MỤC LỤC MỤC LỤC MỤC LỤC HÌNH .2 ĐẶT VẤN ĐỀ NỘI DUNG CHƯƠNG I TẦM QUAN TRỌNG CỦA VIỆC NGHIÊN CỨU HPV .5 1.1 Vị trí phân loại HPV sinh giới 1.2 Vai trò HPV CHƯƠNG II CÁC PHƯƠNG PHÁP HIỆN TẠI ĐƯỢC SỬ DỤNG ĐỂ NGHIÊN CỨU HPV 2.1 Quan sát mắt thường 2.2 PAP’s smear 2.3 Phương pháp lai phân tử sử dụng sử dụng mẫu dò trực tiếp 2.4 PCR (Polymerase Chain Reaction) 10 2.5 Định genotype HPV kỹ thuật PCR – ELISA 14 2.6 Xác định genotype HPV kỹ thuật giải trình tự trực tiếp sản phẩm PCR đặc hiệu 15 2.7 Xét nghiệm bắt mồi lai (Hybrid Capture – HC2) 16 2.8 Real-time PCR 16 CHƯƠNG III: CẤU TRÚC CỦA HPV 19 3.1 Cấu tạo .19 3.2 Chức vùng gene protein .21 3.3 Vòng đời đáp ứng miễn dịch 23 CHƯƠNG IV QUÁ TRÌNH XÂM NHẬP VÀ SỰ LAN TRUYỀN CỦA CỦA HPV 25 4.1 Quá trình tương tác xâm nhập vào tế bào chủ HPVs 25 4.1.1 Các thụ thể HPV 25 4.1.2 Sự xâm nhập HPV vào tế bào 27 4.2 Sự lan truyền HPV .30 4.2.1 Sự lan truyền thể 30 4.2.2 Sự lan truyền từ thể sang thể khác 30 CHƯƠNG V SAO CHÉP, PHIÊN MÃ VÀ DỊCH MÃ 32 5.1 Sao chép .32 5.2 Phiên mã 33 5.3 Dịch mã 37 9.1 Bệnh ung thư cổ tử cung 38 9.1.1 Cơ chế gây bệnh HPV 38 9.1.2 Các tổn thương tiền ung thư đường sinh dục 40 9.2 Mụn cóc da .41 9.3 Mụn cóc hậu môn – sinh dục 42 9.4 U nhú hô hấp tái diễn 44 9.5 U nhú miệng .44 KẾT LUẬN 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO .47 MỤC LỤC HÌNH MỤC LỤC MỤC LỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ NỘI DUNG CHƯƠNG I TẦM QUAN TRỌNG CỦA VIỆC NGHIÊN CỨU HPV 1.1 Vị trí phân loại HPV sinh giới 1.2 Vai trò HPV CHƯƠNG II CÁC PHƯƠNG PHÁP HIỆN TẠI ĐƯỢC SỬ DỤNG ĐỂ NGHIÊN CỨU HPV 2.1 Quan sát mắt thường 2.2 PAP’s smear Hình Các tế bào cổ tử cung bình thường kính hiển vi Hình Các tế bào bất thường cổ tử cung kính hiển vi 2.3 Phương pháp lai phân tử sử dụng sử dụng mẫu dò trực tiếp Hình Kỹ thuật lai phân tử 10 2.4 PCR (Polymerase Chain Reaction) 10 Hình Vị trí gen L1 E6/E7 HPV độ dài sản phẩm PCR phát định type HPV 12 Hình Kết ts-PCR định type HPV type 33, 6/11, 58, 52 56 13 Hình Kết ts-PCR định type HPV type 35, 42, 43 44 13 Hình Kết ts-PCR định type HPV type 68, 39, 51 66 13 Hình Kết ts-PCR định type HPV type 16, 18, 31, 59 45 13 Hình Phát định type HPV kỹ thuật NM – PCR 14 2.5 Định genotype HPV kỹ thuật PCR – ELISA 14 2.6 Xác định genotype HPV kỹ thuật giải trình tự trực tiếp sản phẩm PCR đặc hiệu 15 2.7 Xét nghiệm bắt mồi lai (Hybrid Capture – HC2) 16 2.8 Real-time PCR 16 CHƯƠNG III: CẤU TRÚC CỦA HPV 19 3.1 Cấu tạo 19 Hình 11 Cấu trúc HPV 19 Hình 12 Cấu trúc L1, L2 HPV 20 3.2 Chức vùng gene protein 21 Hình 13 Cấu trúc gene DNA HPV 16 22 3.3 Vòng đời đáp ứng miễn dịch 23 CHƯƠNG IV QUÁ TRÌNH XÂM NHẬP VÀ SỰ LAN TRUYỀN CỦA CỦA HPV 25 4.1 Quá trình tương tác xâm nhập vào tế bào chủ HPVs 25 4.1.1 Các thụ thể HPV 25 4.1.1.1 Thụ thể α6 intergrin 25 Hình 14 Sơ đồ cấu tạo thụ thể α6 intergrin 25 4.1.1.2 Thụ thể Heparan sulfate proteoglycans (HSPGs)/Heparan sulfate 26 Hình 15 Sơ đồ HSPG HS 26 4.1.2 Sự xâm nhập HPV vào tế bào 27 4.1.2.1 Nhập bào qua trung gian clathrin 27 Hình 16 Sơ đồ cấu trúc Clathrin 27 4.1.2.2 Nhập bào qua trung gian caveolae 27 Hình 17 Sơ đồ cấu trúc Caveolae 28 Hình 18 Sơ đồ xâm nhập vào tế bào HPVs 29 4.2 Sự lan truyền HPV 30 4.2.1 Sự lan truyền thể 30 4.2.2 Sự lan truyền từ thể sang thể khác 30 Hình 19 HPV công tế bào cổ tử cung 31 CHƯƠNG V SAO CHÉP, PHIÊN MÃ VÀ DỊCH MÃ 32 5.1 Sao chép 32 5.2 Phiên mã 33 Hình 20 Sơ đồ biểu gene sớm papillomavirus16 biểu mô tế bào cổ tử cung W12 34 Hình 21 Phát mRNA mã hóa từ gene muộn tế bào W12 35 Hình 22 Sơ đồ promoter HPV16 36 Hình 23 ESE, ESS, nhân tố điều khiển adenyl hóa 36 Hình 24 Các mRNA tạo từ genome HPV 37 5.3 Dịch mã 37 9.1 Bệnh ung thư cổ tử cung 38 9.1.1 Cơ chế gây bệnh HPV 38 Hình 25 Cơ chế sinh ung thư HPV 39 Hình 26 Các giai đoạn xâm lấn HPV 40 9.1.2 Các tổn thương tiền ung thư đường sinh dục 40 Hình 27 Diễn tiến tự nhiên nhiễm HPV nguy cao khả tiến triển thành ung thư cổ tử cung 41 9.2 Mụn cóc da 41 9.3 Mụn cóc hậu môn – sinh dục 42 9.4 U nhú hô hấp tái diễn 44 9.5 U nhú miệng 44 KẾT LUẬN 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 ĐẶT VẤN ĐỀ Virus gây u nhú người (Human Papilloma Virus – HPV) nguyên nhân chủ yếu gây ung thư cổ tử cung cho phụ nữ Các nhà khoa học tìm thấy HPV 99,7% trường hợp ung thư tế bào gai cổ tử cung HPV nguyên nhân gây mụn cơm hay nốt sần vùng sinh dục Có 100 chủng HPV có 15 chủng gây ung thư cổ tử cung, hai chủng 16 18 nguyên nhân gây 70% trường hợp ung thư cổ tử cung Có khoảng 100 loại HPV, 40 loại gây bệnh quan sinh dục người, có 15 loại liệt vào hạng "độc" tạo nguy cho sức khỏe Hai loại thông thường HPV-16 HPV-18 có khả nhiễm sâu vào cổ tử cung phụ nữ (3-10%), sau làm thay đổi mô tử cung gây bệnh ung thư cổ tử cung Ngoài HPV loại độc nguyên nhân gây ung thư âm đạo, ung thư âm hộ, ung thư hậu môn, ung thư dương vật, ung thư đầu cổ Loại độc hơn, HPV-6 HPV-11, gây 90% chứng mụn cóc (mào gà) quan sinh dục Loại nhẹ gây chứng mụn cóc tay (HPV-2) bàn chân (HPV-1) Mặc dù tỷ lệ gây bênh không cao HPV dễ dang lây lan không biểu triệu chứng cụ thể nhiều năm liền nên việc phòng bệnh khó khăn Do cần có hiểu biết đầy đủ thông tin cần thiết HPV bệnh chúng gây để có ý thức việc ngăn ngừa kiểm soát nguồn bệnh NỘI DUNG CHƯƠNG I TẦM QUAN TRỌNG CỦA VIỆC NGHIÊN CỨU HPV 1.1 Vị trí phân loại HPV sinh giới Virus papilloma người (HPV) loại siêu vi trùng dạng DNA, hay lây, có khả gây nhiều chứng bệnh từ nhẹ đến trầm trọng Phân loại virus: - Nhóm: I (dsDNA) - Bộ (ordo): không xếp - Họ (Family): Papillomaviridae - Chi (Genus): Alphapapillomavirus - Các chi: Alphapapilloma Betapapilloma Gammapapilloma Mupapilloma Nupapilloma Có nhiều 100 type HPV có vai trò gây bệnh liên quan đến bệnh lý da niêm mạc khoảng 40 type có tác động lên đường sinh dục, đặc biệt liên quan đến bệnh lý ung thư cổ tử cung Nhóm gọi nguy cao bao gồm type 16 (HPV-16), 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 59, 66 HPV-68 Các type HPV-6, 11, 42, 43, 44 gọi nhóm nguy thấp 1.2 Vai trò HPV Theo điều tra Cơ quan nghiên cứu ung thư quốc tế, tỉ lệ nhiễm HPV phụ nữ toàn cầu dao động khoảng 9-13%, nghĩa 10 phụ nữ có người nhiễm HPV Ở Việt nam tính riêng ung thư cổ tử cung số người chết HPV cao nhiều so với HIV Trong 10 năm qua có khoảng 6.000 phụ nữ chết ung thư cổ tử cung cao gấp đôi so với phụ nữ chết HIV/AIDS; khác với HIV, tổn thương HPV, chí ung thư HPV chữa khỏi hoàn toàn phát sớm Tuy nhiên thực tế Việt Nam, phần lớn bệnh nhân ung thư cổ tử cung phát giai đoạn cuối, vài năm trước qua đời Human Papilloma Virus (HPV) thuộc họ Papillomaviridae HPV lây truyền qua da phổ biến qua đường tình dục tất nhiên nơi có tiếp xúc trực tiếp hay gián tiếp âm đạo, cổ tử cung, hậu môn, đường niệu, bàng quang, miệng, mắt… sờ mó, hôn, đồng tính luyến ái, gây lây nhiễm qua niêm mạc miệng từ xâm nhập vào thể Người bị nhiễm HPV biểu lâm sàng thương tổn chỗ với trạng thái tăng sinh nội mô biểu bì thuộc nhiều dạng khác sùi niêm mạc, viêm, xơ cứng biểu mô, khối u papilloma vùng sinh dục, vùng hầu họng, dạng tăng sinh tế bào keratin Hầu type HPV có biểu đặc trưng liên quan đến papilloma vùng sinh dục condyloma, u xơ u mềm cổ tử cung … HPV tác nhân lây nhiễm qua đường tình dục phổ biến Biểu lâm sàng hình ảnh u sùi điển hình vùng hậu môn – sinh dục âm hộ, âm đạo, trực tràng, vùng hậu môn, dương vật u sùi vùng hầu họng đặc biệt ung thư cổ tử cung Hiện nguyên nhân gây nên ung thư cổ tử cung biết cách rõ ràng HPV gây HPV chia làm hai nhóm, nhóm nguy cao nguy thấp (về tính gây ung thư) Nhóm nguy cao có liên quan trực tiếp đến bệnh lý ung thư chúng phát có mặt 90% trường hợp ung thư cổ tử cung (ung thư tế bào lát hay ung thư tế bào tuyến), trái lại nhóm nguy thấp gặp trong trường hợp ung thư Tần suất lưu hành HPV cao cộng đồng, 611% người bình thường (có tài liệu báo cáo >20%) CHƯƠNG II CÁC PHƯƠNG PHÁP HIỆN TẠI ĐƯỢC SỬ DỤNG ĐỂ NGHIÊN CỨU HPV 2.1 Quan sát mắt thường Quan sát mắt thường với iodine Lugol (VILI): VILI dùng tương tự VIA có bôi dung dịch iodine Lugol lên cổ tử cung sau xem có vùng không bám màu VILI cho thấy kết quả, Ấn Độ Châu Phi, kết phương pháp đánh giá phương pháp soi cổ tử cung type cho kết tốt (42, 48, 50, 51) Các phát không hoàn toàn xác phương pháp kết hợp với Pas Stream Hybrid capture để tăng độ xác xét nghiệm đơn lẻ Tuy nhiên độ nhạy độ đặc hiệu hạn chế Quan sát mắt với acid acetic (VIA): biện pháp thay cho xét nghiệm tế bào Với phương pháp VIA dung dịch acid acetic 3-5% bôi lên cổ tử cung quan sát mắt thường sau phút Nếu quan sát thấy vùng bị trắng gần khu vực chuyển tiếp xét nghiệm coi dương tính tế bào tiền ung thư ung thư xâm lấn sớm Ưu điểm: không tốn kém, nhanh, không đòi hỏi kỹ thuật cao, độ đặc hiệu 64%-98%, độ nhạy VIA (66%-98%) tốt tốt độ nhạy Pap smear, giống Pap smear, kiểm tra mắt thường chủ quan, cần phải giám sát để kiểm soát chất lượng phương pháp kiểm tra mắt thường 2.2 PAP’s smear Năm 1928, George Nicolas Papanicolaou – bác sĩ người Hy Lạp giới thiệu phát phương pháp chẩn đoán ung thư với tựa đề báo "New Cancer Diagnosis" (Phương pháp chẩn đoán ung thư mới) Cũng từ năm này, Papanicolaou đến làm việc Hoa Kỳ Tại đây, năm 1939, ông với đồng nghiệp bác sĩ Herbert Traut, nhà bệnh học phụ khoa, làm phết tế bào âm đạo cho nhiều bệnh nhân, từ chứng minh khả chẩn đoán ung thư cổ tử cung giai đoạn sớm phương pháp Năm 1943, họ giới thiệu kết nghiên cứu báo tiếng "Diagnosis of Uterine Cancer by the Vaginal Smear" (Chẩn đoán ung thư tử cung phết tế bào âm đạo) Từ đó, phương pháp gọi theo tên người khởi xướng – xét nghiệm Pap Từ đến nay, phương pháp làm xét nghiệm có nhiều cải tiến để tăng tính xác hiệu quả, dùng rộng rãi để tầm soát ung thư cổ tử cung Cũng cần biết xét nghiệm dùng để tầm soát, mà không dùng để chẩn đoán áp dụng với ung thư cổ tử cung dùng cho “ung thư tử cung” báo mà Papanicolaou viết Tại Việt Nam, trước xét nghiệm thường gọi tên phết mỏng tế bào âm đạo, tên gọi không xác thực chất lấy tế bào cổ tử cung âm đạo, nên số tài liệu gần gọi xét nghiệm phết tế bào cổ tử cung, phết mỏng tế bào cổ tử cung, gọi tắt xét nghiệm Pap Nguyên lý dựa tính chất bong cách tự nhiên, liên tục tế bào âm đạo, cổ tử cung, đặc biệt tế bào bất thường tính bong sớm dễ bong Phân tích hình thái học chi tiết người ta cho dấu hiệu tế bào bị nhiễm HPV bị biến đổi thành dạng tế bào đa nhân, tế bào đa nhân khổng lồ, nhân teo lại, hay tìm thấy tế bào bóng, tế bào có vòng sáng quanh nhân … Hình Các tế bào cổ tử cung bình thường kính hiển vi Hình Các tế bào bất thường cổ tử cung kính hiển vi * Cách thực - Dùng que Ayre đặt áp vào ỗ cổ tử cung - Trải tế bào lên lame kính - Cố định mẫu dung dịch cồn + ether xịt lớp keo mỏng lên bề mặt lame Phương pháp PAP’s smear có độ nhạy 44 – 78% độ đặc hiệu cao 91 – 96%, đơn giản, rẻ tiền, không gây tác động người làm, dễ áp dụng đại trà Tuy nhiên phương pháp có tỉ lệ âm tính giả, theo tác giả giao động từ 1,1 – 29,7% 2.3 Phương pháp lai phân tử sử dụng sử dụng mẫu dò trực tiếp Để phân tích kiểu gene HPV, người ta sử dụng kỹ thuật Southern Blot (là kỹ thuật sử dụng nghiên cứu HPV) Phương pháp lai chỗ (là kỹ thuật gần giống với phương pháp hoá mô miễn dịch, người ta đánh giá biểu kháng nguyên điều kiện mô học bệnh lý) Hình Kỹ thuật lai phân tử Nhược điểm phương pháp độ nhạy thấp, tốn nhiều thời gian cần lượng lớn DNA tinh khiết cao Đối với mô cố định liên kết chéo DNA có xúc tác formol gây thoái hoá DNA tế bào hư hại 2.4 PCR (Polymerase Chain Reaction) Với PAP’s smear ta nói có hay không tổn thương nghi ngờ ác tính hay không ác tính cổ tử cung Ngày nhờ phát triển sinh học phân tử, đặc biệt kỹ thuật PCR cho phép nhận biết xác có nhiễm HPV hay không nhiễm type để tìm thấy nguy cao hay thấp có khả dẫn đến ung thư cổ tử cung PCR dương tính nghĩa ung thư cổ tử cung, việc nhận định có nhiễm HPV hay không nhiễm không nói tình trạng mô học hay tế bào học cổ tử cung mà nói người thử tình trạng nhiễm HPV Ứng dụng từ nhiều nghiên cứu công bố giới kỹ thuật PCR triển khai thực áp dụng Bệnh viện Phong Da liễu Trung ương Quy Hòa để phát định type HPV Phản ứng chuỗi Polymerase dụng cụ có giá trị cho phép vùng gene đặc hiệu DNA nhân lên ống nghiệm Điều làm cho chủng phát với số lượng lớn hầu hết trường hợp nhiễm virus khác Với ưu điểm đó, việc ứng dụng quy trình kỹ thuật PCR để phát DNA HPV mẫu bệnh phẩm dịch phết cổ tử cung 10 Hình 20 Sơ đồ biểu gene sớm papillomavirus16 biểu mô tế bào cổ tử cung W12 34 Hình 21 Phát mRNA mã hóa từ gene muộn tế bào W12 Đối với các-α HPV có hai promoter đặc trưng, promoter gene sớm (P 97 cho HPV16 31, P 105 cho HPV18) vùng kiểm soát dài (LCR), hoạt động suốt trình nhân lên virus, promoter khác cuối khung đọc mở E7 (P670 cho HPV16, P 742 cho HPV31) Promoter đặc trưng cho HPV6 11 Đối với HPV6 có ba promoter P 90, P 270 P 680, với HPV11 promoter có vị trí tương tự Promoter P 97 HPV16 có lẽ biết nhiều (hình 12) Nó điều khiển protein E2 virus mà loạt yếu tố phiên mã di động tế bào bị nhiễm bệnh Có bốn promoter liên kết với E2; hai promoter đầu nằm gần kề TATA box, nằm khu vực xa khu vực upstream Trong nhiễm trùng bình thường, promoter P 97 bị ức chế E2 điều hòa biểu E6 E7, thường không kích hoạt tiến triển khối u 35 Hình 22 Sơ đồ promoter HPV16 Biến đổi sau phiên mã Dù phiên mã HPV liên quan đến yếu tố bắt đầu phiên mã tín hiệu đáp ứng tế bào chủ, biến đổi sau phiên mã quan trọng Phiên mã kiểu polycistronic với ORF chồng chéo nhau, liên quan đến việc gắn đuôi polyA kết nối khác đoạn exon Sự phiên mã nhân dịch mã tế bào chất quy định biểu gene - Sau phiên mã, đầu 3’ mRNA virus gắn polyA vị trí gene sớm muộn Tuy nhiên, vị trí muộn ủng hộ Đến nay, chuỗi AAUAAA tín hiệu gắn polyA nằm ORF E5 L2 nhiều người ủng hộ Hình 23 ESE, ESS, nhân tố điều khiển adenyl hóa 36 - Cắt ghép intron: tượng xảy hầu hết HPV Vị trí cắt ORF E6, E4 nối vào E6, E7, E4, L1 Hình 24 Các mRNA tạo từ genome HPV 5.3 Dịch mã Sự dịch mã HPV tương tự tế bào nhân thực Tuy nhiên, dịch mã HPV theo kiểu polycistronic, cấu trúc gene gồm nhiều ORF Vài nghiên cứu cho thấy, dịch mã mRNA ảnh hưởng đến chép DNA Sự điều khiển dịch mã liên quan đến codon sử dụng mRNA HPV sử dụng codon hiếm, thích nghi tế bào chủ Vài nghiên cứu cho thấy, có thay đổi dịch mã tạo protein capsid loại HPV nhiễm thoáng qua 37 CHƯƠNG VI ẢNH HƯỞNG CỦA HPV VÀ CÁC CĂN BỆNH DO HPV GÂY RA 9.1 Bệnh ung thư cổ tử cung 9.1.1 Cơ chế gây bệnh HPV HPV xâm nhập vào cổ tử cung từ tế bào bề mặt bị tổn thương, thường vết thương dù nhỏ quan hệ tình dục Trong chu kì tế bào bình thường, gene ức chế khối u p53 gene RB (retinoblastoma) kiểm soát bước chuyển tiếp pha G1 (pha chịu trách nhiệm sửa chữa DNA bị hư hại) pha S (chu kì tế bào bắt đầu với tổng hợp DNA) DNA hư hại không sửa chữa dẫn đến chết có kiểm soát tế bào (apoptosis) Trong ung thư, DNA HPV thường gắn kết vào DNA tế bào ký chủ vị trí E1 E2 Khi gene E6 hòa nhập vào gene tế bào ký chủ gene ức chế p53 bị bất hoạt Điều rút ngắn pha sửa chữa G1 thúc đẩy chuyển tiếp sang pha S Khi có hòa nhập gene E7 gene RB liên kết với gene E7 yếu tố tăng trưởng E2F phóng thích E2F kích thích tổng hợp DNA pha S Vì Vậy tế bào cổ tử cung tích lũy DNA hư không khả sửa chữa hay không khả gây chết tế bào theo chương trình Do đó, tế bào vào hết chu kỳ đến chu kỳ khác Tóm lại, kết hợp chức dừng chu kỳ tế bào, thất chế chết tế bào theo chương trình bất ổn định gene tế bào chủ bị nhiễm gene E6 E7 nguy cao làm cho tế bào trở nên không ngừng tăng trưởng, cuối tạo khối u ác tính 38 Hình 25 Cơ chế sinh ung thư HPV HPV tác động chủ yếu vào tế bào biểu mô lát tầng không sừng hóa cổ tử cung Đây tế bào có chức chống chở, bảo vệ phát triển dần lên hướng bề mặt sau bong Virus công vào lớp tế bào đáy biểu mô, tế bào có khả sinh sản cao gây tượng phát triển mạnh bình thường nhiều lớp tế bào sau HPV thường không xuyên xuống màng đáy biểu mô, xâm nhập vào tế bào nông, nơi có tế bào miễn dịch nên không bị hệ miễn dịch nhận diện tiêu diệt Do đó, HPV tồn lâu dài, gây rối loạn sinh sản tế bào, tạo tổn thương từ loạn sản nhẹ, đến trung bình, nặng ung thư cổ tử cung Khi tế bào bất thường chiếm toàn lớp tế bào biểu mô lát (loạn sản nặng, ung thư chỗ) có khả phát triển lan rộng khỏi màng đáy vào lớp sâu biểu mô lát hình thành ung thư cổ tử cung giai đoạn xâm lấn (hình 16 17) Tổn thương loạn sản hay hay ung thư cổ tử cung có thời gian dài phát triển biểu mô chỗ cổ tử cung Khoảng thời gian trung bình cho tiến triển 10 – 20 năm Đây thuận lợi cho việc tầm soát ung thư cổ tử cung, giúp phát sớm điều trị tổn thương loạn sản ung thư cổ tử cung giai đoạn sớm 39 HPV Hình 26 Các giai đoạn xâm lấn HPV 9.1.2 Các tổn thương tiền ung thư đường sinh dục + Bệnh ung thư ác tính cổ tử cung xuất sau lớp biểu mô bề mặt chuyển dạng ung thư gọi ung thư biểu mô cổ tử cung (CIN – Cervical intra – epithelial neoplasia) Quá trình tương tự xảy vị trí khác nam nữ PIN dương vật (p – penile), VIN âm hộ (v – vulval) VaIN âm đạo (Va – vaginal) Sự chuyển dạng xảy lớp biểu mô sâu nhất, lớp mầm tế bào bất thường tất lớp biểu mô khả phân lớp biệt hóa, chia tiến trình bệnh làm ba cấp độ từ CIN1 đến CIN3 40 Hình 27 Diễn tiến tự nhiên nhiễm HPV nguy cao khả tiến triển thành ung thư cổ tử cung + Nguyên nhân xảy lớp thượng bì Khoảng 30 – 50% bệnh nhân nhiễm CIN3 (type 16, 18) Sau 10 năm chuyển thành ung thư xâm nhiễm ác tính virus (invasive cancer) Hiện tượng xảy cấp độ CIN1 CIN2 - Ung thư tế bào sừng (tế bào vảy) + Mối liên quan virus mụn cóc ung thư da, quản đường sinh dục phát từ lâu Khoảng 1/3 người bị mụn cóc loạn sản biểu bì (EV – epidermo dyspasia veruciformis) trẻ, da tiếp xúc nhiều với ánh sáng mặt trời, sau chuyển dạng thành ung thư ác tính + Ung thư xâm nhiễm thường xảy đường hậu môn – sinh dục 95% ung thư xâm nhiễm cổ tử cung phát có DNA HPV 9.2 Mụn cóc da Bệnh thường xuất tuổi trẻ Biểu lâm sàng tùy thuộc vào type HPV vị trí gây nhiễm Mụn cóc thông thường thấy bàn tay biểu u lồi, cứng, màu nâu Mụn cóc bàn chân khác với mụn cóc nơi khác ăn sâu Có thể phân biệt với chai chân chỗ cạo thấy mao mạch bị tắc dễ gây chảy máu Mụn cóc dẹt thường thấy trẻ em, mọc mặt, cổ, ngực, mặt gấp cánh tay chân 9.2.1 Mụn cóc thường 41 - Xuất tay, đầu gối chân - Chúng thường mọc đơn lẻ, cách xa so với nốt khác - Thường gặp trẻ nhỏ trẻ vị thành niên - Chúng lây nhiễm cho người khác qua đường tiếp xúc da 9.2.2 Mụn cóc “phẳng” - Thường xuất mặt vùng sau cánh tay bàn tay, không gồ lên mụn cóc thường mà lại dẹt - Các nốt mụn thường xuất liền kề 9.2.3 Mụn cóc bàn chân - Xuất lòng bàn chân thường chân trần nơi ẩm ướt khiến da bị nhiễm trùng - Vì chúng xuất lòng bàn chân nên không sần lên mà mọc sâu vào bên lòng bàn chân - Thường gây cảm giác đau đớn - Người lớn tuổi trẻ vị thành niên dễ bị chúng công Hình 28 Mụn cóc bàn chân 9.3 Mụn cóc hậu môn – sinh dục Mụn cóc sinh dục gọi codylomata acuminata thường mọc da, niêm mạc, quan sinh dục quanh hậu môn Con đường lây lan chủ yếu qua quan hệ tình dục Đối với nam giới, mụn thường mọc miệng niệu đạo lan xung quanh mọc nơi dương vật 42 Đối với nữ giới, mụn cóc trước hết xuất mép sau môi nhỏ, sau lan vào âm đạo cổ tử cung Trong phần cổ tử cung khó phát bị che khuất lớp màng nhày, phải sử dụng dụng cụ soi âm đạo cần xử lý acid acetic 5% để làm trắng biểu mô, tế bào bình thường có màu hồng Khoảng 12% phụ nữ phát thấy có DNA HPV cổ tử cung Mụn cóc sinh dục khống chế thông qua số điều trị Mục đích điều trị nên loại bỏ mụn thấy được, kích hoạt hệ thống miễn nhiễm để kháng lại với viêm nhiễm loại bỏ chứng gây khó chịu Một số chọn lựa điều trị: * Bôi dung dịch podophyllin, chiết xuất May Apple Dung dịch bôi trực tiếp lên mụn cóc Podophyllin tương tác với tế bào mụn cóc chỗ tổn thương Cần phải rửa chỗ bôi thuốc sau Điều trị thể gây rát da, đau sưng phồng Không áp dụng lúc mang thai * Đốt điện lạnh cách điều trị phổ biến cho bệnh mụn cóc sinh dục phát sinh bên (ví dụ nơi cổ tử cung) bên có sử dụng đến việc đông lạnh mụn dùng chất nitrogen lỏng oxit nitrite Đốt điện lạnh thường sử dụng lúc mang thai có phản ứng phụ nhỏ việc sưng phồng ban đầu xung quanh vùng điều trị Thường không để lại thẹo lâu Điều trị thường thực hàng tuần gây đau * Bệnh nhân bôi dung dịch podophyllotoxin trực tiếp lên mụn cóc nhìn thấy rõ Podophyllotoxin chiết xuất tinh khiết podophyllin Không thích hợp sử dụng chỗ khó bôi vào không sử dụng lúc mang thai Điều trị hoàn tất vòng đến tuần lễ, bôi thuốc lần ngày ngày sau ngưng vòng ngày * Một điều trị khác sử dụng kem imiquimod có thương hiệu Aldara Kem sử dụng thành công để xóa mụn cóc quanh phận sinh dục quanh hậu môn đặc biệt chỗ ẩm nơi người (nam giới) không cắt bao qui đầu Có thể có phản ứng phụ gây khó chịu kèm với điều trị chẳng hạn có cảm giác rát buốt, đau đau chạm vào Mức độ tái phát với điều trị thấp so với điều trị khác Có thể phải 16 tuần để xóa mụn cóc Điều trị không trợ cấp Hệ thống Hỗ Trợ Dược Phẩm (Pharmaceutical Benefit Scheme) đắt tiền 43 * Điều trị tia laser phương pháp mụn cóc loại bỏ cách đốt với tia có cường độ cao xác Độ xác phương pháp làm nguy có sẹo thấp * Sự chọn lựa khác bao gồm phẫu thuật điện/phép điện nhiệt (cắt bỏ với dao điện, dây điện kim) cắt bỏ kéo (kéo dao mổ) với thuốc tê xung quanh vùng Mụn cóc sinh dục nơi cổ tử cung xem xét kính hiển vi đặc biệt dụng cụ soi âm đạo (colposcope) mẫu nhỏ (gọi sinh thiết) lấy để kiểm tra bất thường cổ tử cung Điều trị cổ tử cung thường bác sĩ phụ khoa thực hiện, cắt bỏ phần bất thường laser, phép điện nhiệt, phẫu thuật Điều quan trọng phải dùng dụng cụ soi âm đạo thử nghiệm khí nhớt để theo dõi sau Mụn cóc tái phát cho dù có điều trị phương pháp Nên tiếp tục điều trị mụn cóc Có khuyến nghị nên kiểm tra lại lần cuối ba tháng sau Người bạn tình nên khám bệnh mụn cóc, hai quí vị người bạn tình nên khám kiểm tra bệnh truyền nhiễm lây lan qua đường tình dục khác (STIs) 9.4 U nhú hô hấp tái diễn Bệnh đặc trưng xuất u nhú lành tính dạng vảy màng nhày đường hô hấp quản, nguyên nhân nhiễm virus type 11 Trẻ em thường bị nhiễm qua đường rốn, người lớn chủ yếu lây qua quan hệ tình dục tiếp xúc qua miệng Khi bị tổn thương nặng gây tiếng thở rít, gây tắt đường hô hấp 9.5 U nhú miệng HPV gây u nhú tổn thương lành tính màng nhày miệng lưỡi Chúng lây qua tiếp xúc đường miệng quan hệ tình dục U nhú gây tổn thương niêm mạc miệng gọi u nhú miệng màu đỏ U nhú chuyển dạng thành u ác tính Có nhiều loại u miệng u nhú (gai), u nhầy, u ngà Loại u thường gặp u răng, dẫn tới nhiều biến chứng không điều trị sớm U hình thành tế bào tạo men, tạo ngà bị xáo trộn giai đoạn tổ chức, không tạo bình thường Nó bao gồm loại: 44 - U phức hợp: mô canxi hóa làm thành khối không đặn, hình dạng răng, bọc rõ ràng, ranh giới với xương chung quanh Loại u khó chẩn đoán phim X – ray lâm sàng - U kết hợp: hình nhỏ bồi đắp chất men ngà; khối u to nhiều khối dạng kết hợp với tạo thành Tổ chức gắn liền với bình thường khiến bị lệch không mọc lên Kích thước u bé hạt đậu, đạt đến đường kính vài cm Nó lấn ép xung quanh làm mỏng xương Khi u to ranh giới chung quanh không rõ ràng, xương hàm mỏng dễ bị gãy, liên quan phải nhổ bỏ, gây biến dạng gương mặt 45 KẾT LUẬN HPV vấn đề sức khỏe quan trọng đặc biệt phụ nữ Siêu vi trùng có mối liên hệ với nguy gia tăng phát triển ung thư cổ tử cung Một vài loại HPV làm cho tế bào cổ tử cung phát triển bất bình thường Có tế bào bất thường nơi cổ tử cung nghĩa bị ung thư Những tế bào bất thường trở thành ung thư Tuy nhiên, điều phải thời gian, thông thường hàng năm trời xảy Việc phát vai trò HPV ung thư cổ tử cung nói riêng vai trò số virus khác ung thư nói chung, mở nhiều hướng chẩn đoán, điều trị phòng ngừa ung thư Việc phát minh vacinne ngừa HPV đem lại nhiều hy vọng vịêc khống chế ung thư cổ tử cung, vốn bệnh ung thư hàng đầu phụ nữ Các nghiên cứu tác động vaccine, mở rộng chủng HPV cần phòng ngừa, cách sử dụng kinh tế hiệu vaccine … tiến hành hứa hẹn nhiều phát thú vị ích lợi 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Huỳnh Quyết Thắng 2009 Ghi nhận ung thư quần thể Cần Thơ 2005- 2007” Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, tập 13, phụ số trang 43- 51 Lê Thanh Hoà 2006 Y-sinh học phân tử Nhà xuất y học Nguyễn Vũ Quốc Huy.2010 Humanpapilomavirus Bài giảng sau đại học Trường Đại học Huế Tài liệu tiếng anh Monsonego Lorincz A.T, (2006), “Humanpapilomavirus Testingby Hydid Capture”, Emerging Issues on HPV Infections from Science to Practice, pp.54- 62 Monsonego Garland, S.M, (2006), “Methods for HPV Detection: Polymerase Chain Reaction Assays”, Emerging Issues on HPV Infections from Science to Practice, pp 63- 72 Monsonego Joseph, Dalstein V, (2006), “Humanpapilomavirus Testing for Primary Cervical Cancer Screening”, Emerging Issues on HPV Infections from Science to Practice, pp.103- 119 Munoz et al 2003 Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer N Engl J Med 2003;348:518-527 Jonh B Carter and Venetia A Saunders 2007 Virology Principle and Applications Jonh Willey & Sons, Ltd, pp.287 -288 Julie E Burns and Norman J Maitland 2005 Human papillomaviruses and cancer Microbiology today 56 , 116 -120 M.A Stanley , M.R Pett and N Coleman 2007 HPV: From Infection to cancer Biochemical Society Transactions Volume 35, part 6, pp 1456 -1460 Simonn Stacey, Deborah Jordan, Peter J F Snilders , Michael Mackett, Jan M M Walboomers, John R Arrand 1995 Translation of the Human Papillomavirus Type 16 E7 Oncoprotein from Bicistronic mRNA Is Independent of Splicing Events within the E6 Open Reading Frame Journal of virology, Nov 1995, pp 7023–7031 Tan Letian, Zhang Tianyu 2010 Cellular receptor binding and entry of human Papillomavirus Virology Journal 2010, 7:2 47 K Sotlar, D.Diemer, A.Dethleffs 2004 Detection and typing of Human Papillomavirus by E6 Nested Multiplex PCR Journal of Clinical Microbiology, pp.3176-3184 Website http://bacsicuaban.com/?act=Tintuc&ID=1006 (20/5/2011) http://www.bio.davidson.edu/people/sosarafova/Assets/Bio307/emmccracken /page%2001.html (20/5/2011) http://cinvestav.mx/genetica/MyFiles/Papillomavirus/ (22/5/2011) http://:www.medinet.hochiminhcity.gov.vn/ttyh/bshkhkt/HPV_UngThuCTC htm (25/5/2011) http://quangninh123.com/forum/showthread.php? t=3305&pagenumber=#ixzz1NQcOcwcd (20/5/2011) http://www.tinsuckhoe.com/nd5/viewsubject/benh-ung-thu/hpv-va-chungung-thu-o-phu-nu/56697.s_29.1.html (26/5/2011) http://en.wikipedia.org/wiki/Tetraspanin (23/5/2011) http://vov.vn/Home/Ung-thu-co-tu-cung-lam-sao-de-phat-hiensom/20095/112267.vov http://hoanmysaigon.com/index.php? option=com_content&task=view&id=1102&Itemid=135 http://vnexpress.net/gl/suc-khoe/2002/03/3b9b997f/ 48 [...]... IV QUÁ TRÌNH XÂM NHẬP VÀ SỰ LAN TRUYỀN CỦA CỦA HPV 4.1 Quá trình tương tác và xâm nhập vào tế bào chủ của HPVs 4.1.1 Các thụ thể của HPV Vỏ capsid của HPV ngoài vai trò bảo vệ bộ gen của virus, nó còn có vai trò là vị trí gắn với các thụ thể (receptor) trên bề mặt tế bào chủ Sự xâm nhập của HPV vào tế bào khởi đầu từ quá trình tương tác của virus với các receptor trên bề mặt tế bào để đi vào trong tế... trong vật chủ 4.2 Sự lan truyền của HPV 4.2.1 Sự lan truyền trong cơ thể Sau khi xâm nhiễm vào cơ thể HPV sẽ - Lan vào niêm mạc âm đạo - Lan vào cơ tử cung ở đoạn dưới và thân trên - Lan vào hạch bạch huyết ở quanh cổ tử cung và từ đó xâm lấn hạch - Lan thẳng vào các cấu trúc lân cận hay chu cung, tới cân cơ bịt và tới thành chậu Có thể lan tới bàng quang, trực tràng gây dò Mức độ xâm lấn hạch có tương... endosome” và thoát ra theo phương thức ở mục 4.1.2.1 HPV – 16 có thể xâm nhập vào trong tế bào theo cách này 28 Hình 18 Sơ đồ các con được xâm nhập vào tế bào của HPVs A HPV – 16, –58, và BPV – 1 thông qua clathrin HPV – 31 cũng có thể vào bằng cách này B Sự giảm pH dẫn đến sự phóng thích genome của virus C HPV – 31 vào tế bào qua caveolin D và E Các hạt virus vận chuyển qua lại giữa endosome và caveosome... caveosome F HPV 16 xâm nhập và tế bào không qua caveolin và clathrin, qua các TEMs Tóm lại, HPV đã phải trải qua một quá trình phức tạp để lây nhiễm thành công tế bào chủ của chúng Các thụ thể ràng buộc của tế bào chủ và đường hợp nhất của HPV 29 có liên quan đến nhiều phân tử, điều này cho thấy rằng đó là một bước quan trọng trong tấn công của virus gây bệnh trước khi chúng có thể sử dụng máy móc của tế... nhập với trình tự trong genbank và hiển thị kết quả so sánh; (2) xây dựng một thư viện các trình tự của các genotype tham chiếu của HPV cho thư viện này vào các thư viện của chương trình Bio-Edit, sau đó dùng phần mềm này để đăng nhập trình tự giải được với trình tự đã đăng nhập Mặc dù kỹ thuật PCR-ELISA phát hiện và định genotype HPV ứng dụng được trong nghiên cứu và chuẩn đoán, tuy nhiên với phương... quang phổ và điện di lại trên gel agarose 2% để chắc chắn loại bỏ primer dimer 15 Sau đó thực hiện phản ứng chu kỳ giải trình tự với bộ mồi MY09 và MY11 bằng máy giải trình tự và phân tích bằng phần mềm sequences analysis Sau khi giải trình tự, tiến hành định genotype của trình tự bằng 2 cách: (1) đăng nhập trình tự giải được trên NCBI Blast để chương trình so sánh trình tự đăng nhập với trình tự trong... huyết thanh nào đáng tin cậy nên sự nhận diện Papillomavirus và định type HPV căn cứ vào tiêu chuẩn nucleic acid HPV có cấu trúc DNA gồm 8000 bp Hai chuỗi, phân tử DNA cuộn lại trong một vỏ protein bao gồm 2 phân tử L1 và L2 Bộ mã di truyền của HPV ngoài phần mã để tạo L1, L2 còn có phần mã hóa của 6 loại protein sớm từ E1 đến E7 cần thiết cho sự nhân đôi của DNA và sự thành lập những hạt thể virus... bào W12 Đối với các-α HPV có hai promoter đặc trưng, các promoter ở gene sớm (P 97 cho HPV1 6 và 31, P 105 cho HPV1 8) trong vùng kiểm soát dài (LCR), hoạt động trong suốt quá trình nhân lên của virus, một promoter khác ở cuối trong khung đọc mở E7 (P670 cho HPV1 6, P 742 cho HPV3 1) Promoter cũng đã được đặc trưng cho HPV6 và 11 Đối với HPV6 có ba promoter P 90, P 270 và P 680, với HPV1 1 các promoter có... ELISA để phát hiện và định genotype HPV và kit này đã triển khai sử dụng khá hữu hiệu tại một số phòng thí nghiệm tại thành phố Hồ Chí Minh Tuy nhiên hãy còn một tiếp cận khác để có thể định được genotype HPV, đó là sử dụng phương pháp giải trình tự để giải trình tự trực tiếp sản phẩm PCR đặc hiệu vùng gen L1 của HPV và so sánh trình tự này trên thư viện trình tự các genotype của HPV, nhờ vậy mà có... cuối Như vậy, có mối liên quan giữa quá trình nhân lên của virus và quá trình biệt hóa mô Ở các tế bào nhiễm sinh sản thì DNA tồn tại ở dạng episome, còn khi bị tổn thương ác tính thì DNA virus gắn vào vị trí bất kì trên genome của tế bào - Vùng E (e – early: gene sớm) của DNA chứa các khung đọc mở mã hóa cho các protein tham gia vào các quá trình sao chép, phiên mã và chuyển dạng tế bào - Vùng L (l ... nguyên trình diện tế bào kéo dài đáp ứng tế bào lympho B nhớ 24 CHƯƠNG IV QUÁ TRÌNH XÂM NHẬP VÀ SỰ LAN TRUYỀN CỦA CỦA HPV 4.1 Quá trình tương tác xâm nhập vào tế bào chủ HPVs 4.1.1 Các thụ thể HPV. .. đời đáp ứng miễn dịch 23 CHƯƠNG IV QUÁ TRÌNH XÂM NHẬP VÀ SỰ LAN TRUYỀN CỦA CỦA HPV 25 4.1 Quá trình tương tác xâm nhập vào tế bào chủ HPVs 25 4.1.1 Các thụ thể HPV 25 4.1.1.1 Thụ thể α6 intergrin... xâm nhập vào tế bào HPVs 29 4.2 Sự lan truyền HPV 30 4.2.1 Sự lan truyền thể 30 4.2.2 Sự lan truyền từ thể sang thể khác 30 Hình 19 HPV công tế bào cổ tử cung 31 CHƯƠNG V SAO CHÉP, PHIÊN MÃ VÀ