1 LỜI CAM ĐOAN Thực tập tốt nghiệp thời gian để người sinh viên có điều kiện rèn luyện tính tự lực, độc lập suy nghĩ, bổ sung kiến thức mẻ từ thực tiễn, nâng cao trình độ lý luận chuyên môn Tiếp tục rèn luyện đạo đức tác phong, quan điểm phục vụ người cán khoa học kỹ thuật Để hoàn thành luận văn xin cam đoan: Trong trình nghiên cứu, thân nhiệt tình với công việc Số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực Kết nghiên cứu thân có nhờ giúp đỡ tận tình thầy hướng dẫn PGS.TS Trần Ngọc Lân Mọi giúp đỡ cho việc thực khóa luận cảm ơn thông tin trich dẫn khóa luận rõ nguồn gốc Nghi Lộc, ngày tháng năm2011 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Kim LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc tới PGS TS Trần Ngọc Lân – Trưởng khoa Nông Lâm Ngư, Trường Đại học Vinh, đã tận tình hướng dẫn và dìu dắt quá trình hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo Khoa Nông Lâm Ngư – Trường Đại học Vinh đã giảng dạy và giúp đỡ suốt trình học tập thực hiện luận văn Tôi xin bày tỏ biết ơn tới toàn thể cán bộ, giảng viên, kỹ thuật viên Phòng Thí nghiệm tổ Bảo Vệ Thực Vật - Khoa Nông Lâm – Đại học Vinh đặc biệt là KS Hồ Thị Nhung giúp đỡ và chỉ bảo rất tận tình suốt thời gian thực hiện luận văn Cuối cùng, xin gửi tới gia đình, bạn bè đồng nghiệp lòng biết ơn sâu sắc vì sự quan tâm, động viên và góp ý cho suốt quá trình học tập và hoàn thành luận văn Sinh viên Nguyễn Thị Kim MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Cây Lạc (Arachis hypogaea L) công nghiệp ngắn ngày có giá trị kinh tế cao dùng làm thực phẩm xuất Hạt lạc chứa nhiều prôtêin, lipit, nhiều loại vitamin loại axit amin không thay Cây lạc trồng có khả thích ứng rộng với điều kiện đất đai có khả cố định đạm Do lạc loại trồng luân canh cải tạo đất tốt Trong năm qua trồng lạc cho hiệu kinh tế cao cho thu nhập ổn định Do lạc nhiều địa phương khuyến khích phát triển Theo Tổng cục thống kê (2004), tổng diện tích lạc nước đạt 258,7 nghìn ha, suất trung bình 17,4 tạ/ha, tổng sản lượng đạt 451,1 nghìn Dự kiến giai đoạn 2005 - 2010 đưa diện tích trồng lạc lên 330 nghìn ha, sản lượng đạt 550-560 nghìn Nghệ An coi vùng trồng lạc có truyền thống lâu đời Hiện nay, Nghệ An địa phương có diện tích gieo trồng lạc lớn nước (24,1 nghìn sản lượng 48,5 nghìn tấn) chủ yếu tập trung số huyện ven biển Nghi Lộc (4300 ha), Diễn Châu (3800 ha), chủ yếu sản xuất vụ xuân Theo ủy ban nhân dân tỉnh Nghệ An, thời gian tới tiếp tục đầu tư thâm canh, mở rộng sản xuất lạc để đến năm 2010 đưa diện tích gieo trồng lạc tỉnh lên đến 35 nghìn ha, suất bình quân đạt 20 tạ/ha Tuy nhiên, hạt lạc nơi tiềm ẩn nhiều loài nấm gây bệnh, đặc biệt loài nấm có nguồn gốc đất truyền qua hạt giống Aspergillus sp., Sclerotium rolfsii, Pennicilium, Fusarium v.v… chúng gây thiệt hại suất, làm chết đồng ruộng nguyên nhân gây bệnh nguy hiểm cho người vật nuôi Nhóm nấm sinh độc tố phổ biến Aspergillus (A flavus, A parasiticus A nomius) sản sinh Aflatoxin, độc tố nguy hiểm nhóm độc tố mycotoxin hợp chất có tiềm gây ung thư cao Trong năm gần đây, gia tăng diện tích trồng việc áp dụng biện pháp kỹ thuật thâm canh làm phát sinh ngày nhiều dịch hại nguy hiểm, đặc biệt nhóm nấm gây bệnh héo rũ gây Nhóm nấm phát sinh gây hại chu kỳ sống đồng ruộng kho bảo quản, ảnh hưởng đến chất lượng hạt giống Đây nguyên nhân dẫn đến giảm sút suất phẩm chất lạc nhân, ảnh hưởng đến sức khoẻ người Chính vậy, việc trọng đến công tác bảo vệ thực vật đồng ruộng kho bảo quản yếu tố quan trọng để nâng cao suất chất lượng lạc trước sau thu hoạch Một tồn lớn sản xuất nông nghiệp quan tâm việc sử dụng nhiều thuốc bảo vệ thực vật có nguồn gốc hóa học Tình trạng tiếp diễn ngược lại mục tiêu xây dựng nông nghiệp bền vững an toàn mà nỗ lực tiến tới Thực tế sản xuất cho thấy, người dân lạm dụng việc sử dụng thuốc hoá học để phòng trừ sâu bệnh sản xuất nông nghiệp ngày làm bộc lộ mặt trái Dư lượng thuốc bảo vệ thực vật làm ảnh hưởng xấu đến môi trường, ảnh hưởng tới sức khoẻ người gây thiệt hại kinh tế sản xuất nông nghiệp Một số thuốc trừ nấm dùng nhiều gây huỷ diệt côn trùng đất, tạo nên tính kháng thuốc số nấm bệnh hại trồng Mặt khác, đòi hỏi nông sản dư lượng thuốc hoá học thị trường ngày tăng Bởi vậy, xu hướng bảo vệ thực vật quản lý dịch hại tổng hợp IPM phòng trừ sinh học Hiện nay, nhiều nước giới nghiên cứu ứng dụng biện pháp sinh học để phòng chống dịch hại, có chế phẩm sinh học để trừ bệnh hại trồng Song, có chế phẩm nghiên cứu ứng dụng thành công Hầu hết việc sử dụng chế phẩm sinh học phòng trừ bệnh nhiều hạn chế, chưa nhiều nông dân chấp nhận, kể phòng trừ bệnh đồng ruộng việc xử lý hạt giống trước gieo trồng Xuất phát từ vấn đề nêu trên, để góp phần vào việc phòng trừ bệnh hại hạt lạc an toàn, hiệu quả, đồng thời giảm tác hại bệnh mốc vàng đồng ruộng, nâng cao suất phẩm chất lạc, tiến hành nghiên cứu đề tài: "Khả đối kháng Trichoderma harzianum Tri.011.NL, Trichoderma atroviride Tri.020.NC nấm mốc hại lạc Aspergillus flavus" 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích - Xác định thành phần mức độ nhiễm bệnh nấm gây hại hạt giống lạc thu thập vùng Nghi Lộc - Nghệ An - Xác định thành phần mức độ nhiễm bệnh lạc vụ xuân 2011, đánh giá thành phần mầm bệnh đất trồng lạc vùng Nghi Lộc phụ cận - Khảo sát hiệu phòng trừ Trichoderma A flavus hại lạc điều kiện phòng thí nghiệm chậu vại 1.2.2 Yêu cầu - Giám định thành phần nấm gây bệnh gây hại mẫu hạt giống lạc thu thập vùng Nghi Lộc - Nghệ An - Điều tra tình hình bệnh hại lạc huyện Nghi Lộc vùng phụ cận vụ xuân 2011 - Điều tra thành phần mầm bệnh, đánh giá diễn biến lượng mầm bệnh A flavus đất trồng lạc vùng Nghi Lộc - Tìm hiểu khả phòng trừ A flavus biện pháp sinh học sử dụng Trichoderma điều kiện phòng thí nghiệm chậu vại CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu nước Trong nguyên nhân làm giảm suất lạc bệnh hại nguyên nhân Bệnh hại lạc lượng lớn loại nấm, vi khuẩn, Phytoplasma, 20 loại virút khoảng 100 loài tuyến trùng, bị nhiễm bệnh nhóm nấm vi khuẩn gây hại đáng kể Theo Allen and Lenne,1998 có khoảng 40 loại bệnh hại lạc đáng ý đóng vai trò quan trọng giới chia làm nhóm: - Nhóm bênh héo rũ gây chết - Nhóm bênh hại hạt mầm - Nhóm bệnh gây thối than rễ - Nhóm gây bệnh - Nhóm bệnh gây thối củ 1.1.1 Nhóm bệnh héo rũ gây chết Bệnh héo rũ gây chết nhiều nguyên nhân, bị nhiễm bệnh phần lớn héo chết, sống sót khả cho suất suất giảm, chất lượng Đã có nhiều nghiên cứu nước nhóm bệnh này, loại nấm gây hại 1.1.1.1.Bệnh héo rũ gốc mốc đen lạc nấm Aspegillus niger Hiện bệnh mốc đen hại lạc xem bệnh hại nguy hiểm cho vùng trồng lạc người sử dụng, thiệt hại ước tính từ 1-50% suất (KoKalis – Burelle,1997) [39] Nấm Aspegillus niger gây tượng thối hạt, lạc chết mầm chết héo vòng 30 ngày sau trồng Trên vết bệnh, sợi nấm cành bào tử phân sinh thường quan sát thấy vùng cổ rễ xuất nhanh sau hạt nẩy mầm Aspegillus niger tồn đất, hạt giống với tỷ lệ hạt bị nhiễm bệnh lên tới 90% Nấm bệnh truyền qua đất có khả phát triển mạnh điều kiện biến động lớn độ ẩm đất, chất lượng hạt giống Bệnh thối gốc mốc đen nấm A niger đến bệnh quan trọng công nhận hầu hết vùng trồng lạc giới Thiệt hại suất sản lượng bệnh héo rũ gốc mốc đen thay đổi khó đánh giá, thiệt hại sản lượng cá biệt lên tới 50% thường dao động mức 1% [34] Thiệt hại suất lạc ghi nhận cụ thể Malawi, Senegal, Sudan v.v Ở Ấn Độ, bệnh héo rũ gốc mốc đen nhân tố quan trọng gây nên suất thấp với tỷ lệ nhiễm khoảng từ – 10% Nếu nhiễm khoảng 50 ngày sau gieo gây thiệt hại nghiêm trọng gây chết tới 40% số Ở Mỹ, bệnh héo rũ gốc mốc đen ngày trở nên quan trọng từ đầu năm 1970 việc xử lý hạt thuốc có chứa thuỷ ngân bị cấm trở thành vấn để Florida đầu năm 1980 [43] Theo Allen Lenne (1998), bệnh héo rũ gốc mốc đen phát lần Sumatra vào năm 1926, mẫu bệnh gây biến dạng mầm củ biến màu vỏ lạc, hạt lạc loại nấm tìm thấy từ năm 1920 Theo Kokalis - Burelle (1997) [39], Châu Á, bệnh công nhận Andhara Pradesh năm 1980 Nấm A niger gây tượng thối hạt, chết mầm chết héo vòng 30 ngày sau trồng Trên vết bệnh, sợi nấm cành bào tử phân sinh thường quan sát thấy vùng cổ rễ xuất nhanh sau hạt nảy mầm Sợi nấm xâm nhập trực tiếp vào cổ rễ, đoạn thân ngầm sát mặt đất làm cho biểu bì, vỏ thân bị nứt rạn, thâm đen, thối mục, làm cho bị héo rũ, chết khô A niger tồn đất, hạt giống với tỷ lệ hạt bị nhiễm bệnh lên tới 90% Nấm bệnh truyền qua đất có khả phát triển mạnh điều kiện biến động lớn độ ẩm đất, chất lượng hạt giống tỷ lệ sát thương cao Độc tố nấm sản sinh gây ảnh hưởng đến sinh trưởng rễ quăn xoắn, biến dạng ngọn, chí axit béo tự hạt chứa độc tố [36] 1.1.1.2 Bệnh héo rũ gốc mốc trắng (Sclerotium rolfsii) S rolfsii gây hại phổ biến vùng trồng lạc giới Thiệt hại suất bệnh gây ước tính khoảng 25 - 80% Ở vùng Georgia Mỹ, tổn thất bệnh gây ước tính 43 triệu USD/năm (KoKalis-Burelle, 1997) [39] Nấm Sclerotium rolfsii nấm đa thực, có phổ ký chủ rộng, chúng có khả lây nhiễm 500 ký chủ thuộc nhóm mầm hai mầm, đặc biệt thuộc họ đậu đỗ, bầu bí số rau trồng luân canh với họ đậu Chúng có khả xâm nhiễm trực tiếp qua biểu bì qua vết thương giới Sclerotium rolfsii có sợi nấm màu trắng phát triển mạnh vết bệnh, từ sợi nấm hình thành nên hạch nấm Hạch nấm lúc đầu có màu trắng, sau chuyển thành màu nâu, hình tròn đường kính 1-2 mm (Purseglove, 1968) [40] Hạch nấm tồn từ năm sang năm khác tầng đất mặt (Aycook, 1974) Nấm sử dụng chất hữu làm dinh dưỡng, sản sinh axit oxalic enzyme phân huỷ mô ký chủ Nấm thuộc loại háo khí ưa ẩm nhiệt độ cao 300C (McCarter, 1993) Nấm sản sinh lượng lớn axit oxalic gây biến mầu hạt lạc gây điểm chết hoại giai đoạn đầu bệnh phát triển Bệnh phát triển thuận lợi điều kiện nhiệt độ 25-300 C ẩm độ cao Bệnh lan truyền qua đất, qua hạt giống Sự phát sinh, phát triển bệnh phụ thuộc vào nhiều yếu tố Sự tác động qua lại chất khoáng, độ pH đất kỹ thuật trồng trọt có ảnh hưởng đến phát sinh phát triển bệnh [45] 1.1.1.3 Bệnh héo vàng nấm Fusarium spp Đã có nhiều công trình nghiên cứu nấm Fusarium spp công bố có ý nghĩa lớn phát triển khoa học kỹ thuật Nấm Fusarium spp có mặt khắp vùng trồng lạc giới Có 17 loài nấm Fusarium phân lập từ đất trồng lạc, số 17 loại nấm có loài gây bệnh cho lạc (KoKalis – Bureller, 1997) [39] Cây bị bệnh bị ức chế sinh trưởng, chóp rễ bị hoá nâu, dẫn đến bị thối khô F solani Trên thân lạc, nấm Fusarium sp xâm nhiễm làm cho non, rễ trụ mầm bị biến mầu xám, mọng nước Khi trưởng thành F oxysporum gây tượng thối rễ làm cho héo từ từ héo rũ, chuyến sang màu vàng xanh xám, bị rụng trước chết, bó mạch rễ bị thâm nâu (Kokalis et al., 1997) [39] Ở Libya, nấm F solani nấm F scirpi xác định nguyên nhân gây thối Nấm Fusarium sp gây triệu chứng thối quả, làm cho vỏ xù xì, xấu xí, làm màu vỏ Tản nấm Fusarium sp có màu trắng kem, sợi nấm đa bào mảnh xốp, hình thành nhiều bào tử phân sinh có mặt giọt nước Biện pháp phòng trừ bệnh héo vàng nấm Fusarium sp chủ yếu làm ải luân canh trồng cho hiệu cao [48] 1.1.1.4 Bệnh lở cổ rễ (Rhizoctonia solani Kuhn) Trong năm gần đây, bệnh nấm Rhizoctonia solani gây tương đối nguy hiểm vùng trồng lạc giới Ở miền Nam nước Mỹ, lở cổ rễ lạc trở thành vấn đề cấp bách Hàng năm Geogia (Mỹ) thiệt hại bệnh gây ước tính khoảng tỷ USD Rhizoctonia solani sản sinh lượng lớn enzyme cellulilitic, pectinolitic độc tố thực vật Đây nguyên nhân gây bệnh thối hạt làm chết con, thối mầm, thối rễ, thối tia củ gây cháy lạc nấm xâm nhập vào Nấm Rhizoctonia solani với Fusarium sp gây bệnh chết vàng lạc, làm cho héo vàng từ từ, phần gốc thân biến mầu nâu làm cho lớp vỏ thân bị nứt Rhizoctonia solani loài nấm đất, sản sinh nhiều hạch nấm mô kí chủ, chúng tồn đất nẩy mầm kích thích dịch rỉ từ chủ bị bệnh việc bổ sung chất hữu vào đất Ngoài truyền bệnh qua đất tàn dư trồng, R solani có khả truyền qua hạt giống Theo nghiên cứu Scotland, R solani có khả truyền 10 qua hạt giống lạc với tỷ lệ 11%, Mỹ tỷ lệ lên tới 30% (Kokalis N et al., 1997) [39] 1.1.2 Nghiên cứu thành phần bệnh Trong nhóm bệnh phổ biến bệnh đốm đen, đốm nâu gỉ sắt, v.v gây hại phổ biến khắp vùng trồng lạc giới Khi nhiễm nhẹ ảnh hưởng đến suất, nhiên số nơi bệnh nặng thiệt hại suất lên tới 50% 1.1.2.1 Bệnh đốm nâu (Cercospora arachidicola Hori) Bệnh đốm nâu hay gọi bệnh đốm sớm, chủ yếu gây hại lá, bệnh nặng lan xuống cuống lá, cành thân Vết bệnh có dạng gần tròn, đường kính 1- 10mm, có màu nâu tối, xung quanh vết bệnh có quầng vàng, bề mặt lá, nơi bào tử sinh nhiều thường có màu nâu sáng [45] Giai đoạn sinh sản vô tính nấm Cercospora arachidicola có cành bào tử phân sinh đâm thẳng, đa bào có 4-14 vách ngăn ngang, không màu Giai đoạn sinh sản hữu tính có tên Mycospharella arachidis Deighton tạo thể bầu mầu đen Nguồn bệnh tồn chủ yếu tàn dư bệnh, nằm đất, bào tử túi, bào tử hậu sợi nấm nguồn xâm nhiễm Trong trình xâm nhiễm gây hại, nấm C.arachidicola sản sinh độc tố Cercosporin ức chế hoạt động gây tượng rụng sớm Bào tử phân sinh lan truyền nhờ gió, mưa Nhiệt độ nấm hình thành bào tử 25-31 oC[48] 1.1.2.2 Bệnh đốm đen (Cercospora personata Berk & Curtis) Bệnh xuất muộn tương đối giống với triệu chứng bệnh đốm nâu nên gọi bệnh đốm muộn Bệnh phổ biến tất vùng trồng lạc giới, có mức nguy hiểm với bệnh đốm nâu, suất thất thu thường lên tới 50% [36] Năm 1985, Ellis Everhad kiểm tra mẫu bệnh Alabama Nam Carolina có kết luận nấm bệnh thuộc loại Cercospora sp đặt tên 68 CT6 CV% 5503,67 1,5 5357,67 1,3 LSD0,05 268,884 218,551 Ghi chú: Các giá trị cột mang chữ giống không khác ý nghĩa mức α = 0,05 Hình 4.5 Xác định khả hạn chế số lượng mầm bệnh A flavus đất trồng lạc chủng Trichoderma harzianum (Tri.011.NL) Trichoderma atroviride (Tri.020.NC) điều kiện chậu vại mức nồng độ khác • CT1: Công thức đối chứng, không nhiễm Trichoderma, nhiễm A.flavus nồng độ 106 thời gian với công thức khác • CT2: Tưới dung dịch Trichoderma nồng độ 105 vào đất trồng lạc, tuần sau nhiễm tiếp dung dịch A.flavus nồng độ 106 • CT3: Tưới dung dịch Trichoderma nồng độ 106 vào đất trồng lạc, tuần sau nhiễm tiếp dung dịch A.flavus nồng độ 106 • CT4: Tưới dung dịch Trichoderma nồng độ 107 vào đất trồng lạc, tuần sau nhiễm tiếp dung dịch A.flavus nồng độ 106 69 • CT5: Tưới dung dịch Trichoderma nồng độ 108 vào đất trồng lạc, tuần sau nhiễm tiếp dung dịch A.flavus nồng độ 106 • CT6: Tưới dung dịch Trichoderma nồng độ 109 vào đất trồng lạc, tuần sau nhiễm tiếp dung dịch A.flavus nồng độ 106 Qua bảng 4.12 hình 4.5 cho thấy khả hạn chế số lượng mầm bệnh A flavus đất trồng lạc chủng Tri.011.NL Tri.020.NC rõ rệt Số lượng mầm bệnh công thức thấp nhiều so với công thức đối chứng Điều cho thấy rõ khả phòng trừ A flavus Trichoderma Giữa công thức chủng Trichoderma số lượng mầm bệnh có sai khác mức ý nghĩa 0,05 Giữa chủng Trichoderma khác khả hạn chế số lượng mầm bệnh A flavus khác sử dụng nồng độ để phòng trừ Tuy nhiên hai chủng thể hện rõ sử dụng nồng độ phòng trừ tăng khả hạn chể số lượng mầm bệnh A flavus lớn Đối với chủng Tri 020.NC CT2 CT3 sai khác mức ý nghĩa 0,05 CT6 có khả hạn chế số lượng mầm bệnh lớn Đối với chủng Tr 011NL công thức có sai khác CT6 có khả hạn chế số lượng mầm bệnh lớn Từ bảng 4.12, hình 4.5 phân tích thấy CT6 có hiệu phòng trừ cao chủng Trichoderma Nồng độ Trichoderma lớn hiệu lực phòng trừ cao Giữa chủng Tri.011.NL Tri.020.NC chủng Tri.011.NL có khả hạn chế mầm bệnh A flavus chậu vại cao Điều có tầm quan trọng lớn, góp phần làm sở cho thí nghiệm tiếp theo, mở rộng quy mô nghiên cứu đồng ruộng 70 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu đề tài rút số kết luận sau: Trên tập đoàn giống lạc trồng huyện Nghi Lộc vụ xuân năm 2011 theo dõi có thành phần nấm hại lạc bao gồm 10 loài thuộc gây lạc 10 bệnh khác Trong bệnh mốc xanh bệnh thối rũ gốc mốc đen xuất phổ biến Thành phần nấm hại đất trồng lạc 100 mẫu đất thu thập xã trồng lạc trọng điểm Nghi Lộc vụ xuân năm 2011 bao gồm 15 loài thuộc họ khác Trong nấm A niger, Penicillium sp xuất phổ biến Diễn biến mầm bệnh A flavus đất trồng lạc huyện Nghi Lộc vụ xuân năm 2011 phức tạp Mầm bệnh xuất từ giai đoạn phân cành đến thu hoạch Trong số lượng mầm bệnh tăng đột biến từ giai đoạn hình thành đến lúc vào Đặc biệt Nghi Trường mầm bệnh xuất với số lượng lớn, sau đến Nghi Ân cuối Nghi Phong Thành phần nấm hại hạt giống lạc mẫu thu thập vùng Nghi Lộc phụ cận xác định thành phần nấm hại hạt giống bao gồm loài thuộc khác Tỷ lệ nhiễm nấm hạt giống lạc vùng Nghi Lộc phụ cận tương đối cao Trong nấm A niger Penicillium sp chiếm tỷ lệ cao huyện điều tra Tỷ lệ nhiễm nấm A flavus hạt giống lạc vùng Nghi Lộc phụ cận tương đối cao, vùng Nghi Lộc có tỷ lệ nhiễm A flavus cao tới 70% Khả xâm nhiễm A flavus lên hạt giống lạc L14 cao, nồng độ 101 bào tử/ml tỷ lệ hạt nhiễm bệnh 18,6% Nồng độ bào tử A flavus lớn khả xâm nhiễm vào hạt giống lạc chúng cao Hai chủng Trichoderma harzianum Trichoderma atroviride có khả hạn chế xâm nhiễm A flavus lớn, kích thích nảy mầm, giảm 71 thiểu số lượng mầm dị dạng tăng kích thước mầm, điều kiện phòng thí nghiệm Đặc biệt chủng Tri.011.NL có hiệu lực phòng trừ A flavus cao đạt 99,14% phun Trichoderma trước ngày Xử lý hạt giống Trichoderma harzianum Trichoderma atroviride mang lại hiệu sử dụng cách xử lý hạt giống thông thường Chúng có tác dụng tăng tỷ lệ nảy mầm, giảm tỷ lệ mầm dị dạng tăng kích thước mầm trung bình Trong Trichoderma harzianum mang lại hiệu xử lý cao 10 Trichoderma harzianum Trichoderma atroviride có khả hạn chế mầm bệnh A flavus đất trồng lạc điều kiện chậu vại lớn Chủng Trichoderma harzianum mang lại hiệu phòng trừ cao 5.2 Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu cập nhật danh mục bệnh hại lạc hạt giống lạc tập đoàn giống lạc Tiếp tục nghiên cứu thêm khuyến cáo biện pháp sinh học phòng trừ xử lý hạt giống vào thực tiễn sản xuất 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO A/ Tiếng Việt Bộ NN&PTNT (2003), Tiêu chuẩn ngành 10TCN 224 - 2003 - Phương pháp điều tra phát sinh vật hạt trồng Lê Như Cương (2004), "Tình hình bệnh héo rũ lạc kết nghiên cứu số biện pháp phòng trừ tỉnh Thừa Thiên Huế”, Tạp chí BVTV, số 1/2004, tr – 14 Phạm Văn Chương cộng sự, Nghiên cứu mô hình sản xuất lạc xuân đạt tấn/ha diện tích trở lên (2009), Báo Nông nghiệp Việt Nam Lê Như Cương (2004), "Tình hình bệnh héo rũ lạc kết nghiên cứu số biện pháp phòng trừ tỉnh Thừa Thiên Huế”, Tạp chí BVTV, số 1/2004, tr – 14 Phạm Văn Chương, Đào Văn Huynh (2006): “Kết nghiên cứu phát triển giống lạc L20 cho vùng sinh thái Bắc Trung bộ” Kỷ yếu khoa học công nghệ 2001-2005.Tr 489-510 Nguyễn Lân Dũng (2008), “Tác dụng chữa bệnh gừng” Báo Nông nghiệp Việt Nam Đỗ Tấn Dũng (2001), Bệnh héo rũ trồng cạn, Nxb Nông Nghiệp 2001 Đỗ Tấn Dũng (2006), "Nghiên cứu bệnh héo rũ gốc mốc trắng Sclerotium rolfsii Sacc, hại số trồng cạn khu vực Hà Nội phụ cận năm 2005 2006", Tạp chí BVTV, số 4, Tr 20 – 24 Ngô Bích Hảo (2004), “Tình hình nhiễm nấm Aspergillus spp hạt giống số trồng ảnh hưởng nấm gây bệnh đến nảy mầm sức sống con”, Tạp chí KHKT Nông nghiệp,Tập (số 1/2004), tr.9-12 73 10 Ngô Bích Hảo (2007), Bài giảng môn học bệnh hại hạt giống 11 Nguyễn Xuân Hồng, Nguyễn Thị Xuyến (1991), Kết nghiên cứu bệnh hại lạc Việt Nam, NXB Nông nghiệp 1991 12 Nguyễn Xuân Hồng cộng (1998), "Bệnh Việt Nam số đề xuất chiến lược phòng trừ", Kết nghiên cứu khoa học 1988, Viện khoa học nông nghiệp Việt Nam 1999 13 Trần Quang Hùng (1999), Nghiên cứu, ứng dụng chế phẩm từ dich chiết thực vật phòng trừ dịch hại trồng, NXB Nông nghiệp 14 Lê Chí Hướng (2008), "Điều tra nghiên cứu tình hình bệnh nấm hại lạc vụ xuân 2008 vùng Hà Nội phụ cận; biện pháp phòng trừ số bệnh hại chính", Luận văn Thạc sỹ Nông nghiệp, Trường ĐH Nông nghiệp Hà Nội, 101 tr 15 Nguyễn Quốc Khang (2001), "Khả diệt sâu hại số chế phẩm thảo mộc có Việt Nam", Tạp chí BVTV số 3, tr 18-21 16 Nguyễn Thị Lan (chủ biên), Phạm Tiến Dũng (2006), Giáo trình phưong pháp thí nghiệm, NXB Nông nghiệp 17 Phạm Văn Lầm (1995), Biện pháp sinh học phòng chống dich hại nông nghiệp, NXB Nông nghiệp 18 Nguyễn Thị Ly, Phan Bích Thu (1993), “Nguyên nhân gây bệnh chết héo lạc miền Bắc Việt Nam”, Hội nghị khoa học BVTV, 3-1993, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 1993, tr.15-16 19 Nguyễn Thị Ly (1996), Nghiên cứu thành phần bệnh héo lạc nấm A flavus sinh độc tố Aflatoxin lạc miền bắc Việt Nam 20 Vũ Triệu Mân (chủ biên) tác giả - Trường ĐH Nông Nghiệp I Hà Nội 2007, Giáo trình bệnh chuyên khoa, NXB Nông Nghiệp 21 Nguyễn Thị Lý, Nguyễn Văn Lý (2006), Kết nghiên cứu đánh giá tập đoàn lạc Kỷ yếu khoa học công nghệ 2001-2005.Tr 573-581 22 Đinh Thị Ngọc (2004) "Điều tra thành phần bệnh nấm hại hạt giống lạc, nghiên cứu bệnh héo rũ gốc mốc đen (Aspergillú niger) hại lạc vùng Hà Nội 74 phụ cận vụ xuân 2004", Luận văn Thạc sỹ Nông nghiệp, Trường ĐH Nông nghiệp Hà Nội, 89 tr 23 Đoàn Thị Thanh Nhàn (1996), Giáo trình công nghiệp, NXB Nông nghiệp 24 Đặng Trần Phú, Lê Trường, Nguyễn Hồng Phi, Nguyễn Xuân Hiền (1977), "Tài liệu lạc (Đậu phộng)", Cây Công nghiệp lấy dầu, tập II, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 55 – 65 25 Lê Lương Tề, Vũ Triệu Mân (2007), Giáo trình Bệnh nông nghiệp, NXB Nông nghiệp 26 Lê Minh Thi, Lê Bích Thủy, Dương Thị Hồng (1989), "Thông báo kết bước đầu khảo nghiệm tính đối kháng nấm Trichoderma spp", Thông tin BVTV, số 2, tr 39-42 27 Trần Thị Thuần (1997), Nghiên cứu nấm đối kháng Trichoderma ứng dụng phòng trừ bệnh hại trồng, Luận văn thạc sỹ nông nghiệp 28 Nguyễn Văn Tuất (2002), Kỹ thuật chẩn đoán giám định bệnh hại trồng, NXB Nông Nghiệp 29 Nguyễn Kim Vân cộng (2001), Bệnh nấm đất hại trồng, nguyên nhân biện pháp phòng trừ Chương trình AusAID, NXB Nông nghiệp 30 Ngô Thị Mai Vi (2009), "Nghiên cứu bệnh nấm hại hạt giống lạc huyện Nghi Lộc, tỉnh Nghệ An biện pháp sinh học phòng trừ bệnh" , Luận văn Thạc sỹ Nông nghiệp, Trường ĐH Nông nghiệp Hà Nội, 108 tr 31 Dương Hoa Xô (2006), Vai trò nấm đối kháng Trichoderma kiểm soát sinh vật gây bệnh đất http://www.hembiotech.com.vn 32 Trung tâm đấu tranh sinh học, Tuyển tập công trình nghiên cứu biện pháp sinh học phòng trừ dịch hại trồng (1990-1995) NXB Nông nghiệp B/ Tiếng Anh 33 Aronoff, Stephen (2004), 2001- 2003 Mold Aspergillus http://www mold-.help.org/Aspergillus.htm 75 34 Compendium of Crop Protection 2001, CAB International Press 35 D.J Allen and J.M Lenne (1998), The Pathology of Food and Pasture Legumes, ICRISAT for the Semi – Arid Tropics, CAB International, pp.1109 36 Dewa Ngurat Suprapta, Made Sudana and Nyoman Arya, Application of plant extracts to control Ceratocystis fruit rot in Snake fruit, June 2001 37 John Damicone, Extension Plant Pathologist (1999), Soilborne Diseases of Peanut, Oklahoma Cooperative Extension Service, OSU Extension Facts Press, F-7664 38 Kulwant Singh, Jens C Frisvad, Ulf Thrane and S.B Mathur (1991), An Illustrated Manual on Indentification of some Seed-borne Aspergilli, Fusaria, Penicillia and their Mycotoxins, DGISP for Developing Countries, ISBN 877026-3175, 133p 39 M.J Richardson (1990), An Annotated list of seed – borne diseases, 4th Edi.,Published by International Seed Test Association (ISTA), Switzerland, pp.23-26 40 N Kokalis-Burelle, D M Porter, R Rodríguez -K Bana, D H Smith, P.Subrahmanyam eds (1997), Compendium of peanut diseases, 2nd editor, The APS press, 94p 41 O Youm (2000), ” Water, soil and Agro- Biodiversity”, Project R3 More Efficient, Environmentally - friendly Crop & Pest Management Options, International Crops Research Institute for the Semi-Arid Tropics (ICRISAT), Hyderbad, Indi 42 R.J Hillocks and J.M Waller, S.J Kolte (1997), Soilborne Diseases of Tropical Crops, CAB International, pp - 8, 253-270 43 Score, A.J, J.W Palfreyman, (1994), Biological control of the dry rot fungus Serpula larymans by Trichoderma species 44 Vannacci, G and G.E.Harman, (1978), Biocontrol of seed-borne Alternaria raphani and Alternaria brassicicola 76 45 Tricoderma spp online 46 http://www.goole.com.vn 47 http://www.hau.edu.vn/khoa/nonghoc/bomon/benhcay/baibao.htm 48 http://vietsciences.free.fr/timhieu/khoahoc/biology/toivasuckhoe.htm 49 http://www.agbiotech.com.vn 77 PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU THỐNG KÊ 1.) Xác định khả xâm nhiễm A flavus hạt giống lạc Thi nghiem xac dinh kha nang xam nhiem toi thieu cua A flavus tren hat giong lac VARIATE V003 TLN LN SOURCE OF VARIATION PROB ER SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO LN ========================================================= ==================== CT$ 12854.6 1836.37 816.15 0.000 * RESIDUAL 16 36.0006 2.25004 * TOTAL (CORRECTED) 23 12890.6 560.462 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KKK 9/ 7/11 17:56 :PAGE Thi nghiem xac dinh kha nang xam nhiem toi thieu cua A flavus tren hat giong lac MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 3 Tỷ lệ nhiễm nấm 0.000000 18.6667 34.6667 43.3333 49.3333 57.0000 63.6667 76.3333 SE(N= 3) 0.866033 5%LSD 16DF 2.59638 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KKK 9/ 7/11 17:56 78 :PAGE Thi nghiem xac dinh kha nang xam nhiem toi thieu cua A flavus tren hat giong lac F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 24) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TLN 24 42.875 23.674 1.5000 3.5 0.0000 2.) Ảnh hưởng Trichoderma atroviride Tri.020.NC đến khả xâm nhiễm A flavus BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLNA FILE 020 19/ 7/11 17:39 :PAGE Anh huong cua Trichoderma atroviride Tri.020.NC den kha nang xam nhiem cua A flavus VARIATE V003 TLNA LN SOURCE OF VARIATION PROB ER SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO LN ========================================================= ==================== CT$ 6694.50 1338.90 349.27 0.000 * RESIDUAL 12 46.0010 3.83342 * TOTAL (CORRECTED) 17 6740.50 396.500 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 020 19/ 7/11 17:39 :PAGE Anh huong cua Trichoderma atroviride Tri.020.NC den kha nang xam nhiem cua A fl 79 MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLNA 81.0000 61.0000 61.0000 57.0000 17.0000 62.0000 SE(N= 3) 1.13040 5%LSD 12DF 3.48315 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 020 19/ 7/11 17:39 :PAGE Anh huong cua Trichoderma atroviride Tri.020.NC den kha nang xam nhiem cua A fl F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TLNA 18 56.500 19.912 1.9579 3.5 0.0000 3.) Ảnh hưởng Trichoderma harzianum Tri.011.NL đến tỷ lệ nảy mầm hạt giống lạc BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLNM FILE 0112 19/ 7/11 18: :PAGE Anh huong cua Trichoderma harzianum Tri.011.NL den ty le mam cua hat giong lac VARIATE V003 TLNM 80 LN SOURCE OF VARIATION PROB ER SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO LN ========================================================= ==================== CT$ 20429.3 4085.87 ****** 0.000 * RESIDUAL 12 20.6683 1.72236 * TOTAL (CORRECTED) 17 20450.0 1202.94 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 0112 19/ 7/11 18: :PAGE Anh huong cua Trichoderma harzianum Tri.011.NL den ty le mam cua hat giong lac MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLNM 5.00000 15.3333 20.0000 98.3333 73.6667 51.6667 SE(N= 3) 0.757707 5%LSD 12DF 2.33475 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 0112 19/ 7/11 18: :PAGE Anh huong cua Trichoderma harzianum Tri.011.NL den ty le mam cua hat giong lac F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - 81 VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TLNM 18 44.000 34.683 1.3124 3.0 0.0000 4.) Xác định khả hạn chế số lượng mầm bệnh A flavus đất trồng lạc chủng Trichoderma harzianum (Tri.011.NL) Trichoderma atroviride (Tri.020.NC) điều kiện chậu vại mức nồng độ khác SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE TNCVT 14/ 7/11 22:47 :PAGE Kha nang phong Aspergillus flavus cua chung trichoderma ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO FPROB TRI011NL 0.32715E+08 22844 12 1432.11 0.000 TRI020NC 0.30234E+08 15092 12 2003.31 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TNCVT 14/ 7/11 22:47 :PAGE Kha nang phong Aspergillus flavus cua chung trichoderma MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 NOS 3 3 TRI011NL TRI020NC 13959.3 13959.3 12243.3 11223.3 12075.0 10980.0 10558.3 9047.67 6956.67 6673.33 82 CT6 5503.67 5357.67 SE(N= 3) 87.2621 70.9272 5%LSD 12DF 268.884 218.551 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TNCVT 14/ 7/11 22:47 :PAGE Kha nang phong Aspergillus flavus cua chung trichoderma F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TRI011NL 18 10216 3104.5 151.14 1.5 0.0000 TRI020NC 18 9540.2 2983.8 122.85 1.3 0.0000 [...]... hạt bị nhiễm A flavus 3.5.2.7 Ảnh hưởng của một số chủng Trichoderma đến khả năng xâm nhiễm A flavus và tỷ lệ nảy mầm của hạt giống lạc • Thí nghiệm sử dụng 2 chủng Trichoderma harzianum (Tri.011NL); Trichoderma atroviride (Tri.02 0NC) để kiểm nghiệm ảnh hưởng của chúng đến khả năng xâm nhiễm của chủng A flavus (VAL004) và tỷ lệ nảy mầm của hạt giống lạc • Pha dung dịch bào tử Trichoderma với nồng độ bào... bị mất đi và sợi nấm vật chủ phá vỡ, giải phóng các sợi nấm đang sinh sản của nấm Trichoderma Những sợi nấm chính của nấm vật chủ bị đánh thủng thành lỗ ở nhiều chỗ, đó là hiện tượng tan rã kitin vùng xung quanh nơi xâm nhập của nấm Trichoderma (Dubey,1995) * Cơ chế kháng sinh (antibiotic) Nấm Trichoderma có khả năng sinh ra một số chất kháng sinh, khả năng sinh ra chất kháng sinh của các loài, chủng,... sử dụng T viride với liều lượng 90kg/ha để phòng trừ bệnh héo rũ hại lạc do nấm A niger, S rolfsii, Fusarium spp., R solani gây ra cho hiệu quả cao Năm 1996, trong thí nghiệm chậu vại khảo sát hiệu lực đối kháng của T viride với S rolfsii hại lạc hiệu lực phòng trừ đạt 97,1% (Trần thị Thuần, 1997) [26] Nấm Trichoderma là loại nấm đối kháng cũng đã được sử dụng để trừ các loại nấm hại trong đất như... rất phổ biến ở các vi sinh vật đất Vi sinh vật đối kháng là nhóm vi sinh vật quan trọng của hệ vi sinh vật đất Chúng là những yếu tố sinh học quyết định hình thành và phát triển của hệ vi sinh vật ở trong đất vùng rễ cây Vi sinh vật đối kháng với vi sinh vật gây bệnh cây gồm nhiều nhóm khác nhau: virus đối kháng, vi khuẩn đối kháng, nấm đối kháng như Trichoderma sp Ngoài ra, một số nước trên thế giới... bào nấm gây bệnh cho cây như men β(1-3) glucanase và chitinase (Chet et al., 1981; Jones and Watson, 1969) * Cơ chế cạnh tranh Nấm Trichoderma có thể biểu hiện tính đối kháng thông qua việc cạnh tranh với nấm gây bệnh cây về dinh dưỡng, nơi cư trú Nấm Trichoderma thường định cư trước so với nấm gây bệnh cây Sử dụng nấm đối kháng trong công tác bảo vệ thực vật là một trong những biện pháp sinh học mang... bệnh hại những nghiên cứu về biện pháp sinh học phòng trừ bệnh hại cây trồng ở nước ta còn ít được quan tâm Các nghiên cứu bước đầu đã có những hiệu quả nhất định và được người dân chấp nhận Hiện nay đã có một số chế phẩm được bán trên thị trường có khả năng phòng trừ nấm bệnh như: Vi-ĐK, nhóm nấm đối kháng Trichoderma và một số chế phẩm khác Vi-ĐK là chế phẩm sinh học có tác dụng đối kháng với các nấm. .. Phytophthora palmivora, Pythium sp Chế phẩm Vi-ĐK đối kháng với các nấm bệnh bằng cách ký sinh trên nấm bệnh, cạnh tranh thức ăn, sản sinh ra các chất kháng sinh và enzyme tiêu diệt, ngăn cản sự xâm nhập của nấm bệnh, bảo vệ tốt bộ rễ, phòng trừ được các bệnh chết rụi và héo rũ cây Cho đến nay, tác nhân sinh học trừ bệnh hại nghiên cứu nhiều hơn cả là nhóm nấm đối kháng Trichoderma và sử dụng dịch chiết từ thực... đã cho thấy nấm Trichoderma sp là một trong những nhóm đứng đầu của vi sinh vật trong đất có tính đối kháng và được nghiên cứu rộng rãi ở nhiều nơi trên thế giới Việc nghiên cứu tính đối kháng, đặc biệt là tác động chọn lọc của những chất đặc trưng do nấm Trichoderma sp tiết ra được nhiều nhà khoa học quan tâm và tiến hành nghiên cứu nhằm giải thích cơ chế tác động của nhóm nấm này đối với các sinh... giống lạc L14 CT2: Nhiễm lên hạt giống với nồng độ bào tử A flavus 101 CT3: Nhiễm lên hạt giống với nồng độ bào tử A flavus 102 CT4: Nhiễm lên hạt giống với nồng độ bào tử A flavus 103 CT5: Nhiễm lên hạt giống với nồng độ bào tử A flavus 104 CT6: Nhiễm lên hạt giống với nồng độ bào tử A flavus 105 CT7: Nhiễm lên hạt giống với nồng độ bào tử A flavus 106 CT8: Nhiễm lên hạt giống với nồng độ bào tử A flavus. .. động đối kháng của nấm Trichoderma được R.Falk công bố từ năm 1931 Tác giả nhận thấy khi cây gỗ được xử lý bằng nấm T viride thì không bị các nấm Merulius lachrymars và Coniophora puteana phá hoại Kết quả nghiên cứu của Muthamilan, M và Jayarajan (1996) cũng cho thấy Trichoderma harzianum và Rhizobium carbendazim có khả năng kiểm soát nấm Sclerotium rolfsii đồng thời còn làm tăng khả năng sinh trưởng của ... bệnh hại hạt lạc an toàn, hiệu quả, đồng thời giảm tác hại bệnh mốc vàng đồng ruộng, nâng cao suất phẩm chất lạc, tiến hành nghiên cứu đề tài: "Khả đối kháng Trichoderma harzianum Tri .011. NL, Trichoderma. .. sinh học định hình thành phát triển hệ vi sinh vật đất vùng rễ Vi sinh vật đối kháng với vi sinh vật gây bệnh gồm nhiều nhóm khác nhau: virus đối kháng, vi khuẩn đối kháng, nấm đối kháng Trichoderma. .. Trichoderma atroviride Tri .020. NC nấm mốc hại lạc Aspergillus flavus" 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích - Xác định thành phần mức độ nhiễm bệnh nấm gây hại hạt giống lạc thu thập vùng Nghi Lộc