BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CHUYÊN NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM MEN CHỊU NHIỆT TỪ HOA QUẢ CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN CN PHẠM HỒNG QUANG LÊ PHƯƠNG THẢO MSSV: 311375 LỚP: VI SINH VẬT HỌC K37 Cần Thơ, Tháng 12/2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CHUYÊN NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM MEN CHỊU NHIỆT TỪ HOA QUẢ CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN CN PHẠM HỒNG QUANG LÊ PHƯƠNG THẢO MSSV: 311375 LỚP: VI SINH VẬT HỌC K37 Cần Thơ, Tháng 12/2014 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN (ký tên) (ký tên) CN Phạm Hồng Quang Lê Phương Thảo DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (ký tên) LỜI CẢM TẠ Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám hiệu Trường Đại học Cần Thơ, Ban Lãnh đạo Viên Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, quý thầy cô tận tình giảng dạy em thời gian học tập vừa qua Xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy Phạm Hồng Quang – người tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt để em thực luận văn tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn cô Ngô Thị Phương Dung anh Huỳnh Xuân Phong, Nguyễn Ngọc Thạnh, Bùi Hoàng Đăng Long – cán phòng thí nghiệm Công nghệ Sinh học Thực phẩm đóng góp ý kiến hỗ trợ em thực luận văn tốt nghiệp Xin cảm ơn gia đình, anh chị cán phòng thí nghiệm Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, Anh Chị học viên cao học tất bạn bè lớp Vi sinh vật học khóa 37 động viên, giúp đỡ em suốt thời gian qua Kính chúc Quý Thầy Cô nhiều sức khỏe, thành đạt nhiều lĩnh vực có cống hiến quý báu cho nghiệp giáo dục đào tạo Xin chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường Đại học Cần Thơ TÓM TẮT Nấm men vi sinh vật có ích với nhiều ứng dụng sản xuất thực phẩm lên men, sản phẩm công nghiệp chứa ethanol Khả chịu nhiệt lên men ethanol nhiệt độ cao đặc tính quan tâm nghiên cứu phát triển cho chủng nấm men Đề tài thực nhằm phân lập tuyển chọn chủng nấm men có khả chịu nhiệt, chịu ethanol lên men tốt từ hoa ăn Từ 13 mẫu hoa quả, 30 chủng nấm men phân lập, chủng có khả lên men đường saccharose maltose, 19 chủng có khả lên men maltose, chủng khả lên men saccharose maltose Hoạt tính urease phát chủng nấm men, chủng có phản ứng dương tính với thử nghiệm gelatinase Khả chịu ethanol chủng nấm men xác định: 18 chủng chịu nồng độ ethanol 9% chủng chịu nồng độ ethanol 12% (v/v) Thử nghiệm khả chịu nhiệt cho thấy 18 chủng phát triển 43°C Ba chủng nấm men CH, KV1 SĐ1 có khả chịu nhiệt, chịu ethanol lên men tốt chủng lại tuyển chọn khảo sát khả lên men môi trường rỉ đường mức nhiệt độ 30°C, 35°C, 37°C 39°C Thử nghiệm khả lên men ethanol dịch rỉ đường nhiệt độ cao xác định nhiệt độ lên men thích hợp cho chủng nấm men CH KV1 30 - 35°C chủng nấm men SĐ1 30°C Từ khóa: khả chịu nhiệt, khả chịu ethanol, lên men ethanol, nấm men chịu nhiệt Chuyên ngành Vi sinh vật học i Viện NC & PT CNSH Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường Đại học Cần Thơ MỤC LỤC PHẦN KÝ DUYỆT LỜI CẢM TẠ TÓM TẮT i MỤC LỤC ii DANH SÁCH BẢNG iv DANH SÁCH HÌNH v CÁC TỪ VIẾT TẮT vi CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược hoa 2.2 Giới thiệu chung nấm men 2.2.1 Đặc điểm nấm men 2.2.2 Hình dạng kích thước 2.3 Cấu tạo tế bào nấm men 2.4 Các trình sinh lí tế bào nấm men 2.4.1 Sinh dưỡng nấm men 2.4.2 Quá trình sinh trưởng phát triển 2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng nấm men 2.6 Vai trò ứng dụng nấm men 10 2.7 Nấm men chịu nhiệt 12 2.8 Một số chủng nấm men chịu nhiệt quan trọng 13 2.8.1 Nấm men Kluyveromyces spp 13 2.8.2 Nấm men Saccharomyces spp 14 2.8.3 Nấm men Candida spp 15 2.9 Sự lên men ethanol 15 Chuyên ngành Vi sinh vật học ii Viện NC & PT CNSH Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường Đại học Cần Thơ 2.9.1 Khái quát trình lên men ethanol 15 2.9.2 Cơ chế trình lên men 16 2.9.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình lên men 18 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 3.1 Phương tiện nghiên cứu 22 3.1.1 Thời gian địa điểm 22 3.1.2 Nguyên liệu 22 3.1.3 Thiết bị - dụng cụ hóa chất 22 3.2 Phương pháp 23 3.2.1 Phân lập chủng nấm men từ hoa ăn 23 3.2.2 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa nấm men 24 3.2.3 Khảo sát sơ hoạt tính lên men nấm men 27 3.2.4 Thử nghiệm khả chịu ethanol chủng nấm men 28 3.2.5 Thử nghiệm khả chịu nhiệt chủng nấm men 28 3.2.6 Thử nghiệm khả lên men tạo ethanol chủng nấm men 29 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 4.1 Phân lập nấm men từ hoa ăn 30 4.2 Đặc điểm hình thái, sinh lý sinh hóa nấm men 31 4.2.1 Đặc điểm hình thái 31 4.2.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa chủng nấm men 35 4.3 Sơ tuyển hoạt tính lên men nấm men 36 4.4 Khả chịu ethanol chủng nấm men 38 4.5 Khả chịu nhiệt chủng nấm men 39 4.6 Khả lên men ethanol dịch rỉ đường 40 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 43 5.1 Kết luận…………………………………………………………………… 43 5.2 Đề nghị…………………………………………………………………… 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC Chuyên ngành Vi sinh vật học iii Viện NC & PT CNSH Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường Đại học Cần Thơ Phụ lục Một số hình ảnh thí nghiệm Phụ lục Kết phân tích thống kê thí nghiệm Phụ lục Các phương pháp phân tích Chuyên ngành Vi sinh vật học iv Viện NC & PT CNSH Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH BẢNG Bảng Thành phần hóa học nấm men Bảng Ứng dụng nấm men thực phẩm, thức uống có ethanol sản phẩm lên men 11 Bảng Những chủng nấm men có khả phát triển sản sinh ethanol 37°C đến 45°C 13 Bảng Nguồn nguyên liệu, địa điểm thu mẫu ký hiệu chủng nấm men phân lập 30 Bảng Đặc điểm hình thái nấm men phân lập từ hoa loại ăn 31 Bảng Đặc điểm sinh lý, sinh hóa chủng nấm men 36 Bảng Khả lên men đường glucose chủng nấm men 37 Bảng Khả chịu ethanol chủng nấm men 38 Bảng Khả chịu nhiệt chủng nấm men 40 Bảng 10 Độ Brix, pH nồng độ ethanol sinh sau ngày lên men dịch rỉ đường nhiệt độ khác 41 Bảng 11 Độ cồn hiệu suất lên men chủng nấm men 41 Bảng 12 Khả lên men saccharose 30 chủng nấm men……………phụ lục 2.1 Bảng 13 Khả lên men maltose 30 chủng nấm men……………….phục lục 2.2 Bảng 14 Kết thử nghiệm khả lên men rỉ đường………………… phụ lục 2.3 Chuyên ngành Vi sinh vật học v Viện NC & PT CNSH Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH HÌNH Hình Tế bào nấm men quan sát kính hiển vi điện tử Hình Saccharomyces spp 14 Hình Cơ chế phân hủy đường tế bào nấm men (Teusink, 2000) 17 Hình Khuẩn lạc nấm men TV3, XV1, NĐ2, SĐ1, CH1, KV1 nồng độ ethanol 39 Hình Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả lên men chủng nấm men 42 Hình Các dụng cụ sử dụng phòng thí nghiệm………………… ….phụ lục 1.1 Hình Kết thử nghiệm hoạt tính urease……………………… …… phụ lục 1.2 Hình Kết thử nghiệm hoạt tính gelatinase……………………………phụ lục 1.2 Chuyên ngành Vi sinh vật học vi Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT PHỤ LỤC Phụ lục Một số hình ảnh thí nghiệm Phụ lục 1.1 Hình ảnh thiết bị sử dụng phòng thí nghiệm Kính hiển vi Tủ ủ Tủ cấy Cân phân tích Brix kế Ethanol kế Máy vortex Hình Các dụng cụ sử dụng phòng thí nghiệm Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Phụ lục 1.2 Hình ảnh kết thí nghiệm a Urease Hình Kết thử nghiệm hoạt tính urease “Trái: dương tính , phải : âm tính “ b Gelatinase (a) (b) Hình Kết thử nghiệm hoạt tính gelatinase (a) âm Chuyên ngành Vi sinh vật học tính, (b) dương tính Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Phụ lục Kết phân tích thống kê thí nghiệm Phụ lục 2.1 Kết lên men đường saccharose Bảng 12 Khả lên men saccharose 30 chủng nấm men (đơn vị: mm) Chiều cao cột khí (mm) Chủng nấm men 12 24 36 − − − − − − CĐ1 − − CĐ2 − − − − − − − − CH 20 30 27 30 + CH1 − − − − − − − − CHĐ − − − − − − − − DDV − − − − − − − − DDV1 − − − − − − − − DV1 − − − − − − − − DV2 − − − − − − − − KV1 − − − − − − − − KV2 − − − − − − − − MCV1 − − − − − − − − MCV2 − − − − − − − − MĐ2 − − − − − − − − MĐ3 − − − − − − − − NĐ1 − − − − − − − − NĐ2 − − − 4 NV1 − − − − − − − − NV2 − − − 4 OV2 26 30 30 30 + + OV3 − − − − − − − − SĐ1 14 30 18 30 + 30 SĐ2 − − − − − − − − TV1 − − − − − − 16 20 TV2 5 + + + + + TV3 − − 3 10 12 10 25 VS − − − − − − − − VS1 − − − − − − − − XV1 − − − − − − − − XV2 − − − − − − − − Chú thích: “−”: Không có bọt khí “+”: chiều cao cột khí đạt tối đa (30 mm) Chuyên ngành Vi sinh vật học 48 − − 30 − − − − − − − − − − − − − − + − + − 15 + 15 − − − − − − + − − − − − − − − − − − − − − + − + − 16 + 10 − − − − − − + − − − − − − − − − − − − − − + − + − 20 + 30 − − − − − − + − − − − − − − − − − − − − − + − + − 15 + 15 − − − − Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Phụ lục 2.2 Kết lên men đường maltose Bảng 13 Khả lên men maltose 30 chủng nấm men (đơn vị: mm) Chiều cao cột khí (mm) Chủng nấm men CĐ1 CĐ2 CH CH1 CHĐ DDV DDV1 DV1 DV2 KV1 KV2 MCV1 MCV2 MĐ2 MĐ3 NĐ1 NĐ2 NV1 NV2 OV2 OV3 SĐ1 SĐ2 TV1 TV2 TV3 VS VS1 XV1 XV2 12 − 10 − − 2 − − − − − − 13 14 − 16 11 − 15 − − − 2 − − − − − − − 23 6 13 − − 24 − 11 − 1 1 − 1 − − − 14 12 − − 15 23 15 30 − 12 10 + − 10 + 30 30 22 30 − 30 10 15 10 18 + 10 − 16 17 + 10 13 15 30 15 − 12 36 18 30 16 16 13 + 12 10 − 22 13 + 30 25 23 18 13 − 18 13 20 30 30 30 + 30 22 19 + 15 30 30 17 − 19 + + 10 + + + − + 30 12 30 20 12 11 12 10 + + 17 30 25 10 13 − 24 15 30 + + 30 20 + 25 − 17 19 13 48 30 30 30 14 30 + 15 + 30 10 16 16 − 30 30 18 + + 30 30 + 23 − + 30 17 30 + + + 10 + + + 30 + 10 + + + 19 − 7 20 + + + + + + − + + 17 + 25 + 11 15 15 + + 22 + + 10 14 − 27 21 + + + + + + + − + + 15 + + + 17 + + 20 + + + 20 30 − − + 20 + + + + + + − + + 20 Chú thích: “−”: Không có bọt khí “+”: chiều cao cột khí đạt tối đa (30 mm) Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Kết thống kê khả lên men glucose 30 chủng nấm men One-way ANOVA: chiều cao sau versus chủng Source DF chủng 29 SS Error 60 0.026667 Total 89 5.077889 S = 0.02108 MS 5.051222 F 0.174180 391.91 P 0.000 0.000444 R-Sq = 99.47% R-Sq(adj) = 99.22% Grouping Information Using Tukey Method chủng N Mean Grouping SĐ1 1.0667 A DV1 0.7000 TV2 0.4000 C KV1 0.4000 C OV2 0.3000 XV1 0.1000 E VS1 0.1000 E TV3 0.1000 E MĐ2 0.1000 E DDV 0.1000 E CH1 0.1000 E CH 0.1000 E XV2 0.0000 F VS 0.0000 F TV1 0.0000 F SĐ2 0.0000 F OV3 0.0000 F NV2 0.0000 F NV1 0.0000 F NĐ2 0.0000 F NĐ1 0.0000 F MĐ3 0.0000 F MCV2 0.0000 F MCV1 0.0000 F KV2 0.0000 F DV2 0.0000 F DDV1 0.0000 F CLH 0.0000 F CĐ2 0.0000 F CĐ1 0.0000 F B D Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: chiều cao sau 12h versus chủng Source chủng DF 29 SS 51.0293 Error 60 4.1867 Total 89 55.2160 S = 0.2642 MS 1.7596 P 0.000 0.0698 R-Sq = 92.42% Chuyên ngành Vi sinh vật học F 25.22 R-Sq(adj) = 88.75% Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Grouping Information Using Tukey Method chủng N Mean Grouping CH 3.0000 A SĐ1 2.0667 B KV1 2.0000 B TV2 1.8333 B VS1 1.5000 B C TV3 1.3000 B C D DDV 0.9333 C D E DV1 0.8667 C D E OV2 0.5667 D E F NĐ2 0.4000 E F MĐ3 0.3333 E F CĐ2 0.3333 E F XV2 0.3000 E F XV1 0.3000 E F NV1 0.3000 E F MĐ2 0.3000 E F TV1 0.2667 E F MCV2 0.2333 E F VS 0.2000 E F CLH 0.2000 E F KV2 0.2000 E F CH1 0.2000 E F DDV1 0.1667 E F SĐ2 0.0000 F OV3 0.0000 F NV2 0.0000 F NĐ1 0.0000 F MCV1 0.0000 F DV2 0.0000 F CĐ1 0.0000 F Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: chiều cao sau 18h versus chủng Source DF chủng 29 SS 87.1973 Error 60 5.3467 Total 89 92.5440 S = 0.2985 MS 3.0068 F 33.74 P 0.000 0.0891 R-Sq = 94.22% R-Sq(adj) = 91.43% Grouping Information Using Tukey Method chủng N Mean Grouping SĐ1 3.0000 A CH 3.0000 A KV1 2.8667 A B VS1 2.8333 A B TV3 2.8333 A B TV2 2.7000 A B C Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT DDV 1.9333 OV2 1.8333 B C D MĐ3 1.7000 D E F NV1 1.6333 D E F G TV1 1.2333 D E F G H XV2 1.1667 D E F G H I DV1 1.1667 D E F G H I CH1 0.9333 E F G H I J CĐ2 0.8000 F G H I J MĐ2 0.7333 G H I J XV1 0.6667 H I J MCV2 0.6667 H I J KV2 0.6000 H I J NV2 0.4333 H I J VS 0.4000 H I J DDV1 0.4000 H I J CLH 0.4000 H I J OV3 0.3667 H I J NĐ2 0.3667 H I J SĐ2 0.2333 I J NĐ1 0.2000 J CĐ1 0.1667 J MCV1 0.1333 J DV2 0.0000 J C D E Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: chiều cao sau 24h versus chủng Source DF chủng 29 SS 87.767 Error 60 13.933 Total 89 101.700 S = 0.4819 MS 3.026 F 13.03 P 0.000 0.232 R-Sq = 86.30% R-Sq(adj) = 79.68% Grouping Information Using Tukey Method chủng N Mean Grouping VS1 3.0000 A TV3 3.0000 A TV2 3.0000 A SĐ1 3.0000 A NV1 3.0000 A KV1 3.0000 A DV1 3.0000 A CH 3.0000 A XV2 2.6667 A B OV2 2.3333 A B C DDV 2.3333 A B C CĐ2 2.1000 A B C D MĐ3 2.0000 A B C D E TV1 1.9000 A B C D E Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 XV1 1.4667 A B C D E F MCV2 1.4667 A B C D E F NV2 1.4000 B C D E F KV2 1.2667 B C D E F CH1 1.1000 C D E F CLH 0.8667 C D E F NĐ2 0.8333 C D E F MĐ2 0.8000 C D E F NĐ1 0.7667 D E F OV3 0.7333 D E F VS 0.7000 D E F SĐ2 0.5667 D E F DDV1 0.5333 E F CĐ1 0.5333 E F MCV1 0.5000 E F DV2 0.1333 F Trường ĐHCT Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: chiều cao sau 30h versus chủng Source DF chủng 29 SS 66.591 Error 60 10.113 Total 89 76.704 S = 0.4106 MS 2.296 F 13.62 P 0.000 0.169 R-Sq = 86.82% R-Sq(adj) = 80.44% Grouping Information Using Tukey Method chủng N Mean Grouping XV2 3.0000 A XV1 3.0000 A VS1 3.0000 A TV3 3.0000 A TV2 3.0000 A SĐ1 3.0000 A OV2 3.0000 A NV1 3.0000 A NĐ2 3.0000 A KV1 3.0000 A DV1 3.0000 A CH 3.0000 A CĐ2 2.8333 A B NĐ1 2.6667 A B DDV 2.5000 A B C CH1 2.5000 A B C TV1 2.4000 A B C D CĐ1 2.2333 A B C D E MĐ3 2.0000 A B C D E F MCV2 2.0000 A B C D E F KV2 1.9000 A B C D E F OV3 1.6667 B C D E F Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT NV2 1.6667 CLH 1.3333 B C D E F C D E F G SĐ2 1.1667 D E F G MĐ2 1.1000 D E F G VS 1.0000 E F G MCV1 0.8000 F G DDV1 0.7000 F G DV2 0.1333 G Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: chiều cao sau 36h versus chủng Source DF chủng 29 SS MS 60.5166 Error 60 1.9867 Total 89 62.5032 S = 0.1820 F 2.0868 63.02 P 0.000 0.0331 R-Sq = 96.82% R-Sq(adj) = 95.29% Grouping Information Using Tukey Method chủng N Mean Grouping XV2 3.0000 A XV1 3.0000 A VS1 3.0000 A TV3 3.0000 A TV2 3.0000 A SĐ1 3.0000 A OV3 3.0000 A OV2 3.0000 A NV1 3.0000 A NĐ2 3.0000 A NĐ1 3.0000 A KV1 3.0000 A DV1 3.0000 A DDV 3.0000 A CH1 3.0000 A CH 3.0000 A CĐ1 3.0000 A CĐ2 2.8333 A B TV1 2.6667 A B C NV2 2.6000 A B C MCV2 2.3333 B C D CLH 2.3333 B C D KV2 2.1333 C D SĐ2 2.0000 D E MĐ3 2.0000 D E MĐ2 1.4333 VS 1.0000 MCV1 0.8000 G DDV1 0.7000 G H DV2 0.1333 H Chuyên ngành Vi sinh vật học E F F G Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Means that not share a letter are significantly different One-way ANOVA: chiều cao sau 42h versus chủng Source DF chủng 29 SS 62.80900 Error 60 0.22000 Total 89 63.02900 S = 0.06055 MS 2.16583 F 590.68 P 0.000 0.00367 R-Sq = 99.65% R-Sq(adj) = 99.48% Grouping Information Using Tukey Method chủng N Mean Grouping XV2 3.0000 A XV1 3.0000 A VS1 3.0000 A TV3 3.0000 A TV2 3.0000 A TV1 3.0000 A SĐ1 3.0000 A OV3 3.0000 A OV2 3.0000 A NV2 3.0000 A NV1 3.0000 A NĐ2 3.0000 A NĐ1 3.0000 A MCV2 3.0000 A KV1 3.0000 A DV1 3.0000 A DDV 3.0000 A CLH 3.0000 A CH1 3.0000 A CH 3.0000 A CĐ1 3.0000 A CĐ2 2.8333 A KV2 2.1333 B SĐ2 2.0000 B MĐ3 2.0000 B MĐ2 1.5000 VS 1.0000 MCV1 0.8000 E DDV1 0.7000 E DV2 0.1333 C D F Means that not share a letter are significantly different Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Phụ lục 2.3 Trường ĐHCT Khảo sát khả lên men chủng nấm men Bảng 14 Kết thử nghiệm khả lên men rỉ đường Nhiệt độ Chủng nấm men CH 30C KV1 SĐ1 CH 35C KV1 SĐ1 CH 37C KV1 SĐ1 CH 39C KV1 SĐ1 brix pH 18,0 18,0 18,0 17,2 17,2 17,2 18,0 18,0 18,0 18,0 18,0 18,0 18,8 19,0 19,0 18,5 18,0 18,0 18,0 18,0 18,0 18,5 18,0 18,0 19,0 19,0 19,0 18,5 18,0 18,5 19,0 19,0 19,0 17,8 18,0 18,0 4,5 4,0 4,0 4,9 4,0 4,0 3,8 3,0 3,0 3,9 3,9 3,9 3,9 3,8 3,8 3,9 3,9 3,8 3,8 3,9 3,9 3,8 3,8 3,9 3,7 3,7 3,7 3,9 3,9 3,9 3,6 3,0 3,0 4,0 4,0 3,9 Ethanol 20C 2,8 1,8 2,8 2,8 2,8 2,3 2,7 2,3 2,7 2,8 2,8 1,8 1,8 2,3 1,8 1,4 1,9 1,9 1,4 1,9 1,9 1,4 1,8 1,8 1,2 1,2 1,7 1,8 1,8 1,3 1,2 1,7 1,7 0,9 1,4 0,9 * độ brix ban đầu 22 độ pH ban đầu 5,15 Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Kết thống kê chủng nấm men (sử dụng phần mềm minitab ver.16.2.1) Kết thống kê chủng nấm men (sử dụng phần mềm minitab ver.16.2.1) One-way ANOVA: Độ ethanol 20 versus chủng Source chủng Error Total DF SS MS 11 8.770 0.797 24 2.880 0.120 35 11.650 F 6.64 P 0.000 S = 0.3464 R-Sq = 75.28% R-Sq(adj) = 63.95% Grouping Information Using Tukey Method chủng KV1 30°C SĐ1 30°C CH 35°C CH 30°C KV1 35°C SĐ1 35°C CH 37°C KV1 37°C CH 39°C KV1 39°C SĐ1 37°C SĐ1 39°C N Mean 2.6333 2.5667 2.4667 2.4667 1.9667 1.7333 1.7333 1.6667 1.6333 1.5333 1.3667 1.0667 3 3 3 3 3 3 Grouping A A A B A B A B C A B C A B C A B C A B C B C C C Means that not share a letter are significantly different Kết thống kê chủng CH One-way ANOVA: Độ ethanol 20 versus chủng Source chủng Error Total DF SS MS 1.856 0.619 1.667 0.208 3.522 11 F 2.97 P 0.097 S = 0.4564 R-Sq = 52.69% R-Sq(adj) = 34.94% Grouping Information Using Tukey Method chủng CH 30°C CH 35°C CH 37°C CH 39°C N Mean Grouping 2.4667 A 2.4667 A 1.7333 B 1.6333 B 3 3 Means that not share a letter are significantly different Kết thống kê chủng KV1 One-way ANOVA: Độ ethanol 20 versus chủng Source chủng Error Total DF SS MS 2.1633 0.7211 0.6067 0.0758 2.7700 11 F 9.51 P 0.005 S = 0.2754 R-Sq = 78.10% R-Sq(adj) = 69.89% Grouping Information Using Tukey Method chủng KV1 30°C KV1 35°C KV1 37°C KV1 39°C N 3 3 Mean Grouping 2.6333 A 1.9667 A B 1.6667 B 1.5333 B Means that not share a letter are significantly different Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Kết thống kê chủng SĐ1 One-way ANOVA: Độ ethanol 20 versus chủng Source chủng Error Total DF SS MS 3.7900 1.2633 0.6067 0.0758 4.3967 11 F 16.66 P 0.001 S = 0.2754 R-Sq = 86.20% R-Sq(adj) = 81.03% Grouping Information Using Tukey Method chủng SĐ1 30°C SĐ1 35°C SĐ1 37°C SĐ1 39°C N 3 3 Mean Grouping 2.5667 A 1.7333 B 1.3667 B 1.0667 B Means that not share a letter are significantly different Phụ lục Các phương pháp phân tích Phụ lục 3.1 Phương pháp quan sát khuẩn lạc tế bào nấm men  Khuẩn lạc nấm men Sử dụng que cấy lấy tế bào nấm men từ ống trữ cho vào mL nước cất, tiến hành vortex để nấm men phân bố Sau đó, hút µl dịch nấm men nhỏ lên đĩa petri chứa môi trường YPD, ủ 24-48 tiến hành quan sát tiêu hình thái như: hình dạng, kích thước, màu sắc, dạng bìa độ khuẩn lạc nấm men  Tế bào nấm men Các bước quan sát tế bào nấm men tiến hành sau:  Chuẩn bị mẫu nấm men  Nhỏ 20 µl nước cất vô trùng lên kính mang vật  Khử trùng kim cấy lửa đèn cồn để nguội  Dùng kim cấy lấy sinh khối nấm men trãi lên giọt nước kính mang vật  Để cạnh kính đậy vật tiếp xúc với kính mang vật góc 45o đậy kính đậy vật xuống từ từ nhẹ nhàng cho mẫu vật bọt khí  Quan sát mẫu vật kính hiển vi quang học để thấy hình dạng tế bào nấm men Phụ lục 3.2 Phương pháp pha loãng Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT Cách thực hiện: Dùng pipet hút 1mL mẫu cho vào ống pha loãng chứa 9ml nước cất, sau lắc kĩ độ pha loãng 1/10 tức 10-1, mẫu lắc máy lắc, tiếp tục hút 1mL từ ống có độ pha loãng 10-1 cho vào ống nghiệm thứ ta có mẫu độ pha loãng 10-2, thực tương tự độ pha loãng mong muốn Số lượng vi sinh vật mẫu lớn độ pha loãng cao Khi pha loãng cần ý dùng ống hút riêng cho độ pha loãng Mẫu pha loãng thành dãy nồng độ thập phân 1/10, 1/100,… Mỗi bậc pha loãng 1/10 Tiến hành cấy lượng xác định mẫu thí nghiệm vào đĩa petri có chứa môi trường dinh dưỡng Ủ điều kiện xác định, theo dõi đếm tất khuẩn lạc đĩa petri Phụ lục 3.3 Phương pháp xác định mật số vi sinh vật Cách thực hiện: Lắc ống nghiệm chứa mẫu pha loãng, dung ống hút giọt vào mặt kính, đậy kính lên lưới đếm Dịch huyền phù vào buồng đếm nhờ chế mao dẫn Chú ý không để tạo thành bọt khí lưới đếm tràn dịch mẫu xuống rãnh Đặt buồng đếm lên bàn kính hiển vi, sau tiến hành đếm tế bào ô lớn góc Trong ô lớn, đếm từ ô thứ tới ô thứ 16 Chỉ đếm tế bào nằm ô tế bào nằm cạnh liên tiếp chiều Ghi số lượng tế bào đếm nằm ô lớn Đếm buồng đếm sau lấy giá trị trung bình (Nguyễn Xuân Thành, 2005) Cách tính: Số lượng tế bào mL mẫu tính công thức sau: N=(a4000103c)/b Trong đó: N: số lượng tế bào mL mẫu nghiên cứu a: số tế bào ô vuông lớn b: số ô vuông nhỏ ô vuông lớn 103: số chuyển mm3 thành mL ( 1000mm3 = mL) Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH Đề cương tốt nghiệp Đại học khóa 37 -2014 Trường ĐHCT c: độ pha loãng mẫu Phụ lục 3.4 Xác định nồng độ ethanol phương pháp chưng cất Xác định độ ethanol Cho 100 mL dung dịch sau lên men vào bình cầu hệ thống chưng cất ethanol, tiến hành chưng cất thu lấy 100 mL, ý đừng để ethanol bay Sau để dịch cất ổn định nhiệt độ, cho dịch cất vào ống đong có đường kính to gấp lần đường kính nơi to cồn kế Thả cồn kế vào đọc nồng độ ethanol (dùng cồn kế: – 30) đo nhiệt độ sau quy nồng độ rượu nhiệt độ chuẩn 20oC cách tra bảng nhiệt độ nồng độ ethanol tương ứng để biết nồng độ ethanol dung dịch điều kiện chuẩn Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT CNSH [...]... của đề tài là phân lập và tuyển chọn chủng nấm men có khả năng chịu nhiệt, chịu ethanol đồng thời có khả năng lên men tốt từ hoa của cây ăn quả Nội dung thực hiện: - Phân lập các chủng nấm men từ hoa của cây ăn quả, xác định đặc tính hình thái, sinh lý sinh hoá các chủng nấm men này - Khảo sát khả năng chịu nhiệt, chịu ethanol và khả năng lên men của các chủng nấm men, tuyển chọn chủng có đặc tính... khả năng lên men ethanol mạnh”, Nguyễn Vân Anh et al (2011) đã tuyển chọn được 11 chủng nấm men có khả năng chịu nhiệt tương đối cao (42°C) Từ luận văn tốt nghiệp Tuyển chọn và khảo sát điều kiện lên men ethanol bằng nấm men chịu nhiệt , Nguyễn Hữu Tường (2013) đã tuyển chọn được 7 chủng nấm men có khả năng chịu nhiệt tương đối cao (43°C) Những chủng nấm men khác nhau chịu ảnh hưởng của nhiệt độ không... Nghiên cứu và Phát triển Công nghệ sinh học, trường Đại học Cần Thơ 3.1.2 Nguyên liệu Hoa của cây ăn quả ở các tỉnh Đồng Bằng Sông Cửu Long Các mẫu hoa của cây ăn quả được thu thập từ các tỉnh Cần Thơ, Đồng Tháp, Vĩnh Long, bao gồm 13 mẫu: - Cần Thơ: hoa vú sữa - Đồng Tháp: hoa cóc, hoa nhãn, hoa mận, hoa sa pô chê - Vĩnh Long: hoa chuối, hoa đu đủ, hoa dừa, hoa khế, hoa mãng cầu, hoa mận, hoa ổi, hoa xoài... xác định nhiệt độ phát triển của nấm men ưa lạnh (psychrophilic) trong khoảng 2- 20°C; nấm men ưa nhiệt độ trung bình (mesophilic) là 5- 35°C; nấm men chịu nhiệt (thermotolerant) là 8-42°C; ưa nhiệt (thermophilic) là 2845°C Theo Roehr (2001), nấm men chịu nhiệt có một số thuận lợi trong việc sản xuất ethanol trong điều kiện nhiệt độ cao bao gồm: hoạt động trao đổi chất vẫn tốt và tốc độ lên men cao... glucose, trong mật hoa có rất nhiều nước Mật hoa được sản xuất bởi các tuyến được gọi là tuyến mật Tuyến mật có thể được đặt trên bất kỳ phần nào của cây, nhưng thường nằm trong hoa Tùy thuộc vào loài, tuyến mật có thể được đặt trên cánh hoa, bao phấn, nhị hoa, đài hoa, nhụy hoa, Chính vì thế nên có nhiều loài nấm men trên hoa 2.2 Giới thiệu chung về nấm men 2.2.1 Đặc điểm nấm men Nấm men là vi sinh vật... Aldodeshydrogenase Ethanol Hình 3 Cơ chế phân hủy đường trong tế bào nấm men (Teusink, 2000) Để lên men, người ta cho vào môi trường một lượng tế bào nấm men nhất định Thông thường, khi lên men, lượng nấm men phải lớn hơn 10 triệu/1mL dung dịch lên men Đường lên men và các chất dinh dưỡng khác được hấp thụ trên bề mặt nấm men, sau đó khuếch tán qua màng vào bên trong, tạo ra rượu và CO2 Rượu etylic tạo thành sẽ... trình lên men được hiệu quả Do đó chúng có ý nghĩa rất quan trọng đối với các nước nhiệt đới nơi mà phải tốn nhiều chi phí cho hệ thống làm mát Nồng độ ethanol của môi trường cũng tác động đáng kể đến năng suất lên men của nấm men, nấm men không chịu được nồng độ ethanol cao sẽ bị ức chế trong quá trình lên men dẫn đến hiệu quả nấm men không cao Những chủng nấm men có khả năng phát triển và lên men ethanol... triển cao và khả năng sử dụng rộng rãi các cơ chất trong công nghiệp như đường mía, bắp, nước trái cây, rỉ đường….( Nonklang et al., 2008) Ngoài K marxianus, quá trình lên men ở nhiệt độ cao còn có thể kể đến Saccharomyces uvarum với khả năng phát triển tối ưu ở khoảng nhiệt độ 25- 43°C (McCracken và Gong, 1982) Từ đề tài nghiên cứu khoa học Phân lập và tuyển chọn các chủng nấm men chịu nhiệt có khả... rượu Để sản phẩm lên men có tính đặc trưng, thì chúng ta cần phải chọn lọc các chủng nấm men thích hợp cho từng sản phẩm Việc chọn lọc các chủng nấm men thường chọn lọc vào hai yếu tố: - Tốc độ lên men: để so sánh khả năng lên men của các chủng nấm men, phương pháp thường được sử dụng trong các phòng thí nghiệm là phương pháp chai Durham Phương pháp này so sánh cường độ lên men dựa vào khí CO2 sinh ra... chủng nấm men Candida spp được phân lập từ bã mía Kết quả có 3 chủng cho kết quả hiệu suất lên men cao nhất Trong đó 1 chủng được khảo sát cẩn thận với nhiệt độ cao nhất khoảng 48°C vì đây là nhiệt độ thích hợp cho sự đường hóa liên tục cellulose và lên men hoặc một trong hai quá trình sẽ được kết hợp với enzyme isomerase xylose để thực hiện tiến trình đồng phân hóa và lên men xylose Ở 45°C , từ 10%