Tạp chí Nghiên cứu dược Thông tin thuốc I Số 1/2010 Agents and Chemotherapy, 6, pp 2421-2428 its role", International Journal o f Antimicrobial Agents, 30, pp 11-18 Kubin C., Dzierba A (2005), "The Effects of Continuous Renal Replacement on Anti-infective Therapy in the Critically III", Journal o f Pharmacy Practice, 18, pp 109-117 Roberts J A., et al (2009), "Pharmacokinetic issues for antibiotics in the critically ill patient", Crit Care Med, 37, pp 840-851 Pea F., Viale P., Pavanl P Furlanut M (2007), "Pharmacokinetic Considerations for antim­ icrobial Therapy in Patients Receiving Renal Re­ placement Therapy", Clin Pharmacokinet, 46(12), pp 997-1038 Schetz M (2007), "Drug closing in continuous renal replacement therapy: general rules", Current Opinion in Critical! Care, 13, pp 645-651 10 Tegeder I., Bremer F., Oelkers R., et al (1997), "Pharmacokinetics of imipenem-cilastatin in critically illpatients undergoing continuous venovenous hémofiltration", Antimicrob Agents Chemother, 12, pp 2640-2645 Roberts J A., Paratz J., Paratz E., Krueger W., Lipmanab J (2007), "Continuous infusion of blactam antibiotics in severe infections: a review of XÁC ĐỊNH GIỐNG VÀ VÙNG TRỒNG CÂY DÂY THÌA CANH {GYMNEMA SYLVESTRE(RETZ.) R.BR SCHULT) PHỤC vụ THựC HÀNH TRỒNG TRỌT TỐT (GAP) Trân Văn ơrf*\ Hoàng Th ế Chứé*}, Hoàng M inh Châu (**} (*) Trường Đ ại học D ược Hà Nội, (**) công ty c ố phần Nam Dược Summary In order to develop protocols for GAP in cultivation Gymnema sytvestre, a medicinal plant used for treatment o f diabetes, this research had been carried out for two objectives: (i) to identify different varieties o f Gymnema sylvestre and (ii) to identify quantities o f GS4 o f the leaf from two different eco­ logical zones North-east and Red river delta Specimens had been collected from 11 localities in Viet­ nam, described by diagnosis method and compared by the quantity o f GS4 As a result, two varieties o f Gymnema sylvestre had been differentiated by the color o f petals: the red-brown and the cream varieties However, the quantity o f GS4 o f the two varieties is similar One variety, the cream, had been cultivated in each site o f ecological zone: in Thai Nguyen pros/, (for North-east) and Nam Dinh prov (for Red river delta) with the same cultivating condition The quantity o f GS4 o f the sample from Thai Nguyen (5.57%) is remarkable higher than the sample from Nam Định (3.72%) The research had opend the door to GAP o f not only Gymnema sylvestre but also other medicinal plants In Vietnam Từ khoá: Dây thìa canh, GAP, Gymnema sylvestre Hoạt chất công nhận rộng rãi Dây thìa Đặt Vấn đê: canh GSi, hỗn hợp Saponin[10],[ll] Dây thìa canh (Gymnema sylvestre (Retz.) Mặc dù vậy, việc sản xuất sản phẩm từ Dây R.Br ex Schult) sử dụng Y thìa canh chủ yếu dựa nguồn nguyên học cổ truyền Ayurveda Ấn Độ từ 2.000 năm liệu thu hái từ hoang dã, dẫn đến khó kiểm soát để chữa đái tháo đường (ĐTĐ)[9] Dựa số lượng chất lượng kinh nghiệm này, hàng loạt nghiên cứu thực nhiều nơi giới Mỹ, Nhật Nhằm tạo dược liệu có chất lượng cao Bản, Trung Quốc, v.v [7] tạo sở cho Ổn định, việc trồng trọt thuốc nói chung cần đời nhiều chế phẩm điều trị ĐTĐ Việt thực theo qui định Thực hành Nam, nghiên cứu phát triển [1],[4], trồng trọt tốt (GAP) áp dụng thuốc [5],[6]và tạo sản phẩm hỗ trợ điêu trị ĐTĐ [12], yếu tố quan trọng hàng đầu 19 Tạp chí Nghiên cứu dược Thông tin thuốc I sô' 1/2010 trồng giống, vùng sinh thái, kỹ thuật trồng Hàm lượng GS4 xác định theo phương trọt, thu hái sơ chẽ Việc áp dụng yêu cầu GAP trồng trọt Dây thìa canh gặp nhiều pháp cân[2],[ll]: cân xác khoảng 20,00 g Dây thìa canh tán nhỏ, đem ngâm lạnh với khó khăn chưa xác định giống có chất ethanol (EtOH) 50% 72h Rút dịch chiết lượng cao vùng trồng cho hàm lượng lần Dịch chiết đem cô cách thủy cao lỏng 1:2 Acid hóa dung dịch H2SO4 5% hoạt chất cao đến pH thu tủa (GS3) Lọc lấy tủa Hòa Nghiên cứu thực nhằm bước tan tủa bằng* dung dịch KOH 5% đến pH kiềm đầu trả lời hai câu hỏi quan trọng Acid hóa H2SO4 5% đến pH3 thu tủa trồng trọt Dây thìa canh theo GAP với GS4 Lọc lấy tủa đem sấy khô đến khối lượng mục tiêu sau: (1) xác định giống Dây thìa canh Việt Nam; (2) So sánh hàm lượng không đổi 60°c cân khối lượng Mỗi mấu lặp lại lần Hàm lượng saponin toàn phần GS4 GS4 Dây thìa canh vùng trồng tính theo công thức: GS4 (%) = m/M(l-x) Đông Bắc đồng sông Hồng *100, đó: m khối lượng GS4 thu Nguyên liệu Phương pháp nghiên (g); M khối lượng dược liệu đem cân (g); X cứu: hàm ẩm dược liệu (%) - Xác định giống cầy Dây thìa canh: - Xác định thành phần GS« mẫu sắc ký lớp mỏng dịch chiết ethanol 60%, Mẩu tươi mang hoa, Dây thìa 11 địa điểm nghiên cứu miền mỏng Silicagel GF254 với hệ dung môi Bắc Trung Việt Nam, bao gồm: Lạng SỢn, Cloroform: Methanol: Acetic acid (13: 1,8: 0,02) Quảng Ninh, Bắc Giang, Hải Phòng, Vĩnh Phúc, thuốc thử màu H2SO4 10% Hà Tĩnh, Nghệ An, Thanh Hóa, Hà Tĩnh, Quảng UV366 canh thu thập Bình, Quảng Trị Thừa thiên Huế Mầu tiêu Kết nghiên cứu: lưu trữ Phòng tiêu Thực vật Các giông Dây thìa canh: Trường Đại học Dược Hà Nội (HNIP) Tất mẫu nghiên cứu thu thập Các mẫu mô tả so sánh đặc điểm 11 địa điểm nghiên cứu có đặc điểm tiêu theo dõi hoàn toàn giống nhau, bao gồm: bề mặt cành non (đều có lông thưa ngắn), hình hình thái theo phương pháp mô tả chẩn đoán [8], dựa mẫu tươi Các chi tiêu so sánh bao gồm: Bề mặt thân non, hình dạng, bề dạng (hình bầu dục hay hình trứng, gốc tròn mặt lá, kiểu cụm hoa, màu sắc bề mặt hay hình tim cá thể), bề mặt (có lông thưa ngắn gân chính), kiểu cụm hoa (xim nách lá), màu sắc bề mặt đài (xanh, có phận sinh sản (đài hoa, tràng hoa, nhị, nhụy), hình dạng kích thước quả, số lượng hạt/quả Các mẫu kết luận khác sau lông thưa mặt mép), hình dạng trồng điều kiện, vùng sinh (thuôn, phình to phần gốc) kích thước thái (Thái Nguyên) kiểm tra hàm lượng (dài 5-6cm), số lượng hạt/1 (40-50) Chỉ có GS4 đặc điểm sai khác màu cánh - Xác định hàm lượng GS4 Dây hoa: màu hoa đỏ nâu màu vàng kem thìa canh Hàm ĩượng GS4 mẫu hoa đỏ hoa vàng kem Thái Nguyên: Mầu giống trồng địa điểm đại diện cho vùng Đông Bắc (Thái Nguyên) Hàm lượng GS4 từ dịch chiết giống đồng sông Hồng (Nam Định) hoa đỏ (4,87%) hoa vàng kem (4,79%) điều kiện canh tác (thời vụ trồng, mật độ, chế độ Thái Nguyên tương đương nhau, sai lệch ánh sáng, giàn leo, phân bón) nhằm cố định không đáng kể (Bảng 1) biến số ảnh hưởng đến hàm lượng GS4 Mau thu thời điểm (tháng 3), sãy khô 45°c 20 Tạp chí Nghiên cứu dưởc Thông tin thuốc I Số 1/2010 Hình 1: Hai giống Dây thìa canh (Gymnema sylvestre (Retz.) R.Br ex Schult) với cánh hoa màu kem (trái) đỏ nâu (phải) Bảng 1: Hàm lượng GS4 mẫu Dây thìa canh hoa đỏ vàng kem Thái Nguyên Mầu hoa màu đỏ Mầu hoa màu kem Hàm ẩm (%) 9,89 9,41 Khối lượng dược liệu (g) 20,03 20,05 Khối lượng GS4(g) 0,88 0,87 Hàm IƯỢng GS4 (%) 4,87 4,79 Thành phần hàm lượng GS4 /á Dây thìa canh theo vùng trồng: Trên sắc ký đồ cho thấy có tương đồng vết mẫu giống trồng Nam Định Thái Nguyên, thể màu sắc vết vị trí vết tương đương (Hình 2) Hàm lượng GS4của giống (hoa màu kem) thu mẫu Thái Nguyên (5,57%) cao Nam Định (3,72%), chênh lệch đáng kể (nhiều gấp 1,5 lần) (Bảng 2) Bàn luận: - Vê giõng Dây thìa canh: Y, < Phân tích mẫu Dây thìa canh 11 địa điểm cho thấy có giống Dây thìa canh giống DỂkm Ck _ - toàn đặc điểm hình thái, khác Hình 2: sắc ký đồ dịch chiết ethanol màu sẳc cánh hoa Điều thường gặp nhiều loài khác cảnh Dây thìa canh trồng Thái Nguyên (Đông (Hoa hồng, Đỗ Quyên) hay thuốc (Lá móng), Bắc) Nam Định (Đồng sông Hồng) màu thuốc thửH S04 10%, soi thể khác cấp độ giống (forma) giống UV366 (trái) sắc ký đồ GS4 mẫu có khác không? Nếu hàm lượng GS4 màu bẵng thuốc thử H2 SO4 10% (phải) Vấn đề đặt hàm lượng GS4 21 Tạp chí Nghiên cứu dược Thông tin thuốc I Sô’ 1/2010 Bảng 2: Hàm lượng GS4 mẫu Dây thìa canh trồng Thái Nguyên Nam Định Mẩu trồng Thái Nguyên (g) Mẩu trồng Nam Định (g) Hàm ẩm (%) 14,17 12,89 Khối lượng dưực liệu ban đầu (g) 20,06 20,05 Khối lượng G S (g) 0,96 0,65 Hàm lượng G S (%) 5,57 3,72 chúng khác đáng kể, cần chọn giống có cho chất lượng Kết xác định hàm hàm lượng cao hơn, nhằm tăng hiệu qủa kinh tế IƯỢng canh tác Kết nghiên cứu cho thấy Nam Định cho thấy hàm lượng chúng không khác nhau, bước đầu Nguyên (5,57%) cao Nam Định (3,72%) đến GS4 mẫu trồng Thái Nguyên GS4 mẫu Thái khẳng định sử dụng hai giống 1,85% Sự khác đáng kế, ảnh hưởng canh tác Khác với nhiều nghiên cứu khác, việc lớn đến hiệu kinh tế nhà sản xuất công xác định hàm lượng hoạt chất (GS4) nghiên bố hàm lượng GS4 sản phẩm, cứu thực có hệ thõng hai việc xác định giống, kết nghiên cứu giống trồng điều đáng tin cậy thực theo kiện, nghĩa biến số độc lập cố cách cố định biến số (giống, tuổi cây, định Hơn nữa, qui trình chiết xuất áp chế độ canh tác, v.v ) Mặc dù vậy, để khẳng dụng đề tài giống với qui trình định chẳn hơn, cần mở rộng số điểm nghiên thực giới[ll] Do đó, kết cứu vùng sinh thái mở rộng phạm vi nghiên cứu đáng tin cậy Tuy nhiên, hàm nghiên cứu vùng sinh thái khác GS4 lượng GS4 nghiên cứu xác định phương pháp cân, thường có sai số cao Đê’ khẳng định chẳn hơn, cần nghiên cứu phương pháp định lượng kỹ thuật có độ xác cao hơn[ll], sử dụng sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) hay sắc ký lớp mỏng hiệu cao (HPTLC) với chất chuẩn xác định, nên nghiên cứu sâu cấp độ phân tử để xác định chất Các kết thu nghiên cứu bước đầu chuỗi nghiên cứu trồng Dây thìa canh theo qui định GAP Ngoài việc mở rộng nghiên cứu nhằm khẳng định kết quả, cần nghiên cứu thêm yếu tõ khác qui định GAP kỹ thuật trồng chăm sóc, thời gian kỹ thuật thu hái, chế biến bảo quản[3],[12] cho hàm lượng GS4 cao ổn định khác nghiên cứu lượng sinh khối thu giống đơn vị diện tích - Về thành phần hàm lượng thìa canh theo vùng trồng: Đã bước đầu xác định Dây thìa canh GS4 Dây Miền Bắc miền Trung Việt Nam có giống, khác màu hoa màu đỏ nâu vàng Trong canh tác thuốc, việc xác định vùng trồng cho suất hàm lượng hoạt chất cao có ý nghĩa sống định hiệu kinh tế chất lượng sản phẩm[3] Trong nghiên cứu này, sắc ký đồ dịch chiết tổng GS4 Kết luận: cho thấy tương đồng vị trí kem Hai giống có hàm lượng GS4 Đã sơ xác định hàm lượng GS4 Dây thìa canh trồng vùng Đông Bắc (Thái Nguyên) cao đáng kể so với trồng vùng đồng sông Hồng (Nam Định) thời điểm giống màu sắc vết Như vậy, nhận định Nghiên cứu mở hướng bước đầu thành phần Dây thìa canh nghiên cứu chuẩn hoá nguyên liệu đầu vào năm tuổi trồng hai vùng đại diện sản xuất sản phẩm tử Dây thìa canh mà Đông Bắc (Thái Nguyên) đồng sông góp phần vào hoàn thiện phương pháp luận Hồng (Nam Định) giống nhau, nghĩa chúng thực tiễn nghiên cứu Thực hành trồng trọt tốt Tạp chí Nghiên cứu dược Thông tin thuốc I Số 1/2010 Dây thìa canh (Gymnema sylvestre (Retz.) R Br ex Schult.), Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ - Trung tâm thông tin thư viện trường Đại học Dược Hà Nội thuốc (GAP) Việt Nam Tài liệu tham khảo: Lương Thúy An (2009), Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học Dây thìa canh (Gymnema sylvestre {Retz.) R Br exSchult Asdepiaceaê), Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ - Trường Đại học Dược Hà Nội Baskaran et al.(1990), "Antidiabetic effect of a leaf extracts from Gymnema sylvestre in non-insulin-dependent diabetes mellitus patients.", Journal o f Ethnopharmacol, 30 (3), pp 295-300 Trần Hùng (2006), Phương pháp nghiên cứu dược liệu, Bộ môn dược liệu, Khoa Dược, Đại học Y Dược Tp HCM, tr 48-50 Trần công Khánh (2009), "Trồng thuốc thu hái dược liệu hoang dã theo tiêu chuẩn GACP", tạp chí Dược liệu, tập 14, tr 57 62 De Vogel E.F (1987), Manual o f Herbarium Taxonomy - Theory and Pracrice, UNESCO - Man and Biosphere (MAB) Kapoor LD (1990), Handbook o f Ayurvedic Medicinal Plants, Boca Raton, FLCRC Press Inc, pp.200-201 Trần văn ơn, Phùng Thanh Huong, Đỗ Anh Vu Cs (2008), Tác dụng hạ đường huyết Dây thìa canh (Gymnema sylvestre (Retz.) R Br ex Schutt) Việt Nam, Tạp chí dược học, Số 391, Tr 31-34 10 Kazuko Yoshikawa et al (1990), "Dammarane saponins from Gymnema syl­ vestre.", Phytochemistry, 31(1), pp 237241 11 Valivarthi s R Raju et al (2006), "Standardisation of Gymnema sylvestre R.Br by High-Performance Thin-Layer Chro­ matography: An Improved Method", Phytochem Ana., 17, pp 192-196 Trương Thị Tâm (2008), Nghiên cứu thành phần hóa học bước đầu thử hoạt tính phân đoạn dịch chiết Dây thìa canh (Gymnema sylvestre (Retz.) R Br ex Schult.yỊ, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ Trung tâm thông tin thư viện trường Đại học Dược Hà Nội 12 World Health Organization (2003), WHO guidelines on good agricultural and collec­ tion practices (GACP) for medicinal plants, Geneve, Switzerland Đỗ Anh Vũ (2007), Nghiên cứu đặc điểm thực vật tác dụng hạ đường huyết Hiệu glucosamin (tiếp trang 29) Tài liệu tham khảo Rozendaal RM, et al (2008) Effect of glucosamine sulfate on hip osteoarthritis: a randomized trial Ann Intern Med; 148:268-77 Reichenbach s, et al (2007) Meta-analysis: chondroitin for osteoarthritis of the knee or hip Ann In­ tern Med; 146: 580-90 10 Towheed TE, et al (2005) Glucosamine therapy for treating osteoarthritis Available in The Cochrane Database of Systematic Reviews; Issue Chichester: John Wiley; (accessed 14/11/09) 11 Kayne SB, Wadeson K, MacAdam A (2000) Glucosamine - an effective treatment for osteoarthritis? A meta-analysis.Pharm J; 265: 759-763 12 Food and Drug Administration, Food Advisory Committee and Dietary Supplements Subcommittee (2004), Letter Regarding the Relationship Between the Consumption of Glucosamine and/or Chondroitin Sulfate and a Reduced Risk of: Osteoarthritis; Osteoarthritis-related Joint Pain, Joint Tenderness, and Joint Swelling; Joint Degeneration; and Cartilage Deterioration (Docket No 2004P-0059) 13 British National Formulary 59 (2009), glucosamine monograph (accessed via MedicinesComplete) 23 ... 1/2010 trồng giống, vùng sinh thái, kỹ thuật trồng Hàm lượng GS4 xác định theo phương trọt, thu hái sơ chẽ Việc áp dụng yêu cầu GAP trồng trọt Dây thìa canh gặp nhiều pháp cân[2],[ll]: cân xác khoảng... huyết Dây thìa canh (Gymnema sylvestre (Retz.) R Br ex Schutt) Việt Nam, Tạp chí dược học, Số 391, Tr 31-34 10 Kazuko Yoshikawa et al (1990), "Dammarane saponins from Gymnema syl vestre. ", Phytochemistry,... vestre. ", Phytochemistry, 31(1), pp 237241 11 Valivarthi s R Raju et al (2006), "Standardisation of Gymnema sylvestre R. Br by High-Performance Thin-Layer Chro­ matography: An Improved Method", Phytochem