TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP & TNTN Bộ MỒN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG NHÂN GIỐNG LAN Dendrobium anosmum, Dendrobium mini BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔIanosmum, CẤY MÔ.Dendrobium NGHIÊN NHÂN GIÓNG LAN Dendrobium minỉ BẰNG PHƯƠNG NUÔI CẤY MÔ CỨU CÁC LOẠIPHÁP GIÁ THẺ TRỒNG LANNGHIÊN CỨU CÁC LOẠI GIÁ THẺ TRÒNG LAN Dendrobium Dendrobiummini miniTHÍCH THÍCHHƠP HỢP VÀ CHO HIỆU QUẢ CAO Chù nhiệm đề tài: NGUYỄN THỊ MỸ DUYÊN Long Xuyên, tháng năm 2009 TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP & TNTN Bộ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG NHÂN GIÓNG LAN Dendrobium anosmum, Dendrobium mini BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ NGHIÊN CỨU CÁC LOẠI GIÁ THẺ TRÒNG LAN Dendrobium mini THÍCH HƠP VÀ CHO HIỆU QUẢ CAO Chủ nhiệm đề tài: NGUYỄN THỊ MỸ DUYÊN Cộng tác viên: TRỊNH HOÀI vũ Long Xuyên, tháng năm 2009 LÒI CẢM ƠN Chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu, Phòng Quản lý Khoa học, Phòng Ke hoạch tài vụ, đặc biệt Ban chủ Nhiệm Khoa Nông nghiệp & TNTN Truờng Đại học An Giang tạo điều kiện thuận lợi cho thực đề tài Rất biết ơn Thầy Võ Tòng Xuân, Thầy Võ Tòng Anh, Thầy Truông Bá Thảo, Thầy Nguyễn Hữu Thanh đă nhiệt tình động viên ủng hộ thực đề tài Cùng với Nguyễn Thị Thúy Diễm, Trịnh Hoài Vũ đồng nghiệp môn nhiệt góp sức nghiên cứu thực đề tài Cô Mai Dung, cô Đặng Phương Trâm người Thầy dẫn cho hai lĩnh vực trồng lan cấy mô Nguyễn Thị Mỹ Duyên PHẦN TÓM TẮT Đe tài nghiên cứu thực Khoa Nông Nghiệp & TNTN, Trường Đại học An Giang từ tháng 02 năm 2006 đến tháng 02 năm 2008 Đề tài thực với hai qui trình vi nhân giống lan Dendrobỉum anosmum Dendrobium mini, thử nghiệm Dendrobỉum mini nhiều loại giá thể khác Với tổng cộng thí nghiệm gồm thí nghiệm phòng thí nghiệm vườn Qui trình vi nhân giống lan Dendrobỉum anosmum - Trái lan Dendrobium anosmum sau tự thụ tháng, khử trùng gieo cấy hạt vào môi trường thích hợp Sau tháng gieo cấy tất hạt nẩy mầm tốt, tỉ lệ đạt > 85% môi trường MS + mg/1 NAA môi trường MS + mg/1 BA + 0,2 mg/1 NAA - Sang giai đoạn nhân nhanh: Chồi lan Dendrobium anosmum phát triển nhẩy chồi tốt môi trường MS + 2mg/l BA, thời gian tháng sau cấy đạt 3,17chồi, chồi cao 20,6 ram Môi trường MS không bổ sung BA cho kết nhân chồi thấp Đồng thời sử dụng BA nồng độ cao (10mg/l) vào môi trường nhân chồi cho kết tạo chồi thấp (1,5 chồi), xuất chồi dị dạng, phát triển yếu - Giai đoạn tạo hoàn chỉnh: Chồi lan Dendrobium anosmum tạo rễ tốt môi trường MS + mg/1 NAA Sau 3,5 tháng tạo hoàn chỉnh, đạt tiêu chuẩn để đưa vườn Như vậy, sau thời gian 9,5 tháng từ hạt lan gieo cấy đă cho lan hoàn chỉnh đưa vườn trồng Qui trình vi nhân giống lan Dendrobium mỉni - Giai đoạn nhân chồi: Chồi lan Dendrobium mini phát triển nhẩy chồi tốt môi trường có bổ sung mg/1 BA Xét tính kinh tế môi trường MS/2 + lmg/1 BA cho hiệu cao việc nhân nhanh chồi lan Dendrobium mini Sau tháng nhân chồi 3,8 chồi, chồi cao l,26cm - Sự tạo rễ lan Dendrobium mini: môi trường MS/2 + 0,2 mg/1 NAA cho kết 11 MỤC LỤC Lời cảm ơn i Phần tóm tắt ii Mục lục iii Danh sách bảng vi Danh sách hình vii Danh mục chữ viết tắt .viii CHƯƠNG I MỎ ĐÀU I MỤC TIÊU VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 1 Mục tiêu Nội dung .2 II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VỊ NGHIÊN CỨU Đối tuợng 2 Phạm vi .2 III Cơ SỞ LÝ LUẬN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .3 Cơ sở lý thuyết 1.1 Giới thiệu giống lan Dendrobium 1.1.1 Phân loại phân bố iii 1.8 Các yếu tố liên quan đến phương pháp vi nhân giống .14 1.8.1 Qui trình vi nhân giống 14 1.8.2 Cá c thành phần môi trường nuôi cấy mô thực vật 16 Mô tả phương pháp nghiên cứu liên quan thực 18 IV PHƯƠNG PHÁP TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 19 Thời gian địa điểm thí nghiệm 19 Phương tiện nghiên cứu 19 Phương pháp nghiên cứu 20 Lan Dendrobỉum anosmum 20 3.2.2 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hưởng NAA với hai loại môi trường MS MS/2 lên tạo rễ từ chồi lan .24 3.2.3 Thí nghiệm 6: Thử nghiệm lan Dendrobium mỉni loại giá thể khác 25 CHƯƠNG II KẾT QUẢ NGHIÊN cứu VÀ PHÂN TÍCH KÉT QUẢ 27 I Lan Giả hạc (Dendrobium anosmum) 27 Thí nghiệm 1: Khảo sát số môi trường gieo hạt thích họp cho hạt lan Dendrobium anosmum 27 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hoà sinh trưởng BA (6 - Benzyl - IV Thí nghiệm 6: Thử nghiệm lan Dendrobium mini loại giá thể khác .7 .40 KẾT LUẬN VÀ KIÉN NGHỊ 45 Kết luận 45 V DANH SÁCH BẢNG Bảng Tựa bảng Trang 1.1 Các loại lan rừng có trữ lượng nhiều hoa đẹp thị trường nước ưa chuộng 1.2 Ký hiệu nghiệm thức theo môi trường cấy hạt lan 22 1.3 Ký hiệu nghiệm thức theo môi trường cấy chồi lan Dendrobium anosmum 22 1.4 Ký hiệu nghiệm thức thí nghiệm nhân chồi lan Dendrobỉum mini 24 1.5 Các nghiệm thức thí nghiệm tạo rễ lan Dendrobỉum mỉni 24 1.6 Các giá thể chọn làm thí nghiệm trồng lan 25 2.1 Kết gieo hạt lan Dendrobỉum anosmum 27 2.2 Ảnh hưởng nồng độ BA đến nhân chồi lan Dendrobium anosmum thời điểm 70 NSKC 28 2.3 Ảnh hưởng nồng độ BA đến nhân chồi lan Giả hạc Dendrobium anosmum thời điểm 80 NSKC 29 2.4 Ảnh hưởng nồng độ BA đến nhân chồi lan Giả hạc Dendrobium anosmum thời điểm 90 NSKC 30 VI DANH SÁCH HÌNH DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIÉT TẤT Hình Tựa hình 1.1 Hoa lan Dendrobium anosmum 1.2 Hoa lan Dendrobium mỉni Trang 1.3 Sự tạo thành chồi ngang (a) chồi bất định (b) 13 1.4 Các bước vi nhân giống 14 1.5 Hiệu tương tác NAA BA Bowỉea volubilis 18 1.6 Hoa lan Dendrobium anosmum trái lan thụ 20 1.7 Qui trình khử trái gieo hạt lan Dendrobium anosmum 21 1.8 Chuẩn bị vật liệu trồng bố trí thí nghiệm 26 2.1 Số lượng chồi lan Giả hạc Dendrobỉum anosmum tạo môi trường có vii CHƯƠNG I MỞ ĐÀU Nói đến hoa lan nghĩ đến loài hoa vương giả, cao hoa lan không đẹp mà giá trị lại cao Ngày nay, nhờ kỹ thuật nhân giống đại phương pháp nuôi cấy mô hồ trợ cho phương pháp nhân giống cổ truyền theo kiểu tách chiết, nên đă nhân số lượng lớn lan giống cung cấp cho thị trường hoa lan, giá thành lan tương đối dễ chịu Cũng từ thú chơi lan dân ta ngày phát triển thông qua Hội thi hoa lan ngày đa dạng phong phú Hơn nữa, Hoa lan chiếm vị trí cao bàn tiệc, hội nghị, lễ, đám cưới, cách trang trí giỏ hoa, lẵng hoa, bình hoa, hoa cài áo, trang điểm cô dâu Do Hoa lan xem loại hoa trang trí quan trọng có giá trị kinh tế cao, mặt hàng xuất chiến lược nhiều quốc gia Chẳng hạn với loại hoa chủ lực Dendrobium, Thái Lan xuất đạt doanh thu gần 600 triệu USD năm Theo thống kê Bộ Nông nghiệp Hoa Kỳ, năm 2000, tổng sản lượng lan bán thị trường đạt xấp xỉ 100.000.000 USD, Phaỉaenopsis chiếm 75% (Griesbach, R.J 2002) Bên cạnh đó, nước phát triển như: Anh, Mỹ, Đức, Ý, Singgapore, Hồng Kông, nhập nhiều phong lan Việt Nam có nhiều triển vọng kinh doanh xuất phong lan (Huỳnh Văn Thới, 2005) Với kỹ thuật nhân giống nuôi cấy mô - tế bào thực vật, ưu điểm khả nhân giống nhanh với hệ số nhân cao thời gian ngắn, nhân từ nhiều phận khác thực vật, tạo giống bệnh Xa nữa, thông qua kỹ thuật nuôi cấy mô tạo nguồn vật liệu lai tạo giống có đặc tính ưu việc với thời gian ngắn Ưu điểm nuôi cấy mô giúp cho việc nẩy mầm hạt lan Vì hạt lan có đặc tính có phôi mà (hoặc có ít) phôi nhũ kích thước hạt nhỏ khó nẩy mầm tự nhiên Nên phương pháp nhân giống cổ truyền tách chiết với tốc độ nhân giống chậm, người ta phải sử dụng kỹ thuật gieo hạt ống nghiệm Ngoài ra, nhân giống hạt áp dụng cho công tác lai tạo giống mới, đặc biệt hoa Lan Tuy nhiên, yếu tố không phần quan trọng định đến thành công qui trình nhân giống nuôi cấy mô việc đưa mô vườn ươm với tỷ lệ sống cao Do đó, đề tài “Nhân giống lan Dendrobim anosmum Dendrobỉum minỉ phương pháp nuôi cấy mô Nghiên cửu loại ệiá thể trồng lan Dendrobỉum mỉnỉ thích họp cho hiệu cao” thực nhăm nhân nhanh hai loài lan nghiên cứu qui trình lan mô cho tỷ lệ sống cao để cung cấp giống cho thị trường hoa lan tỉnh I MỤC TIÊU VÀ NỘI DUNG NGHIÊN cứu Mục tiêu: Nghiệm thức Nghiệm thức Số SốChiều chồi cao Số (lá) Đặc điểm chồi tiêu tiêucao caochồi, chồi, trường nghiệm D2 cho cao nghiệm thứcmôi D2 cho cao chồibản MS, tốt (1,08 cm) thức Tuy nhiên, II Lan Dendrobium mini chồi tốt (0,68 cm), không khác biệt mặt thống kê so với ngiệm thức không khác biệt mặt thống kê tiêu cao chồi so với nghiệm thức DO, DIDl, D3 D4D4trong nhóm môi trường MS/2 nghiệm thức C2, C3 C4 nhóm môi trường nhóm trường4:MS/2 nghiệm thứctrường C3 nuôi C4 môi trường MS.việc Thímôi nghiệm Nghiên cún môi cấy nhóm mô thích họp cho MS Nhưng cókhác khác biệt thống thống kê ởởmức ý nghĩa 1%1% so với thức co, C1co, DO Nhưng có mức ý nghĩa so nghiệm với nghiệm thức Cl Và nhân chồi củabiệt Lan Dendrobium mini tiêu số lá, nghiệm thức D2 có số cao (12,2 lá), không khác biệt so với C2, khác biệt thống kê so với nghiệm thức co DO Đối tiêu MS (Murashige nghiệm thức C2 1962) cao nhất, khác cân biệt Môivớitrường & Skoog, đượcnhưng xem làkhông môi trường mặt thốngvà kêgiàu so dinh với dưỡng nghiệmnhất, thức doD2 Đây tiêu phụ không định hiệu sử dụng phổ biến (Dương Công Kiên, Như vậy, thời gian 45 NSKC cho kết tự ởsinh thời giancó30rất NSKC, môi nhân2003) chồi Thật mẫu qua cấy.cácDothíđónghiệm nghiệm thức D2 tượng nghiệm thức hiệu cao ta thấy chồi lan trưởng tốt môi trường D2 (MS/2 + mg.r BA) môi trường cho kết nhân chồi tốt Điều để tính quảra,kinh ngườigiáta cảm thử sử dụng trongtrường việc nhân Tuy chồinhiên, loài lan hiệu Ngoài xéttếvềthìđánh quan môi hìnhtrường thái phát cũngnếu đượccho chứng tỏchồi rấtvẫn rõlantrong quámôi trìnhtrường quan sátnày mẫu cấychọn nghiệm MS/2, kết tốttrong ta MS/2 sẽtính chothức hiệuD2 (như triển mẫu nghiệm thứcMS có thấy nhiều trội tạo cụm chồi tốt (chồi xanh tốt, to khỏe) so với nghiệm thức khác kinh tế Ghi chủ: Các nghiệm thức cột theo sau chừ giống khác mẫu có nhiều chồi, thân to khỏe, xanh mượt) Đồng thời xét tính hiệu hiệt không ỷ nghĩa mức 5%; *: mức ỷ nghĩa nghiệm thức D2 hiệuý nghĩa khác biệt cần ởlượng Vi các5%.khoáng đa vi lượng so với môi trường MS (nhóm C) Điều phù hợp với nhận định Bùi Bá Bổng (1995), điểmthời chồigian đầu thích nghi với môi chồi trường, Chiều chồiSau cấycao Số vào môi Đặc Bảng 2.10mới Ảnhnên hưỏng BA lên quákhác trình nhân nhanh chồi Lan30Dendrobium trường chưa có biểu biệt nhiều điểm ngàyLan sau cấy Bảng 2.9 Ảnh hưởng BA lên trìnhSang nhânthời nhanh chồi mini 60 ngày sau cấy Dendrobium minỉ 45 ngày sau cấy mỉni 30 NSKC Bảng BAthức lên 2.8 Ảnh tiêu hưởng số rễ, nghiệm X2nhân (MS chồi + Lan mg.r Dendrobium NAA) cho hiệu tạo rễ tốt (7,438 rễ), khác biệt thống kê so với nghiệm thức XI X3, có khác biệt thống kê ý nghĩa mức 5% so với nghiệm thức xo (MS + mg.r NAA) Đồng thời, tiêu dài rễ, nghiệm thức X2 cho giá trị độ dài rễ cao (0,679 cm), khác biệt thống kê so với nghiệm thức XI, có khác biệt thống kê ý nghĩa mức 5% so với nghiệm thức xo (MS + mg.rNAA) X3 (MS + mg.rNAA) Đồng thời hai tiêu số chiều cao chồi khác biệt mặt thống kê nghiệm thức, ta nhận thấy quan sát mẫu thấy chồi nghiệm thức X2 cho to, khỏe trội so với nghiệm thức khác (chồi cao trung bình 3,325 cm, số trung bình 4,25 lá) Đây yếu tố quan trọng liên quan đến tiêu tỉ lệ sống mô Vì giai đoạn rễ có sức sống mạnh, thân to, rễ tốt cho khả sống sót cao giai đoạn vườn ươm Nghiệm thức Số Ngoài ra, qua thí nghiệm thấy môi trường X3 (MS + mg.r NAA) cho hiệu tạo rễ không cao lượng NAA cao gấp đôi nghiệm (lá) điểm chồi cần sử dụng nhiều chất điều hòa Chiều chồi Như chứng cao tỏSốlan thức X2 Giả hạc Đặc rễ không Chủ thích: Trên cột, số trung bình theo sau chữ khác biệt không ý nghĩa; = khácmột biệt cột, mức 1% bình theo sau chừ khác biệt không Chủ có thích: Trên**cùng cácỷ nghĩa sổ trung cỏ ỷ nghĩa; ** = khác biệt mức ỷ nghĩa % Hình 2.3 Qui trình vi nhân giống lan Dendrobỉum anosmum từ hạt Sau 30 ngày cấy tiêu số chồi, nghiệm thức D2 cho số chồi cao (2,3 chồi), Sang không45khác biệtsau mặt cấy thốngvềkêchỉ so tiêu với nghiệm DI thức D3 nhómlà môi ngày số chồi,thức nghiệm D2 nghiệm trường MS/2 nghiệm thức C2, C3 C4 nhóm môi trường MS Nhưng khác thức cho số chồi cao (2,7 chồi), cao nghiệm thức C2 (2,8 chồi) cóTuy nhiên, D3 hai nghiệm thức không khác biệt mặt thống kê so với nghiệm thức Dl, D3, D4 nhóm môi trường MS/2 nghiệm thức c 1, C3 C4 nhóm môi trường 34 3,5MS abcNhưng 1,04 ab biệt 15,2 abckê mức Xanh, cụmý nghĩa chồi1% sophát có khác thống với hai nghiệm thức co DO 36 thức Số rễ Dài Thí nghiệm Nghiên cửu sựSốảnh NAA vói hai loại môi Số rễ 5: rễ hưởng Dài rễ rễ Dài rễ trường MS MS/2 lên tạo rễ từ chồi lan Dendrobium mini Lan Dendrobium đối tượng dễ rễ Thật vậy, theo dõi mẫu cấy sau 30 ngày Bảng 2.11 Ảnh hưửng môi trường nuôi cấy lên tạo hoàn chỉnh Lan Dendrobium mini Chủ thích: Trên cột, sổ trung bình theo sau chữ khác biệt ỷ nghĩa; ** = khác biệt mức ỷ nghĩa % Xét tiêu số rễ, nghiệm thức NT9 (môi trường MS/2 + 0,7 mg.r NAA) cho số rễ cao (10,25 rễ), không khác biệt mặt thống kê so với nghiệm thức NT7 Chúvàthích: cácthống số trung theo sau khácnghiệm biệt không NT8,Trên kháccột, biệt kê bình mức ý nghĩa 1%một so chữ vớithìcác thức khác cỏ ỷ nghĩa; ** = khác biệt mức ý nghĩa 1% Tương tự tiêu dài rễ, nghiệm thức NT9 cho dài rễ tốt (1,08 cm), không khác biệt mặt thống kê so với nghiệm thức NT7 NT6, khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với nghiệm thức khác Thấp nghiệm thức NT1 (môi trường MS + mg.r NAA) cho số rễ thấp (4,50 rễ), khác biệt mặt thống kê mức ý nghĩaTóm 1%lại,songhiệm với nghiệm NT9, biệt BA) thống kê so với thức cthức + mg.r BA) D2 không (MS/2 +khác mg.r hai (MSNT7 nghiệm thức lại Tưcmg tự tiêu dài rễ, nghiệm thức NT1 cho dài nghiệm thức thích hợp cho việc nhân chồi lan Dendrobỉum mini Điều chứng rễ thấp rễ),cókhác biệt 1vềmg.r mặtBA thống kê kết mứcquả ý nhân nghĩa chồi 1% tốt so với đối nghiệm thức NT6, tỏ môi(0,23 trường bổ sung cho với lan NT7, NT8 NT9, không khác biệt thống kê so với nghiệm thức lại Như xét môi trường MS (NT1, NT2, NT3, NT4, NT5) môi 38 trường MS/2 (NT6, NT7, NT8, NT9, NT10) ta nhận môi trường MS/2 cho kết tốt, Nghiệm thức Giá thể Cao số Dài Số chồi kết tốt Cũng giống lên môisự trường dưỡng Bảng 2.12 Ảnhnhư hưởng củacây giánắp thểấm, trồng phátnghèo triển dinh Lan tạo nhiều ấm hon Dendrobỉum minỉ 15 ngày sau trồng (NSKT) T5 (dừa sợi) Điều phù hợp giá thể trồng nghiệm thức TI T4 hai loại giá thể mềm, giữ ẩm tốt, thân giá thể có chất hữu nên thích họp lan giống Dendrobium Ta nhận thấỵ điều rõ vuờn lan, Tương tự sang 45 NSKC, nghiệm thức NT7, NT9 nghiệm thức cho kết lan Dendrobium hay nghệ nhân trồng lan trồng vào vỏ trái dừa, rễ tốt Và so sánh hai nhóm môi trường nhận thấy nhóm môi trường vỏ trái dừa cung cấp chất hữu giữ ẩm độ tốt cho rễ lan Do chúng MS/2 cho kết rễ tốt nhóm môi trường MS phát triển tốt Tuy nhiên, giá gặp số hạn chế mà tìm hiểu tiếp phần sau Sang 60 NSKC, nhóm môi trường MS/2 lại cho kết rễ tốt nhóm thích: Trên mộtcác cột, số trung bình theo sau chữ môi trường MS Trong nhóm MS/2 môi trường cho kết rễ tốt nghiệm khác biệt ỷ nghĩa; * = khác biệtvới mức nghĩa Và tương phản điềuỷnày thể5% hai nghiệm thức T2, T3 với chất trồng thức NT7 (MS/2 + 0,2 mg.r NAA), không khác biệt mặt thống kê so với than Vì than chất giữ ẩm không cao, lại không chứa chất hữu cung cấp cho rễ lan nghiệm thức nhóm (NT8, NT9, NT10) Và nghiệm thức rễ thấp Do trồng giá thể cho thấy tăng trưởng chậm Và giá thể T5 (dừa NT1cây(MS mg.rcóNAA), không biệt thông kê hơn, ý nghĩa 1% so với Sang 30 NSKT +bắt0 đầu phát triểnnónhư khác cao dài sợi) cho kết thấp dù giá thể giữ ẩm than Đó nghiệm nhóm NT5) khác biệt không đángthưc kể ý(NT3, nghĩaNT4, thống kê nghiệm thức tiêu cao cây, số lá, dài Riêng tiêu số chồi khác biệt Bảng 2.14 Ảnh hưỏng giá thể trồng lên phát triển Lan Dendrobium mini chồi đă có sẳn, chưa có thêm chồi xuất 195mỉni NSKT (6,5 đoạn tháng) Tóm lại, lan Dendrobỉum giai rễ không cần nhiều dinh dưỡng Thícủa nghiệm nghiệm lan Dendrobium mỉni loại giá Bảng 2.13 Ảnh hưởng giá 6: thểThử trồng lên rasựcâyphát triển Lan thể khác Dendrobium mini 30 NSKT Nghiệm Giáthức Nghiệm thức số lámôDài Sau từ chai khay ươmSốthìchồi thấy mau chóng ổn định thể C ao chuyển thích nghi Tỉ lệ sống giai đoạn ươm ghi nhận trung bình lần lặp lại 70% - điều chứng tỏ lan Dendrobium minỉ cho khả thích nghi tốt tương đối dễ trồng loại cấy mô Trong giai đoạn nàỵ không tăng trưởng chiều cao kích thước, có thay đổi rõ: từ màu xanh non trở nên xanh đậm hơn, thân cúưg cáp hơn, rễ từ màu trắng xanh nhạt chuyển sang màu xanh đậm rõ Đó nhờ quang họp với ánh sáng tự nhiên khả thích nghi tốt nên sau tháng đủ cứng cáp để bố trí đưa vào chậu trồng Chú thích: Trên cột, số trung bình theo sau chừ khác biệt ỷ nghĩa; * = khác biệt mức ỷ nghĩa 5% Sang giai đoạn chuyển từ vườn ươm sang trồng thực sự, tức chuyển từ khay ươm sang chậu, giai đoạn đầu bị sốc chút, chựng lại chậm phát triển Cũng giống trườnẸ họp trồng lan lớn tách chiết, tách mẹ sức Và thông thưòưg sống đơn độc chậu lớn so với kích thước, Số hồi Số chồinày thường nghệ nhân trồng Giácây sẽthểbị Cao Dài yếu xét thờiở gian lâu Như giai đoạnphục đầu đếnlá Điều 7,5 tháng tuổi sau chuyển từ lan gọi “lạnh” cho cây ởbốgiai tríđoạn thí nghiệm vàđược tuyển chọn kỳ chai mô Trong giá thể giai thíchđoạn họp dớn dừa miếng nên tỷ lệ chết Ở 7,5 tháng tuổi, lan Dendrobỉum mỉnỉ cao trung bình 2-3 cm tính Đencó15khoảng ngày sau bắtmồi đầucây thích đáng chồi chính, từ 2khi đếntrồng lá, (NSKT), trung bìnhđãtrên bannghi đầu cho không thêm từ - chồi Chủ thích: Trên cột, sổ trung bình theo sau chữ khác biệt ỷ nghĩa; * = khác biệt mức ỷ nghĩa 5% Giai đoạn lan có tỉ lệ hao hụt không cao, chủ yếu rễ non lan hấp dẫn ốc sên, sâu cắn phá làm cho chựng lại chậm phát triển Nếu việc giữ cho lan khỏi công hai đối tượng tốt tránh ẩm ướt Khi 195 NSKT lúc to hình trụ, đốt thân lộ rõ Chiều cao thống kê Nghiệm thức TI (giá thể trồng không khác biệt ý nghĩa so với nghiệm có phát triển rõ Thân phình tăng cao có khác biệt có ý nghĩa mặt Dớn) cho chiều cao cao 42 (1,85 cm), 40 thức T4 (giá thể trồng vỏ dừa miếng), khác đưa Có Công ty quảng cáo đế bán sản phẩm nên đưa tiêu chuẩn lý tưởng đế hấp dẫn người mua, hay khâu chăm sóc thí nghiệm ta chưa tốt (thực tế ta dùng phân bón không sử dụng thuốc kích thích) Do kinh phí đề tài có hạn nên nghiên cứu sâu Tuy nhiên, bước đầu thành công qui trình e f Hình 2.4 Qui trình nhân giống lan Dendronỉum mỉni Một số ghi nhân đưọ’c trình trồng lan Dendrobium mỉnỉ Cây có tượng nhẩy chồi mạnh, từ chồi ban đầu nhẩy thêm nhiều chồi Giá thể trồng với dớn dừa miếng cho phát triển tốt Tuy nhiên với với loại giá thể trồng cần lưu ý: (1) Dễ gây úng rễ dư nước tưới nhiều Hình 2.5 Một số tưọng trình sinh trưỏưg lan Dendronỉum mini (a: Cây bị bệnh hạch hạt cải nấm Sclerotium rol/ìsii Sacc; b: Côn trùng cắn hại rễ non lan; c: Ốc sên cắn phá rễ non; d: Rong rêu công bề mặt giá thể trồng; 44 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua thời gian dài nghiên cứu cho hai qui trình vi nhân giống hai loài lan sau: 1.1 Lan Giả hạc Dendrobium anosmum - Gieo hạt: Nghiệm thức NT5 (môi trường MS + mg/1 BA + 0,2 mg/1 NAA) NT6 (MS + mg/1 NAA) hai môi trường thích hợp cho hạt lan nẩy mầm Chỉ tháng sau gieo tất hạt nẩy mầm tốt, tỉ lệ đạt > 85% - Nhân chồi: Nghiệm thức AI (MS + mg.r BA) A2 (MS + mg.r BA) cho kết nhân chồi tốt lan Giả hạc Tốt nghiệm thức A2, thời gian 90 NSKC, đạt 3,17chồi, chồi cao 20,6 mm, chồi xanh tốt Môi trường bổ sung BA (nghiệm thức AO) cho kết nhân chồi thấp Đồng thòi sử dụng BA cao cho kết không tốt, nghiệm thức A4 (MS + 10mg/l BA) cho số chồi thấp, xuất chồi dị dạng, phát triển yếu Qui trình vi nhân giống lan Dendrobỉum anosmum (Chồi phát triển xanh tốt, hệ số nhân 34 chồi/năm, chồi cao 20,6 mm) MS+ mg.ĩBA Tạo rễ thành hoàn chỉnh MS + mg.r BA 3,5 tháng MS + mg/1 NAA Trồng vườn ưom 1.2 Lan Dendrobium mini - Nhân chồi: Nghiệm thức C2 (MS + mg/1 BA) D (MS/2 + mg/1 BA) hai nghiệm thức thích hợp cho việc nhân chồi lan Dendrobium mini Điều chứng tỏ môi trường có bổ sung mg/1 BA cho kết nhân chồi tốt lan Dendrobỉum mini Và xét tính kinh tế ta nên chọn nghiệm thức D2 Sau tháng nhân chồi 3,8 chồi, chồi cao l,26cm - Ra rễ: Lan Dendrobium minỉ đối tượng có khả tạo rễ mạnh, chồi lan rễ môi trường không bổ sung chất điều hòa sinh trưởng NAA (nghiệm thức NT1 NT6) Môi trường nghiệm thức NT7 (MS/2 + 0,2 mg/1 NAA) cho kết rễ tốt có tính kinh tế tất nghiệm thức khác thí nghiệm Ở 60 NSKC, chồi lan tạo rễ tốt thành hoàn chỉnh để đưa vườn ươm Qui trình vi nhân giống lan Dendrobium mini Cụm chồi Nhân chồi MS/2 + mg/1 BA Tạo rễ tháng MS/2 + 0,2 mg/1 NAA 46 Kiến nghị Nghiên cứu tiếp ảnh hưởng đến mẫu cấy nhân giống lợi nhuận nồng độ cao, hay việc giống mà cấy ảnh hưởng nồng độ cao chất điều hòa sinh trưởng chất lượng đưa trồng Vì có nhiều sở sử dụng chất điều hòa sinh trưởng auxin cytokinin chuyền nhiều lần gây ảnh hưởng đến phẩm chất Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến hoa ống nghiệm lan Dendrobium anosmum Thực qui mô nghiên cứu lớn với nhân giống lan Dendrobium anosmum Vì đối tượng có giá trị kinh tế TÀI LIỆU THAM KHẢO Bùi Bá Bổng 1995 Nhân giống nuôi cấy mô An Giang: Sở Khoa Học Công Nghệ Môi Trường An Giang Bùi Bảo Lộc 2008 Lan Việt: Dã Hạc, Phi Điệp - Dendrobium anosmum (Lindl.) Hoa lan Việt Nam http://www.hoalanvietnam.org/Article.asp?ID=442 (11/4/2009) Bùi Trang Việt 2001 Tế bào học Thành phố Hồ Chí Minh: Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Debergh Pierre 2006 ứng dụng công nghệ nuôi cấy mô nghiên cứu sản xuất hoa - kiểng Đồng Sông Cửu Long Bài giảng, Đại học cần Thơ Dương Công Kiên 2006 Nuôi cấy mô (tập III) Tủ sách ĐH KHTN Dương Tấn Nhựt 2007 Hội Nghị khoa học - Công nghệ sinh học thực vật công tác nhân chọn tạo giống hoa NXB Nông Nghiệp - TP HCM Đặng Phương Trâm 2005 Nuôi cấy mô thực vật ứng dụng Bài giảng, ĐH cần Thơ Griesbach, R J 2002 Development of Phalaenopsis Orchids for the Mass-Market In: J Janick and A Whipkey (eds.) Trends in new crops and new uses ASHS Press, Alexandria, VA p 458^465 [on-line] Available from: http://www.hort.purdue.edu/newcrop/ncnu02/v5-458.html (Accessed 10.01.2008) Huỳnh Văn Thói 2005 cẩm nang nuôi trồng kinh doanh phong lan Hà Nội: NXB Trẻ Minh Tú 2008 Bản tin Tạp Hoa Cảnh, số 10 (148):32 Tp Hồ Chí Minh Nguyễn Bảo Toàn 2004 Nuôi cấy mô tế bào thực vật Giáo trình, ĐH cần Thơ 48 KNO3 Khoáng đa lượng 1900 PHỤ CHƯƠNG PHỤ CHƯƠNG Trần Văn Bảo.Bảng 1999 2KỹẢnh thuật nuôi trồng Phong Trẻ - Tp.tạo HCM 75 Dendrobium Bảng Số lan Giảlan hạc 15 hưởng NAA lênNXB quáNSKC trình rễ trang Lan PHỤ CHƯƠNG Bảng Môi trường MS (Murashige & Skoog), 1962 Trần Văn Huân Văn Tích Luợm 2004 Kỹ thuật nuôi trồng cấy lan Tp.HCM: NXB Mỹ Thuật MnS04.4H20 Khoáng vi lưọng 22,3 Bảng Ảnh hưởng NAA lên trình tạo rễ Lan Dendrobium Glycine Vitamin chất hũn CO’ 2,00 Bảng Ảnh hưởng NAA lên trình tạo rễ Lan Dendrobium 50 Bảng Số lan Giả hạc 30 NSKC Bảng Số rễ lan Giả hạc 15 NSKC Bảng Chiều dài rễ lan Giả hạc 15 NSKC Bảng Số chồi lan Giả hạc 15 NSKC Bảng Chiều cao chồi lan Giả hạc 15 NSKC cv (%) Bảng Số rễ lan Giả hạc 30 NSKC cv (%) = 6,81 52 = 26,38 cv (%) Bảng Chiều dài rễ lan Giả hạc 30 NSKC Bảng 11 Số lan Giả hạc 60 NSKC cv (%) Bảng Số chồi lan Giả hạc 30 NSKC = 16,00 cv (%) Bảng 10 Chiều cao chồi lan Giả hạc 30 NSKC Bảng 12 Số rễ lan Giả hạc 60 NSKC Bảng 13 Chiều dài rễ lan Giả hạc 60NSKC cv (%) = 7,62 Bảng 14 Số chồi lan Giả hạc 60 NSKC Bảng 16 Số lan Giả hạc 75 NSKC Bảng 15 Chiều cao chồi lan Giả hạc 60 NSKC Bảng 17 Số rễ lan Giả hạc 75 NSKC Bảng 18 Chiều dài rễ lan Giả hạc 75 NSKC cv (%) Bảng 19 Số chồi lan Giả hạc 75 NSKC cv (%) = 8,16 = 17,09 cv (%) 54 Bảng 20 Chiều cao chồi lan Giả hạc 75 NSKC Bảng 21 Số lan Giả hạc 90 NSKC Bảng 26 Số lan Giả hạc 105 NSKC Bảng 22 Số rễ lan Giả hạc 90 NSKC Bảng 23 Chiều dài rễ lan Giả hạc 90 NSKC Bảng 24 Số chồi lan Giả hạc 90 NSKC Bảng 25 Chiều cao chồi lan Giả hạc 90 NSKC cv (%) = 7,85 cv (%) = 9,09 56 cv (%) Bảng 27 Số rễ lan Giả hạc 105 NSKC = 21,05 cv (%) Bảng 28 Chiều dài rễ lan Giả hạc 105 NSKC cv (%) Bảng 29 Số chồi lan Giả hạc 105 NSKC = cv 15,44 (%) Bảng 30 Chiều cao chồi lan Giả hạc 105 NSKC cv (%) = 9,81 [...]... Nghiên cứu qui trình ra cây của cây lan cấy mô nhằm giúp gia tăng tỉ lệ cây sống sau khi đưa ra ngoài 2 Nội dung Nghiên cứu môi trường gieo hạt thích họp cho hạt lan, môi trường nhân nhanh và tạo cây hoàn chỉnh lan Dendrobỉum anosmum (Giả hạc) Nghiên cứu môi trường nuôi cấy thích họp cho việc nhân nhanh và tạo cây hoàn chỉnh cho lan Dendrobium mỉni Nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố bên trong và bên... lan Dendrobium cũng giống như rễ lan Vũ nữ, Cattleya thuộc loại rễ bán gió Nhóm này thường có rễ nhỏ nhưng rất nhiều rễ, chủ yếu bám vào giá thể, vào thân cây để hút dưỡng chất dính vào giá thể như nước, cho nên khi trồng vào chậu, phải để giá thể nhiều hơn, gần như toàn bộ rễ đều bám vào giá thể, vào thành chậu, chỉ có một số ít rễ chìa ra ngoài Đối với lan rễ bán gió phải trồng với giá thể nhỏ hơn và. .. trên Bảng Ký hiệu các chồi nghiệm thức thí nghiệm tạo rễ lan Dendrobium mini Môi trường nuôi cấy Nồng độ NAA (mg.ĩ) 3.2 Lan Dendrobỉum mitti 3.2.1 Thí nghiệm 4: Nghiên cứu môi trường nuôi cấy mô thích họp Bố trí thí lan nghiệm: thí nghiệm cho việc nhân chồi Dendrobium mini được bố trí với 6 nghiệm thức là 6 loại giá thể trồng, với 5 lần lặp lại là 5 chậu, mỗi chậu trồng một... khi trồng (NSKT) T5 (dừa sợi) Điều này cũng khá phù hợp vì đối với giá thể trồng ở nghiệm thức TI và T4 là hai loại giá thể mềm, giữ ẩm tốt, bản thân giá thể cũng có chất hữu cơ nên rất thích họp đối với lan giống Dendrobium Ta nhận thấỵ điều này rất rõ ở các vuờn lan, Tương tự sang 45 NSKC, nghiệm thức NT7, NT9 cũng là nghiệm thức cho kết đối với lan Dendrobium rất hay được các nghệ nhân trồng lan trồng. .. Hình nhân 1.7 chồiQui lan thông trình qua kh các tráichỉvàtiêu: gieo hạt lan Dendrobium anosmum (2.2a: ngâm trái lan trong dung dịch clorox; 2.2b,c,d,e: gắp trái ra và xẻ lấy hạt cấy2 2 vào Bảng 1.4 3.2.3 Ký hiệu Thí các nghiệm nghiệm 6: Thử thứcnghiệm nhân chồi ra cây lanlan Dendrobỉum Dendrobium minỉmỉni trên các loại giá thể khác nhau Chiềunuôi cao chồi (mm): lấy trung bình Nồng chiều cao của(mg.r) các. .. gian 45 NSKC cho kết quả tự ởsinh thời giancó30rất NSKC, môi nhân2 003) chồi Thật của vậy mẫu qua cấy. cácDothíđónghiệm nghiệm thức D2 tượng là nghiệm thức hiệu cao ta thấy các chồi lan trưởng tốt quả trên môi nhất trường D2 (MS/2 + 1 mg.r BA) vẫn là môi trường cho kết quả nhân chồi tốt nhất Điều để tính quảra,kinh ngườigiáta cảm thử sử dụng trongtrường việc này nhân Tuy chồinhiên, loài lan này hiệu Ngoài... như nhau và chúng được chọn tùy theo điều kiện ngoại cảnh, nhân lực, loài lan và qui mô sản xuất f Rong biển: rất được ưu chuộng đối với lan Hồ điệp Tuy nhiên, loại giá thể này hút nước nhiều và giữ ẩm cao nên hết sức cẩn thận khi sử dụng Theo Nguyễn Công Nghiệp (2004) và Nguyễn Thị Mỹ Duyên (2006), thì có các loại giá thể trồng lan và đặc tính của từng loại như sau: g Re lục bình: có khắp nơi và rất... giống (Nguyễn Bảo chuyển Toàn, 2004) - Có 1.4 thể tạo nhân được các của giống bằng kỹ thuật cứu phôi, gen - Một số cây quí có thể nhân nhanh để đưa vào sản xuất và việc trao đổi giống được dễ dàng Ngoài ra, kỹ thuật nuôi cấy mô còn giúp cho việc nhân giống hữu tính 14 các đối 1.8.1 Qui trình vi nhân giống Qui trình vi nhân giống đã được Debergh và Zimmerman (1991) chia thành 4 giai đoạn khác nhau, mỗi giai... nghiên cứu khả năng tạo chồi hoa Dendrobium Mild Yumi trong nuôi cấy in vỉtro Đầu tiên ông cũng cho tự thụ trái lan, sau đó khử trùng và cấy hạt hình Theo các nghiên cứu của nhiều tác giả đã cho thấy tỉ lệ auxin và cytokinin trong thành protocorm và lên chồi tạo cây hoàn chỉnh Và chồi lan được sử dụng bố trí thí môi trường nuôi cấy ảnh hưởng đến sự thành lập tạo chồi và rễ Một tỉ lệ cao cytokinin và auxin... thấp thích hợp cho sự tạo chồi Trong khi tỉ lệ cao auxin và cytokinin thấp IV họp PHƯƠNG TIỆN VÀ độ PHƯƠNG thích cho sự tạo rễ, mức trung gian PHÁP giữa haiNGHIÊN tỉ lệ này thích họp tạo callus Hình 1 Thòi gian và địa điểm thí nghiệm 1.5 là thí nghiệm các mức độ BA và NAA khác nhau trên sự thành lập chồi và rễ trên cứu 2 Mô tả các phưong pháp nghiên cún liên quan đã đưọc thực hiện Có rất nhiều các nơi ... MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG NHÂN GIÓNG LAN Dendrobium anosmum, Dendrobium mini BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ NGHIÊN CỨU CÁC LOẠI GIÁ THẺ TRÒNG LAN Dendrobium mini. .. Dendrobỉum minỉ phương pháp nuôi cấy mô Nghiên cửu loại ệiá thể trồng lan Dendrobỉum mỉnỉ thích họp cho hiệu cao thực nhăm nhân nhanh hai loài lan nghiên cứu qui trình lan mô cho tỷ lệ sống cao để cung... cho hạt lan, môi trường nhân nhanh tạo hoàn chỉnh lan Dendrobỉum anosmum (Giả hạc) Nghiên cứu môi trường nuôi cấy thích họp cho việc nhân nhanh tạo hoàn chỉnh cho lan Dendrobium mỉni Nghiên cứu