ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - LÊ THỊ THANH THỦY NGHIÊN CỨU, TUYỂN CHỌN VI KHUẨN ĐỐI KHÁNG CHỐNG Ralstonia solanacearum GÂY BỆNH HÉO XANH CÂY TRỒNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Hà Nội - 2015 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN LÊ THỊ THANH THỦY NGHIÊN CỨU, TUYỂN CHỌN VI KHUẨN ĐỐI KHÁNG CHỐNG Ralstonia solanacearum GÂY BỆNH HÉO XANH CÂY TRỒNG Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 62420107 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Như Kiểu PGS TS Lại Thúy Hiền Hà Nội - 2015 ii LỜI CÁM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: Tiến sĩ Lê Như Kiểu PGS TS Lại Thúy Hiền người thày tận tình giúp đỡ, hướng dẫn suốt trình thực đề tài Luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn: - Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội tổ chức khoá đào tạo tiến sỹ này, giúp có điều kiện học tập nghiên cứu để nâng cao trình độ chuyên môn - Phòng Đào tạo sau Đại học, Khoa Sinh học, Bộ môn Vi sinh vật, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành Luận án - Ban lãnh đạo Viện Thổ nhưỡng Nông hóa, tập thể cán Bộ môn Vi sinh vật phòng liên quan - Viện Công nghệ Sinh học, Viện Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới người thân gia đình, bạn bè tạo điều kiện, động viên giúp đỡ suốt thời gian thực Luận án Hà Nội, ngày 20 tháng 07 năm 2015 Tác giả Lê Thị Thanh Thủy iii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: - Đây công trình nghiên cứu số kết cộng tác với cộng khác - Các số liệu trình bày luận án trung thực, phần công bố tập san tạp chí khoa học chuyên ngành với đồng ý cho phép đồng tác giả - Phần lại chưa công bố công trình khác Tác giả luận án Lê Thị Thanh Thủy iv MỤC LỤC TT NỘI DUNG TRANG MỞ ĐẦU 12 Tính cấp thiết luận án 12 Mục tiêu luận án 13 Nội dung nghiên cứu luận án 14 Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án 14 Đối tượng, phạm vi, địa điểm thời gian nghiên cứu 14 Những đóng góp luận án 14 CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 15 1.1 Tình hình trồng ớt, lạc Việt Nam giới 15 1.1.1 Tình hình trồng ớt lạc Việt Nam 15 1.1.2 Tình hình trồng ớt lạc giới 16 1.2 Vi khuẩn Ralstonia solanacearum 17 1.2.1 Đặc điểm phân loại vi khuẩn R solanacearum 17 1.2.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hoá vi khuẩn R solanacearum 19 1.2.3 Các hình thức xâm nhập R solanacearum vào chủ 21 1.2.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến phát triển vi khuẩn R 22 solanacearum 1.3 Tình hình nghiên cứu bệnh héo xanh vi khuẩn Việt 23 Nam giới 1.3.1 Bệnh héo xanh vi khuẩn 23 1.3.2 Tình hình nghiên cứu bệnh héo xanh vi khuẩn Việt Nam 26 1.3.3 Tình hình nghiên cứu bệnh héo xanh vi khuẩn Thế giới 29 1.4 Vi sinh vật đối kháng chế đối kháng 30 1.4.1 Vi sinh vật đối kháng 30 1.4.1.1 Vai trò vi khuẩn đối kháng 31 1.4.1.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến quan hệ đối kháng vi sinh 32 vật 1.4.2 Cơ chế đối kháng vi sinh vật 33 1.4.2.1 Cơ chế kháng sinh 33 1.4.2.2 Cơ chế siderophore 35 1.4.2.3 Cơ chế tăng cường sức đề kháng (kích kháng) 36 1.5 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật đối kháng 38 1.5.1 Nghiên cứu vi sinh vật đối kháng Việt Nam 38 1.5.2 Nghiên cứu vi sinh vật đối kháng giới 40 CHƯƠNG II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 45 NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu 45 2.2 Phương pháp nghiên cứu 46 2.2.1 Khảo sát tình hình bệnh héo xanh ớt lạc miền 46 Bắc miền Trung Việt Nam 2.2.1.1 Đánh giá tình hình bệnh héo xanh lạc miền Bắc 46 miền Trung Việt Nam 2.2.1.2 Phân lập vi khuẩn R solanacearum gây bệnh héo xanh 46 ớt lạc 2.2.2 Nghiên cứu vi khuẩn đối kháng với R solanacearum 49 2.2.2.1 Phân lập tuyển chọn VKĐK R solanacearum 49 2.2.2.2 Đánh giá hoạt tính sinh học chủng vi khuẩn đối 50 kháng 2.2.2.3 Phân loại vi khuẩn đối kháng 52 2.2.2.4 Đánh giá an toàn sinh học (trên chuột bạch) 54 2.2.2.5 Đánh giá khả kiểm soát bệnh héo xanh ớt lạc 55 (trong nhà lưới) chủng vi khuẩn đối kháng 2.2.2.6 Tách xác định Iturin A 56 2.2.2.7 Tách xác định Phenazine 56 2.2.3 Nghiên cứu sản xuất chế phẩm vi sinh HX 57 2.2.3.1 Nghiên cứu tương tác chủng B subtilis ĐKB1 P 57 fluorescens ĐKP1 môi trường 2.2.3.2 Xác định điều kiện nhân sinh khối phù hợp chủng B subtilis ĐKB1 P fluorescens ĐKP1 57 2.2.3.3 Nghiên cứu tạo chất mang 59 2.2.3.4 Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm vi sinh HX 59 2.2.4 Đánh giá hiệu chế phẩm vi sinh HX ớt 60 lạc đồng ruộng 2.2.4.1 Đánh giá hiệu chế phẩm vi sinh HX ớt 60 lạc điều kiện thí nghiệm đồng ruộng 2.2.4.2 Đánh giá hiệu chế phẩm vi sinh HX ớt 61 lạc mô hình đồng ruộng 2.2.5 3.1 Phương pháp xử lý số liệu 62 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 63 Khảo sát tình hình bệnh héo xanh ớt lạc R 63 solanacearum miền Bắc miền Trung Việt Nam 3.1.1 Bệnh héo xanh ớt miền Bắc miền Trung Việt Nam 63 3.1.2 Bệnh héo xanh lạc miền Bắc miền Trung Việt Nam 63 3.1.3 Phân lập vi khuẩn R solanacearum gây bệnh HX ớt 65 lạc 3.1.3.1 Phân lập vi khuẩn R solanacearum gây bệnh héo xanh ớt 66 3.1.3.2 Phân lập vi khuẩn R solanacearum gây bệnh HX lạc 68 3.1.3.3 Đánh giá khác 02 chủng LH3 (gây bệnh HX 71 lạc) YH3 (gây bệnh HX ớt) phân nhóm biovar 3.1.3.4 Hình thái kích thước khuẩn lạc vi khuẩn R solanacearum 72 3.2 Nghiên cứu vi khuẩn đối kháng với R solanacearum 73 3.2.1 Phân lập, tuyển chọn vi khuẩn đối kháng 73 3.2.1.1 Phân lập, lựa chọn chủng vi khuẩn kháng vi khuẩn gây 74 bệnh héo xanh ớt 3.2.1.2 Phân lập, lựa chọn chủng vi khuẩn kháng vi khuẩn gây 79 bệnh héo xanh lạc 3.2.1.3 Khả kiểm soát bệnh héo xanh ớt lạc nhà 84 lưới hai chủng vi khuẩn ĐKB1 ĐKP1 3.2.2 Hoạt tính sinh học chủng VKĐK tuyển chọn 89 3.2.3 Phân loại vi khuẩn đối kháng 91 3.2.3.1 Sử dụng kit API 50 CHB API 20 NE 91 3.2.3.2 Sử dụng phương pháp sinh học phân tử 93 3.2.4 Đánh giá an toàn sinh học vi khuẩn đối kháng 94 3.2.4.1 Xác định độc tính vi khuẩn đối kháng danh mục an 95 toàn sinh học vi sinh vật 3.2.4.2 Xác định độc tính vi khuẩn đối kháng chuột bạch 95 3.2.5 Xác định loại kháng sinh chủng vi khuẩn tuyển 98 chọn sinh 3.2.5.1 Xác định phenazine phương pháp sắc ký lớp mỏng 100 (TLC) sắc ký lỏng cao áp (HPLC) 3.2.5.2 Xác định Iturin A phương pháp sắc ký lỏng siêu cao áp 104 (UPLC/MS/MS) 3.3 Nghiên cứu sản xuất chế phẩm vi sinh HX 106 3.3.1 Phối hợp chủng vi khuẩn đối kháng 106 3.3.1.1 Đánh giá khả tồn môi trường 106 chủng B.subtilis ĐKB1 P fluorescens ĐKP1 3.3.1.2 Đánh giá khả ức chế R solanacearum tổ hợp 107 chủng B.subtilis ĐKB1 P fluorescens ĐKP1 3.3.2 Xác định điều kiện nhân sinh khối phù hợp 109 chủng B subtilis ĐKB1 P fluorescens ĐKP1 3.3.2.1 Nghiên cứu lựa chọn môi trường nhân sinh khối 109 3.3.2.2 Xác định pH ban đầu thích hợp 110 3.3.2.3 Xác định nhiệt độ phù hợp 111 3.3.2.4 Xác định lượng không khí cung cấp thích hợp 112 3.3.2.5 Xác định tốc độ khuấy phù hợp 113 3.3.2.6 Xác định tỷ lệ giống cấp phù hợp cho nhân sinh khối 114 3.3.2.7 Xác định thời gian nhân sinh khối phù hợp 115 3.3.2.8 Hoạt tính đối kháng chủng vi khuẩn sau nhân sinh khối 117 3.3.3 Nghiên cứu tạo chất mang 118 3.3.4 Sản xuất chế phẩm vi sinh HX phòng chống bệnh héo 122 xanh ớt lạc 3.3.4.1 Xây dựng Quy trình sản xuất chế phẩm vi sinh HX phòng 122 chống bệnh héo xanh lạc ớt 3.3.4.2 Đánh giá hoạt lực đối kháng R solanacearum chế phẩm 125 HX 3.4 Hiệu chế phẩm vi sinh HX ớt lạc 127 3.4.1 Trên ớt lạc thí nghiệm đồng ruộng 127 3.4.1.1 Trên ớt 127 3.4.1.2 Trên lạc 128 3.4.2 Trên ớt lạc mô hình đồng ruộng 131 3.4.2.1 Trên mô hình ớt 131 3.4.2.2 Trên mô hình lạc 133 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 137 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA 138 TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO 139 PHỤ LỤC BẢNG CHỮ VIẾT TẮT TT CHỮ VIẾT TẮT CAS CFU ESI HXVK HPLC IAA ISR KK NCBI 10 NN&PTNT 11 PCA 12 PGPB 13 PGPR 14 PDA 15 RFLP 16 TLC 17 18 19 20 VKĐK VSV VKHX SAR 21 WHO TIÊNG ANH TIẾNG VIỆT Chrome Azurol S Colony-forming unit Electrospray ionization Bacterial wilt disease High Pressure Liquid Chromatography Indole-3-acetic acid Induced Systemic Resistance Đơn vị hình thành khuẩn lạc Ion hóa tia điện Bệnh héo xanh vi khuẩn Sắc ký lỏng cao áp Tính kháng hệ thống Không khí Trung tâm Thông tin Công nghệ sinh học Quốc gia National Center for Biotechnology Information Phenazine -1carboxylic acid Plant GrowthPromoting Bacteria Plant Growth Promoting Rhizobacteria Photo Diode Array Restriction fragment length polymorphism Thin layer chromatography Systemic Acquired Resistance World Health Organization Nông nghiệp phát triển nông thôn Axit Phenazine -1- carboxylic Vi khuẩn kích thích sinh trưởng thực vật Vi khuẩn khu trú vùng rễ kích thích sinh trưởng trồng Khoảng bước sóng từ 190- 800 nm Đa hình chiều dài đoạn cắt giới hạn Sắc ký lớp mỏng Vi khuẩn đối kháng Vi sinh vật Vi khuẩn gây bệnh héo xanh Tính kháng hệ thống có điều kiện Tổ chức Y tế giới XỬ LÝ SỐ LIỆU Bảng 3.26: Ảnh hưởng tỷ lệ giống cấp đến chất lượng sinh khối VK Mật độ tế bào chủng B.subtilis ĐKB1 sau 36h nhân sinh khối % cấp 0,5 Đơn vị x 105 cfu/ml x 106 cfu/ml x 107 cfu/ml x 107 cfu/ml LN1 15 134 22 39 LN2 21 134 24 44 LN3 18 140 23 40 TB 18 136 23 41 STDEV 3,00 3,46 1,00 2,65 Mật độ tế bào chủng P fluorescens ĐKP1 sau 30h nhân sinh khối % cấp 0,5 Đơn vị x 105 cfu/ml x 107 cfu/ml x 107 cfu/ml x 107 cfu/ml LN1 148 148 29 52 LN2 150 152 26 55 LN3 164 138 35 52 TB 154 146 30 53 STDEV 8,72 7,21 4,58 1,73 XỬ LÝ SỐ LIỆU Bảng 3.27: Ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng đến sinh trưởng chủng vsv Mật độ tế bào chủng B.subtilis ĐKB1 DD King B SPA SX1 SX2 SX3 SX4 Đơn vị x 107 cfu/ml LN1 LN2 40 98 24 47 44 x 105 cfu/ml x 106 cfu/ml x 107 cfu/ml x 106 cfu/ml 44 125 26 30 43 LN3 48 137 29 38 34 TB 44,00 STDEV 4,00 120,00 26,33 38,33 40,33 19,97 2,52 8,50 5,51 LN3 TB Mật độ tế bào chủng P fluorescens ĐKP1 DD King B SPA SX1 SX2 SX3 SX4 Đơn vị x 107 cfu/ml x 107 cfu/ml x 107 cfu/ml x 107 cfu/ml x 106 cfu/ml LN1 154 20 26 112 90 LN2 164 26 24 132 95 162 26 34 116 110 STDEV 160,00 24,00 28,00 120,00 98,33 5,29 3,46 5,29 10,58 10,41 XỬ LÝ SỐ LIỆU Bảng 3.28: Hoạt lực đối kháng R solanacearum chủng vi khuẩn trước sau nhân sinh khối Ký hiệu chủng B subtilis ĐKB1 P fluorescens ĐKP1 Thời điểm Trước nhân sinh khối Sau nhân sinh khối Trước nhân sinh khối Sau nhân sinh khối Đường kính vòng ức chế R solanacearum (D-d, mm) TB STDEV LN1 LN2 LN3 14,8 15,2 15,3 15,3 14,9 14,5 15 15 0,22 0,36 15,7 15,6 16 16,2 16,3 16,2 16 16 0,24 0,28 XỬ LÝ SỐ LIỆU Bảng 3.31: Mật độ tế bào chủng vi khuẩn chất mang dạng bột sau 30 ngày nhiễm Đơn chủng B subtilis ĐKB1 P fluorescens ĐKP1 Đơn vị x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 107 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 107 cfu/g x 106 cfu/g CT CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 LN1 57 28 38 45 28 27 47 24 19 48 LN1 62 40 31 53 32 40 63 27 25 53 LN3 49 28 36 46 33 29 61 27 22 55 TB 56,00 32,00 35,00 48,00 31,00 32,00 57,00 26,00 22,00 52,00 STDEV 6,56 6,93 3,61 4,36 2,65 7,00 8,72 1,73 3,00 3,61 LN1 49 34 32 162 21 107 18 15 21 21 LN3 46 29 26 143 21 108 23 17 18 22 TB STDEV 44,00 6,24 30,00 3,61 28,00 3,46 150,00 10,44 20,00 1,73 110,00 4,36 22,00 3,61 16,00 1,00 19,00 1,73 20,00 2,65 Hỗn hợp B subtilis ĐKB1 P fluorescens ĐKP1 Đơn vị x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 105 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 107 cfu/g x 106 cfu/g CT CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 LN1 37 27 26 145 18 115 25 16 18 17 XỬ LÝ SỐ LIỆU Bảng 3.32: Hoạt lực đối kháng R solanacearum chủng VK chất mang dạng bột sau 30 ngày nhiễm Đơn chủng Đường kính vòng phân giải (D-d,mm) B subtilis ĐKB1 P fluorescens ĐKP1 CT CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 LN1 13,7 14 15,2 13,5 13,5 14,7 15 16,2 15,7 14,8 LN1 14,2 14,3 14,9 14 14,3 15,2 14,6 15,3 14,3 15,4 LN3 14,1 13,7 14,9 14,5 14,2 15,1 15,4 16,5 15 14,8 TB 14,00 14,00 15,00 14,00 14,00 15,00 15,00 16,00 15,00 15,00 STDEV 0,26 0,30 0,17 0,50 0,44 0,26 0,40 0,62 0,70 0,35 LN3 14,2 14,5 15,3 13,7 14,2 15,1 14,8 16,1 15,2 14,8 TB 14,00 14,00 15,00 14,00 14,00 15,00 15,00 16,00 15,00 15,00 STDEV 0,44 0,46 0,30 0,44 0,44 0,66 0,44 0,17 0,72 0,35 Hỗn hợp Đường kính vòng phân giải (D-d,mm) B subtilis ĐKB1 P fluorescens ĐKP1 CT CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 LN1 14,3 13,9 14,7 14,5 13,5 15,6 14,7 15,8 15,6 14,8 LN1 13,5 13,6 15 13,8 14,3 14,3 15,5 16,1 14,2 15,4 XỬ LÝ SỐ LIỆU BẢNG 3.33 Khả tồn chủng VK chất mang than bùn Đơn chủng Mật độ tế bào chủng B.subtilis ĐKB1 Thời gian (tháng) Đơn vị x 105 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g LN1 24 236 300 236 15 LN2 20 234 320 206 15 LN3 16 220 310 218 18 TB LN1 136 184 215 268 118 LN2 161 160 267 250 114 LN3 153 172 256 270 98 TB STDEV 150 12,77 172 12,00 246 27,40 263 11,02 110 10,58 LN1 68 94 230 260 140 LN2 60 97 200 248 127 LN3 70 110 236 243 133 TB LN1 136 94 165 220 95 LN2 128 120 172 225 90 LN3 140 110 188 204 106 TB STDVE 135 6,11 108 13,11 175 11,79 216 10,97 97 8,19 20 230 310 220 16 STDEV 4,00 8,72 10,00 15,10 1,73 Mật độ tế bào chủng P fluorescens ĐKP1 Thời gian (tháng) Đơn vị x 105 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 105 cfu/g Hỗn hợp Mật độ tế bào chủng B.subtilis ĐKB1 Thời gian (tháng) Đơn vị x 105 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 105 cfu/g 66 100 222 250 133 STDVE 5,29 8,50 19,29 8,74 6,51 Mật độ tế bào chủng P fluorescens ĐKP1 Thời gian (tháng) Đơn vị x 105 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 105 cfu/g Bảng 3.34: Khả tồn B subtilis ĐKB1 P fluorescens ĐKP1 chế phẩm sau thời gian bảo quản Mật độ tế bào chủng B.subtilis ĐKB1 Thời gian (tháng) Đơn vị x 105 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 107 cfu/g x 107 cfu/g LN1 15 100 240 160 100 60 40 LN2 19 120 200 140 120 80 60 LN3 15 140 280 180 140 100 80 TB 16,33 120,00 240,00 160,00 120,00 80,00 60,00 STDEV 2,31 20,00 40,00 20,00 20,00 20,00 20,00 LN2 42 215 300 270 163 120 38 LN3 50 204 312 283 139 140 51 TB 44,00 200,33 300,33 280,67 150,67 120,00 40,67 STDEV 5,29 16,80 11,50 9,71 12,01 20,00 9,29 Mật độ tế bào chủng P fluorescens ĐKP1 Thời gian (tháng) Đơn vị x 105 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 106 cfu/g x 107 cfu/g x 107 cfu/g LN1 40 182 289 289 150 100 33 SỐ LIỆU THÔ THÍ NGHIỆM ĐỒNG RUỘNG TRÊN CÂY LẠC ỨNG HOÀ – HÀ NỘI, Vụ Hè Thu, 2013 Cao lạc (ĐÓI CHỨNG) Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Cây 36 35,6 35,7 35,7 35,5 Cây 35,3 35 34 32 37,4 Cây 34 34 36,3 34,1 32,3 Cây 37 39 37,9 36,3 35 Cây 34 37,3 33,7 38 34 Cây 33,8 34 33,5 35 36,3 Cây 36 39,5 32 35 33,6 Cây 37,5 34,4 32 38 35,4 Cây 34,6 33,7 30 36,3 38,4 Cây 10 33,8 37,5 35,9 32,6 36,1 TB 35,2 36,0 34,1 35,3 35,4 Cây 35,3 37,5 33 37,7 38,8 Cây 34,8 35,5 33,7 36,6 38,5 Cây 36,8 38 40,5 35,7 39 Cây 39,5 38,3 37,7 37,4 36,3 Cây 10 40,5 37 33 33,5 34 TB 36,8 37,2 35,8 36,8 36,9 Cây 5,7 5,1 4,6 5,4 4,8 Cây 4,6 5,2 5,8 Cây 5,5 4,9 5,5 6,9 Cây 5,2 5,7 5,2 4,9 5,2 Cây 10 4,7 5,2 5,8 4,8 5,6 TB 5,31 5,14 5,23 5,40 5,46 Cây 6,3 5,7 6,3 5,8 6,4 Cây 6,3 6,3 6,4 6,3 6,1 Cây 6,4 5,9 6,2 6,1 Cây 5,9 6,3 6,4 6,4 6,3 Cây 10 5,8 6,4 6,2 6,3 5,9 TB 6,12 6,05 6,21 6,09 6,04 Cao lạc (THÍ NGHIỆM) Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Cây 35,5 34,6 37,7 38,6 35,6 Cây 38,4 39,5 34 39,7 32,3 Cây 36,2 36,6 32 34,5 37,7 Cây 35,8 36,2 38,5 38,8 37,3 Cây 35,2 38,8 37,9 35,5 39,5 Năng suất lý thuyết lạc (ĐỐI CHỨNG) Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Cây 6,3 4,6 5,2 5,7 4,7 Cây 5,5 5,6 4,9 5,2 5,2 Cây 4,7 5,2 5,8 5,9 5,8 Cây 4,3 4,8 5,2 5,5 5,5 Cây 5,2 5,7 4,9 4,8 5,9 Năng suất lý thuyết (THÍ NGHIỆM) Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Cây 6,3 5,7 6,5 5,6 5,7 Cây 5,9 5,9 6,4 6,1 6,4 Cây 6,2 6 6,2 Cây 6,3 5,9 6,4 5,8 Cây 5,8 6,3 5,8 5,9 5,6 THÍ NGHIỆM ĐỒNG RUỘNG - TRÊN CÂY LẠC Năng suất LT lạc ĐC 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 Quả 13 11 11 13 12 14 11 13 12 14 10 15 13 10 12 13 12 10 13 13 12 13 15 13 12 13 14 14 14 14 13 12 13 12 12 15 12 13 14 13 14 15 12 10 11 12 13 12 P100 (g) 142,7 142,7 142,7 142,7 142,7 142,7 142,7 142,7 142,7 142,7 141,85 141,85 141,85 141,85 141,85 141,85 141,85 141,85 141,85 141,85 141,11 141,11 141,11 141,11 141,11 141,11 141,11 141,11 141,11 141,11 139,79 139,79 139,79 139,79 139,79 139,79 139,79 139,79 139,79 139,79 140,9 140,9 140,9 140,9 140,9 140,9 140,9 140,9 140,9 140,9 Năng suất lý thuyết lạc TN NSLT (g) 556530000 470910000 470910000 556530000 513720000 599340000 470910000 556530000 513720000 599340000 425550000 638325000 553215000 425550000 510660000 382995000 553215000 510660000 425550000 553215000 550329000 507996000 550329000 634995000 550329000 507996000 550329000 592662000 592662000 592662000 587118000 545181000 503244000 545181000 503244000 503244000 629055000 503244000 545181000 587118000 549510000 591780000 634050000 507240000 422700000 464970000 507240000 549510000 507240000 380430000 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 Quả 13 15 14 16 12 13 14 13 15 13 15 14 16 16 15 16 14 14 13 16 12 14 13 15 16 14 15 13 14 12 16 15 15 16 13 13 14 16 13 14 14 13 15 14 16 15 14 12 15 16 P100 (g) 143,41 143,41 143,41 143,41 143,41 143,41 143,41 143,41 143,41 143,41 142,36 142,36 142,36 142,36 142,36 142,36 142,36 142,36 142,36 142,36 142,1 142,1 142,1 142,1 142,1 142,1 142,1 142,1 142,1 142,1 141,48 141,48 141,48 141,48 141,48 141,48 141,48 141,48 141,48 141,48 142,4 142,4 142,4 142,4 142,4 142,4 142,4 142,4 142,4 142,4 NSLT (g) 559299000 645345000 602322000 688368000 516276000 559299000 602322000 559299000 645345000 559299000 640620000 597912000 683328000 683328000 640620000 683328000 597912000 597912000 555204000 683328000 511560000 596820000 554190000 639450000 682080000 596820000 639450000 554190000 596820000 511560000 679104000 636660000 636660000 679104000 551772000 551772000 594216000 679104000 551772000 594216000 598080000 555360000 640800000 598080000 683520000 640800000 598080000 512640000 640800000 683520000 SỐ LIỆU THÔ THÍ NGHIỆM ĐỒNG RUỘNG TRÊN CÂY ỚT MÊ LINH – HÀ NỘI, Vụ Hè Thu, 2013 THÍ NGHIỆM ĐỒNG RUỘNG - TRÊN CÂY Ớt Cao lô ( ĐC) Điểm 21 17,4 17,44 17,5 18,4 16,4 19,5 19,4 18,6 19,7 17,8 16,9 22,5 20,5 20,3 18,8 18,12 21,6 17,5 17,8 20,2 19,7 17,7 19,8 21,4 17 16,5 18,6 17,5 17,3 TB 18,53 18,02 19,54 18,56 19,15 20,3 18,4 17,13 22 19 19,32 18,64 18,02 20,31 19,38 19,134 19,14 19,38 18,35 19,87 20,02 19,352 22,34 23,75 22,46 23,25 24,03 23,166 18,76 Cao lô (TN ) 18,5 20,4 17 22,3 18,4 16,3 17,25 20,7 21 20,6 20,7 18,5 16,5 17,5 21,7 19,5 19,6 17,3 18,1 17 20,6 17,7 19,5 21 19,6 Năng suất tươi ( tấn/ha) ( ĐC ) 19 18,2 17,3 20,6 19,4 18,6 20,4 19,5 19,3 22,1 22,5 23,4 21,7 24,4 24,6 22 24 22,5 23,8 23,3 19,7 18,4 19,5 19,5 21,4 18,54 19,5 17,4 19,13 19,22 19 19,48 18,6 21 19 20 20,3 17,8 19,7 19 Năng suất tươi ( tấn/ha ) ( TN ) 21,5 23,3 23,4 22,8 23,9 23 24,5 21,7 21,6 24,78 22,54 23,9 22,66 23 22,6 22,5 23,4 22,8 23,9 25 THÍ NGHIỆM ĐỒNG RUỘNG - TRÊN CÂY Ớt Hiệu phòng trừ bệnh héo xanh vi khuẩn hại ớt chế phẩm HXL Giai đoạn Lô 1: Đ/C Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 0 Lô 2: Chế phẩm vi sinh HXL 0 Giai đoạn nụ, hoa, Lô 1: Đ/C Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 0 Lô 2: Chế phẩm vi sinh HXL 0 0 THÍ NGHIỆM ĐỒNG RUỘNG - TRÊN CÂY LẠC Hiệu phòng trừ bệnh héo xanh vi khuẩn lạc ( Ứng Hoà ) Giai đoạn CT1 Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm CT2 2 0 Giai đoạn nụ, hoa, Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm CT1 CT2 2 1 0 Giai đoạn trước thu hoạch CT1 Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 0 0 0 SỐ LIỆU THÔ MÔ HÌNH ĐỒNG RUỘNG TRÊN CÂY LẠC TĨNH GIA – THANH HOÁ, Vụ Đông Xuân, 2014 Tỉ lệ héo xanh lạc Thanh Hoá ( ĐC ) Gđ Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 10 Gđ nụ, hoa, non 1 1 0 Gđ trước thu hoạch 5 1 2 Tỉ lệ héo xanh lạc Thanh Hoá ( TN ) Gđ Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 10 Gđ nụ, hoa, non 0 0 0 0 0 Cao ĐC (cm) Cây2 Cây1 Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 10 38 40 37 40,3 35,6 40,4 36,5 37,5 38 37,6 38,5 38,8 39,4 41,4 38,5 39,5 38,7 41 40,5 38 0 0 0 0 Cây3 37,5 37,5 36,6 40,6 36,6 39 38,6 36,7 37,5 37,3 Cao TN (cm) Cây2 Cây1 Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 10 Gđ trước thu hoạch 1 1 0 1 39,5 38,5 38 40,1 37,3 38,5 37,4 38,2 39 39 Cây3 37,9 39,9 40,7 38,8 40,7 41,4 39,8 40,2 40,2 38,5 40,3 40,4 39,6 39,5 39,9 40,6 38,9 39,8 39,7 39,5 MÔ HÌNH ĐỒNG RUỘNG - TRÊN CÂY LẠC Năng suất lạc ĐC Quả chắc/ Cây Cây Cây Cây Cây Cây Cây Cây Cây Cây 10 Cây 11 Cây 12 Cây 13 Cây 14 Cây 15 Cây 16 Cây 17 Cây 18 Cây 19 Cây 20 Cây 21 Cây 22 Cây 23 Cây 24 Cây 25 Cây 26 Cây 27 Cây 28 Cây 29 Cây 30 Cây 31 Cây 32 Cây 33 Cây 34 Cây 35 Cây 36 Cây 37 Cây 38 Cây 39 Cây 40 Cây 41 Cây 42 Cây 43 Cây 44 Cây 45 Cây 46 Cây 47 Cây 48 Cây 49 Cây 50 7 6 5 6 7 6 5 6 7 8 7 7 8 6 P100 137,3 137,3 137,3 137,3 137,3 137,3 137,3 137,3 137,3 137,3 137,0 137,0 137,0 137,0 137,0 137,0 137,0 137,0 137,0 137,0 137,1 137,1 137,1 137,1 137,1 137,1 137,1 137,1 137,1 137,1 136,9 136,9 136,9 136,9 136,9 136,9 136,9 136,9 136,9 136,9 137,3 137,3 137,3 137,3 137,3 137,3 137,3 137,3 137,3 137,3 Năng suất lạc TN NS(g) 247140000 288330000 247140000 288330000 329520000 205950000 247140000 247140000 288330000 329520000 205500000 205500000 205500000 246600000 246600000 287700000 287700000 328800000 246600000 246600000 287805000 205575000 205575000 246690000 246690000 287805000 287805000 287805000 328920000 328920000 328560000 205350000 246420000 287490000 246420000 287490000 287490000 287490000 287490000 369630000 205950000 164760000 288330000 329520000 288330000 329520000 247140000 247140000 247140000 288330000 Quả chắc/ Cây Cây Cây Cây Cây Cây Cây Cây Cây Cây 10 Cây 11 Cây 12 Cây 13 Cây 14 Cây 15 Cây 16 Cây 17 Cây 18 Cây 19 Cây 20 Cây 21 Cây 22 Cây 23 Cây 24 Cây 25 Cây 26 Cây 27 Cây 28 Cây 29 Cây 30 Cây 31 Cây 32 Cây 33 Cây 34 Cây 35 Cây 36 Cây 37 Cây 38 Cây 39 Cây 40 Cây 41 Cây 42 Cây 43 Cây 44 Cây 45 Cây 46 Cây 47 Cây 48 Cây 49 Cây 50 7 7 8 9 8 7 8 6 6 7 6 P100 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,4 139,2 139,2 139,2 139,2 139,2 139,2 139,2 139,2 139,2 139,2 139,0 139,0 139,0 139,0 139,0 139,0 139,0 139,0 139,0 139,0 139,3 139,3 139,3 139,3 139,3 139,3 139,3 139,3 139,3 139,3 NS (g) 292740000 292740000 250920000 334560000 209100000 250920000 292740000 209100000 292740000 292740000 334560000 334560000 334560000 376380000 376380000 250920000 292740000 334560000 209100000 250920000 292320000 334080000 334080000 292320000 292320000 250560000 334080000 250560000 292320000 334080000 291900000 250200000 333600000 250200000 250200000 250200000 291900000 250200000 333600000 291900000 250650000 250650000 292425000 292425000 250650000 250650000 292425000 250650000 334200000 250650000 SỐ LIỆU THÔ MÔ HÌNH ĐỒNG RUỘNG TRÊN CÂY ỚT MÊ LINH – HÀ NỘI, Vụ Đông Xuân, 2014 MÔ HÌNH ĐỒNG RUỘNG - TRÊN CÂY ỚT Hiệu phòng bệnh héo xanh vi khuẩn hại ớt chế phẩm HXL ( Mê Linh ) Giai đoạn Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 10 CT ( ĐC) 0 1 0 CT2 ( TN ) 0 0 0 0 Giai đoạn nụ hoa, quả, CT Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 10 CT 0 1 0 0 0 0 0 0 0 Giai đoạn trước thu hoạch CT Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 10 CT 0 0 0 0 0 0 0 0 0 MÔ HÌNH ĐỒNG RUỘNG - TRÊN CÂY ỚT Hiệu chế phẩm vi sinh HXL tới ớt ( Mê Linh ) Cao ớt - ĐC cây 56,4 55,7 63,7 63 51,4 63,5 58,5 59,5 55 59,3 59,5 63,5 64,5 64,6 55,2 59,3 60,4 58,9 53 58,5 63,7 53,1 57,8 60,4 58,3 60,3 60,5 60,7 62 61,4 59,4 58,4 59,4 62,4 62,4 57,8 63,4 62,5 63,7 63,5 Năng suất tươi Cây Cây 1,65 1,78 1,85 1,96 1,79 1,98 1,73 1,96 1,9 1,97 1,6 1,96 1,85 2,05 1,76 1,97 1,76 1,95 1,89 1,79 ĐC Cây 1,65 2,34 2,07 1,89 1,78 1,76 1,96 2,05 1,88 1,66 Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 10 55,7 62,4 58,2 62,4 55 57,4 66 55,7 57,5 53,4 53,8 57,9 65 65 57,8 60,2 59,7 60,1 58,5 53 63,5 59,5 59 62 53,5 56,7 64,6 62,4 52 53,6 63,3 60,4 64 64 54,7 61,7 62,8 54,4 59,4 60 TB 58,7 59,9 62,4 63,5 54,6 59,8 62 58,5 55,9 56,3 Cao ớt TN Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 10 Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 10 58,4 55,5 56,5 59,4 65 55,5 65 58,3 60,5 58 Năng suất tươi Cây Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm Điểm 10 Cây 22,1 21,8 21,5 22 22,2 22,4 21,7 22,1 22,1 22 Cây 1,87 1,89 1,98 1,86 1,86 1,88 1,88 2,09 1,68 1,94 Cây 1,83 1,93 2,15 1,69 1,99 1,72 1,79 1,78 1,9 1,75 Cây 1,76 1,63 1,76 1,8 1,7 1,62 1,79 1,86 2,08 1,65 NS ( kg/m2 ) 1,757 1,933 1,955 1,822 1,867 1,757 1,887 1,918 1,875 1,780 Cây 22,4 22,24 22,4 22,4 22,4 22,4 22,3 22 22,3 21,4 Cây 22,6 21,9 22,2 21,8 22,3 22,3 22 22 22,7 22 NS (tấn/ha) 22,4 22,04 21,98 22,1 22,3 22,5 21,9 21,9 22,4 21,8 60,2 56,5 58,5 62,6 62,5 57,8 64,3 60,2 63 59,4 THÍ NGHIỆM Cây 22,5 21,9 21,7 22,4 22,5 22,7 22,1 21,5 22,5 21,7 59 56,7 62,3 65 64,5 55 68,4 57,6 65 60,5 60,2 59,7 57 64,4 63,3 56 60 59 65,8 56 TB 60,5 55,6 58 64 61,5 62,2 68,5 63,1 61 57 22 22,3 22,3 22 22,3 22,4 21,8 22 22,4 21,5 Cây 22,8 22,1 21,8 21,9 22,1 22,8 21,5 21,8 22,4 22,2 [...]... chủng vi khuẩn R solanacearum YH3 gây bệnh héo xanh cây ớt 79 Khả năng ức chế vi khuẩn R solanacearum gây bệnh héo xanh cây lạc của các chủng vi khuẩn phân lập Một số đặc điểm sinh học của chủng vi khuẩn ĐKP1 82 Khả năng cạnh tranh của vi khuẩn đối kháng ĐKP1 và 83 chủng vi khuẩn R solanacearum LH3 Hiệu quả kiểm soát bệnh héo xanh cây ớt (giống ớt cay 85 LN57) trong nhà lưới của hai chủng vi khuẩn. .. phẩm vi sinh (HX) trong phòng chống bệnh héo xanh cây ớt và lạc có hiệu quả cao, thân thiện với môi trường 5 Đối tượng, phạm vi, địa điểm và thời gian nghiên cứu - Đối tượng: Vi khuẩn R solanacearum, VKĐK, cây ớt, cây lạc - Phạm vi: Những vùng trồng lạc và ớt bị bệnh héo xanh ở miền Bắc Vi t Nam; bệnh héo xanh vi khuẩn; chế phẩm vi sinh phòng bệnh héo xanh - Địa điểm: Vi n Thổ nhưỡng Nông hóa, Vi n... Pss4, nuôi cấy trên môi trường TTC Cây lạc bị chết do bệnh héo xanh vi khuẩn (mẫu bệnh héo xanh lạc thu thập tại Tĩnh Gia, Thanh Hóa) A: Cây ớt bị chết do bệnh héo xanh vi khuẩn; B Dịch vi khuẩn R solanacearum màu trắng sữa thôi ra từ thân cây bị bệnh HXVK (Nguồn: Vi n TNNH) Bệnh héo xanh cây lạc (Nghi Lộc, Nghệ An, tháng 3-2014) Lây bệnh héo xanh vi khuẩn nhân tạo trên cây lạc Hình ảnh thử phản ứng siêu... đi sâu nghiên cứu bệnh HXVK ở cây lạc, ớt và phân lập, tuyển chọn vi khuẩn đối kháng (VKĐK) cũng như xác định cơ chế kháng vi khuẩn R solanacearum của các chủng VKĐK tuyển chọn để sản xuất chế phẩm vi sinh sử dụng trong phòng trừ bệnh héo xanh lạc và ớt 2 Mục tiêu của luận án Tuyển chọn được các chủng vi khuẩn đối kháng có khả năng kháng cao với vi khuẩn R solanacearum để sản xuất chế phẩm vi sinh... trừ bệnh héo xanh cây ớt và lạc Xác định được cơ chế kháng vi khuẩn R solanacearum của các chủng VKĐK tuyển chọn 13 3 Nội dung nghiên cứu của luận án 3.1 Khảo sát tình hình bệnh héo xanh cây ớt và lạc ở miền Bắc và miền Trung Vi t Nam; Phân lập vi khuẩn R .solanacearum 3.2 Nghiên cứu vi khuẩn đối kháng với R solanacearum 3.3 Nghiên cứu sản xuất chế phẩm vi sinh HX 3.4 Đánh giá hiệu quả của chế phẩm vi. .. những nơi nghiên cứu sâu nhất về loại vi khuẩn gây bệnh héo xanh này Tại hội nghị chuyên đề về vi khuẩn gây bệnh héo xanh được tổ chức tại Pháp ngày 22 - 27 tháng 6 năm 1997, một số công trình nghiên cứu quan trọng liên quan đến vi c nghiên cứu và phòng chống bệnh này đã được công bố như: Hiệu quả của vi c luân canh cây trồng và bỏ hoang đất trong phòng chống bệnh héo ở chuối [93]; Cảm ứng kháng bệnh có... phát triển của bệnh Các nghiên cứu trên cây lạc cho thấy, bệnh héo xanh hại lạc do vi khuẩn R solanacearum gây ra, phát sinh và gây hại nặng từ giai đoạn cây lạc ra hoa rộ - quả non Trên đất luân canh với lúa nước thì mức độ nhiễm bệnh nhẹ hơn so với độc canh cây lạc hay luân canh với cây trồng khác Từ các kết quả nghiên cứu về đa dạng ADN các chủng vi khuẩn R solanacearum gây bệnh héo xanh cây lạc bằng... race quan trọng nhất, cây ký chủ, phân bố địa lý của 18 R solanacearum Phân nhóm vi khuẩn R solanacearum thành các biovar 48 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc các chủng vi khuẩn R 66 solanacearum phân lập từ cây ớt Đặc điểm hình thái khuẩn lạc các chủng vi khuẩn R 68 solanacearum phân lập từ cây lạc 75 Khả năng ức chế vi khuẩn R solanacearum gây bệnh héo xanh cây ớt của các chủng vi khuẩn phân lập Một số... tính đối kháng R solanacearum 2 chủng vi khuẩn B.subtilis ĐKB1 và P fluorescens ĐKP1 trong chất mang sau 30 ngày nhiễm, trong điều kiện hỗn hợp chủng vi khuẩn (A) và đơn chủng vi khuẩn (B) Minh họa quá trình sản xuất chế phẩm vi sinh HX phòng chống bệnh héo xanh cây lạc và ớt Sơ đồ Qui trình sản xuất chế phẩm vi sinh HX phòng chống bệnh héo cây lạc và ớt Hoạt lực đối kháng R solanacearum của chế phẩm vi. .. sản xuất chế phẩm vi sinh phòng trừ bệnh HXVK, góp phần nâng cao năng suất, chất lượng nông sản, giảm thiệt hại kinh tế cho người nông dân và xã hội là vi c làm có ý nghĩa khoa học và thực tiễn cao Xuất phát từ những lý do trên, chúng tôi lựa chọn đề tài luận án: Nghiên cứu, tuyển chọn vi khuẩn đối kháng chống Ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh cây trồng Trong số các cây trồng quan trọng trong ... xanh vi khuẩn Vi t 23 Nam giới 1.3.1 Bệnh héo xanh vi khuẩn 23 1.3.2 Tình hình nghiên cứu bệnh héo xanh vi khuẩn Vi t Nam 26 1.3.3 Tình hình nghiên cứu bệnh héo xanh vi khuẩn Thế giới 29 1.4 Vi. .. khuẩn lạc vi khuẩn R solanacearum 72 3.2 Nghiên cứu vi khuẩn đối kháng với R solanacearum 73 3.2.1 Phân lập, tuyển chọn vi khuẩn đối kháng 73 3.2.1.1 Phân lập, lựa chọn chủng vi khuẩn kháng vi. .. kháng vi khuẩn gây 74 bệnh héo xanh ớt 3.2.1.2 Phân lập, lựa chọn chủng vi khuẩn kháng vi khuẩn gây 79 bệnh héo xanh lạc 3.2.1.3 Khả kiểm soát bệnh héo xanh ớt lạc nhà 84 lưới hai chủng vi khuẩn