bộ giáo dục đào tạo trờng đại học nông nghiệp hà nội - NGUYN TH HNG NH HNG CA KH NC LấN S SNG V PHT TRIN CA TRNG, PHễI NG VT NHIT THP Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Hà nội - 2012 giáo dục đào tạo trờng đại học nông nghiệp hà nội NGUYN TH HNG NH HNG CA KH NC LấN S SNG V PHT TRIN CA TRNG, PHễI NG VT NHIT THP Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành : Chn nuụi Mã số : 60.62.40 Ngời hớng dẫn khoa học: TS BI XUN NGUYấN PGS.TS NGUYN B MI Hà nội - 2012 LI CAM OAN Tụi xin cam ủoan ủõy l cụng trỡnh nghiờn cu chớnh tụi thc hin v mt s kt qu cựng cng tỏc vi cỏc cng s khỏc, cỏc s liu lun l trung thc v chớnh xỏc Tụi xin cam ủoan mi s giỳp ủ cho vic thc hin lun ny ủó ủc cm n ủy ủ, cỏc thụng tin trớch dn lun ủó ủc ch rừ ngun gc H Ni, ngy thỏng nm 20 Tỏc gi lun Nguyn Th Hng Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip i LI CM N Tụi xin by t lũng bit n chõn thnh v sõu sc ti TS Bựi Xuõn Nguyờn, ngi ủó tn tỡnh giỳp ủ, to ủiu kin v hng dn trc tip ủ ti lun ca tụi cho ti hon thnh lun Tụi xin by t lũng bit n sõu sc v chõn thnh ti PGS.TS Nguyn Bỏ Mựi, ngi ủó tn tỡnh ch bo v giỳp ủ tụi hon thnh lun Tụi xin by t li cm n chõn thnh ti cỏc cụ, chỳ, anh ch em thuc phũng Cụng ngh Phụi, Vin Cụng ngh sinh hc, Vin Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam c bit, tụi xin by t lũng bit n ti T.S Nguyn Th c, T.S Nguyn Vit Linh, T.S Nguyn Vn Hnh, Nguyn Th Hip, Nguyn Thựy Anh, Nguyn Th Thm, Nguyn Th Nhung, Nguyn Vn Lõm, Nguyn Th Mn ủó nhit tỡnh giỳp ủ tụi sut thi gian lm lun Tụi cng xin chõn thnh cm n B mụn Húa sinh v Sinh lý ủng vt, th cỏn b, giỏo viờn khoa Chn nuụi v Nuụi trng thy sn trng i hc Nụng nghip H Ni Cui cựng, tụi xin chõn thnh cm n gia ủỡnh ủó ủng viờn, ng h, khớch l tụi sut quỏ trỡnh hc v hon thnh lun Thc s ny Xin chõn thnh cm n! H Ni, ngy thỏng nm 20 Tỏc gi lun Nguyn Th Hng Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip ii DANH MC CH VIT TT Ch vit tt Tờn ủy ủ ANH : anhydrobiosis DES : dehydration AFP : Antifreeze peptides, peptide chng ủụng SCP : supercooling point, ủim lm chm ủụng PBS : Phosphate Buffered Saline DPBS : Dullbeccos phosphate-buffered saline GV : (geminal vesicle): trng giai ủon búng mm MII : (metaphase II): trng giai ủon trung k II CPAs : (cryoprotectants) cht bo qun lnh NST : nhim sc th DMSO : Dimethyl sulfoxide Gly : Glycerol EG : Ethylene glycol Met : Methanol Proh : 1,2-propanediol FBS : fetal bovine serum Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip iii MC LC LI CAM OAN i LI CM N ii DANH MC CH VIT TT .iii MC LC iv DANH MC BNG vii DANH MC HèNH NH ix DANH MC TH x PHN I M U 1.1 t ủ 1.2 Mc tiờu ca ủ ti 1.3 í ngha ca ủ ti PHN II TNG QUAN 2.1 Kh nc - c ch chng chu lnh v bo tn s sng 2.2 Kh nng kh nc ca trng, phụi ủng vt thy sn v ủng vt cú vỳ 11 2.2.1 C ch tỏc ủng ca kh nc lờn trng, phụi ủng vt thy sn v ủng vt cú vỳ 11 2.2.2 nh hng ca kh nc lờn s sng ca trng, phụi ủng vt thy sn 13 2.2.3 nh hng ca kh nc lờn s sng ca trng, phụi ủng vt cú vỳ 15 2.3 nh hng ca nhit ủ thp lờn s sng ca trng, phụi ủng vt cú vỳ v thy sn 18 2.3.1 C ch tỏc ủng ca nhit ủ thp lờn trng, phụi ủng vt thy sn v ủng vt cú vỳ 18 2.3.2 nh hng ca nhit ủ thp lờn s sng ca trng, phụi cỏ 19 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip iv 2.3.3 nh hng ca nhit ủ thp lờn s sng ca trng ln 21 2.4 ng dng ca kh nc bo qun lnh trng, phụi ủng vt 22 2.4.1 Nguyờn lý v phng phỏp bo qun lnh trng, phụi ủng vt 22 2.4.2 ng dng ca kh nc bo qun lnh trng, phụi cỏ 26 2.4.3 ng dng ca kh nc bo qun lnh trng, phụi ủng vt cú vỳ, ln 29 PHN III I TNG - NI DUNG V PHNG PHP NGHIấN CU 33 3.1 i tng, thi gian v ủim nghiờn cu 33 3.1.1 i tng nghiờn cu 33 3.1.2 Thi gian nghiờn cu 33 3.1.3 a ủim nghiờn cu 33 3.2 Ni dung nghiờn cu 33 3.2.1 Tỏc ủng ca kh nc, cht bo qun lnh v nhit ủ thp lờn s sng ca phụi cỏ tra 33 3.2.2 Tỏc ủng ca kh nc, cht bo qun lnh v nhit ủ thp lờn s sng ca trng ln 34 3.3 Phng phỏp nghiờn cu 35 3.3.1 Phụi cỏ tra 35 3.3.2 Trng ln 38 3.4 Phng phỏp x lý s liu 43 PHN IV KT QU V THO LUN 45 4.1 nh hng ca kh nc, cht bo qun lnh v nhit ủ thp lờn s sng ca phụi cỏ tra 45 4.1.1 nh hng ca kh nc lờn s sng ca phụi cỏ tra nhit ủ phũng 45 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip v 4.1.2 nh hng ca nhit ủ thp lờn s sng ca phụi cỏ tra 47 4.1.3 nh hng ca kh nc lờn s sng ca phụi cỏ tra nhit ủ thp 52 4.1.4 nh hng ca cỏc cht bo qun lnh riờng l nhit ủ phũng v nhit ủ thp 59 4.1.5 nh hng ca kh nc kt hp cht bo qun lnh nhit ủ phũng v nhit ủ thp (0, - 20oC) 67 4.2 nh hng ca kh nc, cht bo qun lnh v nhit ủ thp lờn s sng ca trng ln 72 4.2.1 nh hng ca kh nc lờn s sng ca trng ln nhit ủ phũng 72 4.2.2 nh hng ca nhit ủ thp lờn s sng ca trng ln 77 4.2.3 nh hng ca kh nc nhit ủ thp lờn s sng ca trng ln 78 4.2.4 nh hng ca cỏc cht bo qun lnh riờng l v kt hp kh nc lờn t l trng thnh thc 81 PHN V KT LUN V NGH 87 5.1 Kt lun 87 5.2 ngh 88 TI LIU THAM KHO 89 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip vi DANH MC BNG STT Tờn cỏc bng Trang Bng 2.1 Mi tng quan gia kh nc v nhit ủ c th Bng 3.1 Phõn loi trng theo Leibried Rutledge v cs (1987) trc ủem nuụi 40 Bng 4.1 nh hng ca s kh nc lờn s phỏt trin ca phụi cỏ tra nhit ủ phũng (n = 3) 45 Bng 4.2 nh hng ca nhit ủ thp lờn s sng ca phụi cỏ tra (n = 3) 47 Bng 4.3 nh hng ca s kh nc lờn s phỏt trin ca phụi cỏ tra nhit ủ 0oC (n = 3) 53 Bng 4.4 nh hng ca s kh nc lờn s sng v phỏt trin ca phụi cỏ tra nhit ủ -20oC 15 phỳt (N = 90, n = 3) 57 Bng 4.5 nh hng ca cỏc cht bo qun lnh riờng l (nng ủ 3M) nhit ủ phũng v nhit ủ thp 15 59 Bng 4.6 nh hng ca cỏc cht bo qun lnh riờng l (nng ủ 1M) nhit ủ phũng v nhit ủ thp 0oC 1h (N = 90, n =3) 63 Bng 4.7 nh hng ca cỏc cht bo qun lnh riờng l (nng ủ 1M) nhit ủ thp -20oC 1h lờn s sng ca phụi cỏ tra (N = 90, n = 3) 64 Bng 4.8 nh hng ca s kt hp kh nc cht bo qun lnh lờn s sng ca phụi cỏ tra nhit ủ phũng 1h (N = 90, n = 3) 67 Bng 4.9 nh hng ca s kt hp kh nc cht bo qun lnh lờn s sng ca phụi cỏ tra nhit ủ 0oC 1h 68 Bng 4.10 nh hng ca s kt hp kh nc cht bo qun lnh lờn s sng ca phụi cỏ tra nhit ủ -20oC 1h 70 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip vii Bng 4.11 nh hng ca s kh nc nhit ủ phũnglờn s thnh thc ca trng ln (n = 3) 72 Bng 4.12 nh hng ca nhit ủ thp lờn t l trng ln thnh thc 77 Bng 4.13 nh hng ca s kh nc nhit ủ 4oC lờn s thnh thc ca trng ln 78 Bng 4.14 nh hng ca cỏc cht bo qun lnh riờng l v kt hp kh nc lờn s thnh thc ca trng ln 83 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip viii vi ethylene 1M, ủú, phụi cỏ tra khụng b nh hng ủn t l n x lý kh nc kt hp vi cht bo qun lnh hu ht cỏc lụ thớ nghim nhng b gim t l cỏ tra n sng lụ sucrose 1M + propaneldiol 1,2 1M v lụ sucrose 1M + ethylene glycol 1M EG 1M MET 1M Proh 1M MET 1M sucrose 1M Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 85 EG 1M sucrose 0,5M MET 1M sucrose 0,5M Proh 1M sucrose 0,5M Proh 1M sucrose 1M EG 1M sucrose 1M i chng Hỡnh 4.5: Hỡnh nh trng ln sau x lý vi cỏc cht bo qun lnh nhit ủ phũng, trng sau MAT II Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 86 PHN V KT LUN V NGH 5.1 Kt lun 5.1.1 Kh nc nhit ủ phũng thi gian di lm gim kh nng phỏt trin ca trng ln v phụi cỏ tra Phụi cỏ tra cú kh nng chng chu tt vi nng ủ kh nc 0,5M v 1M thi gian 2h (t l cỏ n sng cao, 90% v 94,44%) Trng ln cú kh nng chng chu vi nng ủ kh nc 0,5M 20 m khụng lm gim t l trng thnh thc so vi khụng kh nc 5.1.2 Bo qun nhit ủ thp 0oC, -20oC 1h hoc -50oC 15 lm gim ủỏng k kh nng phỏt trin ti giai ủon n sng, thm gõy cht phụi cỏ tra Trng ln rt nhy cm vi x lý nhit ủ thp, ch x lý nhit ủ 4oC lm gim ủỏng k t l trng thnh thc 5.1.3 Kh nc nhit ủ thp vi nng ủ sucrose phự hp (2M 0oC 2h, 0,5M v 2M 15 -20oC) cú tỏc ủng bo v phụi cỏ tra chng li stress lnh v gim tỏc hi ca bin ủi ỏp lc lờn s phỏt trin ca phụi cỏ tra Kh nc nhit ủ thp 4oC vi c nng ủ sucrose ủu cho hiu qu bo v trng ln 5.1.4 Vi nng ủ cao 3M, glycerol v ethylene glycol cú tớnh ủc cao vi phụi cỏ tra c nhit ủ phũng v nhit ủ thp Tuy nhiờn, vi nng ủ 1M, hai cht bo qun lnh ny khụng th hin ủc tớnh rừ rt Methanol v propaneldiol 1,2 nng ủ 1M v 3M kộm ủc vi phụi cỏ tra X lý propaneldiol 1M 1h 0oC cú hiu qu rừ rt bo qun lnh phụi cỏ tra Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 87 Vi trng ln, ethylene glycol v propaneldiol 1,2 cú ủc tớnh thp hn so vi methanol 5.1.5 nhit ủ phũng, x lý kh nc vi sucrose 0,5M kt hp propaneldiol 1,2 hoc ethylene glycol lm gim kh nng phỏt trin ca phụi cỏ tra nhit ủ thp 0oC, x lý kh nc vi sucrose 1M kt hp methanol cú tỏc ủng phi hp dng tớnh bo v phụi cỏ tra nhit ủ thp Vi trng ln, kh nc vi sucrose 0,5M kt hp ethylene glycol nhit ủ phũng kộm gõy hi lờn trng ln, cỏc t hp cũn li ủu lm gim kh nng phỏt trin ca trng ln 5.2 ngh Khi nghiờn cu bo qun lnh phụi cỏ tra cú th s dng hai cht bo qun lnh l propanediol 1,2 v methanol nng ủ 3M Nờn nghiờn cu thờm bo qun lnh phụi cỏ tra nhit ủ thp hn vi s kt hp methanol 1M v sucrose 1M Nghiờn cu bo qun lnh phụi cỏ tra nhit ủ thp hn thi gian di vi vic kt hp kh nc trc bo qun lnh Nờn s dng t hp ethylene glycol + sucrose 0,5M bo qun lnh trn ln Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 88 TI LIU THAM KHO Ting Anh Agca Y., J Liu, J.J Rutledge, E.S Critser, J.K Critser (2000), Effect of osmotic stress on the developmental competence of germinal vesicle and metaphase II stage bovine cumulus oocyte complexes and its relevance to cryopreservation, Mol Reprod Dev, 55(2): 9-212 Allison E.Moisan (2006), Vitrification and dehydration for the preservation of gametes, Doctor of Philosophy in The Interdepartmental Program of Animal and Dairy Sciences, Allison Erna Moisan, http://etd.lsu.edu/docs/available/etd07312006124855/unrestricted/Moisan_di s.pdf Arav A., D Shehu, M Mattioli (1993), Osmotic and cytotoxic study of vitrification of immature bovine oocytes, Journal of Reproduction and Fertility 99, pp 353-358 Barfield J.P., P.M McCue, E.L Squires, G.E Seidel (2009), Effect of Dehydration Prior to Cryopreservation of Large Equine Embryos, Cryobiology, 59(1), pp 36-41 Brian C.F v D.B Terry (2001), Effect of Low-Temperature Incubation of Channel Catfish Ictalurus punctatus Eggs on Development, Survival, and Growth, Journal of the World Aquaculture Society, Volume 32, Issue 2, pp.189194 Cabrita E., V Robles, J.C Wallace, M.C Saraquete, M.P Herrỏez (2006), Preliminary studies on the cryopreservation of gilthead seabream (Sparus aurata) embryos, Aquaculture, 261: 55-245 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 89 Carlos A Martớnez-Palacios, Jordi Comas Morte, Juan Antonio Tello-Ballinas, Mayra Toledo-Cuevas, Lindsay G Ross (2004), The effects of saline environments on survival and growth of eggs and larvae of Chiristoma estor estor Jordan 1880 (Pisces: Atherinidae), Aquaculture 238, pp 509-522 Chen S.L., Y.S Tian (2005), Cryopreservation of flouder (Paralichthys olivaceus) embryos by vitrification, Theriogenology, 63: 191207 Crowe J.H v L.M Crowe (1982), Induction of Anhydrobiosis: Membrance Changes during Drying, Cryobiology 19, pp 317-328 10 Edgar D.H., J Karani, D.A Gook (2009), Increasing dehydration of human cleavage-stage embryos prior to slow cooling significantly increases cryosurvival, Reprod Biomed Online, 19(4): 521-5 11 El-Gayar M., Reischl J., Gauly M., Holtz W (2011), 71 will dehydration by exposure to sucrose improve post vitrification survival of murine embryos vitrified by the open pulled straw method?, Reproduction, Fertility and Development 23(1), pp 141-141 12 Fahy G.M., D.R MacFarlane, C.A Angell, H.T Meryman (1984), Vitrification as an approach to cryopreservation, Cryobiology, 21: 407-426 13 Farrant J., A.E Woolar (1972), Human red cells under hypertonic conditions; a model system for investigating freezing damage, Cryobiology, 9: 9-21 14 Farrant J., C.A Walter, L.E.E Heather, C.E Mc Gann (1977), Use two-step cooling procedures to examine factors influencing cell-survival following freezing and thawing, Cryobiology, 14: 273-286 15 Felix Franks (1985), Biophysics and biochemistry at low temperatures, Cambridge University Press, pp 117-119, 135-139 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 90 16 Fiser P.S., E Fuku, G.J Marcus, A Bielanski, R.W Fairfull, B.R Downey (1993), The effect of partial dehydration on the developmental capacity of mouse embryos stored in the supercooled state, Animal Reproduction Science, Volume 30, Issue , pp 325-333 17 Fujihira T., H Nagai, Y Fukui (2005), Relationship between equilibration times and the presence of cumulus cells, and effect of taxol treatment for vitrification of in vitro matured porcine oocytes, Cryobiology, 51: 339-342 18 Gerard E., B.X Nguyen, E Nguyen, J.P Renard (1991), Rheological changes in mammalian egg cytoskeleton in response to cold adaptation, American Institute of Physics, Conference Proceeding: The living cell in four dimension, G Paillotin (Ed), New York, 226, pp: 37-54 19 Janik M., F.V Kleinhans, M Hagedorm (2000), Overcoming a permeability barrier by microinjecting cryoprotectants into zebrafish embryos (Brachydanio rerio), Cryobiology, 41: 25-34 20 Jason E.P., F.C John, C.H Steven (2001), Survival of water stress in annual fish embryos: dehydration avoidance and egg envelope amyloid fibers, PMID: 11124142 21 Jing Huang, Qingwang Li, Rui Zhao, Wenye Li, Zengsheng Han, Xiaoyu Chen, Bo Xiao, Shuyun Wu, Zhongliang Jiang, Jianhong Hu, Lei Liu (2008), Effect of sugars on maturation rate of vitrified-thawed immature porcine oocytes, Animal Repoduction Science, Volume 106, Issue 1, pp 25-35 22 Hagedorm M., F.V Kleinhans, D.E Wildt, W.F Rall (1997), Chill sensitivity and cryoprotectant permeability of dechorionated zebrafish embryos, Brachydanio rerio, Cryobiology, 34: 63-251 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 91 23 Hagedorm M., S.L Lance, D.M Fonseca, F.V Kleinhans, D Artimov, R Fleischer, ATMS Hoque, M.B Hamilton, B.S Pukazhenthi (2002), Altering fish embryos with aquaporin-3: an essential step toward successful cryopreservation, Biol Reprod, 67: 6-961 24 Hagedorn M., F.W Kleinhans, D Artemov, U Pilatus (1998), Characterization of a major permeability barrier in the zebrafish embryo, Biol Reprod, 59: 50-1240 25 Heyman Y., Z Smorag, L Katska, C Vincent (1986), Influence of carbohydrates, cooling and rapid freezing on viability of bovine non-matured oocytes or 1-cell fertilizing eggs, Cryo-Letters 7, pp 170-183 26 Karl Erik Zachariassen (1985), Physiology of Cold Tolerance in Insects, Physiological Reviews, The American Physiological Society, Vol 65, No 4, pp 826-827 27 Kenneth B.S v M.S Janet (1988), Freeze Tolerance in Animals, Physiological Reviews, Vol 68, No 1, pp 32-35 28 Lahnsteiner F (2008), The effect of internal and external cryoprotectants on zebrafish (Danio rerio) embryos, Theriogenology 69, pp 384-396 29 Leibo S.P (1980), Water permeability and its activation energy of fertilized and unfertilized mouse ova, J.Membrane Biol, 53: 179-188 30 Lin L., Y Du, Y Liu, P.M Kragh, J Li, S Purup, M Kuwayama, X Zhang, H Yang, L Bolund, G Vajta (2009a), Elevated NaCl concentration improves cryotolerance and developmental competence of porcine oocytes, Reprod Biomed Online, 18(3):360-6 31 Lin L., P.M Kragh, S Purup, M Kuwayama, Y Du, X Zhang, H Yang, L Bolund, H Callesen, G Vajta (2009b), Osmotic stress induced by Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 92 sodium chloride, sucrose or trehalose improves cryotolerance and developmental competence of porcine oocytes, Reprod Fertil Dev, 21(2):338-44 32 Lovelock J.E (1953), The mechanism of the protective action of glycerol against haemolysis by freezing and thawing, Biochim Biophys Acta., 11: 28-36 33 Massip A., P Van der Zwalmen (1982), In vitro survival of mouse embryos frozen in glycerol and glycerol-sucrose, Cryo-letters, 3, 326 34 Mazur P (1963), Kinetics of water loss from cells at subzero temperatures and the likelihood of intracellular freezing, J gen Physiol, 47: 357-369 35 Mazur P (1977), The role of intracellular freezing in the death of cells cooled at superoptimal rates, Cryobiology, 14: 251-272 36 Mazur P., R.H Miller, S.P Leibo (1974), Survival of frozen-thawed bovine red cells as a function of the permeation of glycerol and sucrose, J Membr Biol, 15: 137-158 37 Mazur P v U Schneider (1986), Osmotic responses of preimplantation mouse and bovine embryos and their cryobiological implications, Cell Biophys, 8: 259-285 38 Meryman H.T., M Hornblower (1972), Changes in red cells following rapid freezing with extracellular cryoprotective agents, Cryobiology, 9: 262-267 39 Mullen S.F., Y Agca, D.C Broermann, C.L Jenkins, C.A Johnson, J.K Critser (2004), The effect of osmotic stress on the metaphase II spindle of human oocytes, and the relevance to cryopreservation, Hum Reprod 19, pp 1148-1154 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 93 40 Mullen S.F., M Rosenbaum, J.K Critser (2007), The effect of osmotic stress on the cell volume, metaphase II spindle and developmental potential of in vitro matured porcine oocytes, Cryobiology 54, pp 281-289 41 Nagashima H., R.D.A Cameron, M Kuwayama, M Young, L Beebe, A.W Blackshaw, M.B Nottle (1999), Survival of porcine delipated oocytes and embryos after cryopreservation by freezing or vitrification, J Reprod Dev., 45: 167-176 42 Nguyen B.X., Y Heyman, J.P Renard (1984), Direct freezing of cattle embryos after partial dehydration at room temperature, Theriogenology, 22 (4): 389-399 43 Nguyen B.X., J.P Renard, V Garnier (1983), Rapid freezing and thawing of cells stage rabbit embryos after partial dehydration at room temperature, Cryobiology, 20, 742 44 Nguyen B.X., Y Sotomaru, T Tani, Y Kato, Y Tsunoda (2000), Efficient cryopreservation of bovine blastocysts derived from nuclear transfer with somatic cells using partial dehydration and vitrification, Theriogenology, 53(7): 48-1349 45 Oda K., W.E Gibbons, S.P Leibo (1992), Osmotic shock of fertilized mouse ova, J Reprol Fertil., 95: 737-747 46 Pedro P.B., S.E Zhu, N Makino, T Sakurai, K Edashige, M Kasai (1977), Effects of hypotonic stress on the survival of mouse oocytes and embryos at various stages, Cryobiology, 35, 150-158 47 Plachinta M., T Zhang, D.M Rawson (2004), Studies on cyroprotectant toxicity to zebrafish (Danio rerio) oocytes, Cryo-Letters 25, pp 415-424 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 94 48 Pribenszky C., G Vajta, M Molnar, Y Du, L Lin, L Bolund, J Yovich (2010), Stress for stress tolerance? A fundamentally new approach in mammalian embryology, Biol Reprod 83(5):690-7 49 Rahman S.M., C.A Strỹssmann, S.K Majhi, T Suzuki, M Watanabe (2011), Efficiency of osmotic and chemical treatments to improve the permeation of the cryoprotectant dimethyl sulfoxide to Japanese whiting (Sillago japonica) embryos, Theriogenology, 75(2): 55-248 50 Rall W.F., D.S Reid, J.V Farrant (1980), Innocuous biological freezing during warming, Nature Lond, 286: 511-514 51 Rall W.F v G.M Fahy (1985), Ice-free cryopreservation of mouse embryos at 196 C by vitrification, Nature, 313: 573575 52 Rawson D.M v Tiantian Zhang (2005), New approaches to the cryopreservation of fish oocytes and embryos, The role of biotechnology, Villa Gualino, Turlin, Italy 53 Renard J.-P., Bui Xuan Nguyen, V Garnier (1984), Two-step freezing of two-cell rabbit embryos after partial dehydration at room temperature,J Reprod Fert 71, pp 573-580 54 Robertson S.M., A.L Lawrence, W.H Neil, C.R Arnold, G McCarty (1988), Toxicity of the cryoprotectants glycerol, dimethyl sulfoxide, ethylene glycol, methanol, sucrose, and sea salt solutions to the embryo of red drum, Prog Fish-Cult 50, pp 148-154 55 Robles V., E Cabrita, M Real, R lvarez, M.P Herrỏez (2003a), Vitrification of turbot embryos: preliminary assays, Cryobiology, 47: 9-30 56 Robles V., E Cabrita, G.L.Fletcher, M.A.Shears, M.J King, M.P Herrộaz (2003b), Vitrification assays with embryo from a cold tolerant subarctic fish species, Theriogenology, 64: 64-1633 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 95 57 Robles V., E Cabrita, L Anel, M.P Herrỏez (2007), Microinjection of the antifreeze protein type III (AFPIII) in turbot (Scophthalmus maximus) embryos: toxicity and protein distribution, Aquaculture, 262: 40-535 58 Ruffing N.A., P.L Steponkus, R.E Pitt, J.E Parks (1993), Osmotic behavior hydraulic conductivity and incidence of intracellular ice formation in bovine oocytes at different developmental stages, Cryobiology, 30: 562-580 59 Rui-Hua Liu, Qing-Yuan Sun, Yong-Hai Li, Li-Hong Jiao v WeiHua Wang (2003a), Maturation of porcine oocytes after cooling at the germinal vesicle stage, Zygote 11, pp 299-305 60 Rui-Hua Liu, Qing-Yuan Sun, Yong-Hai Li, Li-Hong Jiao v WeiHua Wang (2003b), Effects of cooling on meiotic spindle structure and chromosome alignment within in vitro matured porcine oocytes, Mol Reprod Dev 65, pp 212218 61 Sherman J.K (1962), Survival of higher animal cells after the formation and dissolution of intracellular ice, Anat Rec, 144: 171-189 62 Shi W.Q., S.E Zhu, D Zhang, W.H Wang, G.L Tang, Y.P Hou, J Tian (2006), Improved development by Taxol pretreatment after vitrification of in vitro matured porcine oocytes, Reproduction, 131: 795-804 63 Shinsuke Seki, Toshimitsu Kouya, Ryoma Tsuchiya, M Delgado, Jr Valdez, Bo Jin, Chihiro Koshimoto, Magosaburo Kasai, Keisuke Edashige (2011), Cryobiological properties of immature zebrafish oocytes assessed by their ability to be fertilized and develop into hatching embryos, Cryobiology 62, pp 8-14 64 Smorag Z., L Katska, S Wierzbowski (1981), Some factors affecting the success of embryo freezing: storage before freezing, super Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 96 ovulation rate, PBS concentration, cooling and thawing rates, In Frozen Storage of Laboratory Animals, Ed.G.H Zeilmaker Gustav Fischer, Stuttgart, pp 45-54 65 Taylor A.C., R Gerstner (1954), Tissue survival after exposure to low temperatures and the effectiveness of protective pretreatments, J cell Comp Physiol, 46: 477-502 66 Tiantian Zhang v David M Rawson (1995), Studies on Chilling Sensitivity of Zebrafish (Brachydanio rerio) Embryos, Cryobiology 32, pp 239-246 67 Tingaud-Sequeira A., C Zapater, F Chauvignộ, D Otero, J Cerd (2009), Adaptive plasticity of kilifish (Fundulusheterolitus) embryos: dehydration-stimulated development and differential aquaporin-3 expression, Am J PhysiolRegullntegr Comp Physiol, 296(4): R1041-52 68 Toner M., E.G Cravalho, M Karel, D.R Armant (1991), Cryomicroscopic analysis of intracellular ice formation during freezing of mouse oocytes without cryoadditives, Cryobiology, 28: 55-71 69 Tsai S., D.M Rawson, T Zhang (2009), Studies on chilling sensitivity of early stage zebrafish (Danio rerio) ovarian follices, Cryobiology 58, pp 279-286 70 Valdez D.M., A Miyamoto, T Hara, K Edashige, M Kasai (2005), Sensitivity to chilling of medaka (Oryzias latipes) embryos at various developmental stages, Theriogenology, 64(1): 112-22 71 Wei-Tung Huang v Wolfgang Holtz (2002), Effects of meiotic stages, cryoprotectants, cooling and vitrification of porcine oocytes, Asianaustraliasian journal of animal sciences, ISSN: 1011-2367 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 97 72 Willadsen S.M., C Polge, L.E.A Rawson, R.M Moor (1976), Deep freezing of sheep embryos, J Reprod Fert, 46: 151-154 73 Whittingham D.G (1971), Survival of mouse embryos after freezing and thawing, Nature, Sep 10,233(5315):6-125 74 Wittingham D.G., S.P Leibo v P Mazur (1972), Survival of mouse embryos frozen to -196oC and -269oC, Science 178: 411-414 75 Wittingham D.G., M.J Wood, J Farrant, H Lee, J.D Halsey (1979), Survival of frozen mouse embryos after rapid thawing from -196oC, J Reprod Fert, 56: 11-26 76 Wu C., R Rui, J Dai, C Zhang, S Ju, B Xie, X Lu, X Zheng (2006), Effects of cryopreservation on the developmental competence, ultrastructure and cytoskeletal structure of porcine oocytes, Mol Reprod Dev., 73: 1454-1462 77 Yuge M., T Otoi, M Nii, M Murakami, N.W Karja, F Rajaei, B Agung, P Wongsrikeao, M Murakami, T Suzuki (2003), Effects of cooling ovaries before oocytes aspiration on meiotic competence of porcine oocytes and of exposing in vitro matured oocytes to ambient temperature on in vitro fertilization and development of the oocytes, Cryobiology, 47: 102-108 78 Zhang T., D.M Rawson, G.J Morris (1993), Cryopreservation of pre-hatch embryos of zebrafish (Brachydanip rerio), Aquat Living Resour, 6: 145-53 79 Zhang Y.Z., S.C Zhang, X.Z Liu, Y.J Xu, J.H hu, Y.Y Xu, J Li, S.L Chen (2005), Toxicity and protective efficiency of cryoprotectants to flounder (Paralichthys olivaceus) embryos, Theriogenology, Feb, 63(3): 73763 Ting Phỏp Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 98 80 Nguyen Bui Xuan (1989), Effet dune deshydratation partielle sur la viabilite de lembryon de mammifere: etude a temperature ambiante et a basse temperature, Iuniversitộ Pierre et Marie Curie paris VI 81 Renard J.P., Y Heyman, J.P Ozil (1982), Congộlation de lembryon bovin: une nouvelle method de dộcongộlation pour le transfert cervical dembryons conditionnộs une seule fois en paillettes, Annls Mộdvột, 126: 23-32 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 99 [...]... 4.1 Ảnh hưởng của khử nước ở nhiệt ñộ phòng lên tỷ lệ nở của phôi cá tra 50 ðồ thị 4.2 Ảnh hưởng của nhiệt ñộ thấp lên tỷ lệ nở của phôi cá tra 50 ðồ thị 4.3 Ảnh hưởng của khử nước ở 0oC lên tỷ lệ nở của phôi cá tra 58 ðồ thị 4.4 Ảnh hưởng của khử nước ở -20oC lên tỷ lệ nở của phôi cá tra 58 ðồ thị 4.5 Ảnh hưởng của các chất bảo quản lạnh riêng lẻ nồng ñộ 3M trong 15’ lên tỷ lệ nở sống. .. thường của phôi cá tra 66 ðồ thị 4.6 Ảnh hưởng của chất bảo quản lạnh riêng lẻ và kết hợp khử nước lên tỷ lệ nở của phôi cá tra ở nhiệt ñộ phòng 67 ðồ thị 4.7 Ảnh hưởng của chất bảo quản lạnh riêng lẻ và kết hợp khử nước lên tỷ lệ nở của phôi cá tra ở nhiệt ñộ 0oC 71 ðồ thị 4.8 Ảnh hưởng của khử nước ở nhiệt ñộ phòng lên tỷ lệ trứng lợn thành thục 72 ðồ thị 4.9 Ảnh hưởng của. .. chất và ñiều này là trở ngại chính làm hạn chế hiệu quả của bảo quản lạnh Trong công trình này chúng tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài: Ảnh hưởng của khử nước lên sự sống và phát triển của trứng, phôi ñộng vật ở nhiệt ñộ thấp trên hai mô hình trứng lợn và phôi cá tra 1.2 Mục tiêu của ñề tài ðánh giá khả năng khử nước của phôi cá tra, trứng lợn ở nhiệt ñộ phòng và nhiệt ñộ thấp Tìm hiểu quy luật ảnh hưởng. .. hơn Sự nở thành công tăng nhiều bởi nuôi ở các nồng ñộ muối vừa phải nhưng nở cho phép trong nước mới Nhìn chung, xử lý khử nước gây hại cho sự phát triển của trứng, phôi ñộng vật thủy sản Tuy nhiên, với nồng ñộ và thời gian xử lý phù hợp, khử nước giúp kích thích sự phát triển 2.2.3 Ảnh hưởng của khử nước lên sự sống của trứng, phôi ñộng vật có vú ðã có những nghiên cứu ñã kiểm tra cơ chế thẩm thấu của. .. hỗ giữa khử nước, chất chống ñông, nhiệt ñộ thấp lên sự sống của phôi cá tra và trứng lợn Tìm hiểu và ñề xuất các tổ hợp khử nước kết hợp với các chất chống ñông phù hợp với việc bảo quản lạnh trứng lợn, phôi cá tra 1.3 Ý nghĩa của ñề tài Kết quả nghiên cứu sẽ cung cấp các thông tin về khả năng khử nước và tìm hiểu các quy luật ảnh hưởng của nó lên sự sống và phát triển của trứng, phôi ñộng vật giữa... thang nhiệt ñộ và dễ bị phá hủy ngay cả khi các tinh thể nước chưa hình thành 2.3.2 Ảnh hưởng của nhiệt ñộ thấp lên sự sống của trứng, phôi cá Nhiệt ñộ thấp ñược chỉ ra là làm giảm, thậm chí làm mất khả năng sống và phát triển của trứng, phôi cá (Tiantian Zhang và David M Rawson,1995 [66]; Shinsuke Seki và cs, 2011 [63]; Brian và Terry, 2001 [5]; Valdez và cs, 2005) [70] Tuy nhiên, tính nhạy cảm lạnh của. .. Trứng ñược nuôi ở nhiệt ñộ thấp kéo dài thời gian phát triển phôi ở 16 (244%) và 21oC (56%) khi so sánh với ñối chứng ở 26oC Tất cả trứng nuôi ở 4 và 11oC chết trong 24 – 48h nuôi Giai ñoạn phát triển có ảnh hưởng rõ rệt tới tỷ lệ nở ở 16, 21 và 26oC Trứng ñược giữ ở 16oC trước khi hình thành trục phôi chết trong 48h Ấu trùng từ trứng nở ở 16oC không phát triển hoàn thiện và chết khi ñưa ra nhiệt ñộ 26oC... giai ñoạn phôi sớm hơn 2.3.3 Ảnh hưởng của nhiệt ñộ thấp lên sự sống của trứng lợn Sự tác ñộng của nhiệt ñộ thấp lên sự phát triển của trứng lợn ñã ñược kiểm tra trên trứng giai ñoạn Germinal vesicle stage (GV) (Rui-Hua Liu và cs, 2003a [59]) và trứng thành thục Metaphase II stage (MII) (Rui-Hua Liu và cs, 2003b [60]) Nhiệt ñộ thấp làm giảm sự thành thục nhân, thành thục tế bào chất, giảm sự hình thành... 25 Hình 4.1: Hình ảnh phôi cá tra khử nước và không khử nước ở nhiệt ñộ phòng 48 Hình 4.2: Hình ảnh phôi cá tra sống, chết và cá tra nở sống, nở chết 55 Hình 4.3: Hình ảnh trứng lợn ñối chứng, khử nước và trứng thành thục 76 Hình 4.4: Hình ảnh trứng lợn khử nước ở nhiệt ñộ thấp 83 Hình 4.5: Hình ảnh trứng lợn sau xử lý với các chất bảo quản lạnh ở nhiệt ñộ phòng, trứng sau MAT – II ... phát triển tới blastocyst Tuy nhiên, khi mức stress nhược trương tăng, tỷ lệ trứng mất khả năng phát triển tới blastocyst không có sự khác nhau rõ rệt Khi xử lý với dung dịch ưu trương kết quả giảm khả năng phát triển trung bình phụ thuộc nồng ñộ, sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê 2.3 Ảnh hưởng của nhiệt ñộ thấp lên sự sống của trứng, phôi ñộng vật có vú và thủy sản 2.3.1 Cơ chế tác ñộng của nhiệt