả nǎng gây dạng nhiễm độc Nhiễm độc tai diễn sau sử dụng kéo dài hồi phục.Và streptomycin cho gây độc cho tai nhiều thuốc khác, chưa có mối liên quan rõ ràng nồng độ aminoglycosid huyết tiến triển nhiễm độc tai 1.2.4 Cơ chế tác động: a) Các chế tác động chất kháng sinh: Cơ chế tác dụng lên vi sinh vật gây bệnh ( hay đối tượng gây bệnh khác - gọi tắt mầm bệnh) chất kháng sinh thường mang đặc điểm riêng, tùy thuộc vào chất kháng sinh đó; đó, kiểu tác động thường gặp làm rối loạn cấu trúc thành tế bào, rối loạn chức điều tiết trình vận chuyển vật chất màng tế bào chất, làm rối loạn hay kiểm soát trình sinh tổng hợp protein, rối loạn trình tái ADN, tương tác đặc hiệu với giai đoạn định chuyển hóa trao đổi chất Trang Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Hình 2: Vị trí tác dụng số chất kháng sinh b) Cơ chế tác động Streptomycin: Streptomycin tác động lên trình sinh tổng hợp protein vi khuẩn cụ thể giai đoạn kéo dài Suốt giai đoạn kéo dài có vị trí bề mặt tiếp xúc ribosome mRAN để phức hợp tRNAs-aa gắn váo vị trí A aminoacyl-tRNA, vị trí P peptidyl- tRNA vị trí E vị trí phóng thích (exit site) suốt trình kéo dài có chuyển dịch tương đối ribosome dọc mRNA Sự tiếp xúc peptidyl-tRNA aminoacyl-tRNA đẫn dẫn đến hình thành liên kết peptid gắn amino vào chuỗi polypeptide hình thành Quá trình lặp lại xuất dấu hiệu kết thúc (tại vị trí E) dịch mã Quá trình gọi chuyển vị điều hòa nhân tố kéo dài G (EF-G) Streptomycin kiềm hãm sinh tổng hợp protein bước chuyển vị cách gắn lên protein S12 tiểu phân 30S ribosome vi khuẩn để khóa nhân tố G, làm vi khuẩn đọc sai mã thông tin mARN, tổng hợp protein bị gián đoạn Hình 3: Vị trí tác dụng kháng sinh ức chế tổng hợp protein Nguyên liệu sản xuất (môi trường sản xuất): Nguyên liệu - môi trường sản xuất bao gồm môi trường giữ giống, môi trường nhân giống môi trường lên men Ở qui mô công nghiệp người ta sản xuất streptomycin chủ Trang Sản xuất streptomycin Nhóm 19 yếu phương pháp lên men chìm nên môi trường sản xuất môi trường lỏng Các loại môi trường sản xuất phải đảm bảo yêu cầu nguồn dinh dưỡng cho vi sinh vật: Nguồn carbon: Nguồn carbon vừa giúp cho vi sinh vật phát triển, cung cấp lượng cho vi sinh vật, đồng thời tham gia trực tiếp vào phân tử kháng sinh streptomycin Nguồn hydratcarbon Str griseus đồng hoá tinh bột, dextrin, maltose, fructose, galactose… Chủ yếu sử dụng tinh bột glucose thành phần cấu tạo Streptomycin có nguồn gốc từ glucose Tuy nhiên streptomycin môi trường lên men tạo thành manosidostreptomycin (hay gọi streptomycin B) có hoạt tính kháng sinh yếu Khi môi trường chứa nhiều glucose tạo thành hỗn hợp không mong muốn loại streptomycin Trong môi trường chứa glucose, Str Streptomixin đồng hóa glucose tạo streptomycin theo chế sau: Glucose – – P Glucose – – P DTTP (deoxitimidin triphotphat) acginin Deoxitimidi diphotphoglucose acginin (DTDP – glucose) Streptidin – – P dihidrostreptose Glucose Dihidrostreptose streptidin – – P N - metylglucozamin Dihidrostreptomicin - P Streptomycin Hình 4: Sơ đồ chuyển hóa glucose thành streptomycin Str streptomixini Nguồn nitơ: Nguồn nitơ vô thích hợp muối amoni không thích hợp với muối nitrat Str griseus có khả sinh trưởng tạo kháng sinh streptomycin môi trường chứa protein bột đậu tương, bột cá, men khô, gluten bột mì loài xạ khuẩn có Trang Sản xuất streptomycin Nhóm 19 hệ protease mạnh nên có khả phân huỷ protein thành acid amin sử dụng acid amin trình trao đổi chất Nguồn phospho: Cần phospho vô hào tan có KH2PO4 giống sinh trưởng phát triển bình thường Thiếu phospho hòa tan sinh trưởng khuẩn ty yếu đồng hoá carbon nitơ bị chậm hoạt lực kháng sinh thấp Tuy nhiên thừa phospho tăng nhanh tốc độ sử dụng hydratcarbon làm cho trình tạo bào tử rút ngắn, ức chế tổng hợp streptomycin NaCl: Thực nghiệm cho thấy thêm NaCl vào môi trường lên men hiệu suất sinh tổng hợp streptomycin tăng NaCl có tác dụng làm thay đổi tính thấm thành tế bào nên kháng sinh tiết vào môi trường dễ dàng không gây ức chế lên chủng sinh streptomycin CaCO3: Trong môi trường nuôi cấy cần có CaCO3 với mục đích làm ổn định pH Nguồn kim loại vi lượng: Chủng xạ khuẩn sinh streptomycin cần số kim loại như: Mg, Mn, Fe, Cu… thường bổ sung dạng muối sulfat Nếu môi trường có cao ngô, bột đậu, bột lạc… không cần bổ sung thân loại nguyên liệu sẵn có muối kim loại Trong sản xuất ta chọn loại môi trường có tỉ lệ thành phần sau: • Môi trường giữ giống (pH: 6,8 – 7,2): Glucose 2,0 g Pepton NaCl 0,5 g Agar - agar 2,0 g • 0,5 g 0,5 g Môi trường nhân giống (pH: 6,8 – 7,2): Glucose 4g Bột đậu 3g NaCl 0,3 g CaCO3 0,6 g Dầu phá bọt 0,5 g • Cao thịt (NH4)2SO4 KH2PO4 0,6 g 0,01 g Môi trường lên men (pH: 6,8 – 7,2): Glucose NaCl Dầu phá bọt 4,0 g Bột đậu 0,25 g CaCO3 3g 0,6 g (NH4)2SO4 0,6 g KH2PO4 0,01 g 0,2 g (Dầu phá bọt thường dùng dầu lạc khử trùng) Giống vi sinh vật Trang Sản xuất streptomycin Nhóm 19 3.1 Mô tả khái quát: Vi sinh vật tham gia sinh tổng hợp Streptomycin chủng Streptomyces griseus (sau đổi tên Streptomyces Streptomixin) thuộc chi Streptomyces, họ Streptomycetaceae, phân lập đầu tiền vào năm 1994 Walksman Schatz Là loại vi khuẩn tìm thấy nhiều đất giống hầu hết loài thuộc chi chúng Str Streptomixin sử dụng để sản xuất nhiều chất chuyển hóa bậc chất ức chế enzyme đóng góp đến 70% lượng thuốc kháng sinh tự nhiên Những chủng Str Streptomixin tự nhiên thường khả sinh tổng hợp Streptomycin mạnh mà chúng phải trải qua trình thay đổi hệ thống di truyền theo phương pháp di truyển cổ điển di truyền tạo chủng có khả sinh tổng hợp Streptomycin mạnh mẽ mong muốn Hình 5: Vi khuẩn Streptomyces griseus 3.2 Hình thái sinh lý học:  Là loại vi khuẩn gram (+), dạng sợi  Streptomyces griseus vi sinh vật hiếu khí mạnh nên trình nuôi cấy cần lắc khuấy trộn kèm theo sục khí Nhiệt độ nuôi cấy thích hợp từ 26 - 28ºC Thời gian lên men khoảng 96 - 144  Chủng Str griseus nhạy cảm với phage, trình lên men cần giữ vô khuẩn chặt chẽ cần kiểm tra độ vô trùng giờ/lần Trong điều kiện tối ưu hiệu suất sinh tổng hợp tạo streptomycin xạ khuẩn Str griseus đạt tới 20.000 25.000 đv/ml môi trường  Thuộc loại vi khuẩn di chuyển, cố định  Chúng loài vi sinh vật ưa pH kiềm, phát triển khoảng pH rộng từ 5-11 tối ưu pH =  Sinh sản cách sinh bào tử chúng phát triển mạnh thành cụm, bào tử có bề mặt nhẵn xếp thành chuỗi thẳng hàng  Phân bố chủ yếu mặt đất, số tìm thấy mặt biển 3.3 Tiêu chuẩn chọn giống: Giống vi sinh vật dùng để tổng hợp streptomycin phải đáp ứng yêu cầu sau: Trang 10 Sản xuất streptomycin - Nhóm 19 Khả sinh tổng hợp streptomycin mạnh: từ 16000-18000 đơn vị hoạt độ/ml (nếu sử dụng giống tự nhiên có 50 units/ml) Không sinh chất không mong muốn – Streptomycin B Nếu có xuất Streptomycin B, hiệu tổng thể giảm 10-15% làm tăng chi phí sản xuất Giống nuôi điều kiện thuận lợi để tạo nhiều bào tử bảo quản theo phương pháp đông khô Khả sinh trưởng, phát triển sinh sản mạnh Quy trình công nghệ sản xuất kháng sinh Streptomycin: 4.1 Qui trình theo sơ đồ khối Giống vi sinh vật Môi trường Nhân giống Môi trường Lên men Bổ sung Ca2+ Lọc Sinh khối Tẩy màu Trang 11 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Lọc Cặn Trích ly Ly tâm Kết tinh Sấy chân không Đóng gói Streptomycin 4.2 Qui trình dạng sơ đồ thiết bị Thuyết minh qui trình: Trang 12 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 1- Nhân giống: Mục đích công nghệ: Khai thác chuẩn bị Quá trình nhân giống nhằm mục tiêu thu nhận số tế bào cao hay nói cách khác sản phẩm trình sinh khối (thường tính tổng lượng tế bào/ml) Nó có mục đích chuẩn bị cho trình lên men diễn tốt Biến đổi nguyên liệu: - - - - Hóa sinh: trình nhân giống vi sinh vật xảy nhiều phản ứng hóa sinh bên lẫn bên tế bào Hầu hết phản ứng có liên quan đến trao đổi chất tế bào Các phản ứng hóa sinh chia làm nhóm: đồng hóa dị hóa Các biến đổi hóa sinh làm xuất nhiều sản phẩm trao đổi chất, chúng nội bào hay ngoại bào Điều góp phần làm cho thành phần canh trường thay đổi liên tục theo thời gian Hóa lý: trình nhân giống có xảy số biến đổi pha Việc nhân giống thực điều kiện hiếu khí nên việc sục không khí vào canh trường làm tăng nồng độ oxy hòa tan pha lỏng Vật lý: trình sinh trưởng, phần lượng vi sinh vật thải bên tế bào dạng nhiệt Hiện tượng làm tăng nhiệt độ canh trường nhân giống vi sinh vật quy mô lớn Do cần ý hiệu chỉnh nhiệt độ canh trường suốt trình nhân giống Sinh học: trình nhân giống, tế bào vi sinh vật thực trình trao đổi chất sinh sản tạo nhiều tế bào Thiết bị, phương pháp tiến hành thông số công nghệ: Thiết bị nhân giống sử giống qui trình ống nghiệm (cấp 1), bình tam giác erlen (cấp 3), nồi nhân giống 10L (cấp 4) Giống xạ khuẩn bảo quản dạng bào tử hoạt hóa, sau cấy truyền vào ống nghiệm, nuôi vòng 40 - 48 nhiệt độ 28ºC, thường sử dụng ống nghiệm: ống đề kiểm tra, ống để sản xuất ống để giữ giống Sau từ ống dùng để sản xuất người ta bắt đầu tiến hành nhân giống: Cấy xạ khuẩn vào môi trường nhân giống bình tam giác lắc 180-220 vòng/phút 26-28ºC/30-70 giờ, sau cho tiếp vào bình nhân giống (có sục khí khuấy), nuôi tiếp cho phát triển sinh khối 20-40 Giống truyền sang nồi nhân giống nuôi dưỡng điều kiện thời gian 36 - 40 Lưu ý trước tiến hành cấy truyền nhân giống môi trường phải khử trùng nóng 121oC 30p để nguội, thành phần môi trường nêu phần 2- Lên men: Mục đích công nghệ: khai thác Quá trình lên men trình định để tạo thu nhận kháng sinh streptomycin Trang 13 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Biến đổi nguyên liệu: - - - Sinh học: biến đổi quan trọng trình lên men trao đổi chất sinh trưởng vi sinh vật, tương tự trình nhân giống xảy mạnh mẽ nhiều Hóa sinh sinh học: biến đổi hóa sinh hóa học xảy trình lên men đa dạng Trong quan trọng chuyển hóa đường glucose thành streptomycin (đã trình bày theo sơ đồ hình 4) Hóa lý: xảy biến đổi pha tương tự trình nhân giống Vật lý: trình lên men, số tiêu vật lý canh trường thay đổi tỷ trọng, nhiệt độ… Cần lưu ý gia tăng nhiệt độ mức làm giảm hoạt tính trao đổi chất Str streptomixini Nguyên liệu cân đong xác tỷ lệ thành phần trình bày phần 2, sau khử trùng 121oC, để nguội cho vào bình lên men Trong trình lên men xảy pha rõ (hình 6): - - Pha tạo thành sinh khối: Ở pha này, chủng xạ khuẩn sinh trưởng mạnh sau - Các chất dinh dưỡng dễ đồng hóa tế bào vi sinh vật hấp thụ mạnh, tốc độ sinh sản chúng xảy nhanh Các bào tử nảy chồi, bào tử nảy chồi tạo thành hệ sợi Khuẩn ty thẳng phân nhánh, tế bào chất ưa kiềm Sự tạo thành streptomycin bắt đầu Pha tạo thành kháng sinh: sinh khối phát triển chậm lại, pH tăng dần đạt giá trị – 7,5 Trong pha streptomycin tạo với mức độ cực đại Trang 14 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Hình 6: Động thái trình lên men streptomycin nhờ streptomyxini Ngoài kháng sinh Streptomycin ra, vi sinh vật tổng hợp số kháng sinh khác có tên manosidostreptomixin (streptomycin B) Loại kháng sinh có hoạt tính nhỏ gấp lần kháng sinh streptomycin thường gây khó khăn cho việc tách tinh chế streptomycin từ dịch lên men Cách tiến hành, thông số công nghệ: bản, lên men thu nhận streptomycin thực theo phương pháp lên men chu kỳ có bổ sung chất, thuộc nhóm lên men bề sâu (lên men chìm) điều kiện tiến hành lên men phụ thuộc vào yếu tố sau: Nhiệt độ: thông số có ảnh hưởng lớn đến phát triển Str Streptomyxini, khả sinh tổng hợp lực tích tụ streptomycin chúng Tiến hành lên men kháng sinh điều kiện nhiệt độ 26- 28ºC thời gian 120 - 144 pH môi trường: thuận lợi cho phát triển hệ sợi cho trình sinh tổng hợp streptomycin thường dao động khoảng pH = Tuy nhiên điều kiện pH cao xu hướng phân huỷ streptomycin tăng lên Vì vậy, sản xuất pH môi trường thường khống chế chặt chẽ giá trị lựa chọn khoảng pH = 6,8 - 7,2 Nồng độ oxy hoà tan cường độ khuấy trộn dịch lên men: Str Streptomyxini vi sinh vật hiếu khí bắt buộc nên trình lên men cần cấp khí liên tục có đảo trộn nhằm tạo điều kiện thuận lợi cho trình sinh tổng hợp streptomycin Cấp khí vô trùng với lưu lượng 0,5 - 1VVM Máy khuấy với tốc độ 110 vòng/phút Phá bọt tự động dầu lạc khử trùng Cứ lấy mẫu phân tích lần để kiểm tra độ vô trùng, có nhiễm phage hay không Glucose: Cần kiểm soát chặt chẽ lượng glucose môi trường lên men để thu chủ yếu streptomycin A Cần kiểm tra xem có cần bổ sung thành phần vào môi trường nuôi cấy hay không? Nồng độ CO2 dịch lên men: vi sinh vật phân giải chất thải khí CO2, phần khí CO2 hòa tan vào canh trường, nồng độ CO2 dịch lên men mức định cần thiết cho trình sinh trưởng xạ khuẩn; nhiên nồng độ CO2 cao làm cản trở trình hấp thu chuyển hoá chất chủng, nghĩa làm làm cản trở trình sinh tổng hợp streptomycin Thiết bị lên men: Thiết bị lên men dạng xilanh bên có trang bị vòi phun, ống khuếch tán, làm sủi bọt để nạp không khí khuấy trộn canh trường, đảm bảo nhu cầu oxy cho vi sinh vật Ống khuếch tán dạng xilanh có miệng loa đáy, lắp bên thiết bị Máy thông gió lắp theo đường tâm thiết bị Nhờ cánh hướng, không khí có áp suất đưa vào máy thông gió theo tiếp tuyến đến tán phễu tròn làm cho nhũ tương không khí - chất lỏng chuyển động xoáy Nhũ tương tuần hoàn liên tục theo vòng khép kín bên theo mép biên xilanh, vòng không gian tường tường thiết bị, sau lần lại lên qua miệng loa Việc chuyển đảo thổi khí mạnh tạo vùng tuần hoàn bên Để thải nhiệt sinh lý có kết hơn, áo 10 có nhiều ngăn bổ sung bề mặt làm lạnh ống khuếch tán Trang 15 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 1-Khớp nối để tháo; 2- Thiết bị thổi khí; 3- Ống xoắn 4-Cửa; 5- Khớp nối để nạp không khí; 6- Khớp thải không khí; 7- Khớp nạp liệu; 8- Cầu thang; 9- Ống khuếch tán; 10- Ao; 11- Thành thiết bị; 12- Ống áp Hình 7: Thiết bị lên men dạng xylanh 3- Bổ sung Ca2+: Mục đích công nghệ: hoàn thiện Quá trình lên men sản xuất streptomycin dù muốn dù không sinh chất không mong muốn, việc xử lý enzyme nhằm tách bỏ mannosidostreptomycin (streptomycin B) khỏi dịch lên men góp phần thu nhận streptomycin tinh khiết, cải thiện tính chất dược học thành phẩm Biến đổi bán thành phẩm: streptomycin B chuyển hóa thành streptomycin, biến đổi không đáng kể Mannosidostreptomycin hay gọi streptomycin B thực chất phân tử streptomycin có gắn thêm đường D-mannose thông qua liên kết 1,4-glycoside C1 Dmannose C4 N – methyl – L – glucosamine gốc phân tử streptomycin Cả chất hình thành song song với chu trình lên men, có xuất streptomycin B chiếm đến 40% Sự xuất streptomycin B làm giảm hoạt tính kháng sinh (streptomycin B có hoạt tính yếu lần so với streptomycin), gây khó khăn trình tách tinh chế streptomycin, streptomycin B chất xuất không mong muốn trình lên men Enzyme mannosidostreptomycinase hình thành vào cuối trình lên men có tác dụng thủy phân liên kết 1,4-glycoside chuyển hóa Trang 16 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 streptomycin B thành streptomycin Việc bổ sung Ca2+ có tác dụng hỗ trợ trình hình thành nên loại enzyme Thiết bị thông số công nghệ: bổ sung Ca2+ dạng dung dịch muối CaCO3 CaSO4 thiết bị lên men chính, tỷ lệ Ca2+ bơm vào bồn lên men 600 ppm/lít dịch lên men, thời điểm bổ sung vào cuối trình lên men, tức khoảng 144h kể từ lúc bắt đầu trình lên men thiết bị chính, sau bồ sung thời gian để enzyme hoạt động khoảng 1h, sau tiến hành trình lọc Nhiệt độ tối ưu để enzyme hoạt động vào khoảng 37-40oC, nhiệt độ kháng sinh dễ bị phân hủy, ta chọn việc xử lý nhiệt độ phòng (khoảng 25-28oC) 4- Lọc Mục đích công nghệ: chuẩn bị Quá trình lọc nhằm mục đích tách loại sinh khối từ dịch lên men có tác dụng hỗ trợ cho trình tinh chế streptomycin sau Biến đổi bán thành phẩm: việc tách loại sinh khối làm cho bán thành phẩm chấm dứt hoạt động sinh học, hóa sinh diễn dịch lên men Tiến hành: Dịch lên men sau xử lý enzyme bơm qua thiết bị lọc Lọc lọc ép khung bản, hay lọc trống quay loại sinh khối Khuẩn ty Str griseus mảnh nên trình lọc cần sử dụng chất trợ lọc, thường sử dụng than hoạt tính Thiết bị lọc: phổ biến thiết bị lọc chân không kiểu thùng quay Nguyên tắc hoạt động thiết bị trình bày hình Thùng lọc dạng hình trụ nằm ngang, thân thùng có đục lỗ bề mặt phủ lớp vách ngăn Người ta phủ thêm lớp bột trợ lọc lên bề mặt lớp vách ngăn để tách tạp chất có kích thước nhỏ khỏi huyền phù Bên thùng gồm nhiều ngăn riêng biệt Mỗi ngăn có đường dẫn nối với ống trung tâm trục thùng quay Các ống dẫn ống trung tâm tạo nên hệ thống đường ống hút chân không dẫn dịch lọc Thùng lọc đặt bên bể chứa huyền phù độ sâu cố định Động lực trình lọc tạo nhớ bơm chân không Khi thùng lọc quay bể huyền phù, áp lực chân không làm cho phần dịch lọc hút qua vách ngăn để chảy vào bên thùng theo ống trung tâm để thoát Các cấu tử pha rắn huyền phù bị bám lại bề mặt vách ngăn Bã lọc rửa tháo bỏ khỏi vách ngăn nhờ hệ thống dao cạo Thông thường, người ta cần lọc lần làm lạnh dịch để chuyển sang công đoạn Chỉ trường hợp đặc biệt cần phải xử lý kết tủa phần protein lọc lại dịch lần thứ hai Trang 17 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Hình 8: Thiết bị lọc thùng quay Thu hồi sinh khối xạ khuẩn: Phần sinh khối rửa sạch, sấy khô sử dụng để chế biến thức ăn gia súc 5- Tẩy màu: Mục đích công nghệ: hoàn thiện Quá trình tẩy màu nằm khâu tinh chế sản phẩm với mục đích tẩy màu loại bỏ số tạp chất khác Biến đổi bán thành phẩm: số tạp chất chất màu loại bỏ Thực hiện: tẩy màu thực cách bổ sung trực tiếp chất hấp phụ than hoạt tính vào dịch lên men Sau than hoạt tính tách rửa lại sử dụng thiết bị lọc hút băng tải thiết bị lọc hút kiểu thùng quay Phần than sau lọc đưa chưng thu hồi dung môi xử lý hoàn nguyên, phục vụ cho mẻ sau Thiết bị: thùng hình trụ có cánh khuấy làm thép không rỉ 6- Trích ly: Mục đích công nghệ: khai thác Quá trình trích ly nhằm mục đích thu nhận kháng sinh streptomycin từ dịch lên men Biến đổi bán thành phẩm: thu nhận streptomycin dạng muối sulfat hòa tan, loại chất không mong muốn lại dịch lên men Thực hiện: streptomycin thường trích ly dạng muối khỏi dịch lọc dung môi hữu aceton pH 2.0 – 2.5, nhiệt độ 0-3oC Phương pháp thực dạng muối streptomycin dễ tan dung môi hữu cơ, chúng không tương tác với Trang 18 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 mặt hóa học Nhằm hạn chế lượng streptomycin bị phân huỷ, trình trích ly thực thời gian ngắn Đồng thời, thời gian trích ly cần giám sát chặt chẽ thông số công nghệ như: nhiệt độ, pH, độ vô khuẩn để hạn chế tổn thất phân huỷ streptomycin Dịch lên men sau lọc bơm trộn đồng thời với dung dịch H2SO4 (hoặc HCl loãng) có bổ sung thêm chất chống tạo nhũ bơm song song với dung môi trích ly vào thiết bị Sau trình trích ly tồn pha không tan vào nhau, việc phân tách pha thực nhờ trình lắng liên tục trọng lực Thiết bị thông số công nghệ: thiết bị trích ly ngược dòng liên tục kiểu khuấy – lắng Tỉ lệ dịch lọc: dung môi thường chọn khoảng - 10V dịch lọc /1V dung môi Thời gian trích bậc 5-10p Hình 9: Sơ đồ hệ trích ly gồm nhiều cặp khuấy lắng hoạt động nghịch dòng 7- Kết tinh: Mục đích công nghệ: chuẩn bị Quá trình kết tinh nhằm thu nhận streptomycin sulfat dạng rắn, chuẩn bị cho trình sấy khô streptomycin Biến đổi bán thành phẩm: chủ yếu biến đổi mặt hóa lý: có biến đổi pha, streptomycin dạng sulfate thể lỏng kết tinh chuyển sang thể rắn Thực hiện: Đầu tiên người ta trộn nước dung môi aceton để tăng bề mặt tiếp xúc, làm để phần tử kháng sinh tiếp xúc chặt chẽ với dung môi Tiến hành khuấy liên tục để đảm bảo trình tiếp xúc đạt mức độ cao Sau người ta tăng nồng độ dung môi lên mức 75-80%, có khác biệt nồng độ pha, kháng sinh không tan dung môi mà bị kết tủa Các kết tủa kháng sinh nguyên chất (dạng sulfat) Thiết bị thông số công nghệ: việc kết tinh thực bồn chứa có cánh khuấy Tỷ lệ nước : kháng sinh : dung môi thường dùng : : Một thông số công nghệ quan trọng khác thời gian kết tinh 8- Ly tâm: Trang 19 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Mục đích công nghệ: chuẩn bị Cũng giống trình kết tinh, trình ly tâm nhằm thu nhận streptomycin dạng rắn, chuẩn bị cho trình sấy khô Biến đổi bán thành phẩm: thu nhận streptomycin dạng rắn có độ ẩm khoảng 40% Thực hiện: trình ly tâm nhằm thu nhận streptomycin thể rắn thực sau trình kết tinh Hệ huyền phù dẫn qua thiết bị ly tâm phân riêng Để nâng cao hiệu suất ly tâm, dòng pha phân tán nên hoàn lưu lại phần Thiết bị: sử dụng thiết bị ly tâm có chén xoay dạng côn Cấu tạo thiết bị bao gồm chén xoay dạng côn quay quanh trục thẳng đứng Tất đặt vỏ cố định Nguyên liệu vào đáy chén xoay Dưới tác dụng lực ly tâm, huyền phù di chuyển thành chén xoay bám Phần dung dịch di chuyển lên phía chảy tràn vỏ Khi bã dày thiết bị ngừng hoạt động, lớp bã tách dao tháo cửa xả đáy chén xoay Để tháo bã liên tục, chén xoay khoét lỗ với đường kính từ 0,75-2mm, tùy thuộc vào kích thước huyền phù Khi dòng bã tháo liên tục qua lỗ Hình 10: Thiết bị trích ly có chén xoay dạng côn 9- Sấy chân không: Mục đích công nghệ: khai thác, hoàn thiện bảo quản Để bảo quản thời gian dài dễ dàng cho vận chuyển đường xa, cần thiết phải sấy khô streptomycin Biến đổi bán thành phẩm: -Vật lý: + Trong trình sấy nhiệt tăng cao bán thành phẩm Trang 20 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 + Sự chuyển động phân tử nhanh hơn, phân tử nước dịch chuyển lên bề mặt thoáng bay + Tỷ trọng bán thành phẩm tăng, khối lượng giảm bốc nước -Hóa học: nhiệt độ trình sấy làm biến tính streptomycin -Hóa lý: biến đổi hóa lý quan trọng nhát chuyển pha nước thành -Sinh học: vi sinh vật nguyên liệu bị ức chế tiêu diệt trình sấy tác dụng nhiệt hoạt độ nước giảm Thiết bị: máy sấy chân không băng tải sử dụng vi sóng -Ứng dụng: Thích hợp cho việc sấy khô nguyên liệu dạng sữa, dịch lỏng, bột mền… -Nguyên lý làm việc: Nguyên liệu thô đưa vào băng tải thông qua ống Dưới điều kiện chân không, nguyên liệu hấp thụ lượng lò vi sóng làm cho độ ẩm bên nguyên liệu bốc nhanh điều kiện nhiệt độ thấp đặt tiêu chuẩn sấy khô Hấp thụ lượng từ lò vi sóng nguyên liệu sấy cách liên tục đồng Phương pháp có ưu điểm: tổng thời gian sấy tiêu hao lượng giảm 20 – 25% Sấy khô điều kiện chân không nhiệt độ thấp nên streptomycin bị biến đổi nhiệt, nâng cao chất lượng sản phẩm -Thông số công nghệ: +Công suất vi sóng: 20 kw +Tốc độ truyền: 0.5 m/phút +Nhiệt độ: 30 ~ 100 oC +Năng suất: ~ 16 kg/h Hình 11: Thiết bị sấy chân không Trang 21 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 (Hình dùng vẽ autocad, xem xong xóa) http://ttmindustry.vn/default.asp?prod=56&sp=51&view=215 Sản phẩm kháng sinh streptomycin: 6.1 Các tiêu chất lượng: Streptomycin sulfate bán thị trường với dạng thuốc tiêm để điều trị số bệnh : lao phổi, nhiễm khuẩn tiết niệu, màng não, dịch hạch… Streptomycin diều trị số bệnh nhiễm khuẩn mà penicillin Streptomycin dùng lọai thuốc trừ vật hại nấm mốc,vi khuẩn trái cây, rau củ hạt giống Streptomycin dùng để tiêu diệt rong, tảo hồ hay bể nuôi cá Trang 22 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Bảng 2: Các tiêu chất lượng streptomycin sulfate thành phẩm: Màu sắc Hoạt tính Độ ẩm pH dung dịch chứa 20% Streptomycin sulfat: Hàm lượng Streptomycin B Hàm lượng sulfate Hàm lượng tro sulfate Trắng trắng ngà 170,000-210,000 UI/mg 12% max 4,5 – 0.3% max 18.0-21.5% 1%max 6.2 Những lưu ý sử dụng kháng sinh streptomycin Dược động học - Hấp thu: uống, bị thải trừ hoàn toàn theo phân Tiêm bắp, hấp thu chậm penicilin, giữ lâu nên cần tiêm ngày lần Gắn vào protein huyết tương 30 - 40% - Phân phối: tan nhiều nước bị ion hóa pH huyết tương, streptomycin khó thấm mạch Gắn nhiều vào thận, cơ, phổi, gan Nồng độ máu thai nhi 1/2 nồng độ huyết tương Ít thấm vào tế bào, không qua hàng rào máu não - Thải trừ: khoảng 85 - 90% liều tiêm bị thải trừ qua lọc cầu thận 24h Độc tính - Dây VIII dễ bị tổn thương, điều trị kéo dài có suy thận Độc tính đoạn tiền đình thường nhẹ ngừng thuốc khỏi, độc đoạn ốc tai gây điếc vĩnh viễn kể ngừng thuốc Dihydrostreptomycin có tỷ lệ độc cho ốc tai cao nên không dùng - Độc với thận phản ứng mẫn gặp Có thể thấy viêm da tiếp xúc y tá (người tiêm thuốc) - Có tác dụng mềm kiểu cura nên gây ngừng hô hấp liệt hô hấp dùng streptomycin sau phẫu thuật có gây mê Không dùng cho người nhược phụ nữ có thai Cách dùng: - Do độc tính nên giới hạn giành cho nhiễm khuẩn sau: Lao: phối hợp với kháng sinh khác (xem " thuốc chống lao") Một số nhiễm khuẩn tiết niệu, dịch hạch, brucellose: phối hợp với tetracyclin Nhiễm khuẩn huyết nặng liên cầu: phối hợp với penicilin G Lọ sulfat streptomycin 1g Liều thông thường tiêm bắp 1g/ ngày Trong điều trị lao, tổng liều không 80- 100g Tài liệu tham khảo: Trang 23 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Lê Văn Việt Mẫn, Công nghệ chế biến thực phẩm, Nhà xuất đại học quốc gia thành phố hồ chí Minh, TP HCM, 2009, 1019 trang Nguyễn Đức Lượng, Công nghệ vi sinh, Tập 2: Vi sinh vật học công nghiệp, Nhà xuất đại học quốc gia thành phố hồ chí Minh, TP HCM, 2006, 371 trang Võ Văn Bang – Vũ Bá Minh, Quá trình Thiết bị Công nghệ Hóa học thực phẩm, Tập 3: Truyền khối, Nhà xuất đại học quốc gia thành phố hồ chí Minh, TP HCM, 2007, 388 trang Trương Thị Minh Hạnh, Giáo án môn học Công nghệ dược phẩm, Trường Đại học Bách Khoa Đà Nẵng Shiroh Shirato and Hiroshi Motoyama, Fermentation Studies with Streptomyces griseus, Research Division, Tokyo, Japan Eugene L Dulaney, Observations on Streptomyces griseus, Research Laboratories of Merck & Co., Inc., Rahway, New Jersey Trang 24 [...]... triển và sinh sản mạnh 4 Quy trình công nghệ sản xuất kháng sinh Streptomycin: 4.1 Qui trình theo sơ đồ khối Giống vi sinh vật Môi trường Nhân giống Môi trường Lên men Bổ sung Ca2+ Lọc Sinh khối Tẩy màu Trang 11 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Lọc Cặn Trích ly Ly tâm Kết tinh Sấy chân không Đóng gói Streptomycin 4.2 Qui trình dạng sơ đồ thiết bị 5 Thuyết minh qui trình: Trang 12 Sản xuất streptomycin. .. gốc phân tử streptomycin Cả 2 chất này đều được hình thành song song với nhau trong cùng 1 chu trình lên men, có khi sự xuất hiện của streptomycin B chiếm đến 40% Sự xuất hiện của streptomycin B sẽ làm giảm đi hoạt tính của kháng sinh (streptomycin B có hoạt tính yếu hơn 6 lần so với streptomycin) , và gây khó khăn trong quá trình tách và tinh chế streptomycin, vì vậy streptomycin B là chất xuất hiện.. .Sản xuất streptomycin - Nhóm 19 Khả năng sinh tổng hợp streptomycin mạnh: từ 16000-18000 đơn vị hoạt độ/ml (nếu sử dụng giống tự nhiên chỉ có 50 units/ml) Không sinh chất không mong muốn – Streptomycin B Nếu có sự xuất hiện của Streptomycin B, hiệu quả tổng thể sẽ giảm 10-15% và làm tăng chi phí sản xuất Giống được nuôi trong những điều kiện thuận lợi... việc xử lý enzyme nhằm tách bỏ mannosidostreptomycin (streptomycin B) ra khỏi dịch lên men góp phần thu nhận streptomycin tinh khiết, cải thiện tính chất dược học của thành phẩm Biến đổi của bán thành phẩm: streptomycin B chuyển hóa thành streptomycin, ngoài ra biến đổi không đáng kể Mannosidostreptomycin hay còn gọi là streptomycin B thực chất chính là phân tử streptomycin có gắn thêm đường D-mannose... thấp nên streptomycin ít bị biến đổi do nhiệt, nâng cao chất lượng sản phẩm -Thông số công nghệ: +Công suất vi sóng: 20 kw +Tốc độ truyền: 0.5 m/phút +Nhiệt độ: 30 ~ 100 oC +Năng suất: 8 ~ 16 kg/h Hình 11: Thiết bị sấy chân không Trang 21 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 (Hình này dùng vẽ autocad, xem xong thì xóa) http://ttmindustry.vn/default.asp?prod=56&sp=51&view=215 6 Sản phẩm kháng sinh streptomycin: ... hay bể nuôi cá Trang 22 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Bảng 2: Các chỉ tiêu chất lượng của streptomycin sulfate thành phẩm: Màu sắc Hoạt tính Độ ẩm pH dung dịch chứa 20% Streptomycin sulfat: Hàm lượng Streptomycin B Hàm lượng sulfate Hàm lượng tro sulfate Trắng hoặc trắng ngà 170,000-210,000 UI/mg 12% max 4,5 – 7 0.3% max 18.0-21.5% 1%max 6.2 Những lưu ý khi sử dụng kháng sinh streptomycin Dược động... trình lên men streptomycin nhờ streptomyxini Ngoài kháng sinh Streptomycin ra, vi sinh vật còn tổng hợp một số kháng sinh khác có tên manosidostreptomixin (streptomycin B) Loại kháng sinh này có hoạt tính nhỏ hơn gấp 6 lần kháng sinh streptomycin và thường gây khó khăn cho việc tách và tinh chế streptomycin từ dịch lên men Cách tiến hành, thông số công nghệ: về cơ bản, lên men thu nhận streptomycin. .. chế streptomycin, vì vậy streptomycin B là chất xuất hiện không mong muốn của quá trình lên men Enzyme mannosidostreptomycinase được hình thành vào cuối quá trình lên men có tác dụng thủy phân liên kết 1,4-glycoside đó và chuyển hóa Trang 16 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 streptomycin B thành streptomycin Việc bổ sung Ca2+ có tác dụng hỗ trợ quá trình hình thành nên loại enzyme trên Thiết bị và thông... khác chính là thời gian kết tinh 8- Ly tâm: Trang 19 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Mục đích công nghệ: chuẩn bị Cũng giống như quá trình kết tinh, quá trình ly tâm nhằm thu nhận streptomycin ở dạng rắn, chuẩn bị cho quá trình sấy khô Biến đổi của bán thành phẩm: thu nhận streptomycin dạng rắn có độ ẩm khoảng 40% Thực hiện: quá trình ly tâm nhằm thu nhận streptomycin ở thể rắn được thực hiện ngay sau quá... ống khuếch tán 9 Trang 15 Sản xuất streptomycin Nhóm 19 1-Khớp nối để tháo; 2- Thiết bị thổi khí; 3- Ống xoắn 4-Cửa; 5- Khớp nối để nạp không khí; 6- Khớp thải không khí; 7- Khớp nạp liệu; 8- Cầu thang; 9- Ống khuếch tán; 10- Ao; 11- Thành thiết bị; 12- Ống quá áp Hình 7: Thiết bị lên men dạng xylanh 3- Bổ sung Ca2+: Mục đích công nghệ: hoàn thiện Quá trình lên men sản xuất streptomycin dù muốn dù không ... Nguyên liệu sản xuất (môi trường sản xuất) : Nguyên liệu - môi trường sản xuất bao gồm môi trường giữ giống, môi trường nhân giống môi trường lên men Ở qui mô công nghiệp người ta sản xuất streptomycin. .. với Streptomycin số miligam pha ml môi trường canh thang kiểm định vi khuẩn Escherichia coli) 1.2 Kháng sinh streptomycin: 1.2.1 Giới thiệu streptomycin: Trang Sản xuất streptomycin Nhóm 19 Streptomycin. .. ta sản xuất streptomycin chủ Trang Sản xuất streptomycin Nhóm 19 yếu phương pháp lên men chìm nên môi trường sản xuất môi trường lỏng Các loại môi trường sản xuất phải đảm bảo yêu cầu nguồn dinh