Đề cương Sinh học phân tử kỹ thuật gene Câu 1: Cho biết đặc điểm về cấu trúc chức của protein? Kích thước và hình dạng: Các protein phân thành hai lớp lớn Protein dạng hình cầu cuộn xoắn chặt dung dịch thường có dạng nhiều giống hạt hình cầu Phần lớn các enzyme tự nhiên có dạng hình cầu Protein dạng hình sợi có tỷ lệ chiều dài/chiều rộng biến động thường protein cấu trúc quan trọng Khối lượng phân tử protein thay đổi từ vài nghìn Da triệu Da Một số protein có chứa phần không mang chất protein Protein có cấu trúc: + Cấu trúc bậc 1: liên kết peptide Nhóm α – carboxyl của acid amin này phản ứng với nhóm α – amino của acid amin kế tiếp tạo thành liên kết peptide Nhiều acid amin liên kết lại bằng liên kết peptide tạo thành chuỗi polypeptide Axit amin đầu chuỗi polypeptit có nhóm α – amino tự do, đầu nhóm α – cacboxyl Vì vậy, chuỗi polypeptit dạng phân tử phân cực, có N đầu C đầu Đôi đầu N bị khống chế, ví dụ nhóm acetyl Trình tự axit amin từ đầu N đến đầu C cấu trúc sơ cấp chuỗi polypeptit Kích thước thông thường chuỗi polypeptit khoảng 100 – 1500 axit amin Tuy nhiên có chuỗi ngắn dài + Cấu trúc bậc 2: tương tác giữa các nguyên tử gần Gồm có xoắn α và gấp nếp β Những vùng có cấu trúc bậc xoắn α thường được tìm thấy ở những protein dạng cầu và ở vài protein dạng sợi Nếp gấp β phẳng được hình thành nhờ các liên kết hydro giữa các nhóm N - H và C = O của liên kết peptide với các nhóm bổ trợ các vùng khác của chuỗi polypeptide + Cấu trúc bậc 3: tương tác giữa các nguyên tử xa Sự kết hợp giữa các xoắn α, gấp nếp β với những cấu trúc bậc cỡ nhỏ khác và những vòng nối cuộn lại thành cấu trúc không gian chiều chính là cấu trúc bậc của chuỗi polypeptide Bản chất cấu trúc bậc ba định sẵn cấu trúc bậc Trong điều kiện định, hầu hết chuỗi polypeptide cuộn xoắn cách tự nhiên thành cấu trúc bậc ba, cấu hình tiêu tốn lượng Tuy nhiên cuộn xoắn thực nhờ protein có tên gọi chaperon, cho acid amin mang chuỗi phụ ưa nước nằm chủ yếu phía ngoài, acid amin kỵ nước nằm phía trong, điều giúp cho cấu trúc ổn định + Cấu trúc bậc 4: sự sắp xếp, kết hợp giữa các tiểu đơn vị Nó cho phép phân tử protein lớn tạo làm cho protein có khả hoạt động chức cao nhờ kết hợp hoạt tính khác vào đơn vị thống Chức protein: + Là enzyme: Ngoài số phân tử ARN có hoạt tính xúc tác tất enzyme protein Các enzyme làm cho tốc độ phản ứng sinh hóa tăng nhiều lần + Là chất tín hiệu: Các protein thụ quan màng tế bào liên kết phối thể (ligand), ví dụ hormon, từ môi trường ngoại bào thay đổi cấu hình để tế bào đáp ứng lại với phối thể Trong gắn kết thường phối thể không bị biến đổi Bản thân số hormon phân tử protein nhỏ, ví dụ isulin hormon sinh trưởng + Vận chuyển dự trữ: Hemoglobin vận chuyển oxy tế bào hồng cầu, transferrin vận chuyển sắt đến gan Một gan, sắt dự trữ dạng gắn với protein ferrintin Các chất béo lưu thông máu nhờ lipoprotein Nhiều phân tử ion khác vận chuyển dự trữ dạng gắn kết với protein Điều giúp tăng cường tính hòa tan giảm tính phản ứng chúng cần sử dụng + Cấu trúc vận động: Collagen protein da, xương mô liên kết, tóc cấu tạo chủ yếu từ keratin Còn có nhiều protein cấu trúc khác bên tế bào, ví dụ khung xương tế bào Acin myosin – protein chủ yếu – tạo nên sợi dễ trượt, sở co + Dinh dưỡng: Casein ovalbumin protein sữa trứng, sử dụng để cung cấp axit amin cho sinh trưởng phát triển thể Các protein hạt cung cấp chất dinh dưỡng cho phôi nảy mầm + Miễn dịch: Các kháng thể nhận biết gắn kết với vi khuẩn, virut chất lạ khác (kháng nguyên) protein + Điều hòa: Các yếu tố phiên mã gắn kết điều chỉnh hoạt động chức DNA Nhiều protein khác làm biến đổi chức phân tử cách gắn kết với chúng Câu 2: Mô tả các bước của sự tái bản DNA sợi kép ở prokaryot (tái bản DNA nửa gián đoạn) Khởi đầu tái bản: Để bắt đầu trình tái bản, enzym DNA gyrase sử dụng ATP làm nguồn lượng để tháo xoắn phân tử DNA Điều cần thiết để phức hợp khởi đầu protein Rep, helicase SSB hoạt động Các bước cần thiết cho khởi đầu tái vị trí khởi đầu (OriC) là: + Protein DnaA bám vào OriC, phá vỡ liên kết hydro cặp bazơ Có khoảng 40 liên kết hydro bị phá vỡ Quá trình đòi hỏi phải cung cấp lượng ATP + Liên kết protein DnaA hỗ trợ cho liên kết DnaB DnaC vị trí OriC Và phức hợp khởi đầu tái tạo thành + Enzym helicase, protein DnaB protein Rep với enzym gyrase SSB bắt đầu tháo xoắn tách sợi đơn DNA Điều cho phép liên kết enzym mồi primase ARN polymerase vào sợi DNA mẹ để tổng hợp sợi dẫn đầu liên kết enzym mồi primase với sợi DNA lại để tổng hợp sợi theo sau Chạc tái bản: hai sợi phân tử DNA chạy song song ngược chiều DNA tổng hợp theo chiều 5’ – 3’ Như tính từ điểm gốc tái OriC sợi DNA mẹ chạy theo chiều 5’ – 3’ sợi chạy theo chiều 3’ – 5’ Sự hình thành primosome: Mỗi protein Rep protein SSB bám vào điểm khởi đầu, liên kết enzym ARN polymerase helicase tạo thành phức hợp mồi gọi primosome Đó phức hợp enzym – protein Trong primosome, ARN mồi sản xuất tạo thành đầu 5’ đoạn Okazaki Tổng hợp sợi dẫn đầu: Bởi sợi dẫn đầu song song ngược chiều với sợi ADN khuôn chiều tổng hợp trùng với hướng phát triển chạc tái nên cần tổng hợp mồi ARN Sau ADN polymerase III chịu trách nhiệm gắn liên tục deoxynribonucleotit vào đuôi 3’ sợi tổng hợp Tổng hợp sợi theo sau: Các bước xảy trình tổng hợp sợi theo sau là: + Đoạn mồi ARN tổng hợp primosome + Sợi theo sau phía sau phức hợp ARN – ADN cuộn vòng lại 1800 vào phức hợp ADN polymerase III, sau kéo dài sợi việc tổng hợp ADN + Tổng hợp ADN tiếp tục ADN polymerase nối khoảng 1000 – 2000 deoxyribonucleotit chạm tới đầu 5’ đoạn Okazaki tổng hợp trước + Ở thời điểm này, DNA polymerase tách khỏi sợi gốc SSB giải phóng + Khi DNA tiếp tục tổng hợp, có nhiều SSB bám vào sợi gốc sau DNA polymerase + Sau SSB bám vào sợi gốc, primosome liên kết với sợi gốc bắt đầu tổng hợp đoạn mồi ARN chu kỳ tổng hợp đoạn Okazaki lặp lại + Sau có nhiều đoạn Okazaki tổng hợp (ít 2) DNA polymerase I có vai trò enzym polymerase kéo dài chuỗi enzym hoạt tính exonuclease cắt 5’ – 3’, bắt đầu đưa thêm deoxyribonucleotit vào chuỗi 3’ đoạn Okazaki, đồng thời tách ribonucleotit đoạn mồi ARN đầu 5’ đoạn Okazaki trước Hai hoạt động enzym (polymerase exonuclease) tiếp tục tất mồi ARN tách bỏ Vào thời điểm đó, cần liên kết phosphodieste nối hai đoạn Okazaki cạnh Các đoạn Okazaki gồm toàn deoxyribinucleotit + Enzym DNA ligase bắt đầu vai trò sử dụng ATP nguồn lượng, tổng hợp cầu nối phophodieste việc liên kết đầu 3’ đoạn Okazaki với đầu 5’ đoạn Okazaki trước qua nhóm 5’ – phosphoryl Những bước lặp lại nhiều lần sợi dẫn đầu sợi theo sau chạc tái tổng hợp hoàn tất Bằng cách đó, trình tổng hợp DNA theo hai chiều kết thúc Câu 3: Gen là gì? Gen cấu trúc và gen điều hòa có đặc điểm gì? So sánh gen cấu trúc ở prokaryot và eukaryote Gen: Là đơn vị di truyền mang thông tin cho một chuỗi polypeptide hoặc phân tử ARN Tùy thuộc vào chức năng, gen xếp vào gen cấu trúc hay gen điều hòa: Gen cấu trúc: mã hóa cho chuỗi polypeptide hay ARN phục vụ cho các hoạt động trao đổi chất thông thường của tế bào Do đó, gen cấu trúc là đoạn ADN hay ARN số virut, mang thông tin mã hóa hoàn toàn cho phân tử ARN vận chuyển (tARN), ARN ribosome (rARN) hoặc polypeptide Gen điều hòa: mã hóa cho nhũng polypeptide để tạo thành các protein có chức điều hòa sự biểu hiện của gen cấu trúc Gen thường nằm ở vùng nhất định nhiễm sắc thể và có quan hệ đến trạng thái sinh lý của thể sống Gen tự nó không tạo nên hay sinh bất cứ cái gì Một tập hợp gen hoàn chỉnh của tế bào sống gọi là bộ gen (gener) hay hệ gen Kích thước gen có thể được xác định bằng bản đồ di truyền và tần số trao đổi chéo Trung bình gen của prokaryot có khoảng 800 – 1500 cặp bazo, còn gen ở người khoảng từ hàng chục ngàn đến hàng trăm ngàn nucleotide So sánh gen cấu trúc prokaryote eukaryote: Prokaryote Eukaryote + Được cấu tạo bởi các đoạn nucleotide + Được cấu tạo bởi các đoạn nucleotide mã không bị ngắt quãng bởi đoạn không hóa (exon) và không mã hóa (intron) Do mã hóa đó gen của eukaryote được gọi là gen phân mảnh (không liên tục) Các intron không có mặt cách ngẫu nhiên dọc gen mà chúng hiện diện ở những vị trí nhất định Trong quá trình tổng họp protein ở Eukaryot, các intron được tách khỏi phân tử mRNA sau mRNA được tổng hợp + Thường được hoạt hóa từng nhóm Được gọi đơn vị phiên mã đa cistron, nghĩa đơn vị phiên mã mang thông tin cho việc tổng hợp hai chuỗi polypeptit Đơn vị phiên mã có sự sắp xếp các đoạn nucleotide sau: đoạn dẫn đầu, đoạn khởi động, đoạn mã hóa, đoạn kết thúc + Đơn vị phiên mã: đơn cistron ARN thông tin chỉ mang thông tin cho chuỗi polypeptide Câu 4: Kỹ thuật gen là gì? Đặc điểm của vectơ tách dòng? Mô tả ngắn gọn số loại vecto tách dòng? Kỹ thuật gen: Là thuật ngữ chỉ tập hợp nhiều kỹ thuật nghiên cứu gen, bộ gen và các thao tác gen, nhằm điều chỉnh và biến đổi gen hoặc tạo các gen mới Đặc điểm của vectơ tách dòng: + Vectơ tách dòng là các phân tử DNA có kích thước nhỏ cho phép gắn các đoạn DNA cần thiết + Có khả tái bản không phụ thuộc vào phân chia tế bào + Tồn tế bào vật chủ qua nhiều hệ, không biến đổi gene tế bào vật chủ + Vectơ tách dòng phải có nhiều điểm cắt đặc hiệu, mang các gen chỉ thị màu hoặc kháng sinh Được sử dụng “phương tiện vận chuyển gen” nhằm tạo số lượng lớn các bản của gen hoặc trình tự DNA các tế bào chủ Một số loại vectơ tách dòng: + Vectơ tách dòng là plasmid: là các phân tử DNA xoắn kép dạng vòng, có kích thước nhỏ, tế bào chất của tế bào vi khuẩn hay tế bào nấm men Có khả tự tái bản độc lập với sự phân chia tế bào + Vectơ tách dòng là phage: Phage bao gồm nhiều loại thực khuẩn thể (ký sinh vật thể) có gen DNA mạch đơn mạch kép Các vectơ tách dòng phage thường được tạo nên từ sự cải tiến bộ gen phage Có ưu điểm so với plasmid là cài đoạn lớn hơn, tạo nhiều bản + Vectơ tách dòng là phagemid: gồm số gen của plasmid (các gen chỉ thị, đoạn ori…) và phần gen của phage (đoạn ori, các gen cần thiết cho sự đóng gói) + Vectơ tách dòng là cosmid: thiết kế từ đoạn của plasmid và đoạn cos của phage Có thể được gắn thêm đoạn đa cắt nối (MCS), đoạn khởi đầu tái bản (ori) + Vectơ tách dòng là các nhiễm sắc thể nhân tạo: loại có đặc điểm đặc trưng riêng, cho phép cài gắn đoạn DNA có kích thước khác + Vectơ tách dòng là Ti plasmid: là plasmid có kích thước lớn tới 200 kb tế bào vi khuẩn Agrobacterium tumefacien Ti plasmid có đoạn T – DNA khoảng 10 – 20 kb mang các gen tổng hợp opin, auxin gây khối u ở thực vật lá mầm + Vectơ tách dòng ở tế bào sinh vật Eukaryot: thường thiết kế từ promoter PCMV, trình tự ori virus SV40, đoạn đa cắt nối (MCS) đoạn gen vi khuẩn E.coli Câu 5: Cho biết các enzyme thường dùng kỹ thuật gen Các kiểu cắt của ezyme giới hạn Các enzyme thường dùng kỹ thuật gen: + Enzyme giới hạn: có khả nhận biết trình tự nucleotid đặc hiệu phân tử DNA (khoảng – nucleotid) + Enzyme xúc tác tổng hợp DNA, RNA: Nhóm enzym xúc tác tổng hợp DNA gọi chung DNA polymerase, xúc tác gắn nucleotid vào chuỗi mạch đơn DNA tổng hợp, điển hình tad DNA polymerase, pfu DNA polymerase,… Enzym phiên mã ngược xúc tác tổng hợp cDNA từ mạch khuôn RNA Enzym xúc tác tổng hợp RNA gồm loại thông dụng T3 RNA polymerase T7 RNA polymerase + Enzyme nối DNA: xúc tác hình thành liên kết phosphoeste + Các loại enzyme phân cắt acid nucleic: cắt phân tử DNA hay RNA, có vai trò quan trọng kỹ thuật tinh DNA, RNA, phản ứng phiên mã ngược tạo cDNA Các kiểu cắt của enzyme giới hạn: Cắt đầu bằng hoặc đầu so le Enzyme giới hạn cắt cả mạch DNA cùng điểm tạo các đoạn cắt có đầu bằng Các đoạn DNA có đoạn cắt bằng đầu bằng không có khả tự dính lại với nhau, để nối các đoạn này cần sử dụng enzyme nối (DNA ligase) Các loại enzyme giới hạn nhận biết và cắt phân tử DNA ở các vị trí khác tạo nên các đoạn cắt có đầu so le (hay đầu dính) Các đoạn DNA có đầu so le có thể tự nối với không cần sự có mặt của enzyme nối DNA ligase Câu 6: Mô tả đặc điểm cấu trúc vectơ biểu hiện gen và các loại promoter thường sử dụng biểu hiện gen? Ưu điểm và hạn chế biểu hiện gen ở E.Coli? Đặc điểm cấu trúc vectơ biểu hiện gen: Vectơ biểu gen cho phép biểu đồng thời gen thị gen tách dòng, tạo nên protein lai Thành phần: promoter mạnh, trình tự chép (Ori), vị trí khởi đầu phiên mã, vị trí bám riboxom, tín hiệu kết thúc dịch mã, trình tự đa cắt nối (MCS) gen thị… Vectơ biểu mạnh có đặc điểm: + Tạo nhiều tế bào chủ + Dịch mã tạo nhiều protein lai + Đoạn MCS có nhiều vị trí cắt đặc hiệu + Hoạt động vectơ không ảnh hưởng gây ức chế tế bào chủ Các loại promoter thường sử dụng vectơ biểu gen: + Các loại vectơ biểu gen tế bào prokaryote thường sử dụng promoter mạnh thực khuẩn thể (T7 promoter, T3 promoter,…) số promoter mạnh vi khuẩn (lac promoter, Trp promoter,…) loại vectơ thích hợp với nhiều loại RNA polymerase + Trong tế bào eukaryote thường sử dụng vectơ biểu gen có promoter mạnh virus CMV (cytomegavirus), SV40,… promoter mạnh nấm men PGK promoter, GAL, AOX I promoter Ưu điểm hạn chế biểu gen E.coli : Ưu điểm: + Tốc độ sinh trưởng nhanh + Khả biểu promoter mạnh + Khả tạo sản phẩm gen cao, từ 50mg/lít đến 500mg/lít + Giảm chi phí cho công nghệ hóa chất, nên giá thành sản phẩm hạ + Cấu trúc đặc điểm di truyền biết tương đối đầy đủ Hạn chế: + Khó khăn cho protein có kích thước lớn 50 kD, protein giàu cyterin protein có nhiều liên kết disunfur S- S + Protein không biến đổi sau dịch mã trình glycosyl hóa + Có thể gây bệnh tạo độc tố + Tiết protein ngoại bào tương đối thấp Câu 7: Nguyên lý chung của phương pháp PCR Các yếu tố nào cần chú ý phương pháp PCR Nguyên lý chung của phương pháp PCR: PCR là một chuỗi phản ứng liên tục, gồm nhiều chu kỳ (cycle) kế tiếp nhau, mỗi chu kỳ gồm giai đoạn: + Giai đoạn biến tính (Denaturation): ở nhiệt độ cao 94 – 95oC, làm đứt mạch liên kết hydro gen, hai sợi DNA tách rời nhau, kéo dài đến phút + Giai đoạn gắn mồi (Annealing): ở nhiệt độ cao khoảng 55 – 65oC, mồi bắt cặp với các mạch đơn DNA khuôn ở các đầu 3’, thời gian khoảng 30 – 60 giây + Giai đoạn tổng hợp (Elongation): nhiệt độ khoảng 70 – 72oC thích hợp cho hoạt động của enzyme DNA polymerase DNA polymerase xúc tác gắn nucleotid vào cuối đoạn mồi, thời gian giai đoạn này khoảng 30 giây đến vài chục phút Thời gian phút tổng hợp được những đoạn DNA kích thước dưới kb + Phản ứng PCR gồm nhiều chu kỳ, sản phẩm tạo làm khuôn cho phản ứng tiếp theo, 20 – 40 chu kỳ Như vậy, mỗi đoạn DNA khuôn có thể tạo nên 220 – 240 bản DNA Các yếu tố cần chú ý phương pháp PCR: + DNA khuôn (DNA template): sạch Nhỏ 3kb cho kết quả tốt Có thể khuếch đại từ mẫu máu, tóc, xương + Các nucletid tự (dNTP): gồm dATP, dTTP, dGTP và dTCP Chú ý đến tỷ lệ G – C đoạn khuôn Nồng độ dNTP khoảng 50 – 200 μm + Mồi (primer): đoạn oligonucleotid ngắn khoảng 14 – 35 nucleotid, gồm mồi xuôi F (Forward) và mồi ngược R (Revert) Mồi xuôi có trình tự tương đồng mạch DNA không mang mã Mồi ngược có trình tự tương đồng mạch DNA mang mã di truyền Điều kiện đảm bảo mồi: mồi không quá ngắn (nhỏ nucleotid) hoặc quá dài (lớn 50 nucleotid) Trình tự mồi có tính đặc hiệu cao, chỉ bắt cặp đầu 3’ Nhiệt độ nóng chảy (Tm) của các mồi không chênh lệch + Enzyme DNA Polymerasa: Tag DNA Polymerasa được sử dụng phổ biến phòng thí nghiệm, có hoạt tính cao ở 75 – 80oC, tốc độ tổng hợp mạch đơn DNA rất cao (trung bình 130 – 300 nucleotid/1giây) Pfu DNA Polymerasa có hoạt tính ở nhiệt độ 72 – 78oC, tốc độ xúc tác tổng hợp mạch đơn DNA chậm, khoảng 12/1 giây, tỷ lệ sai sót giảm nhiều lần so với Tag + Dung dịch đệm cho PCR: ion Mg2+ ảnh hưởng đến khả bắt cặp và gắn các mồi vào khuôn + Thiết bị thực hiện phản ứng PCR: có thể thực hiện phản ứng với bể ổn nhiệt, bộ đếm giờ với dụng cụ thông dụng Các hãng sản xuất khác ngày càng đưa các loại máy PCR thế hệ mới, có nhiều đặc điểm tiện lợi, cho kết quả cao, tốn ít thời gian thực hiện phản ứng Câu 8: Cho biết cấu trúc gen mã hóa insulin ở người và công nghệ sản xuất insulin tái tổ hợp Cấu trúc gen mã hóa insulin ở người: Gen mã hóa insulin nằm ở nhiễm sắc thể số 11, cánh ngắn (11p) Vùng không mang mã di truyền chia làm cụm gen, ký hiệu class I, class II và class III Vùng mã hóa có kích thước 1430kb Trong vùng mã có intron Đoạn gen mã hóa chuỗi peptid cấu trúc phân tử insulin: chuỗi peptid tín hiệu, chuỗi peptid B, chuỗi peptid C chuỗi peptid A Công nghệ sản xuất insulin tái tổ hợp: Nguyên lý chung gồm: + Tách chiết và tinh sạch RNA thông tin mã hóa preproinsulin + Thực hiện kỹ thuật phiên mã ngược + Sử dụng enzyme giới hạn cắt bỏ đoạn gen mã hóa chuỗi peptid C, tách dòng riêng từng đoạn gen mã hóa chuỗi A và chuỗi B + Tạo vectơ biểu hiện gen đoạn A và gen B + Biến nạp riêng mỗi loại vectơ E.coli + Thực hiện quá trình lên men thu protein chuỗi A – lacZ và chuỗi B – lacZ + Thu riêng từng loại protein lai và thực hiệc các phản ứng cắt với cyanua bromide (CNBr) giữa acid amin cuối cùng của insulin và acid amin của β – Galactosidase + Tách và tinh sạch riêng biệt các chuỗi A và B, sau đó tạo hỗn hợp chuỗi A với B hình thành cầu nối disunfit và thu insulin thành phẩm Câu 9: Vaccin tái tổ hợp vaccin DNA gì? Kỹ thuật sản xuất vaccin tái tổ hợp phòng chống bệnh viêm gan? Vaccin tái tổ hợp là: Các loại vaccin sản xuất kỹ thuật gen, nhờ tạo sản phẩm protein kháng nguyên tái tổ hợp tế bào chủ Vaccin tái tổ hợp điển hình vaccin phòng chống bệnh viêm gan (B, A, C,…), vaccin phòng chống HIV bệnh sốt xuất huyết, sốt rét, cúm gà,… Nó có ưu điểm như: giá thành rẻ, sử dụng rộng rãi phòng chống nhiều loại bệnh nhiễm vi khuẩn, kí sinh trùng, virus,… Vaccin DNA là: Tập hợp gen mã hóa kháng thể đặc hiệu thường gắn vào vectơ biểu mạnh, đưa vào tế bào gen dịch mã tạo kháng thể đặc hiệu, giúp tế bào chống lại xâm nhiễm tác nhân gây bệnh Loại vaccin có hiệu cao phòng chống nhiều bệnh hiểm nghèo (ung thư, HIV,…) Vaccin DNA gồm hai loại chủ yếu vaccin tập hợp gen kháng nguyên vaccin tập hợp gen sinh kháng thể trực tiếp Nó có nhiều ưu điểm như: dễ dàng thiết kế sản xuất, bảo quản lâu, vận chuyển sử dụng đơn giản, tiện lợi,… Kỹ thuật sản xuất vaccin tái tổ hợp phòng chống bệnh viêm gan: + Kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B (HBV) sản xuất nấm men S cerevisiae từ năm 1981 Sử dụng 1986 + Một số sản phẩm vaccin phòng chống HBV: Recombivax IIB, Engerx – B, Genhevac B…được sản xuất tế bào nấm men vi khuẩn HBV vaccin sử dụng gen mã hóa protein vỏ Protein kháng nguyên HBsAg có khả tạo kháng thể miễn dịch mạnh + Người ta thực kỹ thuật tách dòng gen mã hóa protein vỏ virus HBV, thực tổng hợp protein tái tổ hợp biểu tế bào chủ (nấm men, vi khuẩn,…) làm sở sản xuất vaccin tái tổ hợp + Gen mã hóa protein vỏ gồm gen: Pre-S1mã hóa chuỗi peptid gồm 128 a.a, Pre-S2 mã peptid có 55 a.a gen S mã hóa chuỗi peptid có 226 a.a + Người ta tách riêng phức hợp gen S với gen Pre – S1 phức hợp gen S với gen Pre – S2 để tạo nên vectơ tái tổ hợp khác Biểu loại vectơ tái tổ hợp khác thu loại protein tái tổ hợp khác nhau, tạo nên loại vaccin có hiệu khác + Việt nam nước có mức nhiễm HBV cộng đồng dân cư mức cao: viêm gan cấp tính HBV khoảng 37 – 49%, xơ gan có HBV 47 – 87%, ung thư gan có HBV 57 – 80% + Gần loại vaccine viêm gan B tạo nên từ biểu gen kháng nguyên : S, Pre – S1 gen Pre – S2 HBV tế bào trứng chuột đất vàng Trung Quốc Câu 10: Công nghệ tạo giống lúa vàng được thực hiện thế nào? Theo Anh (Chị) chúng ta cần làm gì để thực hiện an toàn sinh vật biến đổi gen Lúa vàng công bố vào năm 2000 Lúa vàng giàu vitamin A sản phẩm kỹ thuật gene Các nhà khoa học chuyển gene mã hoá enzyme phytoene synthase (psy) từ hoa Thuỷ Tiên vàng (Daffodil) enzyme phytoene desaturase (CrtI) từ vi khuẩn đất (Erwinia uredovora) vào hệ gene lúa Các enzyme giúp trình chuyển hoá GGPP (geranylgeranyl diphosphate) gạo trắng thành beta-Carotene gạo vàng Cũng nhờ enzyme giúp cho trình tích tụ beta-carotene hạt, giống lúa bình thường trình tích tụ beta-carotene diễn Màu vàng gạo chứa nhiều beta-Carotene Sơ đồ công nghệ tạo giống lúa vàng: + Bước 1: Tách chiết các gen mã hóa sự tạo thành β – caroten từ Thủy tiên hoa vàng (daffodil) và từ khuẩn Enwinia uredorova + Bước 2: Tạo vectơ tái tổ hợp với các plasmid thích hợp và biến nạp vào vi khuẩn Agrobacterium tumefacien + Bước 3: Chuyển vectơ tái tổ hợp mang các gen mã hóa β – caroten vào các tế bào phôi lúa + Bước 4: Sàng lọc các tế bào phôi được chuyển gen, nuôi cấy mô để tạo dòng lúa có khả tạo β – caroten hạt gạo Sau đó thực hiện lai chéo dòng lúa nuôi cấy mô có hàm lượng β – caroten cao được tạo với các giống lúa địa phương nhằm tạo giống lúa lai có khả tạo β – caroten cao Tiếp tục cho lai giống để đảm bảo tính ổn định di truyền của các giống lúa có hàm lượng β – carotene cao Thực hiện an toàn sinh vật biến đổi gen: Sinh vật biến đổi gen: + Gây nhiều tranh cãi + Tổ chức y tế thế giới (WHO) khẳng định chuyển gen và động vật chuyển gen không tác hại đến sức khỏe người + Vấn đề nhân bản người nên hay không nên? Mục đích nhân người? vấn đề tiếp tục tranh luận + Ở Việt Nam hành lang pháp lý về an toàn sinh học còn chưa cụ thể Để an toàn sinh vật biến đổi gen, nên thực công việc sau: + Tổ chức nghiên cứu triển khai ảnh hưởng trực tiếp gián tiếp sinh vật biến đổi gen + Các mặt hàng nhập có nguồn gốc sinh vật biến đổi gen phải ghi rõ nhãn mát + Cần có quan quản lý có uy tính, chất lượng Không để thất thoát sinh vật biến đổi gen môi trường chưa biết hết ảnh hưởng + Trong sản xuất nông nghiệp, sinh vật biến đổi gen cần có quy trình sản xuất khép kín, phấn hoa thân cần có chế độ xử lý an toàn, thiêu hủy xác sau mùa thu hoạch + Xây dựng phòng thí nghiệm nghiên cứu phải đảm bảo theo tiêu chuẩn tốt hành + Thực an toàn xuyên quốc gia, không nhập xuất sinh vật có nguồn gốc sinh vật biến đổi gen chưa nghiên cứu rõ ràng + Cần có rào cảng pháp lý an toàn cho người sinh vật trái đất ... đổi gen Lúa vàng công bố vào năm 2000 Lúa vàng giàu vitamin A sản phẩm kỹ thuật gene Các nhà khoa học chuyển gene mã hoá enzyme phytoene synthase (psy) từ hoa Thuỷ Tiên vàng (Daffodil) enzyme phytoene... xúc tác hình thành liên kết phosphoeste + Các loại enzyme phân cắt acid nucleic: cắt phân tử DNA hay RNA, có vai trò quan trọng kỹ thuật tinh DNA, RNA, phản ứng phiên mã ngược tạo cDNA Các... Câu 9: Vaccin tái tổ hợp vaccin DNA gì? Kỹ thuật sản xuất vaccin tái tổ hợp phòng chống bệnh viêm gan? Vaccin tái tổ hợp là: Các loại vaccin sản xuất kỹ thuật gen, nhờ tạo sản phẩm protein kháng