BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN ĐÌNH QUỲNH PHÚ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY AN ĐIỀN NÓN (HEDYOTIS PILULIFERA (PIT.) T.N.NINH – RUBIACEAE) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN ĐÌNH QUỲNH PHÚ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY AN ĐIỀN NÓN (HEDYOTIS PILULIFERA (PIT.) T.N.NINH – RUBIACEAE) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 60720406 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Thị Hoài HÀ NỘI 2015 LỜI CẢM ƠN Trong trình nghiên cứu hoàn thành luận văn này, nhận nhiều giúp đỡ quý báu thầy cô giáo, chuyên gia nhiều lĩnh vực đồng nghiệp, bạn bè gia đình Trước hết, xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, phòng Sau Đại học, thầy cô giáo, kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu, Dược học cổ truyền Thực vật Dược - Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho trình học tập nghiên cứu Tiếp theo, xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám hiệu Trường Đại học Y Dược Huế, Ban chủ nhiệm cán đồng nghiệp Khoa Dược - Trường Đại học Y Dược Huế tạo điều kiện cho hoàn thành luận văn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Nguyễn Thị Hoài, người tận tình hướng dẫn, quan tâm bảo tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Thế Cường, ThS Hồ Việt Đức ThS Lê Tuấn Anh giúp đỡ hoàn thành luận văn Cuối lời cảm ơn sâu sắc nhất, muốn gửi tới gia đình, người thân bạn bè, người bên cạnh ủng hộ động viên trình học tập Huế, ngày 12 tháng 10 năm 2015 Nguyễn Đình Quỳnh Phú MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Chi An điền (Hedyotis L.) 1.1.1 Đặc điểm thực vật phân bố 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Tác dụng dược lý công dụng 12 1.2 Cây An điền nón Hedyotis pilulifera (Pit.) T.N.Ninh 18 1.2.1 Vị trí phân loại 18 1.2.2 Đặc điểm thực vật 18 1.2.3 Thành phần hóa học 18 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .19 2.1 Đối tượng phương tiện nghiên cứu .19 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.2 Hóa chất, máy móc, thiết bị dùng nghiên cứu .19 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Nghiên cứu thực vật 19 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 20 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 27 3.1 Kết nghiên cứu thực vật 27 3.1.1 Mô tả đặc điểm hình thái giám định tên khoa học loài nghiên cứu 27 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu An điền nón 29 3.1.3 Đặc điểm bột An điền nón 32 3.2 Kết nghiên cứu thành phần hóa học .33 3.2.1 Định tính nhóm chất .33 3.2.2 Chiết xuất phân lập hợp chất từ An điền nón 34 3.2.3 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ An điền nón 39 Chƣơng BÀN LUẬN 50 4.1 Về thực vật 50 4.2 Về thành phần hóa học .51 KẾT LUẬN 57 KIẾN NGHỊ 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT AH ALT AST b 13 C-NMR CD3OD CDCl3 COSY d DEPT Hep-G2 HMBC H-NMR HSQC IC50 IM LD50 LDH HL-60 k562 MCF-7 MRSA MTT NMR NOESY RP18 SGOT SGPT s SKC SK-Hep-1 STT TBA-MDA THP-1 TLTK : Atypical hyperplasia : Alanin Amino Transferase : Aspartate Aminno Transferase : broad : Carbon Nuclear Magnetic Resonance : Deuterated methanol : Deuterated chloroform : Correlation spectroscopy : doublet : Distortionless enhancement by polarization transfer : Liver hepato cellular carcinoma cell : Heteronuclear multiple bond correlation : Proton Nuclear Magnetic Resonance : Heteronuclear single quantum correlation : Inhibition concentration at 50% : Intestinal metaplasia : Lethal dose 50% : Lactate dehydrogenase : Human leukemic cell : Human leukemia cell : Breast carcinoma cell : Methicilline resistant Staphylococcus aureus : 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromid : Nuclear Magnetic Resonance : Nuclear overhauser effect spectroscopy : Reversed phase : Serum Glutamic Oxaloacetic Transaminase : Serum Glutamic Pyruvic Transaminase : singlet : Sắc ký cột : Human endothelial cell : Số thứ tự : Thiobarbituric acid-Malonyl dialdehyd : Human monocytic cell : Tài liệu tham khảo DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Các loài thuộc chi Hedyotis L Việt Nam Bảng 1.2 Một số alkaloid tiêu biểu phân lập từ chi Hedyotis L Bảng 1.3 Một số iridoid tiêu biểu phân lập từ chi Hedyotis L Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu mẫu nghiên cứu 33 Bảng 3.2 Số liệu phổ NMR hợp chất HP4 hợp chất tham khảo 40 Bảng 3.3 Số liệu phổ NMR hợp chất HP6 hợp chất tham khảo 43 Bảng 3.4 Số liệu phổ NMR hợp chất HP3 hợp chất tham khảo 46 Bảng 3.5 Số liệu phổ NMR hợp chất HP7 hợp chất tham khảo 48 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 3.1 Ảnh cành mang hoa An điền nón Hedyotis pilulifera 28 Hình 3.2 Ảnh hoa, hạt An điền nón Hedyotis pilulifera 28 Hình 3.3 Ảnh vi phẫu thân An điền nón 29 Hình 3.4 Ảnh vi phẫu An điền nón (vật kính 10) 30 Hình 3.5 Ảnh vi phẫu An điền nón (vật kính 40) 31 Hình 3.6 Ảnh số đặc điểm bột thân An điền nón 32 Hình 3.7 Ảnh số đặc điểm bột An điền nón 33 Hình 3.8 Sơ đồ tạo cao chiết phân đoạn từ phần mặt đất An điền nón 35 Hình 3.9 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn nước An điền nón 37 Hình 3.10 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetate An điền nón 38 Hình 3.11 Ảnh sắc ký đồ hợp chất phân lập 38 Hình 3.12 Cấu trúc hóa học hợp chất HP4 41 Hình 3.13 Tương tác HMBC, COSY, NOESY hợp chất HP4 41 Hình 3.14 Cấu trúc hóa học hợp chất HP6 44 Hình 3.15 Tương tác HMBC, COSY, NOESY hợp chất HP6 44 Hình 3.16 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC hợp chất HP3 46 Hình 3.17 Cấu trúc hóa học hợp chất HP7 49 Hình 3.18 Tương tác HMBC, COSY, NOESY hợp chất HP7 49 Hình 4.1 Cấu trúc hóa học hợp chất phân lập 52 Hình 4.2 Con đường sinh tổng hợp iridoid 53 Hình 4.3 Chu trình sinh tổng hợp iridoid glycosid họ Rubiaceae 54 ĐẶT VẤN ĐỀ An điền (Hedyotis L.) chi lớn họ Cà phê (Rubiaceae) Trên giới chi ghi nhận có khoảng 500 loài, phân bố chủ yếu khu vực nhiệt đới cận nhiệt đới [17] Ở Việt Nam, theo tác giả Phạm Hoàng Hộ, chi Hedyotis L có khoảng 70 loài, phân bố nhiều nơi, rải rác khắp nước [6] Thành phần hoá học chi Hedyotis L đa dạng với nhóm hợp chất có hoạt tính sinh học alcaloid, anthraquinon, flavonoid, saponin, sterol, iridoid lignan Nhiều loài chi Hedyotis L sử dụng y học cổ truyền nhiều nước (đặc biệt nước châu Á) để chữa bệnh điều trị thấp khớp, đau dày, suy nhược thần kinh, hạ sốt, làm vết thương nhanh lên da non… [67] Các nghiên cứu Y học đại cho thấy dịch chiết hợp chất phân lập từ loài thuộc chi Hedyotis L chứa đựng nhiều hoạt tính sinh học tốt kháng khuẩn, kháng viêm, chống oxy hóa, gây độc tế bào ung thư, bảo vệ tế bào thần kinh [54] Như thấy với số loài phong phú, chi An điền chứa đựng tiềm cho nghiên cứu tìm kiếm hoạt chất có tác dụng, định hướng cho nghiên cứu phát triển thành sản phẩm thuốc phục vụ sức khỏe người Theo kinh nghiệm dân gian, An điền nón (Hedyotis pilulifera (Pit.) T.N.Ninh) người dân vùng bảo tồn Khe Trăn dùng để chữa bệnh đường tiêu hóa đau nhức xương khớp [16] Tuy nhiên chưa thấy có công bố khoa học đặc điểm thực vật thành phần hóa học hay tác dụng sinh học loài Việc làm sáng tỏ đặc điểm thực vật quan sát, mô tả hình thái, nghiên cứu đặc điểm vi học phân tích, nghiên cứu thành phần hóa học loài H pilulifera (Pit.) T.N.Ninh góp phần cung cấp kiến thức khoa học góp phần tiêu chuẩn hóa dược liệu Với lý đó, đề tài nghiên cứu “Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học An điền nón Hedyotis pilulifera (Pit.) T.N.Ninh − Rubiaceae” với mục tiêu chính: Nghiên cứu đặc điểm thực vật An điền nón Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hóa học 4–5 hợp chất phân lập từ An điền nón Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Chi An điền (Hedyotis L.) 1.1.1 Đặc điểm thực vật phân bố Trên giới chi Hedyotis L gồm khoảng 500 loài, phân bố rộng khu vực cận nhiệt đới nhiệt đới, chủ yếu châu Phi châu Á, thường mọc rừng, ven rừng nơi đất ẩm, từ vùng núi cao đến vùng đất cát ven biển Các loài thuộc chi Hedyotis L thường thảo, bụi, hàng năm lâu năm, phát triển dạng bò leo Thân thường cạnh, cạnh gần tròn đến tròn, có lông hay không lông Lá mọc đối (hiếm mọc vòng), kèm không rụng, gắn với cuống gốc, hay kết hợp xung quanh thân thường gọi bẹ Lá bẹ thường dạng hình tam giác có chia thùy có lông cứng Hoa dạng chùm tán ngọn, nách lá, nách lá, có cọng ngắn dài Hoa thường lưỡng tính Tràng hoa màu trắng, hồng, tím màu xanh, hình ống khác nhau, nhẵn có lông bên trong, thùy (hoặc H hainanensis (Chun) W C Ko), nhị (hoặc H hainanensis (Chun) W C Ko) số lượng tràng hoa, nằm xen kẻ với tràng, đính vào ống họng tràng Bộ nhụy gồm noãn dính thành bầu Núm nhụy chẻ đôi Đài phát triển, thường có (hoặc H hainanensis (Chun) W C Ko) dính với bầu Trái tròn hay hình xoan, nang nhỏ, không tự khai, hay tự khai với quản bì mỏng, đài không hình muỗng, hạt từ vài đến nhiều, nhỏ, góc có cạnh phẳng lồi [17] Theo Phạm Hoàng Hộ, chi An điền nước ta có khoảng 70 loài, chia làm thứ, phân bố rải rác khắp nước (Bảng 1.1) [5], [6] Gần đây, nhà khoa học Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam phát bổ sung loài Hedyotis cathayana W C Ko (An điền Trung Quốc) vào hệ thực vật nước ta Trước đây, loài ghi nhận Hải Nam (Trung Quốc) [5] Ở Malaysia có khoảng 35 loài, Trung Quốc có 67 loài (trong có 38 loài đặc hữu) [18] Bảng 1.1 Các loài thuộc chi Hedyotis L Việt Nam [6] STT Tên khoa học Tên Việt Nam H ovatifolia An điền xoan H oligocephala H pachycarpa H corymbosa Cóc mẵn STT 36 37 38 39 Tên khoa học H pterita H hedyotidea H krewanhensis H lecomtei Tên Việt Nam An điền cánh An điền Krewanh An điền Lecomte Phụ lục 4: Phổ hợp chất HP3: Asperuloside - - 13 - HSQC - HMBC H-NMR C-NMR Phụ lục 5: Phổ hợp chất HP7: Paederoside - - 13 - DEPT - HSQC - HMBC - COSY - NOESY H-NMR C-NMR [...]... bracteata H tenelliflora H uncinella var mekonggensis 65 66 67 68 69 70 An đi n Pếtlot An đi n nhám An đi n nhánh An đi n áo An đi n tai An đi n ph n An đi n cạnh nh n An đi n ph n An đi n g n mảnh An đi n lindley Dạ cẩm An đi n đen An đi n Philippin An đi n Bắc bộ An đi n lá thông Răm n i An đi n đầu nhỏ An đi n mouret An đi n Phú Quốc An đi n trứng An đi n s t An đi n dung An đi n nhiều chụm An đi n. .. heynii H arguta H labialis H biflora H precox H contracta H valerianelloides H crassiflolia H dichotoma An đi n lan An đi n cỏ An đi n lữ đồng An đi n tinh An đi n môi An đi n hai hoa An đi n sớm An đi n ng n An đi n lá dày An đi n lưỡng ph n H justiciformis An đi n xu n ti t H glabra An đi n không lông H lineata An đi n l n H pierrei An đi n pierre H chereevensis An đi n cheo-reo H racemose An đi n. .. chưa thấy các công bố n o về đặc điểm vi học, thành ph n hóa học, cũng như t c dụng sinh học của loài An đi n n n ở Vi t Nam và tr n thế giới Như vậy việc t m hiểu và nghi n cứu về cây An đi n n n sẽ góp ph n t ng giá trị ứng dụng của cây vào thực t cũng như làm phong phú h n những hiểu bi t về thực v t, hóa học, t c dụng sinh học của các cây thuộc chi Hedyotis L., đồng thời bổ sung thêm thông tin vào... được tiếp t c nghi n cứu sâu rộng nhằm khám phá các cấu trúc và ho t tính mới, làm sáng t cơ chế t c dụng cũng như mối quan hệ cấu trúc - ho t tính của các ho t ch t Chưa có công bố n o về t c dụng sinh học và độc t nh của loài H pilulifera (Pit. ) T. N. Ninh tr n thế giới và ở Vi t Nam 1.2 Cây An đi n n n Hedyotis pilulifera (Pit. ) T. N. Ninh 1.2.1 Vị trí ph n loại An đi n n n Hedyotis pilulifera (Pit. ) T. N. Ninh. .. scandens An đi n leo H elegans An đi n thanh H scoparia An đi n chổi H chevalierii An đi n Chevalier H ternata An đi n chụm ba H tetrangularis An đi n b n cạnh H wallichii An đi n wallichii H havilandii An đi n Haviland H effusa An đi n tr n H ampliflora An đi n hoa rộng H umbellata An đi n t n H capitellata An đi n đầu H macrosepala H An đi n đ n gi n simplicissima 40 41 42 43 44 45 46 47 48 H petelotii... trợ về chuy n m n của TS Nguy n Thế Cường (Vi n Sinh thái và T i nguy n Sinh v t Vi n H n lâm Khoa học Công nghệ Vi t Nam) t n khoa học của mẫu tiêu b n VL 01 được giám định là: Hedyotis pilulifera (Pit. ) T. N. Ninh thuộc họ Cà phê Rubiaceae, có t n Vi t Nam phổ thông là An đi n n n và t n khoa học đồng nghĩa là Oldenlandia pilulifera (Pit. ) Hình ảnh của cành mang lá và hoa, hình ảnh quả và h t của cây. .. khoa học của loài n y cũng như chi n y ở Vi t Nam 18 Chƣơng 2 ĐỐI T ỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHI N CỨU 2.1 Đối t ợng và phƣơng ti n nghi n cứu 2.1.1 Đối t ợng nghi n cứu Đối t ợ n tr n m t đ t của cây An đi n n n, mẫu được thu t i huy n Vĩnh Linh, t nh Quảng Trị vào tháng 8 n m 2014 T n khoa học được giám định là Hedyotis pilulifera (Pit. ) T. N. Ninh – Họ Cà phê (Rubiaceae) Tiêu b n mẫu cây (kí hiệu VL-0 1). .. sử dụng chủ yếu hi n nay Phổ cộng hưởng t h t nh n là t n số cộng hưởng của các h t nh n trong ph n t Tuy nhi n, t n số hấp thu của h t nh n thay đổi theo t trường ngoài B 0 Để thu n ti n và loại bỏ ảnh hưởng của B0 trong số liệu phổ, người ta chia sự chênh lệch t n số cộng hưởng của h t nh n so với m t ch t chu n (thường dùng nh t là trimethyl silan, TMS) cho t n số cộng hưởng của ch t chu n đó... t h t nh n của các ch t đó Có 2 cách xác định n ng lượng cộng hưởng n y là xác định t n số cộng hưởng theo t ng t n số trong su t dải t n số cộng hưởng (cộng hưởng t h t nh n qu t) hoặc ghi nh n đồng thời mọi t n số cộng hưởng rồi sử dụng bi n đổi Fourier để t ch riêng t n số cộng hưởng của t ng h t nh n (cộng hưởng t h t nh n bi n đổi Fourier (Fourier transform - NMR, FT - NMR )) và là kỹ thu t sử... (Pit. ) T. N. Ninh (t n đồng nghĩa: Oldenlandia pilulifera (Pit. )) thuộc chi An đi n (Hedyotis L .), họ Cà phê (Rubiaceae), bộ Long đởm (Gentianales), lớp Ngọc lan (Magnoliopsida) và ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) [6] 1.2.2 Đặc điểm thực v t Cây th n cỏ, mọc leo, cành to 4 mm, lúc non có lông m n Lá có phi n thon, to 2-4×1-1,5cm, nh n, đáy t , có lông m n, g n phụ 3-4 cặp, cuống ng n, lá bẹ có 56 lông gai ... 3-O-[2-O-(6-O-E-feruloyl )- -D-glucopyranosyl ]- -D- (23), (24), kaempferol 3-O-(2-O-β-D-glucopyranosyl )- -D- quercetin 3-O-(2-O-β-D-glucopyranosyl )- -D- galactopyranosid (25) [38] Các nhà khoa học Malaysia... đề tài nghiên cứu Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học An điền nón Hedyotis pilulifera (Pit.) T.N.Ninh − Rubiaceae” với mục tiêu chính: Nghiên cứu đặc điểm thực vật An điền nón Chiết... 69 70 An điền Pếtlot An điền nhám An điền nhánh An điền áo An điền tai An điền phún An điền cạnh nhọn An điền phún An điền gân mảnh An điền lindley Dạ cẩm An điền đen An điền Philippin An điền