Tạp chí Nghiên cứu dược vả Thông tin thuốc I Số 1/2010 Ý KIÊN ĐÊ XUẤT chất cho Trường có đào tạo DSĐH để thực nhiệm vụ tăng tiêu đào tạo DSĐH - Bộ y tẽ cần nghiên cứu định mức DSĐH TÀI LIỆU THAM KHẢO theo lĩnh vực dược - Các địa phương cần có sách thu hút Chính phủ (2001); Quyết định thủ nhân lực dược, nghiên cứu xác định nhu cầu tướng Chính phủ việc phê duyệt chiến theo loại hình dược chế phối hợp với lược chăm sóc bảo vệ sức khỏe nhân dân giai đoạn 2001-2010 sở đào tạo việc tăng cường nhân lực dược địa phương Vụ KHĐT-BYT (10/2009); Hội thảo tăng - Các Trường Đại học Dược Đại học Y cường công tác đào tạo nhân lực DƯỢC cần hợp tác đào tạo đáp ứng nhu cầu nghiên cứu khoa học công nghệ dược sở y tẽ, đào tạo theo nhiều hình thức: đào tạo định hướng chuyên ngành, đào tạo chuyên Thủ tướng phủ (2007), "Đào tạo nhân lực y tế cho vùng khó khăn, vùng khoa, đào tạo lại, trì loại hình đào tạo núi tỉnh thuộc miền Bắc miên (đào tạo quy, liên thông, văn Trung, vùng đồng sông cửu Long hái) mở mã ngành đào tạo cao đẳng vùng dược cho tuyến sở, đặc biệt tuyến huyện Tây Nguyên theo chế độ cử tuyểri',QĐ số 1544/2007/QĐ-TTG ngày số tỉnh vùng sâu, vùng xa, trì tiêu 14/11/2007 đào tạo dược sĩ đại học quy địa Nghiên cứu xây dựng chương trình đào tạo phù hợp thực Armstrong, Micheal (2006), A handbook tế, đặc biệt lĩnh vực DSĐH lựa chọn nhiều sau tốt nghiệp o f human resource management practice, Kogan page, 10th édition, London, pp 1-8 */ Tăng cường đội ngũ cán sở vật Motoko (2008); Pharmacy Education in Asia XÂY DựNG PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN CHẤT MÀU BỊ CÂM sử DỤNG PIGMENT RED 53 TRONG SON MÔI VÀ PHẤN MÁ Thái Nguyễn Hùng Thú1, H oàng Thanh Tâm2, Lê Thị Hường Hoa2, Nguyễn Thị Thủy Nguyên1 Trường Đ ại học D ược Hà Nội, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Summary A method using liquid/liquid extraction for sample treatment reversed-phase HPLC with detection VIS for sample analysis was developed for a banned colorant Pigment red 53, which is illegally pre­ sented in lipstick and nail polish The presence o f Pigment red 53 is identified by comparing retention time and UV-VIS absorption spectrum o f any suspected peak in the chromatogram o f sample prepara­ tion to that o f the peak o f Pigment red 53 in the chromatogram o f reference preparation The entire method was validated in terons o f specificity, linear range, LOD, LOQ, and validation results proved that this method was suitable for the determination o f Pigment red 53 illegally presented in lipsticks and makeup powders, and having good accuracy The validated method was used to test 20 cosmetic products purchased in the market, o f them were found to contain Pigment red 53 Đ ă tv ấ n đ ê Kiêm tra, giám sát chất lượng mỹ phậm thống kiểm nghiệm thuốc mỹ phẩm Trong đó, quan trọng việc kiểm soát có mặt cýa cjjc c|1g); bị cgm^ j-jQgc bị gjới hạn hàm nhiệm vụ quan trọng hệ lượng phép sử dụng nhằm đảm bảo an Tạp chi Nghiên cứu dược Thông tin thuốc I Số 1/2010 toàn cho người sử dụng Pigment red 53 chất màu có mặt danh sách chất bị cấm sử dụng mỹ phẩm theo quy định để phát chất màu bị cấm đối tượng mỹ phẩm, vậy, tiến hành nghiên cứu nhằm xây dựng quy trình Hiệp định hệ thống hòa hợp ASEAN quản lý mỹ phẩm, bố sung năm 2007 (Phụ phát Pigment red 53 (PR53) son môi phấn má đê’ góp phần nâng cao nắng lực công tác kiểm tra chãt lượng mỹ phẩm Việt lục II, phần 1) [1] Nam tiến tới hòa hợp với nước ASEAN Cho tới nay, tài liệu nước quản lý mỹ phẩm nước tham khảo được, chưa có phương pháp chuẩn thiết lập Tên khoa học: barium bis [2 chloro - - [(hydroxy -1- naphthy!) azo] toluene - - sulphonate] Mã số màu CI: 15585 Hình Công thức cấu tạo Pigment red 53 CH3 * Phương pháp nghiên cứu 2.Thực nghiệm Phương pháp phát PR53 có mặt trái 2.1 Hóa chất, thiết b ị phép mỹ phẩm xây dựng dựa * Hóa chất: sở kỹ thuật sẳc ký lỏng hiệu cao (HPLC) - Chất chuẩn làm việc Pigment red 53 (Hàn có mặt PR53 mẫu mỹ phẩm đánh Quốc) giá mặt định tính định lượng - Methanol tinh khiết phân tích (Merck) - Định tính: - Dimethylsulfoxid (Merck) + Dựa vào thời gian luV: so sánh thời gian lưu pic nghi PR53 - Tetrahydrofuran (Merck) sắc ký đồ mẫu thử với pic PR53 sắc ký đồ * Thiết bị, dụng cụ: mẫu chuẩn - Máy sắc ký lỏng Shimadzu: +Bơm: Model LC- lOAtvp + Dựa vào phổ hấp thụ UV-VIS thu nhờ detector PDA: so sánh phổ hấp thụ UV-VIS lấy +Detector mảng diod: Model SPD-M10Avp đỉnh pic pic nghi PR53 sắc ký đồ mẫu thử pic PR53 sắc ký đồ mẫu +Moduleđiều khiển: Model SCL-10Avp chuẩn, đánh giá hệ số tương đông (similarity index) phổ +BỘ loại khí (Degasser): DGU- 14A +BỘ trộn dung môi: FCV- lOAIvp -Định lượng: - Máy đo pH 691 Metrohm Khi tiêu định tính khẳng định có mặt PR53 mẫu mỹ phẩm, hàm lượng - Bộ lọc dung môi, lọc mẫu với màng lọc 0,45 PR53 mẫu thử xác định dựa vào diện ụm tích pic PR53 thu sẳc ký đồ dung - Cân phân tích Mettler Toledo có độ xác dịch chuẩn dung dịch thử, nồng độ dung 0,1 mg dịch chuẩn, lượng mẫu thử đem phân tích - Các dụng cụ thủy tinh xác: bình định * Đối tượng nghiên CỨU: mức, pipet xác, ống đong - 20 mẫu mỹ phẩm gồm mẫu son nước 2.3 Phương pháp, đôi tượng nghiên cứu (SN), mẫu son rắn mẫu phấn má (bảng Tạp chí Nghiên cứu dược Thông tin thuốc I Số 1/2010 có PR53) để xây dựng, thẩm định phương pháp (bảng ) 4) - Sử dụng mẫu (được xác định sơ không Bảng Các mẫu mỹ phẩm sử dụng để xây dựng, thẩm định phương pháp Mã sô' Tên mâu, nơi sản xuất SN07 Lỉpgloss 3D 06 Zhoubang áããL Sort nước Son rắn SR10 Rose Lađy 109 vov Moisturizing coloring effect Phấn má PM09Color Song Blusher 04 vov cosmetic Co Ltd., Made in Korea 3.Kết bàn luận Dung dịch đối chiếu: cân xác khoảng 50 mg chất chuẩn PR53 vào bình định mức 100 3.1 Xây dựng phương pháp phân tích ml Thêm 40 ml dimethylsulfoxid lắc siêu âm 10 3.1.1 Lực chọn dung môi chiết mẫu phút, thêm dimethylsulfoxid vừa đủ đến vạch, Sau khảo sát sơ với số dung môl lắc Hút 2,0ml dung dịch vào bình định mức hoà tan mẫu như: ethanol, acetonitrll, aceton, 50 ml, thêm dimethylsulfoxid vừa đủ đến vạch, cloroform, methanol, dicloromethan, dimethyl- lẳc Hút ml dung dịch vào bỉnh định mức solfoxid, hỗn hợp dimethylsulfoxid - acid phos­ 50 ml, thêm ml dimethylsulfoxid, thêm pha phoric (95:5), lựa chọn di- động vừa đủ đến vạch Lọc qua màng lọc methylsulfoxid dung môi hoà tan hoạt 0,45pm trước tiêm sẳc ký chất cần phân tích loại nhiều thành phần khác mẫu son 3.1.3 phấn má với qui Quy trình phân tích Pigment red 53 HPLC: trình xử lý mẫu đơn giản dễ thực - Điều kiện sắc ký: Triển khai thử nghiệm 3.1.2 Quy trình xử lý mẫu mỹ phẩm sở tham khảo tài liệu [2, 3], - Chuẩn b ị mẫu thử: chọn điều kiện sắc ký sau: - Cột Apollo C18 (250 X 4,6 mm, |jm) - Với đối tượng mẫu son nước, son rắn: cân xác khoảng 0,5 g chẽ phẩm vào cốc 50 ml, - Detector PDA quét phổ dải bước sóng từ 200 đến 800 nm Bước sóng lấy sắc ký đồ: 490 nm thêm lml tetrahydrofuran, dùng đũa thuỷ tinh khuấy kỹ chẽ phẩm phân tán hoàn toàn, thêm 10 ml dimethylsulfoxid khuấy kỹ, lắc - Pha động: Methanol - đệm pH 6,2 (65: 35) siêu âm 10 phút, chuyến sang bình định mức 20 ml thêm dimethylsulfoxid vừa đủ đến vạch, - Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút lắc Lọc qua giấy lọc, bỏ khoảng ml dịch - Thể tích tiêm mẫu: 20 ụl lọc đầu Hút ml dịch lọc vào bình định mức 25 - Nhiệt độ cột: 30°c ml Thêm pha động vừa đủ đến vạch Lọc qua màng lọc 0,45 |jm để tiêm sắc ký Dung dịch đệm pH 6,2 chuẩn bị - Với đối tượng mẫu phấn: cân xác cách dùng acid acetic 30% chinh dung dịch khoảng 0,5 g chế phẩm vào bỉnh định mức 20 triethylamin mM nước pH 6,2 Lọc ml, thêm 15 ml dimethylsulfoxid lẳc siêu âm 10 lọc dung môi, màng lọc 0,45 ịjm phút, thêm dimethylsulfoxid vừa đủ đến vạch - Cách tiến hành: Lọc qua giấy lọc, bỏ khoảng ml dịch lọc đầu Tiêm riêng biệt dung dịch thừ, dung dịch Hút ml dịch lọc vào bình định mức 25 ml Thêm chuẩn vào hệ thống HPLC với điều kiện sắc pha động vừa đủ đến vạch Lọc qua màng lọc ký Ghi lại sắc ký đồ 0,45 ụm để tiêm sắc ký - Cách đánh giá kết quả: theo tiêu chí - Chuẩn b ị mẫu chuẩn: mục 2.3 10 Tạp chí Nghiên cứu dược Thông tin thuốc I Số 1/2010 - Mẩu trắng: mẫu son nước không chứa PR53 3.2 Thẩm định phương pháp (SN07) 3.2.1 Độ đặc hiệu - Mau tự tạo: mẫu son nước không chứa PR53 (SN07) trộn với theo lượng xậc PR53 chuẩn nồng độ PR53 cuối Sử dụng điều kiện phân tích trình bày 3.1.3., tiến hành phân tích mẫu (được xử lý theo qui trình nêu mục 3.1.2) đem tiêm sắc ký có nồng độ gồm: 1,2 Ịjg/ml - Mau dung dịch chuẩn PR53 tẬU • SSKBTTTBR WlWwI»: MU “ ■ ãh ÜJ b) a) c) Hình - Sắc ký đô mẫu trắng (a), dung dịch chuẩn PR53 (b) mẫu tự tạo (c) 600 nm, phổ dung dịch chuẩn phô’ Kết thu hình 2, cho thấy: - Đối với dung dịch chuẩn, sắc ký đồ xuất pic rõ ràng PR53 dung dịch thử đạt bước sóng cực đại 490 nm hệ số similarity 0,9954 (hình 3) - Đối với mẫu trẳng, sắc ký đồ pic xuất tương ứng với thời gian lưu PR53 - Đối với mẫu tự tạo, sẳc ký đồ cho ta pic tương ứng với pic PR53 sắc ký đồ dung dịch chuẩn thời gian lưu, độ tương thích so sánh phố UV-VIS, đồng thời Hình 3—Kết so sánh phổUV—VIS pic tách riêng khỏi pic khác PR53 mẫu chuẩn tự tạo - Thời gian lưu tR: Thời gian lưu pic mẫu thử giống thời gian lưu pic mẫu Các kết cho thấy phưđng pháp có độ đặc hiệu đê’ xác định PR53 chuẩn (khoảng 6,70 phút) 3.2.2 Khoảng tuyẽn tính - Phổ uv -VIS: Chồng phổ dải sóng từ 220Bảng Kết khảo sát khoảng tuyến tính PR53 Dung dịch Nồng độ c (ụg/ mi) 1,157 1,542 2,314 2,892 3,856 5,784 7,712 Diện tích pic s (mAU.s) 56415 83537 120814 155739 211317 310885 413030 Đê’ đánh giá khoảng tuyến tính, độ PR53 với hệ số tương quan r 0,9997 chuẩn bị dãy dung dịch PR53 chuẩn Phương trình đường chuẩn thu là: s = dimethyl suloxid: pha động (20: 80) có nồng độ 54105,5x c - 2108,31 bảng Tiến hành phân tích theo điều 3.2.4 Độ lặp lạ i - Độ đủng: kiện sắc ký mục 3.1.3 Kết thu cho - thấy khoảng nồng độ 1,2 - 7,7 ng/ml có tương quan tuyến tính diện tích pic nồng Việc đánh giá độ lặp lại độ thực đồng thời mẫu tự tạo: 11 Tạp chí Nghiên cứu dược Thông tin thuốc I sô' 1/2010 son nước (SN07), son rắn (SR10), phấn má (PM09) Một lượng xác PR53 lại phương pháp đánh giá qua kết hàm lượng PR53 lần phân tích độc lập chuẩn đưa vào mẫu mỹ phẩm cho mẫu tự tạo Độ phương pháp có nồng độ PR53 nằm khoảng nồng độ đánh giá cách so sánh lượng PR53 tìm lại tuyến tính Mỗi mẫu tự tạo Jiẽn hành xử mẫu tự tạo so với IƯỢng PR53 cho lý theo qui trình 3.1.2 phân tích theo điều vào ban đầu Kết trình bày bảng kiện 3.1.3 với lần phân tích độc lập Độ lặp Bảng Khảo sát độ - độ lặp lại với PR53 mẫu tự tạo Nền mẫu mỹ phẩm Đánh giá độ lặp lại Đánh giá độ sử dụng qua RSD (% ) qua tỳ lệ (%) tìm lại SN07 1,39% 101,09% SR10 0,65% 99,47% PM09 0,97% 99,43% Ì - Ỉ- Kết thực nghiệm loại mẫu tự tạo cho thấy, phương pháp có độ lặp lại tốt qua ml (tương ứng với 80 pg/g mẫu mỹ phẩm) lần Dung dịch mẫu tiêm sẳc kỷ có nồng độ PR53 phân tích độc lập (đều có RSD thấp, dao động từ 1,2 ịjg/ml cho đáp ứng pic PR53 gấp 10 0,65% đến 1,39%) Tỷ lệ thu hồi PR53 lần so với nhiễu đường Nên giới hạn định loại mẫu cao (99,43% đến 101,09%) lượng với PR53 phương pháp xác định Như vậy, phương pháp phân tích xây dựng 1,2 ụg/ml (tương ứng với 240 ụg/g mẫu mỹ phẩm) thể độ lặp lại, độ tốt, phù hỢp với mục đích phương pháp phát PR53 có mặt 3.3 trái phép son phấn má Áp dụng phương pháp để kiểm tra sô'mẫu mỹ phẩm mua thị trường 3.2.5 Giới hạn phát hiện- Giới hạn định lượng Áp dụng phương pháp vừa xây dựng để kiểm Dung dịch mẫu tiêm sắc ký có nồng độ PR53 tra 14 mẫu son môi, mẫu phẩn má mua thị trường Danh sách mẫu kiểm tra 0,4 mg/ml cho đáp ứng pic PR53 gấp lần so với nhiễu đường Nên giới hạn phát PR53 phương pháp xác định 0,4 fjg/ kết thu bảng Bảng Kết quà kiểm tra mẫu mỹ phẩm đ ể phát PR53 TT Mã sô' SN01 Son nước Star Shine 01 (Hàn Quốc) + SN02 Son nước Prielry diamond gloss 44 (Hàn Quốc) - SN03 Son nước Blooming gloss 51 Crystal Shimmering (Hàn Quốc) - SN04 Son nước p+ cos Professional (Hàn Quốc) - SN05 Son nước Ohui 06 (Hàn Quốc) - SN06 Son nước Bloom lipgloss 3D lizhoubang - SN07 Son nước Lipgloss 3D 06 Zhoubang SR08 Son rắn Etude colorlipstick 04 Etude - SR09 Son rắn Nob'color NO16201-35 (Pháp) - 10 SR10 Son rắn Rose Lady 109 vov Moisturizing coloring effect Tên mẫu 12 Kết phát PR53 Tạp chí Nghiên cứu dược Thông tin thuốc I Số 1/2010 11 SR11 Son rắn Lacvert Essance RD201 LG Vina Cosmetics Joint Venture Co + 12 SR12 Son rắn Lustre 09 Make-uphần Cosmetics Toronto (Canada) + 13 SR13 Son rắn MayberlineWater Shine Pune Lỉpcolon 06 (Mỹ) - 14 SR14 Son rắn Lacvert EssanceRD225 LG Vina Cosmetics Joint Venture Co + 15 PM03 Phấn má Make-up blue 016 v o v cosmetic Co, Ltd + 16 PM04 Phấn má Etude - 17 PM09 Phấn má Color Song Blusher 04 vov cosmetic Co, Ltd (Hàn Quốc) - 18 PM10 Phấn má Ludanmei No:D208 Ludanmei Cosmetics Co Ltd * 19 PM11 Phấn má Ludanmei No:B493 Ludanmei Cosmetics Co Ltd - 20 PM12 Phấn má Color Song Blusher 21 vov cosmetic Co, Ltd (Hàn Quốc) + ngờ trùng với thời gian lưu pic PR53 chuẩn, mẫu có chứa PR53,trong số có mẫu son (SN01, SR11, SR12 SR14) mẫu phấn má So phổ UV-VIS pic với pic PR53 I A* 4^ , I ^ J I I /\ A» , I , _ J ' _I _ I A* chuẩn thu Hệ số tương thích phổ (PM04 PM12) Thời gian lưu pic nghi (Similarity) cao Tiến hành định lượng PR53 Trong 20 mẫu kiểm tra, phát /s - I ■ ■ J~|I‘L _l — \ ^ , \ — _X A' _ _ r Bảng Kết định lượng mẫu phát có Pigment Red 53 Lượng m ẫu thử(g) Mầu m» H ệ sô'tương thích phô’ (Similarity) so vớiphổ chất chuẩn SN01 0,4992 0,9932 SR11 0,5416 0,9983 SR12 0,5546 0,9999 SR14 0,5000 0,9993 PM03 0,1013 0,9866 PM12 0,1002 0,9996 Lượng PR53 có trông mẫu thử (mg) Hàm lượng (% ) 0,195 0,039 (0,085) (0,016) (0,097) (0,018) 0,356 0,071 4,233 4,179 0,669 0,668 Ghi chú: Các giá trị ngoặc đơn giá trị ước lượng nằm LOQ mẫu Kết thu bảng cao phù hợp cho phép phát PR53 mẫu mỹ phẩm với giới hạn phát 0,4|jg/ml mà không bị lẫn tạp chất khác Kẽt cho thấy: Hàm lượng PR53 mẫu son tương đối nhỏ tỳ lệ mẫu phấn má cao Tuy số mẫu kiểm tra mẫu chưa nhiều tỳ lệ có chứa PR53 đáng lo khoảng tuyến tính, độ lặp lại, độ giới - Phương pháp xây dựng có tính đặc hiệu, ngại (30%) Chứng tỏ nguy lạm dụng PR53 hạn phát chấp nhận việc phân mỹ phẩm cao Do cần mở rộng tích xác định PR53 chẽ phẩm son thêm việc kiểm tra PR53 mỹ phẩm để có phấn má kết luận xác - Trong 20 mẫu mỹ phẩm kiếm tra PR53, phát tỷ lệ mẫu có chứa Kết luận PR53 cao - Đã chọn dung môi cho phép chiết hết Tài liệu tham khảo PR53 mẫu cho mẫu tương đối (Xem tiếp trang 37) - Đã chọn điều kiện sẳc ký lỏng hiệu 13 I ■ ... toàn cho người sử dụng Pigment red 53 chất màu có mặt danh sách chất bị cấm sử dụng mỹ phẩm theo quy định để phát chất màu bị cấm đối tượng mỹ phẩm, vậy, tiến hành nghiên cứu nhằm xây dựng quy trình... thuốc I Số 1/2010 có PR53) để xây dựng, thẩm định phương pháp (bảng ) 4) - Sử dụng mẫu (được xác định sơ không Bảng Các mẫu mỹ phẩm sử dụng để xây dựng, thẩm định phương pháp Mã sô' Tên mâu, nơi... Phương pháp nghiên cứu 2.Thực nghiệm Phương pháp phát PR53 có mặt trái 2.1 Hóa chất, thiết b ị phép mỹ phẩm xây dựng dựa * Hóa chất: sở kỹ thuật sẳc ký lỏng hiệu cao (HPLC) - Chất chuẩn làm việc Pigment