Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài MỞ ðẦU Nước, nguồn tài nguyên thiên nhiên vô quý giá trái ñất, thành phần quan trọng tế bào sinh học, môi trường trình sinh hóa quang hợp, trao ñổi chất,… Tất sống trái ñất ñều phụ thuộc vào nước vòng tuần hoàn nước Hơn 70% diện tích trái ñất ñược bao phủ nước Lượng nước trái ñất có khoảng 1,38 tỉ km3 ñó 97,4% nước mặn ñại dương, 2,6% nước tồn chủ yếu dạng băng tuyết ñóng cực núi có 0,3% (hay 3,6 triệu km3) sử dụng làm nước uống [26] Nguồn nước trái ñất phong phú song vô tận Do ñó, việc sử dụng bảo vệ nguồn nước cách hợp lí vấn ñề cấp bách ñặt cho toàn nhân loại Ngày nay, với phát triển mạnh mẽ toàn xã hội, tăng cách nhanh chóng khu dân cư, khu công nghiệp, ñô thị mới,…ñang làm nguồn nước dần bị cạn kiệt ô nhiễm nghiêm trọng Có nhiều nguyên nhân gây ô nhiễm nguồn nước song nguyên nhân nguồn nước thải từ hoạt ñộng công nghiệp, nông nghiệp, nuôi trồng thủy hải sản sinh hoạt – phần lớn ñều không qua xử lí Một nguyên nhân khác ñáng ý ñó có mặt thực vật phù du sống trôi nguồn nước, ñó có vi khuẩn lam (VKL) Chúng vi sinh vật có khả quang hợp sử dụng nguồn vô trực tiếp làm thức ăn,… xuất với mật ñộ cao gây tượng nở hoa nước Ở nơi có tượng xảy nguồn nước thường có mùi tanh, màu nước thay ñổi, hàm lượng oxy hòa tan nước giảm gây tượng cá chết hàng loạt Bên cạnh ñó nhiều loài VKL thể sản sinh ñộc tố, ñược gọi VKL ñộc VKL gây ñộc gồm nhiều loài thuộc chi Microcystis, Anabaena, Oscilltoria, Aphanizomenon,…nhiều loài số chúng tạo sản phẩm thứ cấp có ñộc tính gây hại cho ñộng vật nuôi hoang dã ðộc tố VKL K13-0602 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài bao gồm ñộc tố gan (hepatotoxin), ñộc tố thần kinh (neurotoxin), ñộc gây ngứa da (cytotoxin),… Phổ biến loại ñộc tố dẫn ñến chết nhiều trường hợp ñã ñược chứng minh thực tế Microcystis tạo có tên gọi microcystins ðây dạng ñộc tố gan, mạch vòng với khoảng 80 dạng khác ðộc tố phá hủy cấu trúc gan, làm cấu trúc thể xoang, tăng trọng lượng gan xuất huyết, gây sốc trình vận chuyển máu, rối loạn nhịp tim dẫn ñến trường hợp tử vong người [12, 15] Do vậy, việc phát loài VKL gây ñộc tiềm tàng phát có mặt loại ñộc tố nguồn nước có ý nghĩa quan trọng ñối với cộng ñồng, tạo ñiều kiện việc cảnh báo sớm xuất bloom ñộc Có nhiều phương pháp ñể nghiên cứu ñộc tố ñộc tính VKL ñộc như: phương pháp thử sinh học, ức chế enzyme phosphatase, ELISA, HPLC,…Tuy nhiên việc lựa chọn phương pháp tiện lợi, chi phí thấp ñể xác ñịnh nhanh chóng ñộc tính hàng loạt mẫu tảo với ñộ xác cao, phù hợp với ñiều kiện Việt Nam ñang hướng ñược nhà khoa học nước quan tâm Xuất phát từ thực tế tiến hành ñề tài: “Nghiên cứu ñộc tính số chủng vi khuẩn lam gây ñộc tiềm tàng thuộc chi Microcystis phương pháp thử sinh học Artemia salina” Nội dung nghiên cứu bao gồm: - Xác ñịnh thành phần VKL số thủy vực nghiên cứu - Phân lập số chủng VKL ñộc - Xây dựng ñường cong tỉ lệ chết Artemia salina theo thời gian - Nghiên cứu ñộc tính mẫu tự nhiên chủng phân lập K13-0602 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài PHẦN I TỔNG QUAN TÀI LIỆU I 1.VI KHUẨN LAM TRONG MÔI TRƯỜNG I.1.1 Sự ña dạng vi khuẩn lam I.1.1.1 ðặc ñiểm hình thái vi khuẩn lam Hình thái VKL ña dạng phong phú bao gồm dạng: ñơn bào, tập ñoàn ña bào + Các dạng ñơn bào tập ñoàn tế bào sống riêng rẽ, có hình dạng khác nhau, thông thường có dạng hình cầu hình elip Trong trường hợp vài nhiều tề bào liên kết lại với chất nhày thành thể nguyên vẹn ñược gọi tập ñoàn Hình dạng tập ñoàn khác gồm: hình cầu, elip, trụ, ñôi có dạng hình hình khối; thông thường dạng không xác ñịnh ñược + Dạng ña bào: VKL ña bào dạng sợi có cấu trúc ñơn ñộc dính lại thành màng hay váng nhờ chất nhày quấn lại thành khối hình cầu hay bán cầu, sợi tế bào ñược liên hệ với qua sợi liên bào Thông thường màng ngăn tế bào có lỗ sợi liên bào ñi qua nối liền tế bào với tế bào thành thể thống Theo hệ thống Bergey (1994) VKL ñược xếp vào khác nhau, rõ rệt hình thái Tế bào sinh dưỡng VKL có hình cầu, elip rộng, hình lê, hình trứng, hình kéo dài phía, hình elip kéo dài, hình thoi, hình ống Có tế bào ñường kính khoảng 1µm (như chi Synecchococcus) có sợi tế bào chiều ngang sợi vượt 30µm (như Oscillatoria) Tế bào VKL gần gũi với cấu tạo của vi khuẩn gram âm Thành tế bào dầy phân thành lớp: lớp lớp lipopolysaccarid, lớp K13-0602 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài lớp peptidoglycan Nhiều VKL tiết bên lớp bao nhầy có cấu tạo polisaccarid Bao nhầy có nhiều hình thái khác nhau: lớp dịch nhầy, vỏ nhày, bao nhầy Bên tế bào có nhiều thylakoid, dạng xếp song song hay dạng uốn khúc nằm gần tế bào chất Chúng có chức quang hợp tế bào Trên màng thylakoid chứa chất diệp lục α, β-carotene, carotene thành phần liên quan ñến chuỗi chuyển ñiện tử quang hợp Trên mặt thylakoid chứa phicobilixome (một cấu trúc protein có dạng ñĩa cấu tạo với 75% phicoxianin, 12% phicoeritrin, 12% cellophicoxianin) Nhờ thành phần mà tế bào VKL thực ñược chức quang hợp Các chất dự trữ gặp tế bào VKL glycogen, poly-βhidroxibutirat volutin (polyphosphate), cyanophycine [7] I.1.1.2 Dinh dưỡng vi khuẩn lam VKL sử dụng nguồn vô trực tiếp làm thức ăn, nguồn lượng từ môi trường hấp thu ánh sáng mặt trời Do ñó, VKL có khả tự dưỡng quang nhờ chứa sắc tố quang hợp chất diệp lục Quá trình quang hợp VKL trình phosphoryl hoá quang hợp phi tuần hoàn, có giải phóng oxy Giải ánh sáng mà VKL chấp nhận ñược rộng, chúng tồn ñược cường ñộ ánh sáng yếu Ngoài quang hợp, VKL có khả quang khử, quang dị dưỡng dị dưỡng hoàn toàn Chúng sử dụng nguồn hữu có môi trường dạng nguồn nguyên liệu bổ sung Chính nhờ khả sống ña dạng mà VKL sống nhiều ñiều kiện, hoàn cảnh, môi trường khác chí ñiều kiện khắc nghiệt Vì vậy, VKL thể tồn lâu ñời phân bố rộng rãi trái ñất [4] K13-0602 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài I.1.1.3 Sự sinh trưởng sinh sản vi khuẩn lam Sự sinh trưởng sinh sản loài VKL khác khác VKL sinh sản theo nhiều hình thức, song chúng khả sinh sản hữu tính VKL sinh sản chủ yếu theo phương thức phân ñôi tế bào ðối với dạng VKL ñơn bào ñó cách Ở thể tập ñoàn dạng sợi phân chia tế bào thể tiến hành theo 1, hay hướng không gian Ở số chi VKL, trình phân chia tế bào tiến hành nhanh chóng hình thành nên nanocyst ðó tế bào nhỏ, ñược hình thành bên màng tế bào mẹ, kết phân cách nhanh chóng chất nguyên sinh Tuy nhiên sinh sản VKL tiến hành không trình phân chia tế bào mà hình thức khác nhau: Hình thành ñoạn sinh sản (hormogonia), bào tử nội (gonidi) [6, 7] I.1.1.4 Sự phân bố vi khuẩn lam VKL phân bố rộng rãi tự nhiên Chúng có mặt khắp nơi ñất sa mạc, băng tuyết vĩnh cửu… Chúng sinh sống bên trong, bên trên, hay sát mặt nước, ñại phận VKL sống nước tạo thành thực vật phù du thuỷ vực Sự phân bố VKL phụ thuộc vào nồng ñộ dinh dưỡng, pH, tốc ñộ dòng nước, nồng ñộ muối thuỷ vực… Ở thuỷ vực khác có chi VKL ưu ñặc trưng thuỷ vực ñó [3] I.1.1.5 Phân loại vi khuẩn lam VKL sinh vật thuộc nhóm nhân nguyên thuỷ chúng có ñặc ñiểm hình thái cấu trúc mang tính chuyên hoá cao Hơn nữa, chúng có ñặc ñiểm sinh lý, sinh hoá quan trọng nên VKL ngày thu hút quan tâm ý nhiều nhà nghiên cứu K13-0602 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài Việc xác ñịnh tên loài VKL có ý nghĩa quan trọng Những công trình nghiên cứu phân loại VKL Agardh năm 1842, Kutzing năm 1843 xuất ñầu tiên vào nửa kỷ XIX ñến giá trị mang tính lịch sử Hệ thống phân loại tảo lam Thuret (1842) ñề vào ñầu kỷ XX sau ñó Stizenberger năm 1860, Sach năm 1874, Kichner năm 1900 ñã phát triển thêm ñến ý nghĩa ñịnh [6, 7] Dựa vào ñặc ñiểm hình thái kết hợp với hình thức sinh sản, VKL ñược chia làm nhóm: + Nhóm thứ nhất: Hình que hình cầu ñơn bào, dạng sợi hay dạng kết khối (aggregate); phân ñôi nẩy chồi; dị tế bào (heterocytes), hầu hết không di ñộng Tỷ lệ G+C 31-71% Các chi tiêu biểu ñược thể hình1 Chamaesiphon Prochloron Chroococcus Glooeothece Gleocapsa Microcystis Hình 1: Hình dạng số chi vi khuẩn lam tiêu biểu thuộc nhóm + Nhóm thứ hai: hình que hình cầu ñơn bào Có thể tạo dạng kết khối (aggregate); phân cắt nhiều lần tạo baeocytes; dị tế bào Chỉ có baeocytes có di ñộng Tỷ lệ G+C 40- 46% Các chi tiêu biểu ñược thể Hình K13-0602 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Pleurocapsa Lê Thị Hoài Chroococcidiopsis Dermocapsa Hình 2: Hình dạng số chi vi khuẩn lam tiêu biểu thuộc nhóm + Nhóm thứ ba: dạng sợi (filamentous); dạng lông (trichome) không phân nhánh, có tế bào dinh dưỡng; sinh sản theo hình thức phân ñôi mặt phẳng, có kiểu ñứt ñoạn (fragmentation); dị tế bào; thường di ñộng Tỷ lệ G+C 34- 67% Các chi tiêu biểu ñược thể hình Lyngbya Oscillatoria Spirulina Prochlorothrix Pseudanabaena Hình 3: Hình dạng số chi vi khuẩn lam tiêu biểu thuộc nhóm + Nhóm thứ tư: bao gồm VKL dạng sợi; dạng lông (trichome) không phân nhánh chứa tế bào biệt hoá (specialized cell); sinh sản K13-0602 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài theo hình thức phân ñôi mặt phẳng, có kiểu ñứt ñoạn tạo thành ñoạn sinh sản (hormogonia); có tế bào dị hình; thường di ñộng sản sinh bào tử màng dày (akinetes) Tỷ lệ G+C 38- 47% Các chi tiêu biểu ñược thể hình Anabaena Cylindrospermum Nodularia Nostoc Calothrix Scytonema Hình 4: Hình dạng số chi vi khuẩn lam tiêu biểu thuộc nhóm + Nhóm thứ 5: lông (trichome) dạng sợi, phân nhánh tế bào nhiều chuỗi tạo thành; sinh sản theo hình thức phân ñôi theo nhiều mặt phẳng, hình thành ñoạn sinh sản (hormogonia); có tế bào dị hình; sản sinh bào tử màng dày (alkinetes), có hình thái phức tạp biệt hóa Tỷ lệ G+C 42- 44% Các chi tiêu biểu là: Fischerella, Stigonema, Geitlerinema, Chloroglocopsis Việc phân loại VKL cho ñến chủ yếu dựa vào ñặc ñiểm hình thái Phương pháp ñôi gặp khó khăn ñối với chủng có hình thái giống nhau, ñặc biệt tượng thường biến xảy tác ñộng môi trường ðiều ñó ñã gây khó khăn ñáng kể ñối với nhà phân loại học [1, 7] K13-0602 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài I.1.2 Hiện tượng nở hoa nước Hình 5: Hiện tượng nở hoa nước hồ Hoàn Kiếm, Hà Nội (chụp ngày 25 tháng năm 2010) Một nguyên nhân gây ô nhiễm nguồn nước thực vật phù du- loài tảo có kích thước hiển vi, sống trôi môi trường nước VKL chiếm 30% số lượng loài thành phần thực vật phù du Một số loài VKL có khả gây lên tượng nở hoa thuỷ vực nước ngọt, ñiển hình chi Microcystis, Anabaena, Aphanizomenon, Oscillatoria, … Sự phát triển cách ạt không kiểm soát ñược loài ñã làm chết hàng loạt ñộng vật thuỷ sinh (tôm, cua, cá, …) chất ñộc mà chúng tiết với lượng chất hữu ñược phân giải lớn sau trình tảo chết Trong ñó, nguồn nước sử dụng cho sinh hoạt, hoạt ñộng công nghiệp, nông nghiệp, ñược lấy chủ yếu từ nguồn nước mặt, gián tiếp ảnh hưởng ñến ñời sống người ñộng thực vật [4, 11] K13-0602 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài I.1.2.1 Khái niệm Theo Odum, vào khoảng thời gian nắng ấm kéo dài, nhiệt ñộ tăng cao, thích hợp với phát triển tảo, số thuỷ vực thường xuất váng tảo kết hợp thành ñám mặt nước, tượng gọi nở hoa nước [10] Hiện tượng kết giàu dinh dưỡng hay gọi phú dưỡng (Eutrophication) kết hợp với ñiều kiên thời tiết thích hợp Phú dưỡng trình tự xảy ao hồ thời gian Nguyên nhân chủ yếu tượng hoạt ñộng người, chất thải nguồn nước sinh hoạt, nguồn nước thải hoạt ñộng sản xuất thải trực tiếp vào thuỷ vực mà chưa qua xử lý Thuỷ vực bị phú dưỡng hàm lượng chất dinh dưỡng cao, ñặc biệt nitrogen Phospho (hàm lượng trung bình hàng năm nitrogen vô >0,3mg.L-1, phospho vô > 0,15mg.L-1 ) [6] Nguyên nhân dẫn ñến tượng nở hoa nước: Nồng ñộ chất dinh dưỡng thuỷ vực cao (ñặc biệt muối ña lượng nitrogen, phospho), nhiệt ñộ nước ấm, cường ñộ chiếu sang cao, thoát nước chậm chạp dẫn tới ứ ñọng nước Sự nở hoa nước chịu ảnh hưởng mạnh mẽ nhiều ñiều kiện ngoại cảnh yếu tố dinh dưỡng, tính chất thuỷ lý, thuỷ hoá cấu trúc cột nước, ñiều kiện thời tiết (ánh sáng, nhiệt ñộ, thời gian chiếu sáng, sức gió, mưa, …), chế bên loài gây nở hoa ñảm bảo khả phát triển ưu ñiều kiện stress môi trường Những chế ñó thường là: khả cố ñịnh Nitrogen, tích luỹ dinh dưỡng nội bào (P, N), tích luỹ kim loại chất tạo chelat, tạo chất nhày vỏ ñể chống lại ñộ ẩm cao thấp, ñiều hoà nổi, quang bảo vệ nhờ hệ sắc tố phụ trợ, nhiều quan hệ hoà hợp với thể vi sinh vật thực vật bậc cao khác [20] K13-0602 10 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài Với mẫu nước nở hoa hồ Hoàn kiếm thu ñược ngày 22.01.2010, ñường cong tỉ lệ chết Artemia salina tỉ lệ thuận với nồng ñộ dịch chiết tảo chia làm nhóm rõ rệt Nhóm thứ (thời ñiểm 22 24 giờ), tỉ lệ chết Artemia salina tăng dải nồng ñộ từ 0- mg tảo khô/mL dải nồng ñộ cao 4mg/mL ñạt cực ñại (tỉ lệ chết ñạt 100% Artemia salina thí nghiệm) Nhóm thứ (thời ñiểm 18 20 giờ), tỉ lệ chết Artemia salina tăng dải nồng ñộ từ 0- mg tảo khô/ mL dải nồng ñộ cao (từ 8- 20 mg tảo khô/mL) tỉ lệ ñạt cực ñại Cũng mẫu nước nở hoa trên, ñường cong tỉ lệ chết Artemia salina 24 cao so với ñường cong thời ñiểm thí nghiệm khác (18 giờ, 20 22 giờ) Bloom TK 02.02.07 T ỉ lệ ch ết Artem ia salin a (% ) T ỉ lệ ch ết A rtem ia s alin a (% ) Bloom HV 23.02.07 100 80 18h 60 20h 40 22h 20 24h 0 10 15 20 25 100 80 18h 60 20h 40 22h 24h 20 0 Nồng ñộ dịch chiết tảo (mg tảo khô/ml) Tỉ lệ chết A rtem ia salin a (% ) T ỉ lệ c h ế t A rt e m ia s a lin a (% ) 100 80 18h 60 20h 40 22h 20 24h 10 15 15 20 25 Bloom ao chùa giàn 28.03.07 Bloom ao chùa giàn 17.02.07 10 Nồng dộ dịch chiết tảo (mg tảo khô/m l) 20 25 100 80 18h 60 20h 40 22h 24h 20 0 Nồng ñộ dịch chiết tảo (mg tảo khô/ml) 10 15 20 25 Nồng ñộ dịch chiết tảo (m g tảo khô/m l) Hình 19: ðường cong tỉ lệ chết Artemia salina theo thời gian thí nghiệm số mẫu nước nở hoa năm 2007 Một số mẫu nước nở hoa khác như: mẫu nước nở hoa hồ Văn, hồ Triều Khúc, ao Chùa Giàn ñược sử dụng cho nghiên cứu Với mẫu nước nở hoa hồ Văn ngày 23.02.2007, ñường cong tỉ lệ chết Artemia salina tỉ lệ K13-0602 49 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài thuận với nồng ñộ dịch chiết tảo Thời ñiểm 18 giờ, 20giờ 22 giờ, ñường cong có xu hướng tăng dần ñều với nồng ñộ dịch chiết Nồng ñộ 20 mg tảo khô /mL không ñủ ñể làm chết 100% Artemia salina thí nghiệm Tại thời ñiểm 24 giờ, khoảng nồng ñộ dịch chiết từ 16- 20 mg tảo khô/mL, tỉ lệ chết Artemia salina ñạt cực ñại Theo số ghi chép hồ Triều Khúc, Thanh Xuân, HN, tượng nở hoa vào thời ñiểm tháng năm 2007 Quan sát thấy váng tảo màu xanh lên bề mặt xung quanh hồ có mùi kháng sinh ñậm ñặc, cá chết lên bề mặt Khi tiến hành nghiên cứu, ñường cong tỉ lệ chết Artemia salina tỉ lệ thuận với nồng ñộ dịch chiết tảo biến ñộng lớn thời ñiểm khác nhau.Tại dải nồng ñộ từ 0- mg tảo khô/mL, tỉ lệ chết Artemia salina không ñáng kể Tỉ lệ chết Artemia salina tăng nhanh dải nồng ñộ 4- mg tảo khô/mL, ñó tỉ lệ chết Artemia salina tương ñối ổn ñịnh mức cao nồng ñộ dịch chiết tảo từ 8- 20mg tảo khô/mL Tại nồng ñộ dịch chiết tảo lớn (20 mg tảo khô/ml), tỉ lệ chết Artemia salina không ñạt 100% Tương tự vậy, tiến hành nghiên cứu mẫu nước nở hoa ao Chùa Giàn vào thời ñiểm tháng tháng năm 2007, tỉ lệ chết Artemia salina tỉ lệ thuận với nồng ñộ dịch chiết tảo ñường cong tỉ lệ chết Artemia salina thời ñiểm 24 cao so với thời ñiểm lại Riêng mẫu nước nở hoa thời ñiểm tháng 2, nồng ñộ dịch chiết tảo 20 mg tảo khô/mL không làm chết 100% Artemia salina thí nghiệm Nhưng mẫu nước nở hoa tháng 3, tỉ lệ Artemia salina thí nghiệm chết 100% nồng ñộ từ 8- 20 mg tảo khô/mL thời ñiểm 24 Còn thời ñiểm khác, nồng ñộ cao nghiên cứu không ñủ ñể làm chết 100% Artemia salina thí nghiệm K13-0602 50 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài Bloom NC 12.08.09 Bloom NC 05.10.09 T ỉ lệ c h ế t A rt e m ia ( % ) 100 T ỉ lệ ch ết A rtem ia salin a( % ) 18h 80 20h 60 22h 24h 40 20 100 80 18h 60 20h 40 22h 20 24h 0 10 15 20 25 10 15 20 25 Nồng ñộ dịch chiết tảo (mg tảo khô/ml) Nồng ñộ dịch chiết tảo (mg tảo khô/ml) Hình20: ðường cong tỉ lệ chết Artemia salina theo thời gian thí nghiệm mẫu nước nở hoa hồ Núi Cốc Vào thời ñiểm tháng ñến tháng 10 năm 2009 hồ Núi Cốc xuất hiện tượng nở hoa nước, váng tảo mầu xanh tập chung cuối hướng gió Khi tiến hành nghiên cứu ñường cong tỉ lệ chết Artemia salina mẫu nước nở hoa này, ta thấy: ñường cong tỉ lệ chết Artemia salina tỉ lệ thuận với nồng ñộ dải nồng ñộ 0- mg tảo khô/mL chia làm nhóm nhóm 18 giờ, 20 nhóm 22 giờ, 24 giờ, ñường cong tỉ lệ chết Artemia salina khác biệt lớn nhóm lại khác biệt tương ñối lớn nhóm, nhóm 22 giờ, 24 có tỉ lệ chết Artemia salina cao nhóm lại Tại dải nồng ñộ lớn (từ 8- 20 mg tảo khô/mL) ñường cong tỉ lệ chết Artemia salina ñạt cực ñại (tỉ lệ chết ñạt 100%) tất thời ñiểm Với mẫu nở hoa tháng 10 kết ñường cong tỉ lệ chết Artemia salina thu ñược tương tự với mẫu nước nở hoa vào tháng thời ñiểm 20, 22, 24 Tuy nhiên thời ñiểm 18 có khác biệt không lớn, ñường cong tỉ lệ chết Artemia salina thí nghiệm tỉ lệ thuận với nồng ñộ dịch chiết không ñạt ñược cực ñại tại nồng ñộ dịch chiết tảo lớn (20 mg tảo khô/mL) Qua kết cho thấy tỉ lệ chết Artemia salina thí nghiệm mẫu nghiên cứu ñều tăng theo nồng ñộ dịch chiết tảo thời K13-0602 51 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài ñiểm 24 tỉ lệ Artemia salina thí nghiệm chết cao so với thời ñiểm khác Dựa kết tiến hành tiếp nghiên cứu ñộc tính mẫu VKL phân lập mẫu nước nở hoa giá trị LC50 thời ñiểm 24 III.4 NGHIÊN CỨU ðỘC TÍNH CỦA MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN LAM PHÂN LẬP VÀ MẪU NƯỚC NỞ HOA NGOÀI TỰ NHIÊN III.4.1 ðộc tính số mẫu vi khuẩn lam trạng thái tươi ñông khô ðể tìm hiểu khác biệt ñộc tính chiết từ mẫu tươi mẫu ñông khô, hay nói cách khác ñộc tố chiết từ mẫu ñông khô có bị biến tính không, tiến hành phân tích so sánh giá trị LC50 số mẫu nghiên cứu ðể phát ñược chủng VKL mẫu nước nở hoa tự nhiên có khả gây ñộc hay không, tiến hành thử ñộc tính phương pháp thử sinh học Artemia salina ðây phương pháp mới, chi phí thấp, dễ sử dụng không vi phạm luật cấm sử dụng ñộng vật thí nghiệm số nước ðộc tính mẫu thí nghiệm ñược xác ñịnh giá trị LC50 nồng ñộ gây chết 50% Artemia salina sau 24 Giá trị LC50 ñược xác ñịnh sở ñường chuẩn phụ thuộc tỉ lệ chết Artemia salina vào nồng ñộ dịch chiết VKL Từ ñường chuẩn nhận ñược thấy giá trị LC50 cao ñộc tính mẫu VKL thấp ngược lại, giá trị LC50 thấp tương ứng với ñộc tính cao mẫu thí nghiệm Kết phân tích ñược trình bày cụ thể bảng K13-0602 52 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài Bảng 8: Giá trị LC50 mẫu tươi mẫu ñông khô Mẫu nghiên cứu TT L 50 Ma NC ðK Ma NC T O limosa ðK O limosa T Spi ðK Spi T Bloom HK ðK Bloom HK T ðặc ñiểm LC50 Microcystis Microcystis Ocillatoria Ocillatoria Spirulina Spirulina Microcystis Microcystis 5.42 5.37 9.29 9.14 n.d n.d 4.35 4.34 10 mẫu tươi mẫu ñông khô Mẫu nghiên cứu Hình 21: Giá trị LC50 mẫu tuơi mẫu ñã ñông khô M.aeruginosa NC Spirulina platensis O limosa Mẫu nước nở hoa HK Giá trị LC50 mẫu tươi mẫu ñông khô hình 19 không thấy có khác biệt nhiều Mẫu O limosa tươi khô có giá trị LC50 cao so với mẫu lại có giá trị LC50 xấp xỉ (9.14 9.29 mg/mL) Tương tự với mẫu M.aeruginosa NC tươi khô, mẫu nước nở hoa hồ Hoàn Kiếm ngày 14.04.2009 có giá trị LC50 chênh lệch không ñáng kể Riêng với mẫu Spirulina platensis, giá trị LC50 mẫu ñông khô mẫu tươi ñều không xác ñịnh ñược Tóm lại, với kết cho thấy ñộc tính mẫu ñông khô không bị biến tính so với mẫu tươi Hơn nữa, ñặc tính mẫu ñông khô bảo quản ñược lâu dễ dàng so với mẫu tươi Vì vậy, ñể tiện cho K13-0602 53 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài trình bảo quản mẫu phục vụ nghiên cứu tiếp theo, sử dụng mẫu ñã ñược ñông khô nghiên cứu III.4.2 Nghiên cứu ñộc tính số chủng vi khuẩn lam phân lập mẫu nước nở hoa tự nhiên Trong tổng số 16 mẫu nghiên cứu, có 10 mẫu phân lập mẫu nước nở hoa Kết nghiên cứu cho thấy, giá trị LC50 mẫu có nhiều khác biệt (bảng 9) Bảng : Giá trị LC50 mẫu nghiên cứu TT K13-0602 Mẫu nghiên cứu Spi ðK ðặc ñiểm Spirulina Bloom CG Microcystis 23.04 Osp1 O limosa ðK Bloom HK Ocillatoria 13.51 Ana HK Ocillatoria Microcystis Anabaena 9.29 9.71 9.61 Bloom TK Bloom HV Microcystis 8.33 10 Ma HK Ma NC ðK Microcystis Microcystis 6.52 5.51 11 12 Bloom HK Bloom NC1 Microcystis Microcystis 5.42 4.35 13 Bloom NC Microcystis Microcystis 4.19 4.11 14 Bloom CG Microcystis 4.1 15 Osp2 Ocillatoria 16 Bloom HK Microcystis 54 LC50 n.d Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài 25 Giá trị LC50 20 15 10 A na H B K lo om B lo TK om H V M a H K B lo om H B K lo om B lo NC om B lo NC om C G B lo Os om p2 H K H K B lo om B lo om C G O sp Mẫu nghiên cứu Hình 22: Giá trị LC50 mẫu nghiên cứu Bảng hình 22 cho thấy, dịch chiết từ mẫu Spirulina platensis không làm chết Artemia salina thí nghiệm Do xác ñịnh ñược giá trị LC50 mẫu Kết phù hợp với nghiên cứu ñã có Spirulina platensi ðây loài tảo không ñộc, ñược sử dụng nhiều làm thực phẩm chức mỹ phẩm giới Việc xác ñịnh ñộc tính loài phương thức ñể kiểm chứng, so sánh mẫu có ñộc mẫu không ñộc Do vậy, giá trị LC50 mẫu không ñược ñề cập phân tích Các mẫu lại có giá trị LC50 thay ñổi lớn, dao ñộng từ mg/mL (trong mẫu nước nở hoa hồ Hoàn Kiếm ngày 22.1.2010 Ocillatoria lemmermannii) ñến 23.04 mg/mL (trong mẫu nước nở hoa ao Chùa Giàn 17.02.2007) Giá trị LC50 mẫu nghiên cứu có xu hướng giảm dần từ mẫu nước nở hoa ao chùa Giàn ngày 17.02.2007 ñến mẫu nước nở hoa hồ Hoàn Kiếm 22.01.2010 Và chia làm nhóm: Nhóm có giá trị LC50 cao (từ 8,33-23,04 mg/mL), bao gồm mẫu: mẫu nước nở hoa ao chùa Giàn 22.01.2010, hồ triều khúc 02.02.2007, hồ hoàn kiếm 08.12.2009, Ocillatoria acuta,O limosa, Anabaena Trong ñó K13-0602 55 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài mẫu có giá trị LC50 cao mẫu nước nở hoa ao chùa Giàn 22.01.2007 (23,04 mg/mL), Ocillatoria acuta (13,51 mg/mL), mẫu lại có giá trị LC50 gần tương ñương xấp xỉ 9,5 mg/mL Nhóm thứ mẫu có giá trị LC50 thấp (2-6,52 mg/mL) bao gồm mẫu: mẫu nước nở hoa Hồ Văn 18.01.2007, hồ Hoàn Kiếm ngày 14.04.2009, hồ Núi Cốc 12.08.2009, hồ Núi cốc 05.10.2009, ao chùa Giàn 28.03.2007, hồ Hoàn Kiếm 22.01.2010, M.aeruginosa HK, M.aeruginosa NC Ocillatoria lemmermannii Trong ñó mẫu có giá trị LC50 thấp (2 mg/mL) mẫu nở hoa hồ Hoàn Kiếm ngày 22.01.2010 mẫu Ocillatoria lemmermannii, mẫu lại có giá trị LC50 tương ñương nhau, xấp xỉ 5,5 mg/mL Trong nghiên cứu này, so với Spirulina platensis, mẫu ñều tiềm ẩn ñộc tính với Artemia salina mức ñộ LC50 khác K13-0602 56 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KÊT LUẬN Từ kết thu ñược trình nghiên cứu, ñi ñến số kết luận sau: Xác ñịnh ñược thành phần VKL ñộc tiềm tàng mẫu nước nở hoa hồ Hoàn Kiếm, Hà Nội hồ Núi Cốc, Thái Nguyên ñại diện thuộc chi: Microcystis, Anabaena, Oscillatoria, Pseudo-anabaena,… Phân lập nuôi cấy 02 chủng Microcystis aeruginosa kí hiệu Microcystis aeruginosa NC, Microcystis aeruginosa HK ñiều kiện phòng thí nghiệm Dựng ñược ñường cong tỉ lệ chết Artemia salina theo thời gian, ñường cong mẫu nghiên cứu ñều tăng theo nồng ñộ dịch chiết tảo thời ñiểm 24 tỉ lệ Artemia salina thí nghiệm chết cao so với thời ñiểm khác Các mẫu nghiên cứu ñều có ñộc tính với Artemia salina với giá trị LC50 giao ñộng từ mg/mL ñến 23 mg/mL Có thể dùng phương pháp thử sinh học Artemia salina làm phương pháp phát ñộc tính VKL môi trường K13-0602 57 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài KIẾN NGHỊ Trong khuôn khổ khóa luận, với thời gian có hạn, ñã bước ñầu thu ñược số kết ñáng ý Tuy nhiên kết ñạt ñược bước ñầu việc nghiên cứu ñộc tính VKL môi trường kết có ñộ tin cậy xác cao bước phân tích ñộc tố ñược thực kĩ thuật ñại(HPLC, ELISA, PPI, ) Mặt khác ñể phục vụ công tác giám sát quản lý chất lượng nước, cần kết hợp thêm phương pháp khác ñể dự báo sớm nở hoa VKL K13-0602 58 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Lân Dũng, 2005 Phân loại vi khuẩn lam Trang ñiện tử http:// vietscience.free.fr ðặng ðình Kim, 2002 Giáo trình kĩ thuật nuôi nhân giống sinh vật phù du Nhà xuất Nông nghiệp 100 trang ðặng ðình Kim, ðặng Hoàng Phước Hiền, 1999 Công nghệ sinh học vi tảo NXB Nông nghiệp 203 trang ðặng ðình Kim, ðặng Hoàng Phước Hiền, Nguyễn Sỹ Nguyên, Dương Thị Thuỷ, Dương ðức Tiến, 2005 Nghiên cứu tảo ñộc nước Việt Nam Báo cáo Hội nghị thuỷ sản 2005, Hải Phòng Nguyễn Sỹ Nguyên, 2003 Nghiên cứu ñộc tố ñộc tính số chủng vi khuẩn lam gây nở hoa nước Luận án Thạc sĩ sinh học, 2003 Viện sinh thái tài nguyên sinh vật Dương ðức Tiến, 1982 Khu hệ tảo thuỷ vực nước Việt Nam Luận án Tiến sĩ sinh học Tasken, Liên Xô Dương ðức Tiến, 1996 Phân loại vi khuẩn lam Nhà xuất Nông nghiệp 233 trang Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Phương Thảo Giáo trình Công nghệ sinh học nông nghiệp NXB Nông Nghiệp 162 trang ðặng Ngọc Thanh, Hồ Thanh Hải, Dương ðức Tiến, Mai ðình Yên, 2002 Thuỷ sinh học thuỷ vực nước ngọt, nội ñịa Việt Nam NXB Khoa học kĩ thuật, Hà Nội 10 Dương Thị Thuỷ, 1997 Bước ñầu ñiều tra tảo ñộc số thuỷ vực Hà Nội Luận văn tốt nghiệp Cử nhân sinh học ðại học Khoa học tự nhiên, ðại học Quốc gia Hà Nội K13-0602 59 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài 11 Dương Thị Thuỷ, 2001 Nghiên cứu vi khuẩn lam ñộc số thuỷ vực Hà Nội luận văn Thạc sĩ môi trường Khoa môi trường, ðại học Khoa học Tự nhiên, ðại học Quốc gia Hà Nội 12 Nguyễn Văn Tuyên, 1979 Dẫn liệu khu hệ tảo nước miền Bắc Việt Nam Luận văn phó tiến sĩ sinh học trường ðại học Tổng hợp Hà Nội 13 ðặng Thị Thanh Xuyên, 2004 Phát nghiên cứu tảo ñộc hồ chứa Kẻ Gỗ sông Rác Luận văn tốt nghiệp Kĩ sư Công nghệ sinh học, Khoa công nghệ sinh học, Viện ðại Học Mở Hà Nội 14 ðặng Thị Như Ý, Phạm Ngọc Lan, Tôn Thất Pháp, 2005 Dẫn liệu quan hệ số yếu tố môi trường nở hoa tảo lam sông Như Ý, tỉnh Thừa Thiên Huế Những vấn ñề nghiên cứu khoa học sống Trường ðại học Khoa học – ðại học Huế Tài liệu tiếng Anh 15 Batram.J, Chorus.I, 1999 Toxic cyanobacteria in water Anatoxin-a guide to their public health consequences, monitoring and management E & FN Spon 16 Carpenter and Carmicheal W.W, 1995 Taxonomy of cyanobacteria, Manual on harmful marine microalgae Intergovermental Oceanographic Commission of UNESCO Page 373-380 17 Falconer I.R, 1993 Algal toxins in sea food and drinking water Academic Press, London 18 Falconer I.R, 1996 Potential, impact a human health of toxic cyanobacteria Phycologia, Vol 35, (supplent 6) Page 6-11 19 Falconer I.R, 1998 Toxic cyanobacteria in drinking water suplies, harmful aglae Xunta de Galicia Intergovermental Oceanographic Commission of UNESCO Page 37-39 20 Jarkko Rapala, 1998 Toxin production by freshwater cyanobacteria Effect of inviromental factors Ph.b thesis department of applied chemmistry and microbiology university of Helsinki, Finland K13-0602 60 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài 21 G.A Akin – Oriola and L.A Lawton, 2006 The detection quafitication of cyanobacterial toxin in water Using the Brine Shrimp (Artemia salina) Assay West Afica journal of applied Ecology Vol Page 16-18 22 Rinehart K, Namikoshi M and Byoung W.choi,1993 Structure and biosynthesis of toxin from blue-green algae (cyanobacteria) Journal of Applied Phycology, (1994) Vol Page 159-176 23 Sinoven K, 1996 Cyanobacteria toxins and toxin product Phycologia, Vol 35 Page 12-24 24 Skullberg O.M, et al, 1993 Taxonomy of toxic cyanophycaea (cyanobacteria) Aglal toxins in seafood and drinking water Academic Press Page 145-164 25 Brenton C Nicholson, Michael D Burch, 2001 Evaluation of Analytical methods for detection and quantification of cyanotoxins in relation to Australian drinking water guidelines Research centrer for water quality and treatment Page 57 Trang ñiện tử 26 http:// vi.wikipedia.org/wiki/nươc K13-0602 61 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài Lời cảm ơn ðầu tiên xin chân thành cảm ơn GS-TS ðặng ðình Kim, ThS Nguyễn Sỹ Nguyên ñã bảo tận tình suốt thời gian thực tập phòng Thuỷ sinh học môi trường-Viện công nghệ môi trường-Viện khoa học công nghệ Việt Nam Tôi xin chân thành biết ơn giúp ñỡ to lớn quý báu ñó Tôi xin chân thành cảm ơn TS Dương Thị Thuỷ, KS Hoàng Trung Kiên toàn thể cán phòng Thuỷ sinh học môi trường-Viện công nghệ môi trường-Viện khoa học công nghệ Việt Nam ñã tạo ñiều kiện hướng dẫn suốt trình thực tập Xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo toàn thể cán khoa Công nghệ sinh học- Viện ðại học Mở Hà Nội, ñã truyền ñạt cho kiến thức quý báu suốt thời gian học tập trường Cuối xin chân thành cảm ơn ñộng viên sâu sắc từ gia ñình bạn bè suốt bốn năm qua Hà Nội, tháng năm 2010 Sinh viên Lê Thị Hoài K13-0602 62 Khoa công nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp2010 Lê Thị Hoài CÁC CHỮ VIẾT TẮT VKL Vi khuẩn lam PSP Paralytic Shellfish Poisons – ðộc tố gây liệt DSP Diarrheric Shellfish Poisons – ðộc tố gây tiêu chảy ASP Amnesis Shellfish Poisons - ðộc tố gây quên CFP Ciguatera Fish Poisons – ðộc tố gây ñộc ña hình HPLC High performance Liquid Chromatography – sắc kí lỏng cao áp ELISA Phương pháp hấp thụ miễn dịch enzyme liên kết LC50 Nồng ñộ gây chết 50% ñộng vật P phospho N Nitrogen K13-0602 63 Khoa công nghệ sinh học [...]... mL nc bin cha Artemia salina (10-20 con) v 0.1mL dch chit to, mi nng ủ tin hnh 3 ln lp li Tin hnh thớ nghim vi cỏc nng ủ 40 32 24 16 8 4 1 0 mg to khụ/mL Theo dừi v ủm s Artemia salina cht sau 18h, 20h, 22h, 24h; sau ủú c ủnh ton b s Artemia salina bng vi git foocmon 50%, ủm s con cht Lỳc ny ta s cú tng s Artemia salina trong mi ging, t ủú tớnh ủc t l phn trm cht theo nng ủ dch chit to [5, 21]... hin vi, s dng trc vi vt kớnh v trc vi th kớnh ủ ủo kớch thc trung bỡnh ca t bo to Quan sỏt chi tit v mụ t chỳng bng hỡnh v Sau ủú xỏc ủnh loi bng mt s ti liu chớnh sau: - Phõn loi VKL Vit Nam (1996) [7] - Khu h to cỏc thu vc nc ngt Vit Nam [6] K13-0602 34 Khoa cụng ngh sinh hc Khúa lun tt nghip2010 - Lờ Th Hoi Dn liu khu h to nc ngt min Bc Vit Nam [12] II.3.3 Phng phỏp phõn lp v nuụi cy vi khun lam. .. hay 40mg to khụ/1mL nc bin) ta cú dch chit 1 (dung dch m) Nu cn khụng ho tan hon ton thỡ phi tin hnh ly tõm lm trong T dch chit m ny pha loóng nc bin thnh cỏc dch chit cú nng ủ 32 24 16 - 8 4 1 mg to khụ/mL [12, 21] + p trng Artemia salina Cõn 1mg trng cho vo trong 50mL nc bin, nuụi 250C (cú sc khớ) sau 40-48h trng n thnh con Artemia salina Sc ủu Artemia salina trong l Dựng nc bin pha loóng sao... Mertens: loi ny sinh ủc t nodularins + Oscillatoria: nhng loi thuc chi ny sn sinh ra ủc t Osccillatoxin-a v Derbromoaplysiatoxins Loi sinh ủc t thng gp l: O.nigro-virdis Thwaites, O.agardhii, O.agardhii rubescen, O.acustissima, O.fomosa, O.lemmermanii +Synechococcus: gp ch yu bin c t do chi ny sn sinh ra c ch mnh quỏ trỡnh phõn hu mỏu + Synechocystis: chi VKL ny gp c nc ngt v nc l 14 loi thuc chi ny ủó... nhim mụi trng xung quanh Bng 1: Mi quan h gia vi khun lam v trng thỏi dinh dng ca thu vc Trạng thái dinh dng thuỷ vực Những loài VKL u thế Nghèo dinh dỡng (Oligotrophic) Gloeotrichia echimilata Anabaena lemmermannii Trung dỡng (Mesotrophic) Microcystis aeruginosa Aphanizomeno flos aquae Microcystis aeruginosa Microcystis wesenbergii Phú dỡng (Eutrophication) Microcystis pulvela Aphanizomenon flos-aquae... ủnh lng ủc t VKL ti cỏc vựng cung cp nc sinh hot v dch chit sinh khi to, vi gii hn phỏt hin ln lt 0,2 àg.L-1 v 0,25àg.L-1 cho mu nc v sinh khi [25] I.3.1.4 Cỏc phng phỏp sinh hc I.3.1.4.1 Phng phỏp th sinh hc trờn chut L phng phỏp quen thuc v thụng thng nht ủ nghiờn cu ủc tớnh VKL Trong phng phỏp ny, chut nht trng, cú trng lng khong 20-25g ủc tiờm 0,1-1mL dch chit VKL ủó kh trựng di mng bng Sau ủú,... hc Khúa lun tt nghip2010 Lờ Th Hoi qu thu ủc t nhng phng phỏp ny tng ủng vi kt qu nghiờn cu ủc tớnh VKL s dng phng phỏp th sinh hc trờn chut [21, 25] I.3.2 Vn ủ giỏm sỏt vi khun lam ủc trờn th gii v Vit Nam Hin tng sinh trng bựng phỏt, khú kim soỏt ca vi to ủc bit quan trng l VKL trong t nhiờn l vn ủ thc tin v rt ph bin Hu qu ca vic ny gõy thit hi ln v kinh t v nh hng nghiờm trng ủc th hin mt s khớa... nm nay ủ xỏc ủnh cỏc cht trao ủi cht th cp cú ủc tớnh Hin nay Artemia salina ủc bỏn trờn th trng dng kit th chun Trng ca Artemia cú th bo qu trong nhiu nm 20oC m khụng b mt hot tớnh v d dng n thnh cỏ th trng thnh ủ s dng trong thớ nghim kộo di 20- 30h [21, 25] I.3.1.4.3 Phng phỏp th sinh hc trờn vi khun Hin nay mt phộp th sinh hc trờn vi khun cú kh nng phỏt sỏng l Photobacterium phosphoreum cũn gi... ễng ủó thu mu nc n hoa mu xanh ngoi t nhiờn v phõn lp ủc nhiu loi to lam thuc chi Microcystis v Anabaena Khi trn nhng VKL ny vo thc n cho ủng vt nuụi trong phũng thớ nghim, ụng thy mt s loi ca cỏc chi to lam trờn cú tớnh ủc [9, 16, 24] Vi s gia tng nhanh chúng ca ngun dinh dng (phỳ dng) cỏc thu vc xut phỏt t sc ộp dõn s v ủiu kin sinh hot thỡ hin tng n hoa nc ca VKL ngy cng phỏt trin S ngi mc ung th... gim ủỏng k ch ủ chiu sỏng, cú th xut hin ủc t khi trong nc xut hin cỏc loi VKL ủc vi mt ủ cao, ủng vt thu sinh cht hoc sinh trng chm, Do ủú vic giỏm sỏt v ủa ra nhng bin phỏp nhm hn ch v gim thiu cng nh phũng chỏnh mt cỏch cú hiu qu nh hng ca hin tng n hoa l cn thit v cp bỏch Vỡ vy nhiu bin phỏp qun lý ủó ủc ủ ra v thc hin thnh cụng nhiu nc v l c s cho vic giỏm sỏt v qun lý to ủc Vit Nam hn ch v ... [4] K13-0602 Khoa cụng ngh sinh hc Khúa lun tt nghip2010 Lờ Th Hoi I.1.1.3 S sinh trng v sinh sn ca vi khun lam S sinh trng v sinh sn ca cỏc loi VKL khỏc cng rt khỏc VKL sinh sn theo nhiu hỡnh thc,... Hỡnh 17: ng cong t l cht ca Artemia salina theo thi gian thớ nghim mt s mu phõn lp thuc chi Oscillatoria Vi chng Osp1, t l cht Artemia salina t l thun vi nng ủ dch chit to v khụng cú bin ủng... cỏc vựng cung cp nc sinh hot v dch chit sinh to, vi gii hn phỏt hin ln lt 0,2 àg.L-1 v 0,25àg.L-1 cho mu nc v sinh [25] I.3.1.4 Cỏc phng phỏp sinh hc I.3.1.4.1 Phng phỏp th sinh hc trờn chut L