BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM MEN CHỊU NHIỆT TỪ TRÁI CÂY CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN ThS HUỲNH XUÂN PHONG VÕ NAM QUÊ MSSV: 3113749 LỚP: VSV K37 Cần Thơ, Tháng 12/2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM MEN CHỊU NHIỆT TỪ TRÁI CÂY CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN ThS HUỲNH XUÂN PHONG VÕ NAM QUÊ MSSV: 3113749 LỚP: VSV K37 Cần Thơ, Tháng 12/2014 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN ThS Huỳnh Xuân Phong Võ Nam Quê DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (Ký tên) LỜI CẢM TẠ Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu trường Đại học Cần Thơ, Ban Lãnh đạo Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, tất quý thầy cô tận tình giảng dạy thời gian học tập vừa qua Xin bày tỏ lòng biết sâu sắc đến đến ThS Huỳnh Xuân Phong – người thầy tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt để thực đề tài Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy Cố vấn học tâp – thầy Phạm Hồng Quang – người giúp đỡ, động viên gặp khó khăn học tập Xin cảm ơn anh Nguyễn Ngọc Thạnh, anh Bùi Hoàng Đăng Long – cán phòng thí nghiệm CNSH Thực phẩm, quý Thầy Cô, anh chị cán phòng thí nghiệm Viện NC&PT CNSH hỗ trợ, đóng góp ý kiến tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành tốt đề tài luận văn Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tất quý Thầy Cô tận tình truyền dạy cho kiến thức, giúp có kiến thức hữu ích phục vụ cho việc thực đề tài luận văn Xin cảm ơn anh chị cao học, bạn làm luận văn phòng thí nghiệm CNSH Thực phẩm nhiệt tình giúp đỡ trình thực đề tài Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình người thân động viên, khích lệ ủng hộ suốt thời gian qua để vững tin hoàn thành tốt luận văn Kính chúc quý Thầy Cô nhiều sức khỏe, hạnh phúc thành đạt Trân trọng cảm ơn! Cần Thơ, ngày 13 tháng 12 năm 2014 Võ Nam Quê Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT TÓM LƯỢC Đề tài thực nhằm phân lập tuyển chọn chủng nấm men chịu nhiệt có triển vọng lên men ethanol nhiệt độ cao Kết nghiên cứu phân lập 44 chủng nấm men từ nguồn nguyên liệu nhiều loại trái chôm chôm, nhãn, nho, xoài,… địa điểm thu mẫu 44 chủng nấm men tiến hành khảo sát số đặc tính sinh lý, sinh hóa; khả chịu ethanol nồng độ 0, 3, 6, 12%; khả chịu nhiệt 30, 35, 37, 40, 43 45°C Kết có 17 chủng nấm men có khả lên men đường saccharose, 38 chủng có khả lên men đường maltose, hoạt tính urease phát chủng nấm men chủng có khả phân giải gelatine Kết cho thấy có 18 chủng chịu nồng độ ethanol 12% 19 chủng phát triển 43°C, chủng phát triển 45°C Khảo sát khả lên men dung dịch đường glucose 2% tuyển chọn chủng nấm men có hoạt tính lên men nhanh mạnh so với chủng lại gồm BD5 (12% ethanol, 43°C), BD2 (9% ethanol, 40°C), ĐT2-2 (9% ethanol, 43°C) ĐT5-2 (9% ethanol, 43°C) chủng nấm men tiến hành khảo sát khả lên men ethanol nhiệt độ cao (30, 35, 37, 39 42°C) chất dung dịch rỉ đường 22°Brix Kết quả, chủng nấm men BD5 lên men sinh độ rượu cao so với chủng lại tất mức nhiệt độ, 30°C độ rượu 6,48% 42°C 2,85% Có thể kết luận chủng nấm men BD5 có khả chịu nhiệt, lên men tốt cho độ rượu cao so với dòng lại Ở 30°C, nồng độ ethanol chủng BD5 6,48%, chủng ĐT5-2, ĐT2-2, BD2 2,25%, 3,34% 2,83% Ở 37°C, nồng độ ethanol chủng BD5 4,09%, chủng ĐT5-2, ĐT2-2, BD2 1,56%, 1,67% 1,63% Ở 42°C, nồng độ ethanol chủng BD5 2,85% chủng ĐT5-2, ĐT2-2, BD2 1,11%, 0,86% 0,47% Từ khóa: chịu ethanol, lên men ethanol, nấm men chịu nhiệt, trái Chuyên ngành Vi sinh vật học i Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT MỤC LỤC Trang PHẦN KÝ DUYỆT LỜI CẢM TẠ TÓM LƯỢC i MỤC LỤC ii DANH SÁCH BẢNG v DANH SÁCH HÌNH .vi TỪ VIẾT TẮT vii CHƯƠNG GIỚI THIỆU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Một số loại trái nguồn phân lập nấm men .4 2.1.1 Nho 2.1.2 Dưa hấu 2.1.3 Khóm 2.1.4 Xoài 2.2 Giới thiệu chung nấm men 2.2.1 Hình dạng kích thước 2.2.2 Cấu tạo tế bào nấm men 10 2.2.3 Các trình sinh lý tế bào nấm men 11 2.2.4 Phân dòng nấm men 13 2.2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng nấm men 14 2.2.6 Vai trò ứng dụng nấm men 16 2.3 Nấm men chịu nhiệt 18 2.4 Một số loài nấm men chịu nhiệt quan trọng 20 2.4.1 Nấm men Kluyveromyces spp 20 Chuyên ngành Vi sinh vật học ii Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT 2.4.2 Nấm men Saccharomyces spp 20 2.4.3 Nấm men Candida spp 21 2.5 Lên men ethanol 22 2.5.1 Khái quát trình lên men ethanol 22 2.5.2 Cơ chế trình lên men ethanol 23 2.5.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình lên men ethanol 25 CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 3.1 Phương tiện nghiên cứu 29 3.1.1 Thời gian, địa điểm thực 29 3.1.2 Nguyên liệu 29 3.1.3 Hóa chất 29 3.1.4 Dụng cụ, thiết bị 29 3.2 Phương pháp nghiên cứu 30 3.2.1 Phân lập chủng nấm men từ trái 30 3.2.2 Xác định hình thái; sinh lý, sinh hóa chủng nấm men 31 3.2.3 Sơ tuyển nấm men có hoạt tính lên men 33 3.2.4 Khảo sát khả chịu ethanol chủng nấm men 34 3.2.5 Khảo sát khả chịu nhiệt chủng nấm men 35 3.2.6 Khảo sát khả lên men ethanol chủng nấm men 35 3.2.7 Xử lý số liệu, phân tích thống kê 36 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 4.1 Phân lập nấm men từ loại trái 37 4.1.1 Địa điểm thu mẫu An Giang 37 4.1.2 Địa điểm thu mẫu Bình Dương 38 4.1.3 Địa điểm thu mẫu Bến Tre 39 4.1.4 Địa điểm thu mẫu Cần Thơ 40 4.1.5 Địa điểm thu mẫu Đồng Tháp 40 4.1.6 Địa điểm thu mẫu Hậu Giang 42 4.1.7 Địa điểm thu mẫu Vĩnh Long 42 Chuyên ngành Vi sinh vật học iii Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT 4.2 Đặc điểm hình thái; sinh lý, sinh hóa 44 chủng nấm men 44 4.2.1 Đặc điểm hình thái 44 4.2.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa 48 4.3 Sơ tuyển nấm men có hoạt tính lên men 55 4.4 Khả chịu cồn (ethanol) 44 chủng nấm men 57 4.5 Khả chịu nhiệt 44 chủng nấm men 60 4.6 Khả lên men ethanol chủng nấm men tuyển chọn 62 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .67 5.1 Kết luận .67 5.2 Đề nghị .67 TÀI LIỆU THAM KHẢO .68 PHỤ LỤC Phụ lục Một số hình ảnh thí nghiệm Phụ lục Các phương pháp phân tích Phụ lục Số liệu kết thí nghiệm Phụ lục Kết phân tích thống kê Chuyên ngành Vi sinh vật học iv Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng Thành phần hóa học nấm men 11 Bảng Sự diện ứng dụng nấm men số thực phẩm, thức uống có cồn sản phẩm lên men 17 Bảng Những chủng nấm men khảo sát có khả phát triển sản sinh ethanol nhiệt độ 37°C đến 45°C 19 Bảng Đặc điểm hình thái 44 chủng nấm men sau 48 ủ 45 Bảng Đặc tính sinh lý, sinh hóa 44 chủng nấm men 49 Bảng Chiều cao cột khí CO2 (mm) 17 chủng nấm men lên men đường saccharose theo thời gian 51 Bảng Chiều cao cột khí CO2 (mm) 38 chủng nấm men lên men đường maltose theo thời gian 52 Bảng Chiều cao cột khí CO2 (mm) 44 chủng nấm men lên men đường glucose 55 Bảng Khả chịu ethanol 44 chủng nấm men sau 48 58 Bảng 10 Khả chịu nhiệt 44 chủng nấm men sau 48 60 Bảng 11 Độ rượu (% v/v, 20°C), độ Brix pH sau ngày lên men 63 Bảng 12 Đặc tính chủng nấm men tuyển chọn 65 Bảng 13 Chiều cao cột khí CO2 17 chủng nấm men có khả lên men đường saccharose PL3 Bảng 14 Chiều cao cột khí CO2 (mm) 38 chủng nấm men có khả lên men đường maltose PL3 Bảng 15 Chiều cao cột khí CO2 (mm) 44 chủng nấm men lên men glucose 2% PL3 Chuyên ngành Vi sinh vật học v Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT DANH SÁCH HÌNH Trang Hình Nho (Vitis vinifera) Hình Dưa hấu (Citrullus lanatus) Hình Khóm (Ananas comosus) Hình Một số giống xoài (A)-Cát Hòa Lộc, (B)-Cát Chu, (C)-xoài Ghép Hình Tế bào nấm men quan sát kính hiển vi điện tử Hình Cấu tạo tế bào nấm men 10 Hình Kluyveromyces lactis 20 Hình Saccharomyces cerevisiae 21 Hình Candida tropicalis 21 Hình 10 Cơ chế phân hủy đường tế bào nấm men 24 Hình 11 Hình dạng tế bào nấm men phân lập từ mẫu thu An Giang 37 Hình 12 Hình dạng tế bào nấm men phân lập từ mẫu thu Bình Dương 38 Hình 13 Hình dạng tế bào nấm men phân lập từ mẫu thu Bến Tre 39 Hình 14 Hình dạng tế bào nấm men phân lập từ mẫu thu Cần Thơ 40 Hình 15 Hình dạng tế bào nấm men phân lập từ mẫu thu Đồng Tháp 41 Hình 16 Hình dạng tế bào nấm men phân lập từ mẫu thu Hậu Giang 42 Hình 17 Hình dạng tế bào nấm men phân lập từ mẫu thu Vĩnh Long 43 Hình 18 Khuẩn lạc số chủng nấm men phân lập 48 Hình 19 Bốn chủng nấm men làm môi trường Christensen chuyển sang màu đỏ sẫm 54 Hình 20 Bốn chủng nấm men có khả thủy phân gelatine 54 Hình 21 Một số chủng nấm men phát triển 12% ethanol 59 Hình 22 Một số chủng nấm men phát triển 43°C 62 Hình 23 Biểu đồ độ rượu (ở 20°C) sau lên men chủng nấm men 64 Hình 24 Khuẩn lạc tế bào chủng nấm men tuyển chọn 66 Chuyên ngành Vi sinh vật học vi Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT Bảng 14 Chiều cao cột khí CO2 (mm) 38 chủng nấm men có khả lên men đường maltose Chiều cao cột khí CO2 (mm) Chủng nấm men 12 24 36 48 AG1-2 30 30 30 AG1 30 30 30 AG1 30 30 30 AG2-2 30 30 30 AG2-2 30 30 30 AG2-2 30 30 30 AG3-1 12 30 30 30 AG3-1 11 30 30 30 AG3-1 12 30 30 30 AG3-2 10 30 30 30 AG3-2 11 26 30 30 AG3-2 12 30 30 30 BD1-1 20 30 30 30 BD1-1 18 30 30 30 BD1-1 15 30 30 30 BD1-2 0 BD1-2 0 BD1-2 0 BD2 30 30 30 30 BD2 30 30 30 30 BD2 30 30 30 30 BD3-2 19 30 30 30 BD3-2 25 30 30 30 BD3-2 30 30 30 30 BD4-1 17 30 30 BD4-1 20 30 30 BD4-1 18 30 30 BD4-2 15 30 30 30 BD4-2 12 30 30 30 BD4-2 18 30 30 30 BD5 12 20 30 30 BD5 14 25 30 30 Lần lặp Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT BD5 14 23 30 30 BT1-2 12 20 24 30 BT1-2 13 20 25 30 BT1-2 20 30 30 30 BT2-1 14 30 30 30 BT2-1 14 30 30 30 BT2-1 15 30 30 30 BT2-2 10 30 BT2-2 12 30 BT2-2 17 30 CT1-1 20 30 30 CT1-1 26 30 30 CT1-1 23 30 30 CT2-1 17 25 30 30 CT2-1 20 30 30 30 CT2-1 15 27 30 30 CT2-2 10 26 30 30 CT2-2 12 30 30 30 CT2-2 10 30 30 30 CT3-1 30 30 30 CT3-1 28 30 30 CT3-1 30 30 30 CT3-2 12 30 30 30 CT3-2 12 30 30 30 CT3-2 10 30 30 30 ĐT1-1 22 30 30 30 ĐT1-1 25 30 30 30 ĐT1-1 20 30 30 30 ĐT1-2 17 30 30 30 ĐT1-2 16 30 30 30 ĐT1-2 18 30 30 30 ĐT2-1 30 30 30 ĐT2-1 30 30 30 ĐT2-1 30 30 30 ĐT2-2 30 30 30 30 ĐT2-2 30 30 30 30 Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT ĐT2-2 30 30 30 30 ĐT3-1 30 30 30 ĐT3-1 30 30 30 ĐT3-1 30 30 30 ĐT4 12 28 30 30 ĐT4 15 30 30 30 ĐT4 10 25 30 30 ĐT5-1 13 23 30 ĐT5-1 12 22 30 ĐT5-1 13 23 30 ĐT5-2 16 28 30 30 ĐT5-2 20 30 30 30 ĐT5-2 14 28 30 30 ĐT5-3 30 30 30 ĐT5-3 30 30 30 ĐT5-3 30 30 30 HG-1 20 30 30 HG-1 20 30 30 HG-1 22 30 30 HG-2 20 30 30 30 HG-2 18 30 30 30 HG-2 23 30 30 30 VL1-1 12 30 30 VL1-1 13 30 30 VL1-1 15 30 30 VL1-2 28 30 30 30 VL1-2 25 30 30 30 VL1-2 26 30 30 30 VL2 22 30 30 VL2 26 30 30 VL2 23 30 30 VL3-1 30 30 30 30 VL3-1 30 30 30 30 VL3-1 30 30 30 30 VL3-2 19 30 VL3-2 20 30 Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT VL3-2 22 30 VL4-1 11 28 30 VL4-1 15 30 30 VL4-1 13 26 30 VL4-2 0 30 30 VL4-2 0 30 30 VL4-2 0 30 30 VL5 13 30 30 VL5 15 30 30 VL5 14 30 30 Bảng 15 Chiều cao cột khí CO2 (mm) 44 chủng nấm men lên men glucose 2% Lần lặp Chủng nấm men 12giờ 18 24giờ 30 36giờ 42 48giờ AG1-1 0 12 AG1-1 0 13 AG1-1 0 10 15 AG1-2 12 18 27 30 30 30 30 AG1-2 10 17 25 30 30 30 30 AG1-2 11 19 25 30 30 30 30 AG2-1 10 13 22 25 30 AG2-1 13 18 23 26 30 AG2-1 12 17 23 25 30 AG2-2 28 30 30 30 30 30 30 AG2-2 30 30 30 30 30 30 30 AG2-2 30 30 30 30 30 30 30 AG3-1 16 24 28 30 30 30 30 AG3-1 17 26 29 30 30 30 30 AG3-1 17 25 27 30 30 30 30 AG3-2 21 16 30 30 30 30 30 AG3-2 18 25 30 30 30 30 30 AG3-2 20 27 30 30 30 30 30 BT1-1 0 0 BT1-1 0 0 BT1-1 0 0 Chiều cao cột khí CO2 (mm) Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT BT1-2 16 26 30 30 30 30 30 BT1-2 17 24 30 30 30 30 30 BT1-2 17 24 30 30 30 30 30 BT2-1 13 20 25 30 30 30 BT2-1 15 22 30 30 30 30 BT2-1 12 20 27 30 30 30 BT2-2 18 24 26 30 30 30 30 BT2-2 16 20 25 30 30 30 30 BT2-2 15 22 25 30 30 30 30 BD1-1 20 30 30 30 30 30 30 BD1-1 17 28 30 30 30 30 30 BD1-1 18 30 30 30 30 30 30 BD1-2 13 22 30 30 30 30 30 BD1-2 16 24 30 30 30 30 30 BD1-2 17 25 30 30 30 30 30 BD2 12 30 30 30 30 30 30 30 BD2 10 30 30 30 30 30 30 30 BD2 14 30 30 30 30 30 30 30 BD3-1 0 0 0 BD3-1 0 0 0 BD3-1 0 0 1 BD3-2 15 23 28 30 30 30 30 BD3-2 13 21 26 30 30 30 30 BD3-2 15 22 27 30 30 30 30 BD4-1 16 23 28 30 30 30 30 BD4-1 15 20 23 30 30 30 30 BD4-1 14 19 22 30 30 30 30 BD4-2 17 20 25 30 30 30 BD4-2 12 18 22 28 30 30 30 BD4-2 12 18 24 30 30 30 30 BD5 30 30 30 30 30 30 30 30 BD5 21 30 30 30 30 30 30 30 BD5 22 30 30 30 30 30 30 30 CT1-1 15 30 30 30 30 30 30 CT1-1 14 30 30 30 30 30 30 CT1-1 13 29 30 30 30 30 30 Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT CT1-2 0 0 0 0 CT1-2 0 0 0 0 CT1-2 0 0 0 0 CT2-1 10 15 21 23 30 30 30 30 CT2-1 14 19 21 26 30 30 30 CT2-1 12 18 22 30 30 30 30 CT2-2 17 25 30 30 30 30 30 CT2-2 19 28 30 30 30 30 30 CT2-2 16 26 30 30 30 30 30 CT3-1 17 23 27 30 30 30 30 CT3-1 17 23 26 30 30 30 30 CT3-1 16 24 25 30 30 30 30 CT3-2 18 25 30 30 30 30 30 CT3-2 15 23 29 30 30 30 30 CT3-2 16 24 27 30 30 30 30 ĐT1-1 16 22 25 30 30 30 30 ĐT1-1 17 20 23 30 30 30 30 ĐT1-1 13 20 23 30 30 30 30 ĐT1-2 16 22 25 30 30 30 30 ĐT1-2 19 24 26 30 30 30 30 ĐT1-2 17 22 25 30 30 30 30 ĐT2-1 13 19 26 30 30 30 ĐT2-1 13 20 30 30 30 30 ĐT2-1 11 20 27 30 30 30 ĐT2-2 13 25 30 30 30 30 30 30 ĐT2-2 14 23 30 30 30 30 30 30 ĐT2-2 16 23 30 30 30 30 30 30 ĐT3-1 13 19 23 30 30 30 30 ĐT3-1 12 18 22 30 30 30 30 ĐT3-1 12 18 21 30 30 30 30 ĐT3-2 0 0 0 0 ĐT3-2 0 0 0 0 ĐT3-2 0 0 0 0 ĐT4 18 23 28 30 30 30 30 ĐT4 15 21 26 30 30 30 30 ĐT4 17 22 28 30 30 30 30 Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT ĐT5-1 17 23 26 30 30 30 30 ĐT5-1 18 24 28 30 30 30 30 ĐT5-1 16 23 26 30 30 30 30 ĐT5-2 11 21 30 30 30 30 30 30 ĐT5-2 12 20 30 30 30 30 30 30 ĐT5-2 12 23 30 30 30 30 30 30 ĐT5-3 11 17 23 30 30 30 30 ĐT5-3 13 19 25 30 30 30 30 ĐT5-3 12 18 25 30 30 30 30 HG-1 13 20 25 30 30 30 30 HG-1 14 22 27 30 30 30 30 HG-1 13 21 27 30 30 30 30 HG-2 16 25 30 30 30 30 30 HG-2 18 26 30 30 30 30 30 HG-2 17 25 30 30 30 30 30 VL1-1 11 15 23 30 30 30 30 VL1-1 14 18 27 30 30 30 30 VL1-1 10 14 25 30 30 30 30 VL1-2 13 24 28 30 30 30 30 30 VL1-2 14 21 25 30 30 30 30 30 VL1-2 11 19 26 30 30 30 30 30 VL2 11 21 30 30 30 30 30 VL2 11 18 30 30 30 30 30 VL2 10 21 30 30 30 30 30 VL3-1 20 26 30 30 30 30 30 VL3-1 19 24 30 30 30 30 30 VL3-1 10 21 28 30 30 30 30 30 VL3-2 19 26 30 30 30 30 30 VL3-2 20 28 30 30 30 30 30 VL3-2 21 30 30 30 30 30 30 VL4-1 18 28 30 30 30 30 30 VL4-1 20 30 30 30 30 30 30 VL4-1 20 27 30 30 30 30 30 VL4-2 13 20 30 30 30 30 30 VL4-2 12 19 27 30 30 30 30 VL4-2 12 17 24 30 30 30 30 Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT VL5 10 20 26 30 30 30 30 VL5 18 27 30 30 30 30 30 VL5 13 22 28 30 30 30 30 Phụ lục Kết phân tích thống kê Phần mềm thống kê sử dụng: Minitab 16 version 16.2.1 (USA) 4.1 Phân tích ANOVA khả lên men glucose 2% sau One-way ANOVA: Cot (6 gio) versus Dong nam men Source DF SS MS F P Dong nam men 43 2564.08 59.63 41.00 0.000 Error 88 128.00 1.45 Total 131 2692.08 S = 1.206 R-Sq = 95.25% R-Sq(adj) = 92.92% Grouping Information Using Fisher Method Dong nam men N Mean BD5 24.333 ĐT2-2 14.333 B VL1-2 12.667 B C BD2 12.000 C ĐT5-2 11.667 C VL3-1 8.333 D CT2-2 8.333 D CT2-1 8.333 D CT3-2 7.000 D E HG-2 6.667 D E F ĐT1-2 6.667 D E F ĐT1-1 6.667 D E F AG3-1 6.667 D E F AG2-2 6.667 D E F VL4-1 6.333 E F G ĐT5-1 6.333 E F G BT2-2 6.333 E F G CT3-1 6.000 E F G H AG1-2 6.000 E F G H Chuyên ngành Vi sinh vật học Grouping A Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT AG3-2 5.667 E F G H CT1-1 5.333 E F G H I BT1-2 5.333 E F G H I ĐT4 5.000 F G H I J ĐT3-1 5.000 F G H I J BD4-1 4.667 G H I J K BD1-1 4.667 G H I J K VL3-2 4.333 H I J K L HG-1 4.333 H I J K L ĐT5-3 4.333 H I J K L BD1-2 4.333 H I J K L BD4-2 3.667 I J K L VL5 3.333 J K L BT2-1 3.000 VL2 2.667 L M N VL1-1 2.667 L M N BD3-2 2.667 L M N VL4-2 1.333 M N O ĐT2-1 1.000 N O AG2-1 1.000 N O ĐT3-2 0.000 O CT1-2 0.000 O BT1-1 0.000 O BD3-1 0.000 O AG1-1 0.000 O K L M Means that not share a letter are significantly different 4.2 Phân tích ANOVA khả lên men glucose 2% sau 12 One-way ANOVA: Cot (12 gio) versus Dong nam men Source DF SS MS F P Dong nam men 43 7197.05 167.37 64.41 0.000 Error 88 228.67 2.60 Total 131 7425.72 S = 1.612 R-Sq = 96.92% R-Sq(adj) = 95.42% Grouping Information Using Fisher Method Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT Dong nam men N Mean BD5 30.000 A BD2 30.000 A AG2-2 29.333 A ĐT2-2 23.667 B VL1-2 21.333 B C ĐT5-2 21.333 B C VL3-2 20.000 C D VL3-1 20.000 C D AG3-2 19.667 C D E VL4-1 19.333 C D E F BD1-1 18.333 ĐT1-2 17.333 E F G H CT2-2 17.333 E F G H HG-2 17.000 F G H ĐT5-1 17.000 F G H ĐT4 16.667 G H I CT3-1 16.667 G H I BT1-2 16.667 G H I AG3-1 16.667 G H I CT3-2 16.333 G H I J BT2-2 16.333 G H I J ĐT1-1 15.333 H I J K BD1-2 15.333 H I J K BD4-1 15.000 H I J K BD3-2 14.333 CT1-1 14.000 J K L M VL5 13.667 K L M CT2-1 13.667 K L M HG-1 13.333 K L M N VL4-2 12.333 L M N O ĐT3-1 12.333 L M N O ĐT5-3 12.000 L M N O VL1-1 11.667 M N O AG1-2 11.000 N O VL2 10.667 BT2-1 8.333 P Q BD4-2 8.333 P Q ĐT2-1 7.000 Q Chuyên ngành Vi sinh vật học Grouping D E F G I J K L O P Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT AG2-1 4.333 R ĐT3-2 0.000 S CT1-2 0.000 S BT1-1 0.000 S BD3-1 0.000 S AG1-1 0.000 S Means that not share a letter are significantly different 4.3 Phân tích ANOVA khả lên men glucose 2% sau 18 One-way ANOVA: Cot (18 gio) versus Dong nam men Source DF SS MS F P Dong nam men 43 10206.27 237.36 100.42 0.000 Error 88 208.00 2.36 Total 131 10414.27 S = 1.537 R-Sq = 98.00% R-Sq(adj) = 97.03% Grouping Information Using Fisher Method Dong nam men N Mean ĐT5-2 30.000 A ĐT2-2 30.000 A BD5 30.000 A BD2 30.000 A AG2-2 30.000 A CT1-1 29.667 A BD1-1 29.333 A VL4-1 28.333 A B VL3-2 28.000 A B VL1-2 26.333 B C CT2-2 26.333 B C VL3-1 26.000 B C D HG-2 25.333 C D E AG3-1 25.000 C D E F BT1-2 24.667 C D E F CT3-2 24.000 C D E F G BD1-2 23.667 D E F G Chuyên ngành Vi sinh vật học Grouping Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT ĐT5-1 23.333 E F G H CT3-1 23.333 E F G H VL5 23.000 E F G H I ĐT1-2 22.667 F G H I AG3-2 22.667 F G H I ĐT4 22.000 G H I J BT2-2 22.000 G H I J BD3-2 22.000 G H I J HG-1 21.000 ĐT1-1 20.667 I J K L BD4-1 20.667 I J K L VL2 20.000 J K L M CT2-1 19.333 K L M VL4-2 18.667 K L M ĐT3-1 18.333 L M ĐT5-3 18.000 M N AG1-2 18.000 M N BD4-2 17.667 M N VL1-1 15.667 BT2-1 13.333 O P ĐT2-1 12.333 P AG2-1 7.000 ĐT3-2 0.000 R CT1-2 0.000 R BT1-1 0.000 R BD3-1 0.000 R AG1-1 0.000 R H I J K N O Q Means that not share a letter are significantly different 4.4 Phân tích ANOVA độ rượu (% v/v) 30°C One-way ANOVA: Do ruou (30) versus Dong nam men Source DF SS MS F P Dong nam men 32.064 10.688 44.94 0.000 Error 1.903 0.238 Total 11 33.967 S = 0.4877 R-Sq = 94.40% Chuyên ngành Vi sinh vật học R-Sq(adj) = 92.30% Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT Grouping Information Using Fisher Method Dong nam men N Mean Grouping BD5 6.4767 ĐT2-2 3.3433 B BD2 2.8333 B C ĐT5-2 2.2500 C A Means that not share a letter are significantly different 4.5 Phân tích ANOVA độ rượu (% v/v) 35°C One-way ANOVA: Do ruou (35) versus Dong nam men Source DF SS MS F P Dong nam men 22.5369 7.5123 77.79 0.000 Error 0.7726 0.0966 Total 11 23.3095 S = 0.3108 R-Sq = 96.69% R-Sq(adj) = 95.44% Grouping Information Using Fisher Method Dong nam men N Mean Grouping BD5 5.3833 BD2 2.7800 B ĐT2-2 2.3467 B C ĐT5-2 1.8233 C A Means that not share a letter are significantly different 4.6 Phân tích ANOVA độ rượu (% v/v) 37°C One-way ANOVA: Do ruou (37) versus Dong nam men Source DF SS MS F P Dong nam men 13.6965 4.5655 51.45 0.000 Error 0.7099 0.0887 Total 11 14.4064 S = 0.2979 R-Sq = 95.07% Chuyên ngành Vi sinh vật học R-Sq(adj) = 93.22% Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT Grouping Information Using Fisher Method Dong nam men N Mean Grouping BD5 4.0867 ĐT2-2 1.6700 B BD2 1.6333 B ĐT5-2 1.5600 B A Means that not share a letter are significantly different 4.7 Phân tích ANOVA độ rượu (% v/v) 39°C One-way ANOVA: Do ruou (39) versus Dong nam men Source DF SS MS F P Dong nam men 6.3413 2.1138 41.35 0.000 Error 0.4090 0.0511 Total 11 6.7503 S = 0.2261 R-Sq = 93.94% R-Sq(adj) = 91.67% Grouping Information Using Fisher Method Dong nam men N Mean Grouping BD5 3.0033 BD2 1.3800 B ĐT5-2 1.3233 B ĐT2-2 1.2767 B A Means that not share a letter are significantly different 4.8 Phân tích ANOVA độ rượu (% v/v) 42°C One-way ANOVA: Do ruou (42) versus Dong nam men Source DF SS MS F P Dong nam men 9.9623 3.3208 43.26 0.000 Error 0.6141 0.0768 Total 11 10.5764 S = 0.2771 R-Sq = 94.19% Chuyên ngành Vi sinh vật học R-Sq(adj) = 92.02% Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT Grouping Information Using Fisher Method Dong nam men N Mean Grouping BD5 2.8500 ĐT5-2 1.1133 B ĐT2-2 0.8567 B C BD2 0.4700 C A Means that not share a letter are significantly different Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học [...]... và dứa, chiếm hơn 73% tổng diện tích trồng cây ăn quả cả nước Từ những lý do trên cùng với nguồn nguyên liệu trái cây dồi dào, sẵn có quanh năm, đa dạng về chủng loại ở ĐBSCL mà đề tài Phân lập và tuyển chọn nấm men chịu nhiệt từ trái cây được thực hiện nhằm phân lập được nhiều chủng nấm men khác nhau có khả năng chịu nhiệt cũng như khả năng lên men ethanol 1.2 Mục tiêu đề tài Phân lập và tuyển chọn. .. phân lập được 36 chủng nấm men từ một số loại trái cây và nước trái cây như nho, khóm, mận, chuối, xoài, Ba mươi sáu chủng nấm men này thuộc 6 giống Candida, Kloeckera, Hanseniaspora, Pichia, Saccharomyces và Torulopsis Kết quả nghiên cứu của Carolina Bezerra-Bussoli et al (2013) cho thấy đã phân lập được 130 chủng nấm men từ trái nho Ngô Thị Phương Dung et al (2011) đã phân lập được 6 chủng nấm men. .. nấm men có khả năng chịu được nhiệt độ cao đồng thời có khả năng lên men ethanol từ nguồn nguyên liệu là nhiều loại trái cây khác nhau, được thu mua ở nhiều địa phương khác nhau (6 tỉnh thuộc ĐBSCL và tỉnh Bình Dương) 1.3 Nội dung nghiên cứu - Phân lập và làm ròng các chủng nấm men từ nhiều loại trái cây - Khảo sát đặc tính sinh lý, sinh hóa của các chủng nấm men phân lập được - Khảo sát khả năng chịu. .. chọn các dòng nấm men chịu nhiệt có khả năng lên men ethanol mạnh”, Nguyễn Vân Anh et al (2011) đã tuyển chọn được 11 chủng nấm men có khả năng chịu nhiệt tương đối cao (42°C) Từ luận Chuyên ngành Vi sinh vật học 19 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 - 2014 Trường ĐHCT văn tốt nghiệp Tuyển chọn và khảo sát điều kiện lên men ethanol bằng nấm men chịu nhiệt , Nguyễn... hưởng đến hoạt động của nấm men Arthur và Watson (1976) đã xác định nhiệt độ phát triển của nấm men ưa lạnh (psychrophilic) trong khoảng 2-20°C; nấm men ưa nhiệt độ trung bình (mesophilic) là 5-35°C; nấm men chịu nhiệt (thermotolerant) là 8-42°C; ưa nhiệt (thermophilic) là 2845°C Theo Roehr (2001), nấm men chịu nhiệt có một số thuận lợi trong việc sản xuất ethanol trong điều kiện nhiệt độ cao bao gồm:... glucose vào trong quá trình lên men từ từ, liên tục đến một thời điểm nào đó khi không thấy dấu hiệu lên men xảy ra nữa Khi kết thúc quá trình lên men, chủng nấm men nào cho nồng độ cồn cao hơn chứng tỏ chủng nấm men đó có tính chịu đựng độ cồn cao hơn Khả năng chịu đựng độ cồn của đa số các chủng men trong sản xuất rượu bia vào khoảng 5-10% ethanol (Casey và Ingledew, 1986) Người ta còn sử dụng nấm men. .. khi thực hiện lên men ở nhiệt độ cao như: độ tan của oxy vào các chất khí khác giảm tạo điều kiện kỵ khí rất tốt, cơ hội bị nhiễm được giảm thiểu (Roehr, 2001) Nhiều loài men có thể được phân lập từ các môi trường giàu đường Một số ví dụ điển hình là các loại trái cây và quả mọng (chẳng hạn nho, táo hay đào) Đã có nhiều nghiên cứu trong và ngoài nước về phân lập nấm men trên trái cây Dilmani et al... phân loại nấm men (Kurtzman và Fell, 1997) Phân loại các giống nấm men dựa vào một số đặc điểm về hình thái, sinh lý nấm men: sự nẩy chồi của nấm men, hình dáng nấm men, sự hình thành bào tử, khả năng lên men các loại đường, khả năng đồng hóa urea - Giống Saccharomyces: sinh sản sinh dưỡng: tế bào nẩy chồi nhiều hướng, đôi khi có khuẩn ty giả Sinh sản hữu tính: túi khá bền và hình thành trực tiếp từ. .. 2002) Nấm men có tiềm năng rất lớn trong việc lên men chuyển hóa đường thành ethanol trong điều kiện kỵ khí Một số loài nấm men có khả năng lên men mạnh đã được sử dụng trong thực phẩm, nước giải khát và các ngành công nghiệp lên men (Jacobson và Jolly, 1989) Tuy nhiên, có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính của nấm men như nguồn carbon, nguồn nitơ, pH, đặc biệt là nhiệt và chịu ethanol của nấm men. .. lên men có tính đặc trưng, thì chúng ta cần phải chọn lọc các chủng nấm men thích hợp cho từng sản phẩm Việc chọn lọc các chủng nấm men thường dựa vào hai yếu tố: - Tốc độ lên men: để so sánh khả năng lên men của các chủng nấm men, phương pháp thường được sử dụng trong các phòng thí nghiệm là phương pháp chai Durham Phương pháp này so sánh cường độ lên men dựa vào khí CO2 sinh ra trong quá trình lên men