ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NGUYỄN THỊ THÙY THƢƠNG , CLOPHENINAMIN MALEAT TRONG THUỐC COLDACMIN HIỆU NĂNG CAO (HPLC) VÀ PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ PHÂN TỬ (UV-VIS) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC VẬT CHẤT THÁI NGUYÊN - 2015 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NGUYỄN THỊ THÙY THƢƠNG , CLOPHENINAMIN MALEAT TRONG THUỐC COLDACMIN HIỆU NĂNG CAO (HPLC) VÀ PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ PHÂN TỬ (UV-VIS) Mã số: 60.44.01.18 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC VẬT CHẤT Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS MAI XUÂN TRƢỜNG THÁI NGUYÊN - 2015 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn/ LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực Những kết luận luận văn chưa công bố công trình khác Thái Nguyên, tháng năm 2015 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Thùy Thương i LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập, nghiên cứu thực luận - , tác giả nhận nhiều quan tâm, động viên, hướng dẫn giúp đỡ thầy giáo, cô giáo, bạn bè gia đình Tác giả bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: - - Nguyên, thầy cô giáo tham gia giảng dạy cung cấp kiến thức giúp tác giả suốt trình học tập nghiên cứu Đặc biệt tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo PGS.TS Mai Xuân Trường người tận tình hướng dẫn bảo giúp đỡ suốt trình nghiên cứu, thực hoàn thành luận văn Cuối tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè người bên tác giả, động viên khuyến khích tác giả trình thực đề tài nghiên cứu Trong trình thực luận văn này, , tác giả cố gắng tránh khỏi thiếu sót Tác giả mong nhận ý kiến đóng góp, xây dựng chân thành từ thầy giáo, cô giáo bạn đọc Xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng năm 2015 Tác giả Nguyễn Thị Thùy Thƣơng ii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan paracetamol clopheninamin maleat 1.1.1 Paracetamol 1.1.2 Clopheninamin maleat 1.2 Các định luật sở hấp thụ ánh sáng 10 1.2.1 Định luật Bughe - Lămbe - Bia 10 1.2.2 Những nguyên nhân làm cho hấp thụ ánh sáng dung dịch không tuân theo định luật Bughe - Lămbe - Bia 11 1.2.3 Định luật cộng tính 13 1.3 Một số phương pháp xác định đồng thời cấu tử 14 1.3.1 Phương pháp Vierordt 14 1.3.2 Phương pháp phổ đạo hàm 16 1.3.3 Phương pháp lọc Kalman 18 1.4 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 19 1.4.1 Nguyên tắc phương pháp HPLC 19 1.4.2 Các đại lượng đặc trưng trình sắc kí 22 1.4.3 Sơ đồ máy HPLC 25 1.4.4 Kết xác định số chất theo phương pháp HPLC 26 iii Chƣơng THỰC NGHIỆM 27 2.1 Nội dung nghiên cứu 27 2.1.1 Phương pháp HPLC 27 2.1.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 27 2.2 Phương pháp nghiên cứu 28 2.2.1 Phươ 2.2.2 Phương 28 28 2.3 Đánh giá độ tin cậy quy trình phân tích 28 2.3.1 Giới hạn phát (LOD) 28 2.3.2 Giới hạn định lượng (LOQ) 29 2.3.3 Đánh giá độ tin cậy phương pháp 29 2.3.4 Đánh giá kết phép phân tích theo thống kê 30 2.4 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 31 2.4.1 Thiết bị 31 2.4.2 Dụng cụ 31 2.4.3 Hóa chất 31 u 32 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Phương pháp HPLC 34 3.1.1 Xác định điều kiện tối ưu cho phép xác định PRC CPM phương pháp HPLC 34 3.1.2 Đánh giá phương pháp định lượng 37 3.1.3 Xác định PRC CPM thuốc COLDACMIN 41 3.1.4 Xác định PRC CPM thuốc PACEMIN 42 3.1.5 Khảo sát độ phép xác định PRC, CPM theo phương pháp thêm chuẩn 43 iv 3.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 45 3.2.1 Khảo sát phổ hấp thụ phân tử paracetamol clopheninamin maleat 45 3.2.2 Kiểm tra phụ thuộc độ hấp thụ quang PRC CPM vào pH 46 3.2.3 Kiểm tra phụ thuộc độ hấp thụ quang PRC CPM theo thời gian 46 3.2.4 Khảo sát phụ thuộc độ hấp thụ quang PRC CPM theo nhiệt độ 47 3.2.5 Khảo sát khoảng tuyến tính tuân theo định luật Bughe - Lămbe - Bia PRC CPM Xác định số LOD LOQ 48 3.2.6 Khảo sát đánh giá độ tin cậy phương pháp nghiên cứu mẫu tự pha 52 3.2.7 Xác định hàm lượng PRC CPM thuốc COLDACMIN eo phương pháp thêm chuẩn 54 3.2.8 Xác định hàm lư ương pháp thêm chuẩn 56 KẾT LUẬN 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 v DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Tiếng việt Tiếng Anh Viết tắt Paraxetamon Paracetamol PRC Clopheninamin maleat Chlorpheniramine maleate CPM Giới hạn phát Limit of Detection LOD Giới hạn định lượng Limit of Quantity LOQ Sai số tương đối Relative Error Độ lệch chuẩn Standard Deviation Phương pháp sắc ký lỏng hiệu High Performance Liquid cao Chromatography iv RE S hay SD HPLC DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Giá trị đại lượng đặc trưng 38 Bảng 3.2 Kết khảo sát thời gian lưu 38 Bảng 3.3 Kết khảo sát diện tích pic 38 Bảng 3.4 Mối tương quan nồng độ diện tích pic PRC CPM 39 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ lặp lại 41 Bảng 3.6 Kết phân tích thuốc COLDACMIN 42 Bảng 3.7 Kết phân tích thuốc PACEMIN 43 Bảng 3.8 Kết khảo sát độ 44 Bảng 3.9 Độ hấp thụ quang PRC CPM Bảng 3.10 S 46 PRC CPM theo thời gian 47 Bảng 3.11 S 47 Bảng 3.12 ộ 49 Bảng 3.13 50 Bảng 3.14 S độ 51 Bảng 3.15 Kết tính LOD LOQ CPM 52 3.16 53 3.17 p 53 Bảng 3.18 Kết tính nồng độ, sai số PRC CPM mẫu thuốc COLDACMIN 55 Bảng 3.19 Kết xác định độ thu hồi PRC CPM mẫu thuốc COLDACMIN 56 Bảng 3.20 Kết tính nồng độ, sai số PRC CPM mẫu thuốc PACEMIN 57 Bảng 3.21 Kết xác định độ thu hồi PRC CPM mẫu thuốc PACEMIN 58 v DANH MỤC CÁC HÌNH 1.1 Mô hình hoạt động lọc Kalman 18 Hình 1.2 Thời gian lưu cấu tử phân tích 22 Hình 1.3 Hệ thống máy HPLC 25 Hình 3.1 Sắc ký đồ PRC (325 µg/mL) 35 Hình 3.2 Sắc ký đồ CPM (10 µg/mL) 35 Hình 3.3 Sắc ký đồ CPM (1), PRC (2) 37 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính diện tích pic PRC nồng độ 40 Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính diện tích pic CPM nồng độ 40 3.6 Phổ hấp thụ dung dịch chuẩn PRC (1), CPM (2) 45 Hình 3.7 Phổ hấp thụ quang PRC nồng độ 0,2 40,0 g/mL 48 3.8 49 Hình 3.9 Phổ hấp thụ quang CPM nồng độ 0,2 40 g/mL 50 Hình 3.10 Đường hồi quy tuyến tính biểu diễn phụ thuộc độ hấp thụ quang A vào nồng độ CPM 51 vi 3.12 3.8 0,2 40,0 µg/mL =0,9998 (B=0,0065) 0,2 µg/mL (A= 0,015 0,2 1µg/mL ng 3.13 Bảng 3.13 B SD LOD LOQ 0,0065 6,1.10-5 0,028 ( g/mL) 0,094 ( g/mL) : 0,1M 0,2 40µg/mL, giá trị LOD 0,028 ( g/mL) LOQ 0,094 ( g/mL) 3.2.5.3 Khảo sát khoảng tuyến tính CPM Pha dãy dung dịch CPM có nồng độ tăng dần từ 0,2 40 g/mL Tiến hành - hình 3.9 Hình 3.9 Phổ hấp thụ quang CPM nồng độ 0,2 50 40 g/mL Bảng 3.14 dung dịch CPM nồng độ 0,2 - 40 g/mL bước sóng cực đại 264 nm 3.14 Bảng 3.14 PM theo nồng độ CCPM( g/mL) 0,2 0,6 1,0 2,0 5,0 A(λ = 264 nm) 0,004 0,018 0,022 0,051 0,109 CCPM( g/mL) 8,0 10,0 20,0 30,0 40,0 A(λ = 264 nm) 0,158 0,201 0,389 0,597 0,795 3.14 3.10 Hình 3.10 Đường hồi quy tuyến tính biểu diễn phụ thuộc độ hấp thụ quang A vào nồng độ CPM Nhận xét: 3.14, hình 3.10 , khoảng nồng độ từ 0,2 ÷ 40 định luật Bughe - Lămbe - Bia khoảng nồng độ từ 0,2 51 40 g/mL 3.2.5.4 Xác định LOD 3.14 0,2 3.10 40,0 (R = 0,9997); (B = 0,0044 0,2 CPM từ 0,2 1,0 th 3.15 Bảng 3.15 Kết tính LOD LOQ CPM B SD LOD LOQ 0,0044 4,7.10-5 0,032 ( g/mL) 0,107 ( g/mL) : Khoảng tuyến tính CPM môi trường HCl 0,1M 0,2 40,0 g/mL, giá trị LOD 0,032 ( g/mL) LOQ 0,107 ( g/mL) 3.2.6 Khảo sát đánh giá độ tin cậy phương pháp nghiên cứu mẫu tự pha * CPM /CPRC 1/150, thể tích VPRC VCPM lấy bảng 3.15 định mức dung dịch HCl 0,1M bình định mức 25 mL sóng 210 290 nm; 0,5 nm lấy giá trị Từ số liệu đo quang tiến hành tính hàm lượng PRC, CPM theo chương trình lọc Kalman [18 CPM trình bày bảng 3.16 3.17 Trong bảng 3.16 3.17 thì: VCPM(1), VCPM(2), VCPM(3), VCPM(4) thể tích dung dịch CPM tương ứng với nồng độ 0,5 µg/mL, µg/mL, 2,5 µg/mL, 25 µg/mL 52 VPRC 25 µg/mL 3.16 Mẫu CCPM/CPRC CCPM CPRC VCPM(1) VCPM(2) VCPM(3) VCPM(4) VPRC (mL) (mL) (mL) (mL) (mL) 1/1 8,0 8,0 - - - 8,0 8,0 1/5 2,0 10,0 - - - 2,0 10,0 1/10 0,8 8,0 - - 8,0 - 8,0 1/20 0,4 8,0 - - 4,0 - 8,0 1/40 0,2 8,0 - 5,0 - - 8,0 1/60 0,1 6,0 - 2,5 - - 6,0 1/100 0,1 10,0 - 2,5 - - 10,0 1/150 0,05 7,5 2,5 - - - 7,5 3.17 8,02 RE% CCPM -0,125 RE% CPRC 0,250 1,99 10,01 -0,500 0,100 8,0 0,79 7,95 -1,250 -0,625 0,4 8,0 0,38 7,97 -5,000 -0,375 1/40 0,2 8,0 0,18 7,96 -10,000 -0,500 1/60 0,1 6,0 0,08 5,97 -20,000 -0,500 1/100 0,1 10,0 0,07 9,99 -30,000 -0,100 1/150 0,05 7,5 0,03 7,45 -40,000 -0,666 Mẫu CCPM/CPRC C0CPM C0PRC CCPM CPRC 1/1 8,0 8,0 7,99 1/5 2,0 10,0 1/10 0,8 1/20 53 C0PRC C0CPM (μ CPRC CCPM (μg/mL) hàm lượng PRC, CPM xác định theo phương pháp toán lọc kalman RE% CCPM RE% CPRC sai số phép xác định hàm lượng CPM PRC Nhận xét: Kết thu bảng 3.17 CPM cấu tử có nồng độ lớn PRC (nhỏ 1%) 3.2.7 Xác định hàm lượng PRC CPM thuốc COLDACMIN PRC CPM thuốc viên nén COLDACMIN sản xuất bởi: DHG PHARMA Công ty cổ phần dược Hậu Giang 288 Bis, Nguyễn Văn Cừ, P An Hòa, Q Ninh Kiều, TP Cần Thơ, Việt Nam; Số lô: 24-01-14; Ngày sản xuất: 20/1/2014; Hạn sử dụng: 20/1/2017 Thành phần theo công bố 325 mg PRC mg CPM viên - Xử lý mẫu thuốc: Cân 20 viên thuốc, tính khối lượng trung bình viên ( X = 0,3537g) Đem nghiền nhỏ thành bột mịn lấy xác lượng bột tương đương 1/10 viên (chứa 32,5 mg PRC 0,4mg CPM) hòa tan dung dịch HCl 0,1M sau rung siêu âm khoảng 15 phút Đem lọc, bỏ khoảng 40 mL dung dịch đầu, lấy mL dung dịch lọc đem định mức thành 100 mL thu dung dịch gốc chứa hàm lượng tương đương PRC 16,25 g/mL CPM 0,2 g/mL gọi dung dịch gốc - -VIS 1700 SHIMADZU khoảng bước s - 3.18 54 Bảng 3.18 Kết tính nồng độ, sai số PRC CPM mẫu thuốc COLDACMIN Mẫu C0PRC C0CPM CPRC CCPM 325 4,00 328,38 1,50 1,04 -62,50 325 4,00 327,28 8,73 0,70 118,42 325 4,00 327,11 10,23 0,65 155,88 325 4,00 325,65 8,85 0,20 121,42 325 4,00 324,81 7,50 -0,06 87,50 RE% CPRC RE% CCPM Trong đó: C0 hàm lượng PRC CPM (mg/viên) mẫu thuốc COLDACMIN C hàm lượng PRC CPM (mg/viên) tính toán theo phương pháp lọc kalman RE% sai số phép xác định hàm lượng PRC CPM Nhận xét: Qua bảng 3.17 nhận thấy xác định PRC hỗn hợp tương đối thuốc COLDACMIN cần phải sử dụng phương pháp thêm chuẩn thuốc PRC CPM sau pha loãng mục 3.2.7 Coldacmin PRC CPM Cân viên thuốc có khối lượng 0,3537g Đem nghiền nhỏ thành bột mịn thêm lượng PRC CPM bảng 3.19, hòa tan HCl 0,1M pha loãng Đo độ hấp thụ quang A, xác định nồng độ tính toán Kết thể bảng 3.19 55 Bảng 3.19 Kết xác định độ thu hồi PRC CPM mẫu thuốc COLDACMIN Mẫu C0PRC (mg/viên) C0CPM (mg/viên) CPRC (mg) CCPM (mg) CT(mg) Rev% 325 - 8,948 98,96 325 - 10 13,79 97,90 325 - 15 18,92 99,50 325 50 - 370,00 90,00 325 100 - 423,50 98,50 Trong đó: C0PRC C0CPM (mg/viên) hàm lượng PRC CPM thuốc COLDACMIN trước thêm chuẩn CPRC CCPM (mg/viên) hàm lượng PRC CPM xác định sau thêm chuẩn Rev(%) CPRC Rev(%) CCPM độ thu hồi PRC CPM Nhận xét: Qua bảng 3.19 cho thấy độ thu hồi PRC từ 99,7% đến 100,00% CPM từ 98,00% đến 100,66% Độ thu hồi PRC CPM mắc sai số nhỏ ([...]... trình sắc ký trong cột: Trong phương pháp HPLC các kỹ thuật tách thường sử dụng: Sắc ký hấp phụ pha thường; sắc ký hấp phụ pha đảo; sắc ký trao đổi ion, sắc ký ion, sắc ký cặp ion và sắc ký rây phân tử - Sắc ký hấp phụ pha thường: Pha tĩnh hạt xốp, phân cực, pha động dung môi không phân cực hay ít phân cực, kỵ nước Phương pháp được sử dụng tách các hợp chất hữu cơ không phân cực và ít phân cực có trong. .. phần của thuốc bằng các phương pháp hiện đại có độ chính xác cao ngày càng được quan tâm Nhiều phương pháp có độ lặp và độ chính xác cao đã được ứng dụng như: phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) và phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử (UVVIS) Sử dụng phương pháp trắc quang dùng phổ toàn phần kết hợp với kỹ thuật tính toán và ứng dụng phần mềm máy tính đã bước đầu được nghiên cứu và cho nhiều... 18 1.4 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Phương pháp này ra đời từ năm 1970 trên cơ sở phát triển và cải tiến từ phương pháp sắc ký cột cổ điển Khi đó nó có tên gọi là phương pháp sắc ký lỏng áp suất cao, ngày nay gọi là phương pháp sắc lý lỏng hiệu năng cao (HPLC) Hiện nay phương pháp HPLC ngày càng phát triển và hiện đại hoá cao nhờ sự phát triển nhanh chóng của ngành chế tạo máy phân tích Nó... paracetamol và clopheninamin maleat trong thuốc viên nén bằng cách đo độ hấp thụ quang ở các bước sóng 242 và 264 nm, còn một số tác giả khác đã xác định đồng thời axit salixylic và chloramphenilcol bằng cách đo độ hấp thụ quang ở các bước sóng 278 và 297 nm [2] Phương pháp Vierordt đơn giản, dễ thực hiện nhưng chỉ áp dụng được khi số cấu tử trong dung dịch hỗn hợp ít, phổ hấp thụ quang phân tử xen phủ... thấy phương pháp có độ tin cậy cao Phương pháp định lượng đồng thời paracetamol và axit mefenamic: phương pháp có độ chính xác cao (sai số tương đối 0,51% - 1,42%), độ đúng tốt (tỷ lệ thu hồi 98,16% - 99,16%) [16] Phương pháp định tính và định lượng đồng thời paracetamol và ibuprofen: phương pháp có độ lặp lại tốt (sai số tương đối 0,81% - 1,03%), độ đúng cao (tỷ lệ thu hồi 98,0% - 98,4%) [16] Phương pháp. .. chính xác, độ tin cậy của phép phân tích, phân tích nhanh, tiện lợi : paracetamol, clopheninamin maleat trong thuốc Coldacmin và Pacemin (HPLC) và phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử (UV-VIS)" 1 Chƣơng 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan về paracetamol và clopheninamin maleat 1.1.1 Paracetamol 1.1.1.1 Giới thiệu chung Paracetamol hay acetaminophen là thuốc có tác dụng hạ sốt và giảm đau, tuy nhiên không... trong thời gian đo Vì trong một mức độ nhất định độ hấp thụ quang A phụ thuộc vào nhiệt độ 1.2.3 Định luật cộng tính Định luật cộng tính là một sự bổ sung quan trọng cho các định luật hấp thụ ánh sáng vừa xét Định luật cộng tính là cơ sở định lượng cho việc xác định nồng độ của hệ trắc quang nhiều cấu tử Bản chất của định luật cộng tính là sự độc lập của đại lượng độ hấp thụ quang của một chất riêng... Phương pháp định lượng đồng thời paracetamol và cafein: phương pháp có độ lặp lại tốt (sai số tương đối 0,54% - 1,07%), độ đúng cao (tỷ lệ thu hồi 98,9% - 99,5%) [16] Phương pháp định lượng đồng thời paracetamol, phenylpropanolamin hidroclorit và clorphenylamin maleat: phương pháp có độ lặp lại cao (sai số tương đối của paracetamol là 0,47%; phenylpropanolamin hidroclorid là 0,67% và clophenylamin maleat. .. nước - Sắc ký hấp phụ pha đảo: Pha tĩnh là loại không phân cực, kỵ nước, pha động dung môi phân cực Phương pháp sử dụng tách và phân tích các chất không phân cực, ít phân cực và phân cực - Sắc ký trao đổi ion: Pha tĩnh có cấu tạo ion, phân cực, pha động dung dịch axít, bazơ, dung dịch đệm Phương pháp sử dụng tách các chất dạng ion hoặc phân ly thành ion Cơ chế tách theo phản ứng trao đổi ion - Sắc ký rây... nhiều trong các ngành kiểm nghiệm đặc biệt là ứng dụng cho ngành kiểm nghiệm thuốc, máy phân tích HPLC là công cụ đắc lực trong phân tích các thuốc đa thành phần cho phép định tính và định lượng Phương pháp này ngày càng được sử dụng rộng rãi và phổ biến vì nhiều lý do: có độ nhạy cao, khả năng định lượng tốt, thích hợp tách các hợp chất khó bay hơi hoặc dễ phân hủy nhiệt 1.4.1 Nguyên tắc của phương pháp ... có độ lặp độ xác cao ứng dụng như: phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử (UVVIS) Sử dụng phương pháp trắc quang dùng phổ toàn phần kết hợp với kỹ thuật... sát độ xác phương pháp - Khảo sát độ phương pháp Xác định đồng thời PRC, CPM thuốc COLDACMIN PACEMIN theo phương pháp HPLC 2.1.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử - Khảo sát toàn phổ từ 200... đảo; sắc ký trao đổi ion, sắc ký ion, sắc ký cặp ion sắc ký rây phân tử - Sắc ký hấp phụ pha thường: Pha tĩnh hạt xốp, phân cực, pha động dung môi không phân cực hay phân cực, kỵ nước Phương pháp