ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ PHƯỚC HẠNH NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT SINH HÌNH THÁI VÀ TĂNG TRƯỞNG CỦA CÂY HOSTA (HOSTA FRANCES WILLIAMS) TRONG ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY IN VITRO Chuyên ngành: Sinh lý Thực vật Mã số chuyên ngành: 60 42 30 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS NGUYỄN THỊ QUỲNH TP HỒ CHÍ MINH, NĂM 2012 LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn đến Ban giám hiệu, phòng Đào tạo Sau đại học, Khoa sinh học trường Đại học Khoa học Tự nhiên tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt thời gian hoàn thành luận văn tốt nghiệp Em xin bày tỏ lời cảm ơn đến tất Thầy Cô Bộ môn Sinh lý Thực vật truyền đạt kiến thức, xây dựng niềm tin ước mơ cho em suốt năm tháng học Em xin chân thành cám ơn Ban lãnh đạo Viện Sinh học Nhiệt đới tạo điều kiện thuận lợi em thực đề tài Viện Em xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thị Quỳnh tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn thầy cô hội đồng chấm luận văn cho em đóng góp quý báu để hoàn chỉnh luận văn Em cám ơn chị Vân, người giúp đỡ em ngày bước vào Viện Sinh học Nhiệt đới Cảm ơn bạn Viện sinh học nhiệt đới: Hiến, Duy, Hoài, Thư, Gà ác Củ Chuối nhiệt tình giúp suốt thời gian qua Cho Hạnh gửi lời cảm ơn đến bạn K17, đặc biệt bạn Trọng Tuấn Thế Anh, xin cảm ơn bạn nhiều giúp đỡ, chia sẻ tận tình bạn suốt năm học Với lòng chân thành sâu sắc xin cảm ơn ba mẹ sinh thành nuôi dưỡng con, chia sẻ giúp đỡ vượt qua khó khăn sống Cám ơn em Tài Trí, em nguồn động viên lớn chị hai Cuối cùng, xin cảm ơn đến gia đình nhỏ bên cạnh chỗ dựa vững cho mẹ suốt thời gian qua Niềm tin yêu gia đình sức mạnh để mẹ nổ lực phấn đấu, cố gắng vượt qua khó khăn Cám ơn “bé con” “ba mập” nhiều lắm! Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 28 tháng năm 2012 Nguyễn Thị Phước Hạnh i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vii ĐẦU 1 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẶC ĐIỂM LOÀI HOSTA 1.1.1 Phân loại học 1.1.2 Nguồn gốc lịch sử phát 1.1.3 Hình thái 1.1.4 Đặc điểm sinh thái 1.1.5 Sâu hại bệnh Hosta 1.1.6 Nhân giống Hosta 1.2 GIÁ TRỊ KINH TẾ CỦA HOSTA 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ CÂY HOSTA 11 1.4 CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG THỰC VẬT 14 1.4.1 Auxin 14 1.4.2 Cytokinin 16 1.4.3 Gibberellin 17 1.4.4 Ethylen 18 1.4.5 Acid abscisic 19 1.5 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CÁC CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG THỰC VẬT 20 1.6 KHÁI QUÁT VỀ KỸ THUẬT VI NHÂN GIỐNG 21 1.6.1 Phương pháp vi nhân giống 21 1.6.2 Phương pháp nuôi cấy lớp mỏng tế bào (Thin cell layer culture) 24 MỞ i 1.6.3 Phương pháp vi nhân giống quang tự dưỡng (photoautotrophic micropropagation) 25 1.7 SỰ TÁI SINH CƠ QUAN TRONG NHÂN GIỐNG IN VITRO 26 1.7.1 Sự hình thành chồi bất định 28 1.7.2 Sự hình thành rễ bất định 29 CHƯƠNG II VẬT LIỆU & PHƯƠNG PHÁP 2.1 VẬT LIỆU 31 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 31 2.1.2 Môi trường 31 2.1.3 Dụng cụ, thiết bị nghiên cứu 32 2.2 PHƯƠNG PHÁP 33 2.2.1 Thí nghiệm Sự phát sinh hình thái nuôi cấy lớp mỏng tế bào Hosta từ vật liệu nuôi cấy ban đầu có nguồn gốc mẫu khác 33 2.2.2 Thí nghiệm Sự phát sinh chồi rễ nuôi cấy lớp mỏng gốc thân Hosta nuôi cấy in vitro 35 2.2.3 Thí nghiệm Mối tương quan tiêu tăng trưởng hàm lượng chất ĐHSTTV chồi Hosta hình thành từ nuôi cấy lớp mỏng tế bào gốc thân 37 2.2.4 Thí nghiệm Ảnh hưởng thành phần khoáng, vitamin lên tăng trưởng cụm chồi Hosta nuôi cấy in vitro 39 2.2.5 Thí nghiệm Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy thoáng khí lên trình tăng trưởng tích lũy ethylen hộp nuôi cấy cụm chồi Hosta nuôi cấy in vitro 40 2.2.6 Các tiêu theo dõi thí nghiệm thí nghiệm thí nghiệm 41 2.3 PHƯƠNG PHÁP THỰC HIỆN VÀ TÍNH SỐ LIỆU 41 2.3.1 Tỉ lệ mẫu tạo mô sẹo, tạo chồi, tạo rễ (%) 41 2.3.2 Số chồi/mẫu, số rễ/ mẫu, số mở/ mẫu 41 2.3.3 Gia tăng trọng lượng tươi (mg/cây) 42 2.3.4 Diện tích lá/ mẫu 42 2.3.5 Tỷ lệ mẫu có vàng (%) 42 2.3.6 Phương pháp nuôi cấy mẫu 42 2.3.7 Quan sát hình thái giải phẫu 42 2.3.8 Phương pháp chụp ảnh kính hiển vi điện tử quét SEM 42 2.3.9 Phương pháp xác định chất ĐHSTTV nội sinh 43 2.3.10 Phương pháp sắc ký khí GC 45 2.4 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH THỐNG KÊ 46 CHƯƠNG KẾT QUẢ & THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ 47 3.1.1 Thí nghiệm Sự phát sinh hình thái nuôi cấy lớp mỏng tế bào Hosta in vitro từ vật liệu nuôi cấy ban đầu có nguồn gốc mẫu khác 47 3.1 Thí nghiệm Sự phát sinh chồi rễ nuôi cấy lớp mỏng gốc thân Hosta nuôi cấy in vitro 55 3.1.3 Thí nghiệm Mối tương quan tiêu tăng trưởng hàm lượng chất ĐHSTTV chồi Hosta in vitro hình thành từ nuôi cấy lớp mỏng tế bào gốc thân 63 3.1.4 Thí nghiệm Ảnh hưởng thành phần khoáng vitamin lên tăng trưởng cụm chồi Hosta nuôi cấy in vitro 70 3.1.5 Thí nghiệm Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy thoáng khí lên trình tăng trưởng tích lũy ethylen hộp nuôi cấy cụm chồi Hosta nuôi cấy in vitro 78 3.2 THẢO LUẬN 85 3.2.1 Sự phát sinh hình thái 85 3.2.2 Sự tăng trưởng 91 CHƯƠNG KẾT LUẬN & ĐỀ NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN 98 4.2 ĐỀ NGHỊ 98 TÀI LIỆU THAM KHẢO 99 PHỤ LỤC I DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT %CK : % chất khô BA : 6-benzyladenin ĐHSTTV : Điều hòa sinh trưởng thực vật GC : Sắc ký khí HPLC : Sắc ký lỏng hiệu cao HT : Hoạt tính IAA : Indol-3-acetic acid MS : Murashige & Skoog (1962) NAA : 1-naphthalene acetic acid ND : Không phát PP : phương pháp QDD : Quang dị dưỡng QDDTK : Quang dị dưỡng thoáng khí QTD : Quang tự dưỡng STN : Sinh trắc nghiệm TDZ : 1-phenyl-3-(1,2,3-thiadiazol-5-yl)urea DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Bố trí thí nghiệm 34 Bảng 2.2 Bố trí thí nghiệm 36 Bảng 2.3 Bố trí thí nghiệm 38 Bảng 2.4 Bố trí thí nghiệm 39 Bảng 2.5 Bố trí thí nghiệm 40 Bảng 3.1 Kết tỷ lệ hình thành mô sẹo, chồi rễ mẫu lớp mỏng Hosta in vitro từ vật liệu nuôi cấy có nguồn gốc ban đầu khác sau tuần nuôi cấy 47 Bảng 3.2 Ảnh hưởng phương pháp cắt mẫu lớp mỏng gốc thân lên tiêu số chồi, số rễ hình thành mẫu trọng lượng tươi cụm chồi Hosta in vitro sau tuần nuôi cấy 49 Bảng 3.3 Hàm lượng chất ĐHSTTV nội sinh phận khác toàn cụm chồi Hosta in vitro ngày thí nghiệm 53 Bảng 3.4 Hàm lượng chất ĐHSTTV nội sinh mẫu Hosta in vitro nuôi cấy từ lớp mỏng sau tuần 53 Bảng 3.5 Kết hình thành chồi, hình thành rễ trọng lượng tươi mẫu lớp mỏng cắt dọc Hosta ảnh hưởng nồng độ TDZ NAA khác sau tuần nuôi cấy 55 Bảng 3.6 Kết định lượng chất ĐHSTTV nội sinh chồi Hosta tạo từ mẫu lớp mỏng gốc thân ảnh hưởng nồng độ TDZ NAA khác sau tuần nuôi cấy phương pháp HPLC 59 Bảng 3.7 Ảnh hưởng nồng độ BA NAA lên hình thành chồi, hình thành rễ trọng lượng tươi mẫu lớp mỏng gốc thân Hosta in vitro sau tuần nuôi cấy 64 Bảng 3.8 Hàm lượng chất ĐHSTTV nội sinh Hosta in vitro phát sinh từ mẫu lớp mỏng gốc thân ảnh hưởng nồng độ BA NAA khác sau tuần nuôi cấy đo phương pháp HPLC phương pháp sinh trắc nghiệm 66 Bảng 3.9 Ảnh hưởng thành phần khoáng vitamin lên tăng trưởng cụm chồi Hosta in vitro sau tuần nuôi cấy 70 Bảng 3.10 Ảnh hưởng thành phần khoáng vitamin lên tăng trưởng cụm chồi Hosta in vitro sau tuần nuôi cấy 72 Bảng 3.11 Hàm lượng chất ĐHSTTV nội sinh cụm chồi Hosta sau tuần nuôi cấy ảnh hưởng thành phần khoáng vitamin đo phương pháp HPLC 75 Bảng 3.12 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy thoáng khí lên tăng trưởng cụm chồi Hosta sau tuần nuôi cấy 79 Bảng 3.13 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy thoáng khí lên tăng trưởng cụm chồi Hosta sau tuần nuôi cấy 79 Bảng 3.14 Kết định lượng chất ĐHSTTV nội sinh chồi Hosta in vitro nuôi cấy điều kiện thoáng khí khác sau tuần nuôi cấy phương pháp HPLC 83 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Một số giống Hosta dùng làm bonsai cảnh Hình 1.2 Các dạng hoa Hosta Hình 1.3 Các loại Hosta Hình 1.4 Hosta Frances Williams Hình 1.5 Bệnh virus INSV virus HVX gây Hình 1.6 Một số giống Hosta năm 2010, 2011 2012 10 Hình 1.7 Tạp chí Hosta 11 Hình 1.8 Triển lãm loại Hosta 11 Hình 1.9 Triển lãm trưng bày Hosta 11 Hình 1.10 Hiệp hội Hosta Anh quốc 11 Hình 1.11 Cấu trúc số loại auxin 15 Hình 1.12 Cấu trúc số dạng cytokinin 17 Hình 1.13 Cấu trúc số loại gibberellin thực vật 18 Hình 1.14 Con đường tổng hợp ethylen từ tiền chất SAM yếu tố tác động đến đường tổng hợp ethylen 18 Hình 1.15 Cấu trúc vai trò ABA đóng mở khí 19 Hình 2.1 Cây Hosta Frances Williams in vitro 30 ngày tuổi môi trường MS có thành phần khoáng đa lượng giảm 1/2 31 Hình 2.2 Phương pháp cắt mẫu lớp mỏng nuôi cấy 35 Hình 2.3 Cách xếp mẫu đĩa petri thí nghiệm 36 Hình 3.1 Mẫu lớp mỏng phiến Hosta in vitro sau tuần nuôi cấy 50 Hình 3.2 Mẫu lớp mỏng phiến Hosta in vitro sau tuần nuôi cấy 50 Hình 3.3 Mẫu phiến Hosta in vitro ngày nuôi cấy (Ảnh chụp kính hiển vi điện tử SEM) 51 Hình 3.4 Phát sinh hình thái lớp mỏng gốc thân Hosta in vitro 52 XV Coefficient of Variation: 1.55% Gia tăng trọng lượng tươi mẫu A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum ofMean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 240267.000 240267.000 33.8742 0.0004 Factor B 205408.333 205408.333 28.9596 0.0007 AB 787456.333 787456.333 111.0201 0.0000 -7 Error 56743.333 7092.917 -Total 11 1289875.000 -Coefficient of Variation: 1.13% Số mở/mẫu K Value A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Source Freedom Squares Square T A B L E F Value Prob -2 Factor A 0.141 0.141 0.2259 Factor B 0.008 0.008 0.0120 AB 0.367 0.367 0.5896 -7 Error 4.987 0.623 -Total 11 5.503 -Coefficient of Variation: 11.92% Số rễ/mẫu A N A L Y S I S O FV A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 1.688 1.688 4.2812 0.0723 Factor B 0.608 0.608 1.5412 0.2496 AB 0.301 0.301 0.7632 -7 Error 3.153 0.394 -Total 11 5.749 -Coefficient of Variation: 41.62% Diện tích lá/mẫu A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 83166.750 83166.750 56.6081 0.0001 Factor B 38874.083 38874.083 26.4600 0.0009 AB 46004.083 46004.083 31.3130 0.0005 -7 Error 11753.333 1469.167 174 Total 11 179798.250 Coefficient of Variation: 3.70% Tỷ lệ mẫu vàng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob -2 Factor A 208.333 208.333 8.3333 0.0203 Factor B 75.000 75.000 3.0000 0.1215 AB 8.333 8.333 0.3333 -7 Error 200.000 25.000 -Total 11 491.667 -Coefficient of Variation: 46.15% Thí nghiệ m Bảng ANOVA số liệu Bảng 3.12 Số chồi/mẫu A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 1.722 0.861 3.875 0.0831 Within 1.333 0.222 -Total 3.056 Coefficient of Variation = 17.32% Trọng lượng tươi mẫu A N A L Y S I S O F Degrees of Sum of Freedom Squares V A R I A N C E Mean Square T A B L E F-value Prob -Between 3630.963 1815.481 1.113 0.3882 Within 9790.682 1631.780 -Total 13421.644 Coefficient of Variation = 6.11% Số mở/mẫu A N A L Y S I S O F Degrees of Sum of V A R I A N C E Mean T A B L E Freedom Squares Square F-value Prob -Between 0.162 0.081 0.374 Within 1.302 0.217 17 Total Số rễ/mẫu 1.464 Coefficient of Variation = 8.64% A N A L Y S I S O F Degrees of Sum of Freedom Squares V A R I A N C E Mean Square T A B L E F-value Prob -Between 6.455 3.227 11.493 0.0089 Within 1.685 0.281 -Total 8.140 Coefficient of Variation = 40.25% Bảng ANOVA số liệu Bảng 3.13 Số chồi/mẫu A N A L Y S I S O F Degrees of Sum of Freedom Squares V A R I A N C E Mean Square T A B L E F-value Prob -Between 3.047 1.523 47.276 0.0002 Within 0.193 0.032 -Total 3.240 Coefficient of Variation = 5.67% Trọng lượng tươi mẫu A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 378441.791 189220.895 448.221 0.0000 Within 2532.957 422.159 -Total 380974.748 Coefficient of Variation = 2.34% Số mở/mẫu A N A L Y S I S O F Degrees of Sum of V A R I A N C E Mean T A B L E Freedom Squares Square F-value Prob -Between 5.056 2.528 13.542 0.0060 Within 1.120 0.187 -Total 6.176 Coefficient of Variation = 6.19% Số rễ/mẫu A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob 17 Between Within 18.807 1.373 9.403 0.229 41.083 0.0003 -Total 20.180 Coefficient of Variation = 18.64% Diện tích mở/mẫu A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 20345.129 10172.564 3.161 0.1154 Within 19306.878 3217.813 -Total 39652.007 Coefficient of Variation = 6.31% Tỷ lệ mẫu vàng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 200.000 100.000 999.990 0.0000 Within 0.000 0.000 -Total 200.000 Coefficient of Variation = 0.00% PHỤ LỤC Bảng trắc nghiệm phân hạng cho số liệu thí nghiệm Thí nghiệ m Bảng trắc nghiệm phân hạng Bảng kết 3.1 Tỷ lệ mẫu tạo chồi Duncan's Multiple Range Test LSD value = 2.816 s_ = 0.6917 at alpha = 0.010 x Original Order Mean = 0.0000 C Mean Mean = 0.0000 C Mean Mean = 0.0000 C Mean Mean = 0.0000 C Mean Mean = 70.83 B Mean Mean = 100.0 A Mean Ranked Order = 100.0 = 70.83 = 0.0000 = 0.0000 = 0.0000 = 0.0000 A B C C C C Tỷ lệ mẫu tạo rễ Duncan's Multiple Range Test LSD value = 2.783 s_ = 0.6836 at alpha = 0.010 x Original Order Mean = 0.0000 C Mean Mean = 0.0000 C Mean Mean = 0.0000 C Mean Mean = 0.0000 C Mean Mean = 18.75 A Mean Mean = 14.55 B Mean Ranked Order = 18.75 = 14.55 = 0.0000 = 0.0000 = 0.0000 = 0.0000 A B C C C C Thí nghiệ m Bảng trắc nghiệm phân hạng Bảng kết 3.5 Số chồi/mẫu Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.2035 s_ = 0.05000 at alpha = 0.010 x Original Order Tỷ lệ mẫu tạo rễ Duncan's Multiple Range Test LSD value = 4.845 s_ = 1.190 at alpha = 0.010 x Original Order Ranked Order Mean = 73.75 B Mean = 82.75 A XX Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 33.75 51.25 82.75 70.00 47.50 D C A B C Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 73.75 70.00 51.25 47.50 33.75 B B C C D Số rễ/mẫu Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.1439 s_ = 0.03536 at alpha = 0.010 x Original Order Ranked Order Mean = 1.440 B Mean = 1.800 A Mean = 0.8000 C Mean = 1.440 B Mean = 0.6100 D Mean = 0.8400 C Mean = 0.6300 D Mean = 0.8000 C Mean = 1.800 A Mean = 0.6300 D Mean = 0.8400 C Mean = 0.6100 D Trọng lượng tươi mẫu Duncan's Multiple Range Test LSD value = 24.63 s_ = 6.051 at alpha = 0.010 x Original Order Ranked Order Mean = 367.3 A Mean = 367.3 Mean = 316.4 B Mean = 316.4 Mean = 289.1 CD Mean = 291.9 Mean = 291.9 BC Mean = 289.1 Mean = 265.1 D Mean = 265.8 Mean = 265.8 D Mean = 265.1 A B BC CD D D Thí nghiệ m Bảng trắc nghiệm phân hạng Bảng kết 3.7 Số chồi/mẫu Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.5115 s_ = 0.1238 at alpha = 0.010 x Original Order Ranked Order Mean = 2.570 BC Mean = 3.150 Mean = 1.730 D Mean = 3.050 Mean = 2.460 C Mean = 2.810 Mean = 2.810 ABC Mean = 2.620 Mean = 2.400 C Mean = 2.570 Mean = 3.150 A Mean = 2.460 Mean = 2.620 ABC Mean = 2.400 Mean = 3.050 ABMean = 1.730 Tỷ lệ mẫu tạo rễ Duncan's Multiple Range Test LSD value = 10.79 A AB ABC ABC BC C C D 179 s_ = 2.611 at alpha = 0.010 x Original Order Ranked Order B Mean = 45.00 Mean A Mean = 33.30 B BC Mean = = 25.00 BC 33.30 CD Mean = 25.00 Mean BC Mean = 23.30 Mean = 21.70 =BC BC 45.00 D A BC BC BC Mean Thí nghiệ m Bảng trắc nghiệm phân hạng Bảng kết 3.9 Số mở/mẫu Least Significant Difference Test LSD value = 0.7197 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 6.100 B Mean = 7.070 Mean = 5.470 BC Mean = 6.100 Mean = 5.300 C Mean = 5.470 Mean = 7.070 A Mean = 5.300 A B BC C Bảng trắc nghiệm phân hạng Bảng kết 3.10 Số chồi/mẫu Least Significant Difference Test LSD value = 0.1501 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean = = B Mean A 3.133 B 3.167 B Mean Mean Mean Mean = = = = 3.433 3.200 3.167 3.133 A B B B Gia tăng trọng lượng tươi Least Significant Difference Test LSD value = 230.7 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 7408 B Mean = 7953 Mean = 7158 C Mean = 7408 Mean = 7179 BC Mean = 7179 Mean = 7953 A Mean = 7158 A B BC C Diện tích Least Significant Difference Test LSD value = 105.0 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 958.0 B Mean = 1238 Mean = 948.0 B Mean = 1001 Mean = 1001 B Mean = 958.0 Mean = 1238 A Mean = 948.0 A B B B 180 Thí nghiệ m Bảng trắc nghiệm phân hạng Bảng kết 3.12 Số rễ/mẫu Least Significant Difference Test LSD value = 0.9981 at alpha = 0.050 Original Order Ranked Order Mean = 0.2000 B Mean = 2.250 Mean A A B Bảng trắc nghiệm phân hạng Bảng kết 3.13 Số chồi/mẫu Least Significant Difference Test LSD value = 0.4901 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order A Mean B A = Gia tăng trọng lượng tươi Least Significant Difference Test LSD value = 56.29 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order B Mean A1 = Số mở/mẫu B Least Significant Difference Test LSD value = 1.185 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 6.533 B Mean = 8.033 Mean = 6.367 BMean = 6.533 B Mean = 8.033 A Mean = 6.367 B Số A Mean A3 =B A Mean =B B A rễ/mẫu Least Significant Difference Test LSD value = 1.311 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order B Mean A1 =B Tỷ lệ vàng Least Significant Difference Test LSD value = 0.008664 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 10.00 A Mean = 10.00 Mean = 0.0000 B Mean = 0.0000 Mean = 0.0000 B Mean = 0.0000 A Mean B B = A B B 181 PHỤ LỤC Sắc ký đồ xác định hàm lượng chất ĐHSTTV đo phương pháp HPLC Sắc ký đồ mẫu chuẩn đơn Sắc ký đồ chuẩn hỗn hợp Sắc ký đồ mẫu chuẩn nội Sắc ký đồ số mẫu thử Untitled SAMPL E INFOR MATI O N S a m pl e N a m e : S a m pl e T y p e: M C R F In te rn al St a n d ar d Acquired By: Sample Set Name: Syst em Via l: Inje ctio n #: Inje ctio n Vol um e: 1 Acq Method Set: hanh20111 P r o c e s s i n g M e t h o d : P H Y T O h C Run Time: Chnl Descr.: 25.0 Minutes Proc PDA 254.0 nm D 8/16/2011 4:29:36 PM ICT at e A c q ui re d: Date Processed: 9/20/2011 12:37:24 PM ICT A u t o S c a l e d C h r o m a t o g r a m 3 0.20 0.15 0.10 0.05 2 A 1 0.00 2.00 4.00 10.00 16.00 22.00 6.00 12.00 18.00 24.00 8.00 14.00 20.00 Minutes Pe ak Re sults Name RT Area Height Amount Units 1 1.793 573523 19595 2 2.426 1119534 77833 3 3.524 6648134 218612 4 5.300 130780 3930 5 7.301 446271 13547 Report Method: Untitled Date Printed: P Repor 125 t Metho d ID Page: of 9/20/2011 12:38:03 PM Asia/Saigon [...]... trọng trong chương trình nhân và tạo giống đối với cây Hosta Đề tài: Nghiên cứu sự phát sinh hình thái và tăng trưởng của cây Hosta (Hosta Frances Williams) trong điều kiện nuôi cấy in vitro được thực hiện, với mục đích tìm hiểu về sự phát sinh hình thái và tăng trưởng của loài cây Hosta Frances Williams trong điều kiện in vitro dưới tác động của các chất điều hòa sinh trưởng thực vật ngoại sinh Qua... hưởng của thành phần khoáng và vitamin lên sự tăng trưởng cụm chồi cây Hosta in vitro nuôi cấy trong hộp Magenta sau 8 tuần 71 Hình 3.17 Ảnh hưởng của thành phần khoáng và vitamin lên sự tăng trưởng cụm chồi cây Hosta in vitro sau 8 tuần nuôi cấy 71 Hình 3.18 Ảnh hưởng của thành phần khoáng và vitamin lên chỉ tiêu số chồi/mẫu của cụm chồi cây Hosta in vitro sau 4 và 8 tuần nuôi cấy 73 Hình. .. lên sự tăng trưởng của cụm chồi cây Hosta sau 8 tuần nuôi cấy 78 Hình 3.22 Sự biến thiên nồng độ ethylen trong hộp nuôi cấy trong hộp nuôi cấy dưới ảnh hưởng của điều kiện nuôi cấy thoáng khí khác nhau theo thời gian nuôi cấy 81 Hình 3.23 Sự tương quan giữa nồng độ ethylen tích lũy trong hộp nuôi cấy có độ thoáng khí khác nhau và tỷ lệ mẫu có lá vàng của cụm chồi cây Hosta in vitro. .. tuần nuôi cấy 58 Hình 3.9 Hình giải phẫu thể hiện sự phát sinh chồi từ mẫu cấy lớp mỏng gốc thân cây Hosta sau 4 tuần nuôi cấy 60 Hình 3.10 Hình giải phẫu mẫu cấy cây Hosta sau 4 tuần nuôi cấy 61 Hình 3.11 Hình giải phẫu mẫu cấy lớp mỏng gốc thân cây Hosta in vitro ở nghiệm thức T0,5N0,5 61 Hình 3.12 Cụm chồi của mẫu lớp mỏng gốc thân cây Hosta in vitro dưới ảnh hưởng của các... lượng của IAA nội sinh đo bằng phương pháp HPLC và tỷ lệ tạo rễ của mẫu cấy lớp mỏng gốc thân cây Hosta in vitro dưới hưởng của các nồng độ TDZ và NAA khác nhau sau 8 tuần nuôi cấy 68 Hình 3.15 Hàm lượng của IAA nội sinh đo bằng phương pháp HPLC và số chồi hình thành của mẫu cấy lớp mỏng gốc thân cây Hosta in vitro dưới hưởng của các nồng độ TDZ và NAA khác nhau sau 8 tuần nuôi cấy 68 Hình 3.16... Hình 3.19 Sự biến thiên nồng độ ethylen trong hộp nuôi cấy dưới ảnh hưởng của thành phần khoáng và vitamin khác nhau theo thời gian nuôi cấy 76 Hình 3.20 Sự tương quan giữa nồng độ ethylen tích lũy trong hộp nuôi cấy kín và chỉ tiêu mẫu có lá vàng ở các nghiệm thức có thành phần khoáng và vitamin của môi trường nuôi cấy khác nhau sau 8 tuần nuôi cấy 76 Hình 3.21 Ảnh hưởng của điều kiện nuôi cấy thoáng... BA và NAA khác nhau sau 8 tuần nuôi cấy 63 Hình 3.13 Hàm lượng gibberellin nội sinh trong cây Hosta in vitro phát sinh từ mẫu cấy lớp mỏng gốc thân đo bằng phương pháp HPLC, phương pháp sinh trắc nghiệm và tỷ lệ hàm lượng gibberellin đo bằng phương pháp sinh trắc nghiệm với hàm lượng gibberellin đo bằng phương pháp HPLC dưới ảnh hưởng của các nồng độ TDZ và NAA khác nhau sau 8 tuần nuôi cấy 67 Hình. .. hoặc vi sinh vật tổng hợp có tác dụng điều hoà sự sinh trưởng ở thực vật Các chất điều hoà sinh trưởng thực vật không phải là chất dinh dưỡng, các vitamin hay những nguyên tố thiết yếu cho thực vật (Bùi Trang Việt, 2000) Hiện nay các chất điều hoà sinh trưởng thực vật được chia thành 5 nhóm chính: auxin, cytokinin, gibberellin, acid abscisic và ethylen 1.4.1 Auxin Auxin là nhóm chất điều hòa sinh trưởng. ..11 Hình 3.5 Mẫu lớp mỏng gốc thân Hosta in vitro sau 8 tuần nuôi cấy trên đĩa petri 52 Hình 3.6 Mẫu lớp mỏng gốc thân Hosta in vitro sau 8 tuần nuôi cấy 52 Hình 3.7 Cụm chồi cây Hosta từ mẫu cấy lớp mỏng dưới ảnh hưởng của các nồng độ TDZ và NAA khác nhau sau 8 tuần nuôi cấy trên đĩa petri 57 Hình 3.8 Cụm chồi cây Hosta tạo từ mẫu cấy lớp mỏng dưới ảnh hưởng của các nồng độ TDZ và. .. 1.10 Hiệp hội Hosta Anh quốc Cây Hosta được trồng khắp nơi tại Mỹ, hình ảnh của nó còn được sử dụng in lên áo, lịch và nhiều loại vật dụng khác Doanh thu từ cây Hosta và các sản phẩm có liên quan không ngừng tăng lên 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ CÂY HOSTA  Trong nước Nguyễn Thị Quỳnh và Nguyễn Tâm Uyên (2010), nghiên cứu nuôi cấy lớp mỏng tế bào từ mẫu gốc thân, cuống lá, phiến lá cây Hosta Frances Williams ... giống Hosta Đề tài: Nghiên cứu phát sinh hình thái tăng trưởng Hosta (Hosta Frances Williams) điều kiện nuôi cấy in vitro thực hiện, với mục đích tìm hiểu phát sinh hình thái tăng trưởng loài Hosta. .. vitamin lên tăng trưởng cụm chồi Hosta nuôi cấy in vitro 39 2.2.5 Thí nghiệm Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy thoáng khí lên trình tăng trưởng tích lũy ethylen hộp nuôi cấy cụm chồi Hosta nuôi cấy. .. trưởng cụm chồi Hosta nuôi cấy in vitro 70 3.1.5 Thí nghiệm Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy thoáng khí lên trình tăng trưởng tích lũy ethylen hộp nuôi cấy cụm chồi Hosta nuôi cấy in vitro