BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Võ Ngô Thị Lưu Ngọc Giàu SO SÁNH HIỆU QUẢ ĐỰC HÓA CÁ BẢY MÀU (Poecilia reticulata Peters, 1860) BẰNG METHYLTESTOSTERONE VÀ SPIRONOLACTONE LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh - 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Võ Ngô Thị Lưu Ngọc Giàu SO SÁNH HIỆU QUẢ ĐỰC HÓA CÁ BẢY MÀU (Poecilia reticulata Peters, 1860) BẰNG METHYLTESTOSTERONE VÀ SPIRONOLACTONE Chuyên ngành : Mã số : Sinh học thực nghiệm 60 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN TƯỜNG ANH Thành phố Hồ Chí Minh - 2013 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan luận văn công trình nghiên cứu khoa học Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực theo thực tế ghi nhận chưa công bố công trình nào! TÁC GIẢ LUẬN VĂN Võ Ngô Thị Lưu Ngọc Giàu LỜI CẢM ƠN Sau thời gian dài học tập nghiên cứu, hoàn thành luận văn Trong suốt trình thực luận văn nhận giúp đỡ quan tâm động viên nhiều cá nhân tập thể Trước hết, xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Tường Anh tận tình hướng dẫn, truyền đạt nhiều kiến thức chuyên môn giúp hoàn thành luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn vị Phó giáo sư, Tiến sĩ Hội đồng đọc góp ý cho luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn quý Thầy, Cô Khoa Sinh học, Phòng Sau đại học Trường Đại học Sư Phạm Tp Hồ Chí Minh, Sở giáo dục đào tạo Tây Ninh, Ban giám hiệu đồng nghiệp Trường THPT Tây Ninh tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian học tập thực luận văn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân bạn bè bên cạnh động viên, giúp đỡ hoàn thành khóa học TP Hồ Chí Minh, ngày tháng 10 năm 2013 TÁC GIẢ LUẬN VĂN Võ Ngô Thị Lưu Ngọc Giàu MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan T Lời cảm ơn T 1T 1T Danh mục chữ viết tắt T Danh mục hình T 1T 1T Danh mục bảng T 1T MỞ ĐẦU T 1T Chương TỔNG QUAN T 1T 1.1 Các đặc điểm sinh học cá Bảy màu .4 T T 1.1.1 Nguồn gốc T 1T 1.1.2 Đặc điểm hình thái T 1T 1.1.3 Môi trường sống T 1T 1.1.4 Dinh dưỡng T 1T 1.1.5 Đặc tính sinh sản T 1T 1.2 Điều khiển giới tính cá Bảy màu Poecilia reticulata .7 T T 1.2.1 Nguyên lý kiểm soát giới tính cá T T 1.2.2 Ứng dụng hormon sinh dục để điều khiển giới tính cá Bảy màu 10 T T 1.2.3 Một số công trình nghiên cứu sử dụng hormon gây đực hóa cá Bảy màu 14 T T 1.2.4 Ý nghĩa việc điều khiển giới tính cá Bảy màu 14 T T 1.2.5 Tổng quan hóa chất thí nghiệm .15 T T Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 T T 2.1 Thời gian, địa điểm vật liệu nghiên cứu 21 T T 2.1.1 Thời gian nghiên cứu 21 T 1T 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 21 T 1T 2.1.3 Vật liệu nghiên cứu 21 T 1T 2.2 Phương pháp nghiên cứu 22 T 1T 2.2.1 Thiết bị, dụng cụ nuôi 22 T 1T 2.2.2 Phương pháp đực hóa cá Bảy màu Poecilia reticulata MT SP 23 T T 2.2.3 Bố trí thí nghiệm 26 T 1T 2.2.4 Phương pháp chăm sóc cá thời gian thí nghiệm 28 T T 2.3 Phương pháp phân biệt đực .30 T T 2.4 Phương pháp thu kết xử lý số liệu 31 T T 2.4.1 Thu kết 31 T 1T 2.4.2 Xử lý số liệu 31 T 1T Chương KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 33 T T 3.1 Kết nghiên cứu 33 T 1T 3.1.1 Tỷ lệ đực tự nhiên cá Bảy màu 33 T T 3.1.2 Nhận dạng cá đực XX 35 T T 3.1.3 Kết thu qua thí nghiệm đực hóa cá Bảy màu Poecilia reticulata T MT SP 41 1T 3.2 Bàn luận .43 T 1T 3.2.1 Ảnh hưởng liều lượng steroid (MT, SP) lên trình đực hóa 43 T T 3.2.2 Ảnh hưởng loại steroid lên trình đực hóa 51 T T 3.2.3 So sánh hiệu đực hóa loại steroid hiệu thí nghiệm 57 T T KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 T T TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 T PHỤ LỤC T 1T 1T DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT MT : Methyltestosterone SP TN1 : Spironolactone : Thí nghiệm cho cá mẹ mang thai ăn phần có trộn MT, SP TN2 MTH1 : Thí nghiệm ngâm cá bột nước có pha MT, SP : nghiệm thức trộn MT Hà Lan với liều 325 mg/kg thức ăn MTH2 : nghiệm thức trộn MT Hà Lan với liều 350 mg/kg thức ăn MTT1 MTT2 SP1 : nghiệm thức trộn MT Trung Quốc với liều 325 mg/kg thức ăn : nghiệm thức trộn MT Trung Quốc với liều 350 mg/kg thức ăn : nghiệm thức trộn SP với liều 500 mg/kg thức ăn SP2 ĐCE MTHn1 MTHn2 MTTn1 MTTn2 SPn1 SPn2 ĐCEn ĐC1 ĐC2 EU Nxb Tp USD mg kg pH % & C ♂ ♀ : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : P P nghiệm thức trộn SP với liều 700 mg/kg thức ăn nghiệm thức đối chứng thức ăn có trộn ethanol nghiệm thức pha MT Hà Lan với liều mg/lít nước xử lý nghiệm thức pha MT Hà Lan với liều mg/lít nước xử lý nghiệm thức pha MT Trung Quốc với liều mg/lít nước xử lý nghiệm thức pha MT Trung Quốc với liều mg/lít nước xử lý nghiệm thức pha SP với liều mg/lít nước xử lý nghiệm thức pha SP với liều 10 mg/lít nước xử lý nghiệm thức pha đối chứng ngâm nước có pha ethanol nghiệm thức pha đối chứng bình thường (không steroid, không ethanol) nghiệm thức đối chứng thực tế Tổ chức liên minh châu Âu Nhà xuất Thành phố đô la Mỹ miligam kilôgam độ chua (độ axít) phần trăm độ C đực DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cá Bảy màu Poecilia reticulata đực .6 Hình 1.2 Cá Bảy màu Poecilia reticulata .6 Hình 1.3 Sơ đồ hình thành giới tính động vật có xương sống Hình 1.4 Phản ứng thơm hoá hormon sinh dục 13 Hình 1.5 Công thức cấu tạo Methyltestosterone 15 Hình 1.6 Sản phẩm MT Hà Lan 17 Hình 1.7 Sản phẩm MT Trung Quốc 17 Hình 1.8 Công thức cấu tạo Spironolactone 18 Hình 1.9 Hộp thuốc Verospiron có chứa hoạt chất Spironolactone 19 Hình 2.1 Các cặp cá Bảy màu Poecilia reticulata minơ (bên trái) da T T T T T T T T T T T T T T T T T T T rắn (bên phải) 21 Hình 2.2 Thức ăn chế biến có trộn steroid 23 Hình 2.3 Những dụng cụ dùng làm thí nghiệm ngâm cá bột 26 Hình 2.4 Các bể kính nuôi cá bố mẹ chậu xi măng nuôi cá 28 Hình 3.1 Cá Bảy màu đực XY với tính trạng cđđ đxl 35 Hình 3.2 Cá Bảy màu đực XY bình thường (cá minơ) 36 Hình 3.3 Cá Bảy màu XX trước sau ăn thức ăn có trộn steroid T T T T T T T T T T T (cá minơ) .36 1T Hình 3.4 Cá Bảy màu đực XX (cá minơ) 37 Hình 3.5 Cá Bảy màu đực XY bình thường (cá da rắn) .38 Hình 3.6 Cá Bảy màu XX trước sau ăn thức ăn có trộn steroid T T T T T (cá da rắn) 39 1T Hình 3.7 Cá Bảy màu đực XX (cá da rắn) 39 Hình 3.8 Đàn cá cá mẹ sau ăn thức ăn có trộn steroid (cá T T T minơ) 40 1T Hình 3.9 T Đàn cá cá mẹ sau ăn thức ăn có trộn steroid (cá da rắn) .40 1T Hình 3.10 Tỷ lệ cá sống đến thành thục nghiệm thức TN1 51 Hình 3.11 Tỷ lệ cá sống đến thành thục nghiệm thức TN2 52 Hình 3.12 Tỷ lệ đực nghiệm thức TN1 .52 Hình 3.13 Tỷ lệ đực nghiệm thức TN2 53 Hình 3.14 Tỷ lệ đực hóa nghiệm thức TN1 54 Hình 3.15 Tỷ lệ đực hóa nghiệm thức TN2 54 Hình 3.16 Hiệu suất đực hóa nghiệm thức TN1 55 Hình 3.17 Hiệu suất đực hóa nghiệm thức TN2 56 Hình 3.18 So sánh hiệu suất đực hóa thí nghiệm 57 T T T T T T T T T T T T T T T T T T DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Lịch sử chuyển đổi giới tính cá (Pandian Sheela (1995) 11 Bảng 3.1 Tỷ lệ đực tỷ lệ sống hệ mà bố mẹ T T T nuôi bình thường 34 T Bảng 3.2 Các tiêu đánh giá nghiệm thức TN1 41 Bảng 3.3 Các tiêu đánh giá nghiệm thức TN2 42 Bảng 3.4 Tỷ lệ cá sống (%) cá sau đẻ nghiệm thức TN1 43 Bảng 3.5 Tỷ lệ cá sống (%) cá bột sau ngâm cá bột nghiệm T T T T T T T thức TN2 44 1T Bảng 3.6 Tỷ lệ cá sống (%) sau 90 ngày tuổi nghiệm thức TN1 45 Bảng 3.7 Tỷ lệ cá sống (%) sau 90 ngày tuổi nghiệm thức TN2 45 Bảng 3.8 Tỷ lệ đực (%) nghiệm thức TN1 46 Bảng 3.9 Tỷ lệ đực (%) nghiệm thức TN2 47 Bảng 3.10 Tỷ lệ đực hóa (%) nghiệm thức TN1 48 Bảng 3.11 Tỷ lệ đực hóa (%) nghiệm thức TN2 49 Bảng 3.12 Hiệu suất đực hóa (%) nghiệm thức TN1 50 Bảng 3.13 Hiệu suất đực hóa (%) nghiệm thức TN2 50 Bảng 3.14 Đơn giá loại steroid 58 Bảng 3.15 Chi phí cho thí nghiệm 58 Bảng 3.16 Chi phí cho thí nghiệm 59 T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T PHỤ LỤC Bảng phụ lục 1: Tác dụng số loại hormon lên tuyến sinh dục non cá bảy màu Lebistes reticulatus [12] Hormon Liều Cách đưa Thời gian lượng vào xử lý Hiệu Theo Miyamori, 1959 , 1964 Estradiol 100 – Hòa tan 300mcg/ môi g trường 80 ngày từ Ức chế tuyến sinh sinh dục Tái biệt hóa Estipil estradiol 128,7mc g/g Cho ăn 80 ngày từ tuyến sinh dục sinh đực di truyền Theo Miyamori, 1961 Hình thành tuyến sinh dục lẫn lộn Methyltestosterone 75 mcg/g Cho ăn 30 – 40 ngày di từ sinh truyền, đực thúc đẩy trình tạo tinh Hormon Liều Cách đưa Thời gian lượng vào xử lý Hiệu Theo Dzwillo, 1962 Dung dịch ml Methyltestosterone mcg/g cồn propil nước Tác dụng lên Trong trường hợp thay đổi có thai (24 giới tính giờ) non di truyền Theo Eversole, 1939 Từ tuần 0,03 Ức chế tạo Testosteron mcg/g Cho ăn đến tháng trứng propionate 0,5 ngày Từ đến 3,5 Làm trứng tiêu đi, mcg/g tháng tiêu phôi Theo Eversole, 1941 Testosteron propionate (cái) Pregninolon (đực) Ức chế buồng trức 0,025 mcg/g Tiêm cá tiêm với dầu Từ đến di tuần, tiêm truyền Thay đổi hàng ngày tuyến tinh đực di truyền Theo Mohsen, 1958 Pregninolon 0,03 0,015 mcg/g Cho nước vào lần tuần Ở di truyền hịnh thành tuyến sinh dục lẫn lộn (mức độ khác nhau) Bảng phụ lục 2: Một số trường hợp đổi giới tính cá bảy màu Poecilia reliculata hormon (Kavumopurah & Pandia, 1993) Loại hormon Liều lượng (mg/kg thức ăn) 19-Nor-ethyltestosteron 300 17 α- Ethynyltestosteron 500 Androstenedion 200 17 α-Ethynylestradiol 200 17 α-Ethynylestradiol 250 Diethylstilbestrol 300 Thời gian xử lý Ngày tuổi Thời lượng (ngày) Cá mẹ mang – 10 ngày thai trước đẻ Cá mẹ mang – 10 ngày thai trước đẻ Cá mẹ mang – 10 ngày thai trước đẻ Cá mẹ mang – 10 ngày thai trước đẻ Cá mẹ mang – ngày thai trước đẻ Cá mẹ mang – 10 ngày thai trước đẻ Tác dụng Đực hóa Đực hóa Đực hóa Cái hóa Cái hóa Cái hóa Bảng phục lục 3: Một số trường hợp đổi giới tính cá bảy màu Poecilia reticulata hormon (Nguyễn Tường Anh & Lâm Minh Trí, 1997) Liều Loại hormon lượng (mg/kg thức ăn) Estradiol propionate Thời gian xử lý 400 Diethylstilbestrol 300 Methyltestosterone 250 Ethylnylestradiol 250 Ngày tuổi Thời lượng Tác dụng (ngày) Cá mẹ mang – ngày thai trước đẻ Cá mẹ mang – 10 ngày thai trước đẻ Cá mẹ mang – 12 ngày thai trước đẻ Cá mẹ mang – 10 ngày thai trước đẻ Cái hóa Cái hóa Đực hóa Cái hóa Bảng phụ lục 4: Một số trường hợp đổi giới tính họ Poeciliidae hormon (Pandian & Sheela, 1995) Liều lượng (mg/kg thức ăn) Tác dụng Androstenedione (tự nhiên) 400 Đực hóa 19-nor-ethynylstestosterone 300 Đực hóa 17 α-methyltestosterone 400 Đực hóa 17 β-Estradiol 400 Cái hóa 50 – 100 Cái hóa Loại hormon Stilbesterol Một số hình ảnh liên quan đến trình thí nghiệm Toàn cảnh nơi thực thí nghiệm đề tài Lu chứa cá Bảy màu dự trữ cho thí nghiệm Xô nhựa lớn chứa nước nuôi cá Kiểm tra pH nhiệt độ nước nuôi cá Máy lọc nước bể kính Cá mẹ sau thời gian dài ăn steroid (MT, SP) cá Những đàn cá Bảy màu cá mẹ dạng khác thí nghiệm để kiểm tra kiểu hình (phenotype) chúng Một số phenotype cá Bảy màu Poecilia reticulata sưu tầm [...]... cá đực thường linh hoạt hơn cá cái Với những ưu thế nổi bật về hình thái của mình mà cá Bảy đực thường là sự lựa chọn đặc biệt của người ni và chơi cá cảnh Nhu cầu về cá Bảy màu, nhất là cá đực trên thị trường là rất lớn và việc xuất khẩu cá Bảy màu rất có tiềm năng phát triển [3] 6 Hình 1.1 Cá Bảy màu Poecilia reticulata đực Hình 1.2 Cá Bảy màu Poecilia reticulata cái 7 1.1.3 Mơi trường sống Cá Bảy. .. cho các nhà điều khiển giới tính cá, sẽ giảm được khoản chi phí lớn cho q trình nghiên cứu, và thậm chí người chơi cá cảnh cũng có thể điều khiển giới tính cá theo ý thích của mình tại nhà Để xác định được hàm lượng tối ưu của một vài chất phổ biến có hiệu quả đực hóa cá Bảy màu tốt nhất, nên đề tài So sánh hiệu quả đực hóa cá Bảy màu Poecilia reticulata Peters, 1860 bằng Methyltestosterone và Spironolactone ... hiện 2 Mục tiêu nghiên cứu So sánh hiệu quả của Methyltestosterone và Spironolactone được dùng để gây đực hóa ở cá Bảy màu Poecilia reticulata 3 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu Cá Bảy màu Poecilia reticulata ở các trại cá giống, cá cảnh trong địa bàn tỉnh Tây Ninh 3 4 Nhiệm vụ nghiên cứu Xác định hàm lượng tối ưu của Methyltestosterone và Spironolactone trong khẩu phần cho cá mẹ đang mang thai ăn 5... sắc, còn cá cái thường màu xám hoặc khơng màu Thực tế có rất nhiều nòi cá Bảy màu khác nhau về màu sắc thân, vây và hình dáng Đây là một đặc điểm rất nổi bật về hình thái cá Bảy màu, tạo nên sự đa dạng, phong phú trong các nòi cá Bảy màu khác nhau Cá trưởng thành có kích thước khoảng 3-6 cm, thân dài, hình tròn hoặc oval, đầu hơi nhọn, cá đực có kích thước nhỏ hơn cá cái Màu nền của thân cá thường... nâu hoặc xám, cá cái có màu thân sáng hơn Vây lưng và vây đi màu sắc sặc sỡ Cá cái to và trơng đẫy đà hơn cá đực, nhất là khi mang thai thì bụng rất to, dễ nhận biết Cá cái trưởng thành có chiều dài khoảng 4–6 cm, khơng có màu sắc thân nổi bật, chỉ có đi thường có màu (đỏ, xanh, vàng…), đơi khi khơng màu Cá đực trưởng thành nhỏ hơn cá cái, dài khoảng 3–3,5 cm Màu sắc thân, hình dạng và màu sắc vây rất... lưng và đi, cá Bảy màu được người ni cá cảnh chú ý và từ những năm 50, nghề ni cá Bảy màu thương phẩm bắt đầu Bảy màu là lồi cá cảnh được phổ biến khắp nơi Singapore, nước có nền cơng nghiệp ni và xuất khẩu cá cảnh nổi tiếng nhất thế giới trong những năm gần đây cũng sản xuất rất nhiều cá Bảy màu (Phang và Fernando, 1990) [2] 1.1.2 Đặc điểm hình thái Trong tự nhiên, cá Bảy màu đực có sự đa hình về màu. .. cứu Cá Bảy màu giống (cá bố mẹ) được lựa chọn một cách cẩn thận từ các trại cá giống và cửa hàng cá cảnh trong địa bàn thị xã Tây Ninh (tỉnh Tây Ninh) Chúng tơi đã cùng lúc tiến hành thí nghiệm trên 2 dòng cá Bảy màu Poecilia reticulata: Cá “minơ” (tên thơng dụng của đa số người ni cá cảnh) có đi đỏ hoặc đi xanh Cá da rắn (còn gọi là cá da beo) có đi da rắn màu đỏ hoặc vàng Hình 2.1 Các cặp cá Bảy màu. .. tốt Đối với cá Bảy màu Poecilia reticulata, việc chọn cá bố mẹ thơng qua các đặc điểm hình thái là một điều rất thuận lợi Các tính trạng này rất dễ quan sát được bằng mắt thường Tuy nhiên, trong các thí nghiệm của chúng tơi, để đảm bảo tính chính xác, chúng tơi chỉ xác định cá đực, cái khi cá đã trưởng thành (60 – 90 ngày tuổi) 2.2.2.2 Đực hóa cá Bảy màu Poecilia reticulata bằng cách cho cá mẹ mang... đến khi phân biêt được đực cái (khoảng 90 ngày tuổi) 2.2.2.3 Đực hóa cá Bảy màu Poecilia reticulata bằng cách ngâm cá bột có pha MT và SP Đây là lần đầu tiên thử nghiệm đực hóa cá Bảy màu bằng cách ngâm cá bột trong nước có pha MT, SP trong túi PE có bổ sung O 2 trong 2 giờ, sau khi tham R R 25 khảo một số tài liệu liên quan, chúng tơi quyết định dùng liều 4 và 5 mg MT/lít, 8 và 10 mg SP/lít cho thí... ở cá Bảy màu Điều đặc biệt thuận lợi khi đổi giới tính cá Bảy màu thuộc thế hệ con bằng hormon là có thể dùng các chất này trộn vào thức ăn cho cá mẹ đang mang thai 15 Qua đó người ta có thể tạo ra những thế hệ cá Bảy màu gồm tồn đực là những cá cảnh đẹp hơn và có giá trị thương mại cao hơn cá cái Những thực nghiệm về điều khiển giới tính và cho phép giao phối dựa trên những dấu di truyền màu sắc cá ... GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Võ Ngơ Thị Lưu Ngọc Giàu SO SÁNH HIỆU QUẢ ĐỰC HĨA CÁ BẢY MÀU (Poecilia reticulata Peters, 1860) BẰNG METHYLTESTOSTERONE VÀ SPIRONOLACTONE. .. nên đề tài So sánh hiệu đực hóa cá Bảy màu Poecilia reticulata Peters, 1860 Methyltestosterone Spironolactone chọn tiến hành thực Mục tiêu nghiên cứu So sánh hiệu Methyltestosterone Spironolactone. .. Trong bể ni, cá đực thường linh hoạt cá Với ưu bật hình thái mà cá Bảy đực thường lựa chọn đặc biệt người ni chơi cá cảnh Nhu cầu cá Bảy màu, cá đực thị trường lớn việc xuất cá Bảy màu có tiềm