Bộ giáo dục đào tạo Trờng đại học vinh Xây dựng quy trình nhân giống khoai lang tím Nhật (Beniazuma) nhập nội phơng pháp nuôi cấy mô in vitro Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành: Trồng trọt Mã số: 60.62.01 Ngời thực : nguyễn ngọc khuê Ngi hng dn khoa hc: pgs.ts nguyễn đình san Nghệ An - 2012 i LI CAM OAN Tụi xin cam oan cỏc s liu v kt qu nghiờn cu lun l trung thc v cha tng c s dng bo v mt hc v, mt cụng trỡnh nghiờn cu no Tụi xin cam oan rng, mi s giỳp cho vic thc hin lun ny u ó c cm n Trong lun tụi cú s dng cỏc thụng tin t nhiu ngun khỏc nhau, cỏc thụng tin trớch dn c s dng u c ghi rừ cỏc ngun gc, xut x Tỏc gi lun NGUYN NGC KHUấ ii LI CM N hon thnh ti ny, tụi xin by t lũng bit n sõu sc n thy giỏo PGS TS Nguyn ỡnh San cỏn b hng dn khoa hc, k thut viờn CN Phựng Vn Ho ó hng dn tn tỡnh v to mi iu kin thun li giỳp tụi sut thi gian nghiờn cu v hon thin lun Tụi xin chõn thnh cm n nhng ý kin úng gúp vụ cựng quý bỏu ca cỏc thy giỏo, cụ giỏo khoa Nụng Lõm Ng, s to iu kin v ng h ca cỏc cỏn b phũng thớ nghim Nuụi cy mụ - t bo thc vt khoa Sinh, trng i hc Vinh Cm n gia ỡnh, bn bố ó luụn ng h, ng viờn tụi sut quỏ trỡnh thc hin ti Xin chõn thnh cm n! Vinh, thỏng 10 nm 2012 Tỏc gi NGUYN NGC KHUấ iii DANH MC CC Kí HIU, CH CI VIT TT cs CT GA3 IAA KI mg/l MS Cng s Cụng thc Gibberellic acid Indol acetic acid Kinetine Milligram/lớt Mụi trng dinh dng Murashige MT NCMTB - NAA & Skoog 1962 Mụi trng Nuụi cy mụ t bo - Naphlene acetic acid iv DANH MC BNG Bng 1.1 Cỏc mc quan trng lch s nuụi cy mụ t bo thc vt 15 Bng 3.1.1 nh hng ca H2O2 10% v thi gian kh trựng n t l sng ca mu nuụi cy 38 Bng 3.1.2 nh hng ca HgCl2 0,1% v thi gian kh trựng n t l sng ca mu cy 40 Bng 3.2.1 nh hng ca nng GA3 n kh nng tỏi sinh chi 45 Bng 3.2.2 nh hng tng hp ca nc da v GA3 n 47 kh nng tỏi sinh chi .47 Bng 3.3.1 nh hng ca Kinetine n kh nng bt chi v .50 h s nhõn chi khoai lang .51 Bng 3.3.2 nh hng ca nng Kinetine n kh nng sinh trng phỏt trin ca chi khoai lang .52 Bng 3.3.3 nh hng ca IAA n kh nng bt chi v 54 h s nhõn chi khoai lang 54 Bng 3.3.4 nh hng ca nng IAA n kh nng sinh trng phỏt trin ca chi khoai lang 55 Bng 3.4.1 nh hng ca nng - NAA n hiu qu r 58 ca cõy khoai lang in vitro 58 Bng 3.4.2 nh hng ca NAA v than hot tớnh n hiu qu r ca cõy khoai lang in vitro 62 Bng 3.5 nh hng ca cỏc loi giỏ th n sc sng ca cõy ex vitro 66 v vi DANH MC HèNH Hỡnh 1.1 Cõy khoai lang v cỏc b phn Hỡnh 3.1.1 nh hng ca H2O2 10% v thi gian kh trựng n t l sng ca mu nuụi cy 39 Hỡnh 3.1.2 nh hng ca HgCl2 0,1% v thi gian kh trựng n t l sng ca mu cy .41 Hỡnh 3.1.3 S phỏt sinh chi t t thõn giai on vo mu 43 Hỡnh 3.2.1 nh hng ca nng GA3 n kh nng tỏi sinh chi 46 Hỡnh 3.2.2 nh hng tng hp ca nc da v GA3 n 48 kh nng tỏi sinh chi .48 Hỡnh 3.2.3 Chi in vitro giai on tỏi sinh chi 50 Hỡnh 3.3.1 nh hng ca Kinetine n kh nng bt chi v .51 h s nhõn chi khoai lang .51 Hỡnh 3.3.2 nh hng ca IAA n kh nng bt chi v .54 h s nhõn chi khoai lang 54 Hỡnh 3.3.3 Chi khoai lang in vitro giai on nhõn nhanh 57 Hỡnh 3.4.1 nh hng ca nng - NAA n hiu qu r 59 ca cõy khoai lang in vitro 59 Hỡnh 3.4.2 nh hng ca NAA v than hot tớnh n hiu qu r ca cõy khoai lang in vitro 62 Hỡnh 3.4.3 Chi khoai lang Beniazuma giai on r .64 Hỡnh 3.5.1 nh hng ca cỏc loi giỏ th n sc sng ca cõy ex vitro 66 Hỡnh 3.5.2 Cõy khoai lang ex vitro giai on hun luyn 68 vii MC LC LI CAM OAN i DANH MC CC Kí HIU, CH CI VIT TT iii DANH MC BNG .iv DANH MC HèNH vi MC LC vii M U 1 Lý chn ti Mc ớch nghiờn cu ca ti 3 í ngha khoa hc v ý ngha thc tin ca ti CHNG I .5 TNG QUAN TI LIU NGHIấN CU .5 1.1 Gii thiu chung v cõy khoai lang 1.1.1 Ngun gc v s phõn b 1.1.2 c im sinh hc ca cõy khoai lang 1.1.3 Giỏ tr ca cõy khoai lang 10 1.1.4 Vi nột v ging khoai lang tớm Nht Bn .12 1.2 Nuụi cy mụ t bo thc vt v ng dng to ging cõy trng .13 1.2.1 Khỏi nim v c s khoa hc ca nuụi cy mụ t bo thc vt 13 1.2.2 Lch s phỏt trin v nhng thnh tu ng dng NCMTB thc vt to ging cõy trng 15 1.3 Tỡnh hỡnh nghiờn cu ng dng NCMTB thc vt vic to ging khoai lang trờn th gii v Vit Nam 24 1.3.1 Trờn th gii .24 1.3.2 Vit Nam .28 CHNG II 30 I TNG, NI DUNG V PHNG PHP NGHIấN CU.30 2.1 i tng v a im nghiờn cu 30 2.1.1 i tng nghiờn cu .30 2.1.2 a im nghiờn cu 30 2.2 Ni dung nghiờn cu .30 2.3 Phng phỏp nghiờn cu 31 3.4 X lý s liu 37 viii CHNG III 38 KT QU NGHIấN CU V THO LUN 38 3.1 Giai on vo mu 38 3.2 Giai on tỏi sinh chi 44 3.3 Giai on nhõn nhanh .50 3.5 Giai on hun luyn thớch nghi .65 3.6 Mt s lu ý quỏ trỡnh nhõn ging khoai lang Nht Beniazuma bng phng phỏp in vitro .70 3.6.1 Vụ trựng 70 3.6.2 Giai on phũng thớ nghim 70 3.6.3 Giai on hun luyn thớch nghi .71 KT LUN V KIN NGH 72 TI LIU THAM KHO 74 M U Lý chn ti Khoai lang (Ipomoea batatas L) l mt loi cõy lng thc vi cỏc r c ln, cha nhiu tinh bt, cú v ngt, c khoai lang l ngun cung cp rau n c quan trng Nú úng vai trũ c rau v lng thc Khoai lang c trng v phõn b rt nhiu ni trờn th gii nh Chõu , Chõu Phi, Chõu M Latinh Trong s cỏc cõy lng thc, cõy cú c gi mt vai trũ quan trng sn xut lng thc nhng nc nghốo, chm v ang phỏt trin (Trnh Xuõn Ng, inh Th Lc, 2004) Theo s liu thng kờ ca T chc Nụng lng Liờn Hp Quc nm 2010 trờn th gii 77% khoai lang s dng lm lng thc, 13% lm thc n gia sỳc, 6% lm nguyờn liu ch bin thnh nhiu sn phm khỏc nh luc n sỏng, lm mt, lm bỏnh ko, nc gii khỏt, ru, lm thuc, dựng thay th cho bt mỡ lm bỏnh bớch quy, phn loi b i rt ớt chim 3% (Cỳc Phng, 2005) Phn thõn, lỏ, ngn c s dng lm rau xanh cho ngi ng thi l ngun thc n tt cho gia sỳc (FAO, Horton, 1988) Vựng Bc Trung B gm sỏu tnh: Thanh Húa, Ngh An, H Tnh, Qung Bỡnh, Qung Tr, Tha Thiờn Hu õy l mt by vựng kinh t ca t nc cú a hỡnh, khớ hu, t phong phỳ gm cỏc tiu vựng sinh thỏi khỏc thớch hp cho nhiu loi cõy trng v vt nuụi Dõn s Bc Trung B cú khong hn 10 triu ngi chim 13% dõn s ca c nc, ú khong triu ngi tui lao ng Tuy nhiờn, n Bc Trung B l vựng kinh t cũn gp nhiu khú khn Vựng Bc Trung B dn u tỏm vựng trờn c nc v din tớch v sn lng khoai lang Ging 72 KT LUN V KIN NGH Kt lun ng dng cụng ngh nuụi cy mụ - t bo thc vt, chỳng tụi ó xõy dng quy trỡnh k thut nhõn nhanh in vitro ging khoai lang Nht Beniazuma vi cỏc kt lun sau: Giai on vo mu Vt liu thớch hp to ngun vt liu u i vi ging khoai lang Nht Beniazuma l cỏc on thõn mang mt ng gn nh sinh trng X lý s b mu cy bng etanol 700 thi gian phỳt, sau ú s dng HgCl 0,1% 10 phỳt Mu c nuụi cy trờn mụi trng (MS + Saccarose 3% + Agar 0,8% + 10% nc da) Thi gian cy gõy l tun Giai on tỏi sinh chi Mụi trng s dng tỏi sinh chi in vitro l: (MS + 0,8 % Agar + 3% saccarose + mg/l GA3 + 150% nc da) Thi gian tỏi sinh l tun Giai on nhõn nhanh Mụi trng thớch hp nhõn nhanh chi khoai in vitro l (MS + 0,8% Agar + 3% saccaroza +1 mg/l GA3 + mg/l KI) Thi gian nhõn nhanh l tun Giai on r to cõy hon chnh Mụi trng thớch hp cho chi khoai in vitro r l (MS + 0,8% Agar + 3% saccaroza + 0,5 mg/l NAA + 1,0 g/l than hot tớnh) Thi gian r l l tun iu kin nuụi cy ca giai on vo mu, tỏi sinh, nhõn nhanh, r to cõy in vitro hon chnh phũng thớ nghim l : 25 20 C, m 65 70%, cng ỏnh sỏng 2000 - 2500 lux v thi gian chiu sỏng l 12h/ngy Giai on hun luyn thớch nghi 73 Giỏ th thớch hp nht hun luyn thớch nghi cõy khoai ex vitro l t tht iu kin hun luyn l: m khụng khớ 80 - 85%, m giỏ th 65 - 80%, nhit 25 - 300C, ngun khoỏng b sung l dung dch dinh dng Knop phun lờn lỏ di dng sng mự Thi gian giai on ny l tun Kin ngh Theo dừi cõy khoai nuụi cy mụ ngoi sn xut ỏnh giỏ kh nng sinh trng, phỏt trin, nng sut, cht lng, kh nng chng chu Cn tin hnh nghiờn cu nh hng phi hp gia cỏc cht TST nh: Kinetin vi BAP hoc 2,4D, IBA xem xột vai trũ sinh lý ca chỳng quỏ trỡnh hỡnh thnh chi mi v kh nng r t cỏc chi ban u Cn nghiờn cu thờm nh hng ca mt s giỏ th khỏc nh tru hun, x da, mn ca, n kh nng thớch nghi ca cõy khoai ex vitro Tng bc ng dng cỏc kt qu nghiờn cu ca ti cung cp cõy ging cho sn xut 74 TI LIU THAM KHO A Ti liu ting Vit: Nguyn Th Lý Anh v cng s (2000), Nghiờn cu lm sch virus v nhõn nhanh mt s dũng, ging khoai lang sch virus bng phng phỏp nuụi cy invitro, Tp Nụng nghip Cụng nghip thc phm ( 12), tr 552-554 Lờ Trn Bỡnh, H Hu Nh, Lờ Th Mui (1997), Cụng ngh sinh hc thc vt ci tin ging cõy trng, NXB Nụng nghip H Ni Ngụ Xuõn Bỡnh, Nguyn Th Thỳy H (2000), Giỏo trỡnh cụng ngh sinh hc, NXB Nụng nghip Dai Peter, Tụn Phan Hu, Hong Mai Thch v cs (2001), Hng dn s dng khoai lang v cỏc cõy trng khỏc chn nuụi ln Bc, Trung Vit Nam, NXB Nụng nghip ng nh (1995), Tng nng sut khoai lang, Nh xut bn Nụng nghip Jennifer A.woolfe (1992), Cõy khoai lang, NXB i hc Cambridge, NewYork inh Th Lc (1995), Cõy khoai lang, Nh xut bn Nụng nghip, H Ni inh Th Lc v CS (1997), Giỏo trỡnh Cõy Lng thc, 2, HNN I, Nh Xut bn Nụng nghip, H Ni Hong Th Sn (1999), Phõn loi thc vt, NXB Giỏo dc H Ni, trang 178 10 Nguyn c Thnh (2000), Nuụi cy mụ t bo thc vt nghiờn cu v ỏp dng, NXB Nụng nghip, tr 54 11 Nguyn Quang Thch v cs (2003), Bi ging cụng ngh sinh hc thc vt, H NNI, H Ni 12 Nguyn Vn Uyn (1993), Nuụi cy mụ thc vt phc v cụng tỏc ging cõy trng, Nh xut bn Nụng nghip 75 13 Bựi Vn Th Vinh (2009), Bi ging cụng ngh sinh hc thc vt, Trng H K thut cụng ngh H Chớ Minh 14 Nng Vnh (2002), Cụng ngh sinh hc cõy trng, NXB Nụng nghip H Ni 15 Nng Vnh (2005), Cụng ngh t bo thc vt ng dng, NXB Nụng nghip 16 V Vn V (ch biờn) (2005), Sinh lý hc thc vt, NXB Giỏo dc H Ni, tr 213 215 17 V Vn V, Nguyn Mng Hựng, Lờ Hng ip (2006), Cụng ngh sinh hc, NXB Giỏo dc B Ti liu ting Anh: 18 Denises, Dagnino, Maria Luiza v cs (1991), Effect of Gibberellic acid on ipomoea batatas regeneration from meristem culture 19 Fowler, M.R (2002), Plant cell culture, laboratory techniques, In Encyclopedia of cell, Wiley, NewYork 20 Hans G.S., Horst W.D., Fiechter A., Yamada H., Shimizu S (2002), Biotechnology, Ullmanns Encyclopedia of Industrial Chemistry Weinheim, Germany 21 Iftekhar Alam, Shamima Akhtar Sharmin, Mst Kamrun Naher, M Jahangir Alam, M Anisuzzaman and Mohammad Firoz Alam (2010), Effect of growth regulators on meristem culture and plantlet establishment in sweet potato (Ipomoea batatas (L.) Lam), POJ 3(2), pp 35 39 22 Mervat M.M.El Far and A Ashoub (2009), Utility of Thermotherapy and meristem tip for freeing sweet potato from viral infection, Australian Journal of basic and applied sciences, 3(1), pp 153 159 23 Murashige T., Skoog F (1962), A revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco tissue culture, J Physol Plant, vol 15, pp 473 479 76 24 Peru, Lima v cs (1992), Tissue culture of ipomoea batatas micro propagation and mainrtenance 25 Taco Bottema, Pham Thanh Binh, Dang Ngoc Ha, Mai Thach Hoanh, Hoang Kim (1991), Sweet potato in Vietnam, production and markets, CGPRTNo.24 Bogor, Indonesia, pp 113 26 T Kozai, C Chun, A.F.M.S Islam, C Kubota and K Ohyama, Efficient Production of Sweetpotato (Ipomoea batatas (L.) Lam.) Propagules and Transplants Using Single Node Leafy Cuttings in Closed Systems with Artificial Lighting, Department of Bioproduction Science, Faculty of Horticulture, Chiba University, Matsudo, Chiba 271, Japan C Internet: 27 www.khuyennongvn.gov.vn 28 Vietbao.vn/suckhoe/rau cu khoai lang thc an va vi thuoc quy/ 29 www.vi.wikimedia.org 30 www.2lua.vn/kythuattrongkhoailangNhat/ PH LC PH LC Thnh phn dinh dng mụi trng MS [10] Thnh phn a lng Vi lng Vitamin Cỏc cht hu c Cht TST Húa cht Nng (mg/ l) NH4NO3 1650 KNO3 1900 CaCl2.2H2O 440 KH2PO4 Na2EDTA.2H2O 370 37,26 FeSO4.7H2O 27,8 MnSO4 16,9 ZnSO4.7H2O 8,6 H3BO3 6,2 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 CaCl2.6H2O Glyxine 0,025 Myo-inositol 100 Nicotinic acid 0,5 Pyridocine 0,5 Thiamine Saccarose 0,1 30 Agar Cytokinin 6-8 0,1- 10 Auxin 0,1- PH LC X Lí S LIU BALANCED ANOVA FOR VARIATE SMS FILE H2O2 16/10/12 23:47 :PAGE Anh huong cua H2O2 va thoi gian khu trung thich hop den ti le song cua mau cay VARIATE V003 SMS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 108.000 36.0000 72.00 0.000 * RESIDUAL 3.99999 499999 * TOTAL (CORRECTED) 11 112.000 10.1818 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE H2O2 16/10/12 23:47 :PAGE Anh huong cua H2O2 va thoi gian khu trung thich hop den ti le song cua mau cay MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 SMS 2.33333 10.3333 7.00000 4.33333 SE(N= 3) 0.408248 5%LSD 8DF 1.15125 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE H2O2 16/10/12 23:47 :PAGE Anh huong cua H2O2 va thoi gian khu trung thich hop den ti le song cua mau cay F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SMS GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 6.0000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 3.1909 0.70711 9.6 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SMS FILE HGCL2MOI 17/10/12 0: :PAGE Anh huong cua HgCl2 v thoi gian khu trung thich hop den ti le song cua mau cay VARIATE V003 SMS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 255.000 85.0000 102.00 0.000 * RESIDUAL 6.66672 833340 * TOTAL (CORRECTED) 11 261.667 23.7879 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HGCL2MOI 17/10/12 0: :PAGE Anh huong cua HgCl2 v thoi gian khu trung thich hop den ti le song cua mau cay MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 SMS 10.3333 23.0000 16.0000 14.0000 SE(N= 3) 0.527048 5%LSD 8DF 1.62865 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HGCL2MOI 17/10/12 0: :PAGE Anh huong cua HgCl2 v thoi gian khu trung thich hop den ti le song cua mau cay F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SMS GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 15.833 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 4.8773 0.91287 5.2 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE GA3 17/10/12 8:11 :PAGE Anh huong cua nong GA3 den kha nang tai sinh choi VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 4.83600 1.20900 120.90 0.000 * RESIDUAL 10 999995E-01 999995E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 4.93600 352571 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE GA3 17/10/12 8:11 :PAGE Anh huong cua nong GA3 den kha nang tai sinh choi MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 HSN 1.60000 2.40000 3.20000 2.90000 2.10000 SE(N= 3) 0.577349E-01 5%LSD 10DF 0.137925 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE GA3 17/10/12 8:11 :PAGE Anh huong cua nong GA3 den kha nang tai sinh choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.4400 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.59378 0.10000 3.9 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE HSNNCD 17/10/12 8:22 :PAGE Anh huong cua nuoc dua va GA3 den kha nang tai sinh choi VARIATE V004 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 7.96267 1.99067 175.65 0.000 * RESIDUAL 10 113333 113333E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 8.07600 576857 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HSNNCD 17/10/12 8:22 :PAGE Anh huong cua nuoc dua va GA3 den kha nang tai sinh choi MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 HSN 2.10000 2.56667 3.10000 4.13333 2.30000 SE(N= 3) 0.614635E-01 5%LSD 10DF 0.164674 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HSNNCD 17/10/12 8:22 :PAGE Anh huong cua nuoc dua va GA3 den kha nang tai sinh choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.8400 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.75951 0.10646 3.1 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE KI 17/10/12 8:27 :PAGE Anh huong cua Kinetine den kha nang bat choi va he so nhan choi khoai lang VARIATE V006 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 21.5096 5.37740 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 137496E-01 137496E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 21.5233 1.53738 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KI 17/10/12 8:27 :PAGE Anh huong cua Kinetine den kha nang bat choi va he so nhan choi khoai lang MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 HSN 2.02500 2.18333 3.19167 5.18333 2.12500 SE(N= 3) 0.214084E-01 5%LSD 10DF 0.653587E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KI 17/10/12 8:27 :PAGE Anh huong cua Kinetine den kha nang bat choi va he so nhan choi khoai lang F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.9417 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.2399 0.37080E-01 1.2 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE IAA 17/10/12 8:31 :PAGE Anh huong cua IAA den kha nang bat choi va he so nhan choi khoai VARIATE V006 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 8.44208 2.11052 422.11 0.000 * RESIDUAL 10 499996E-01 499996E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 8.49208 606577 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IAA 17/10/12 8:31 :PAGE Anh huong cua IAA den kha nang bat choi va he so nhan choi khoai MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 HSN 2.82500 3.10833 4.70000 2.91667 2.61667 SE(N= 3) 0.408247E-01 5%LSD 10DF 0.573238 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IAA 17/10/12 8:31 :PAGE Anh huong cua IAA den kha nang bat choi va he so nhan choi khoai F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.2333 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.77883 0.70710E-01 0.9 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTC FILE TCHCNAA 17/10/12 8:37 :PAGE Anh huong cua NAA den hieu qua re cay khoai lang in vitro VARIATE V005 SRTC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 40.0769 10.0192 993.34 0.000 * RESIDUAL 10 100864 100864E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 40.1777 2.86984 BALANCED ANOVA FOR VARIATE DDR FILE TCHCNAA 17/10/12 8:37 :PAGE Anh huong cua NAA den hieu qua re cay khoai lang in vitro VARIATE V006 DDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 153.899 38.4747 66.39 0.000 * RESIDUAL 10 5.79487 579487 * TOTAL (CORRECTED) 14 159.694 11.4067 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TCHCNAA 17/10/12 8:37 :PAGE Anh huong cua NAA den hieu qua re cay khoai lang in vitro MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 SRTC 4.16667 6.37333 8.71667 8.23000 6.04667 DDR 40.1667 44.8167 46.1867 39.0033 38.2600 SE(N= 3) 0.579839E-01 0.439502 5%LSD 10DF 0.14528 1.10113 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TCHCNAA 17/10/12 8:37 :PAGE Anh huong cua NAA den hieu qua re cay khoai lang in vitro F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SRTC DDR GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 6.7067 15 41.687 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.6941 0.10043 1.2 0.0000 3.3774 0.76124 1.4 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTC FILE TCHCTHT 17/10/12 8:43 :PAGE Anh huong cua NAA va than hoat tinh den hieu qua re cay khoai lang in vitro VARIATE V003 SRTC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 68.4494 17.1123 778.54 0.000 * RESIDUAL 10 219801 219801E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 68.6692 4.90494 BALANCED ANOVA FOR VARIATE DDR FILE TCHCTHT 17/10/12 8:43 :PAGE Anh huong cua NAA va than hoat tinh den hieu qua re cay khoai lang in vitro VARIATE V004 DDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 190.893 47.7233 831.52 0.000 * RESIDUAL 10 573930 573930E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 191.467 13.6762 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TCHCTHT 17/10/12 8:43 :PAGE Anh huong cua NAA va than hoat tinh den hieu qua re cay khoai lang in vitro MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 SRTC 4.22333 9.32000 10.1400 7.15667 6.18667 DDR 46.2167 54.5367 56.3733 52.1267 49.8133 SE(N= 3) 0.855962E-01 0.138315 5%LSD 10DF 0.209717 0.31835 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TCHCTHT 17/10/12 8:43 :PAGE Anh huong cua NAA va than hoat tinh den hieu qua re cay khoai lang in vitro F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SRTC DDR GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 7.4053 15 51.813 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.2147 0.14826 1.5 0.0000 3.6981 0.23957 0.3 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SCS FILE HLTN 17/10/12 8:51 :PAGE Anh huong cua cac loai gia the den suc song cay ex vitro VARIATE V003 SCS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 54.8889 27.4444 19.00 0.003 * RESIDUAL 8.66667 1.44445 * TOTAL (CORRECTED) 63.5556 7.94444 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLM FILE HLTN 17/10/12 8:51 :PAGE Anh huong cua cac loai gia the den suc song cay ex vitro VARIATE V005 SLM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 2.51556 1.25778 19.27 0.003 * RESIDUAL 391666 652777E-01 * TOTAL (CORRECTED) 2.90722 363403 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE HLTN 17/10/12 8:51 :PAGE Anh huong cua cac loai gia the den suc song cay ex vitro VARIATE V006 CCC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 13.2867 6.64333 132.10 0.000 * RESIDUAL 301735 502892E-01 * TOTAL (CORRECTED) 13.5884 1.69855 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HLTN 17/10/12 8:51 :PAGE Anh huong cua cac loai gia the den suc song cay ex vitro MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 SCS 33.0000 39.0000 36.6667 SLM 3.60000 4.86667 4.00000 CCC 5.16333 7.93000 5.59667 SE(N= 3) 0.693889 0.147510 0.129472 5%LSD 6DF 0.750027 0.310261 0.507865 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HLTN 17/10/12 8:51 :PAGE Anh huong cua cac loai gia the den suc song cay ex vitro F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SCS SLM CCC GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 36.222 4.1556 6.2300 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.8186 1.2019 0.9 0.0030 0.60283 0.25550 3.3 0.0029 1.3033 0.22425 3.6 0.0001 | | | | [...]... ra những nghiên cứu ban đầu phục vụ cho các công tác giống sau này, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: Xây dựng quy trình nhân giống khoai lang tím Nhật (Beniazuma) nhập nội bằng phương pháp nuôi cấy mô in vitro 2 Mục đích nghiên cứu của đề tài Bằng phương pháp nuôi cấy mô xây dựng quy trình nhân giống khoai lang tím Nhật nhập nội, tạo ra cây giống có chất lượng cao đưa vào sản xuất 3 Ý nghĩa khoa... việc nhân giống cây trồng bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật nhằm mục đích tăng sinh khối thể nhân giống Vật liệu nuôi cấy là những thể chồi, môi trường nuôi cấy thông thường giống với môi trường tạo thể chồi, đôi khi nồng độ chất sinh trưởng giảm thấp cho phù hợp với quá trình nhân giống kéo dài Cây nhân giống in vitro có trạng thái sinh lý trẻ và được duy trì trong thời gian vô hạn - Tái sinh... Có hai thể nhân giống in vitro: thể chồi, thể cắt đốt 19 + Tạo thể nhân giống in vitro dựa vào đặc điểm nhân giống ngoài tự nhiên của cây trồng Tuy nhiên, có những loài cây trồng không có khă năng nhân giống, ngư i ta thường nhân giống bằng cách tạo cụm chồi từ mô sẹo + Để nhân giống, trong môi trường nuôi cấy thường bổ sung cytokinin, GA3 và các chất hữu cơ khác - Nhân giống in vitro Đây là giai đoạn... sinh dưỡng trong môi trường nuôi cấy mô sẹo [16] - Cytokinin 21 Cytokinin gồm Kinetin, IBA, Zeatin và 2-iP Ngư i ta biết rằng trong môi trường nuôi cấy, việc bổ sung cytokinin sẽ tạo điều kiện thuận lợi cho sự phân chia tế bào và hình thành chồi Cytokinin có vai trò trong sự tạo cơ quan thực vật, chúng kích thích mạnh mẽ sự thành lập chồi non, ngư c lại chúng là chất đối kháng với sự tạo rễ Cytokinin... khoa học - Kết quả nghiên cứu sẽ đưa ra được một quy trình nhân giống cây khoai lang Nhật bằng phương pháp in vitro Đánh giá được tác động của một số chất điều tiết sinh trưởng trong nhân giống khoai lang - Bổ sung nguồn tài liệu tham khảo cho công tác nghiên cứu, giảng dạy và sản xuất giống khoai lang Nhật 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Sản xuất được cây con sinh trưởng, phát triển tốt, đồng đều và sạch bệnh... được tách ra khỏi điều kiện in vitro Sự ra rễ phụ thuộc vào nhiều yếu tố: hàm lượng auxin nội sinh, tỷ lệ C/N, ánh sáng, sự trẻ hóa của mẫu, kiểu di truyền Ngư i ta thường bổ sung auxin để kích thích quá trình ra rễ in vitro - Chuyển cây con in vitro ra vườn ươm Đây là giai đoạn khó khăn nhất trong quá trình nhân giống vô tính Cây in vitro nuôi cấy trong điều kiện ổn định về dinh dưỡng, ánh sáng, nhiệt... từ môi trường có chất kích thích sinh trưởng nồng độ thấp sang môi trường có chất kích thích sinh trưởng nồng độ cao  Chuyển mẫu liên tục trong khoảng thời gian 2 – 4 tuần kể từ khi bắt đầu nuôi cấy thì một lượng lớn các hợp chất phenol sẽ không tích tụ  Tạo thể nhân giống in vitro: + Mẫu nuôi cấy được cấy trên môi trường chọn lọc đặc biệt nhằm mục đích tạo thể nhân giống in vitro Có hai thể nhân giống. .. giữa các giống Các nghiên cứu về cây khoai lang trên thế giới rất đa dạng và phong phú * Hướng nghiên cứu tạo cây khoai lang in vitro sạch virus [36], [37], [38]: Năm 1975, Alconero và cộng tác viên đã kết hợp phương pháp nuôi cấy đỉnh sinh trưởng và xử lý nhiệt để loại trừ virus cây khoai lang Đỉnh sinh trưởng có kích thước từ 0,4 - 0,8 mm được cấy trên môi trường MS, bổ sung kinetin và auxin (NAA,... và nhân giống khoai lang, Iftekhar Alam và cộng tác viên (2010) đã cho thấy hơn 75% tạo chồi khi sử dụng môi trường MS có bổ sung 2 mg/l KN và 0,5 mg/l GA 3 Và các chồi này hình thành trực tiếp thành cây mà không phát triển mô sẹo Theo tác giả, TDZ và BA làm cho chồi phát triển qua mô sẹo nên không dùng trong nuôi cấy đỉnh sinh trưởng [21] * Vi nhân giống: Nhân giống invitro giống khoai lang từ mô. .. khoai lang tím Nhật Bản Giống khoai lang tím Nhật là giống khoai lang mới, có nguồn gốc Nhật Bản Hiện nay giống khoai này đã được trồng trên nhiều vùng và cho kết quả cao như Đắc Nông, Đắc Lăk, Vĩnh Long, [27] Khoai lang Nhật Beniazuma là cây thân thảo, dạng dây leo, hình bò lan rộng, thân to mập, ít phân cành và có màu tím, lá hình tim màu xanh, ngọn và lá non màu xanh vàng Đầu ngọn màu tím thấy rõ, ... lang tím Nhật (Beniazuma) nhập nội phương pháp nuôi cấy mô in vitro Mục đích nghiên cứu đề tài Bằng phương pháp nuôi cấy mô xây dựng quy trình nhân giống khoai lang tím Nhật nhập nội, tạo giống. .. chồi từ mô sẹo + Để nhân giống, môi trường nuôi cấy thường bổ sung cytokinin, GA3 chất hữu khác - Nhân giống in vitro Đây giai đoạn quan trọng việc nhân giống trồng phương pháp nuôi cấy mô tế bào... thoái giống việc làm cần thiết 1.1.4 Vài nét giống khoai lang tím Nhật Bản Giống khoai lang tím Nhật giống khoai lang mới, có nguồn gốc Nhật Bản Hiện giống khoai trồng nhiều vùng cho kết cao Đắc Nông,