Môi trường nuôi cấy vi sinh vật Sự sinh trưởng quần thể vi khuẩn môi trường dinh dưỡng nhân tạo gọi nuôi cấy (cultivation) Một kiểu nuôi cấy chứa loại vi sinh vật gọi nuôi cấy khiết (pure culture) Nuôi cấy hỗn hợp (mixed culture) loại nuôi cấy chứa nhiều loại vi sinh vật Các bước cần thiết cho nuôi cấy vi sinh vật sau: - Chuẩn bị môi trường nuôi cấy cho phép vi sinh vật sinh trưởng tốt - Khử trùng môi trường để loại bỏ tất thể sống có bình nuôi cấy - Cấy vi sinh vật vào môi trường chuẩn bị Để nuôi cấy vi sinh vật, môi trường nuôi cấy phải chuẩn bị loại bình nuôi sử dụng phổ biến nhất, chẳng hạn ống nghiệm, bình tam giác, đĩa petri nồi lên men Có hai loại môi trường nuôi cấy chính: môi trường tự nhiên (dựa kinh nghiệm) môi trường tổng hợp (thành phần hóa học xác định) Nói chung, môi trường dinh dưỡng khác hình thái (dạng rắn lỏng) thành phần, tùy thuộc vào loại vi sinh vật nuôi cấy mục đích nuôi cấy Môi trường tự nhiên Là loại môi trường dựa sở kinh nghiệm, mà không dựa hiểu biết xác thành phần chất dinh dưỡng tác động chúng Môi trường tự nhiên thường chứa peptone, dịch chiết thịt bò, dịch chiết nấm men Khi sử dụng môi trường rắn, bổ sung tác nhân làm rắn vào môi trường gelatin agar Ví dụ môi trường rắn môi trường lỏng dùng cho sinh trưởng nhiều loại vi sinh vật dị dưỡng tương đối đơn giản, phổ biến canh dinh dưỡng (nutrient broth) agar dinh dưỡng (nutrient agar) Thành phần chúng sau: - Canh dinh dưỡng: g nước chiết thịt bò, g peptone, g dịch chiết nấm men nước bổ sung tới L - Agar dinh dưỡng: thành phần canh dinh dưỡng có thêm 15 g agar nước bổ sung tới L 2 Môi trường tổng hợp Môi trường chứa dung dịch pha loãng hóa chất tinh khiết, biết hợp chất hữu và/hoặc vô Chúng thường sử dụng cho mục đích nghiên cứu để sản xuất Môi trường đơn giản muối ammonium vô cộng với muối khoáng đường, phức tạp casein tinh bổ sung thêm vitamin, muối khoáng đường Khử trùng Môi trường dinh dưỡng thích hợp chọn để nuôi cấy loại vi sinh vật đặc biệt rót vào bình nuôi cấy Nếu sử dụng ống nghiệm bình tam giác, chúng phải úp nắp đậy thích hợp cho phép có trao đổi khí với khí ngăn cản thể ngoại lai rơi vào môi trường Các loại nắp khác dùng phòng thí nghiệm bao gồm: nút bông, bọt plastic, nắp vặn, nắp kim loại giấy nhôm Môi trường sau phải khử trùng để loại bỏ tất thể sống bình chứa môi trường Phương pháp khử trùng phổ biến khử trùng nước áp suất cao nồi khử trùng (autoclave) Nói chung, autoclave hoạt động áp suất 15 psi 121oC Thời gian khử trùng tùy thuộc vào chất nguyên liệu, loại bình chứa thể tích môi trường Ví dụ, ống nghiệm chứa môi trường lỏng khử trùng từ 15-20 phút 121oC 4 Nuôi cấy Nuôi cấy tiếp mẫu (vi sinh vật) vào bình chứa môi trường dinh dưỡng vô trùng Sự tiếp mẫu nuôi cấy môi trường rắn có agar thực que cấy có vòng kim loại đầu (metal wire loop) khử trùng nhanh trước sử dụng cách đốt nóng đèn cồn Cấy chuyển nuôi cấy lỏng thường thực Pasteur pipette Sự tiếp mẫu thường tiến hành tủ cấy vô trùng (laminar flow cabinet) để giảm thiểu nguy nhiễm bẩn Điều quan trọng phải nắm vững kỹ thuật hút pipette thích hợp cho việc tiếp mẫu lấy mẫu trình nuôi cấy  ... môi trường Ví dụ, ống nghiệm chứa môi trường lỏng khử trùng từ 15-20 phút 121oC 4 Nuôi cấy Nuôi cấy tiếp mẫu (vi sinh vật) vào bình chứa môi trường dinh dưỡng vô trùng Sự tiếp mẫu nuôi cấy môi. .. chiết nấm men Khi sử dụng môi trường rắn, bổ sung tác nhân làm rắn vào môi trường gelatin agar Ví dụ môi trường rắn môi trường lỏng dùng cho sinh trưởng nhiều loại vi sinh vật dị dưỡng tương đối... phức tạp casein tinh bổ sung thêm vitamin, muối khoáng đường Khử trùng Môi trường dinh dưỡng thích hợp chọn để nuôi cấy loại vi sinh vật đặc biệt rót vào bình nuôi cấy Nếu sử dụng ống nghiệm bình