BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM VÕ THỊ ĐẦM NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN CHIẾT XUẤT BẰNG NƯỚC CẤT VỚI SỰ HỖ TR CỦA SIÊU ÂM ĐẾN HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA VÀ HÀM LƯNG PROTEIN CỦA DỊCH CHIẾT TỪ HẢI MIÊN (Spongia sp.) ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Chế biến Thủy sản KHÁNH HÒA, 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM VÕ THỊ ĐẦM NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN CHIẾT XUẤT BẰNG NƯỚC CẤT VỚI SỰ HỖ TR CỦA SIÊU ÂM ĐẾN HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA VÀ HÀM LƯNG PROTEIN CỦA DỊCH CHIẾT TỪ HẢI MIÊN (Spongia sp.) ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Chế biến Thủy sản GVHD: TS HUỲNH NGUYỄN DUY BẢO KHÁNH HÒA, 2015 i LỜI CẢM ƠN Được phân cơng Khoa Cơng nghệ Thực phẩm –Trường Đại Học Nha Trang, đồng ý Thầy giáo hướng dẫn TS Huỳnh Nguyễn Duy Bảo em thực đề tài “Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện chiết xuất nước cất với hỗ trợ siêu âm đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng protein dịch chiết từ hải miên (Spongia sp.)” Để hồn thành đề tài này, trước tiên, em muốn bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Huỳnh Nguyễn Duy Bảo, Khoa Cơng Nghệ Thực phẩm, Trung tâm TNTH, thầy giáo tận tình hướng dẫn, giảng dậy suốt q trình học tập, định hướng nghiên cứu, trực tiếp hướng dẫn bảo tận tình suốt thời gian nghiên cứu rèn luyện Trường Đại học Nha Trang Xin chân thành cảm ơn Thầy TS Huỳnh Nguyễn Duy Bảo – người thầy trực tiếp hướng dẫn tận tình, hết lòng giúp đỡ, dạy bảo, tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt q trình thực đề tài Em muốn gửi lời cảm ơn chân thành đến ban lãnh đạo Khoa Cơng nghệ Thực phẩm, Trung tâm TNTH, Trường Đại học Nha Trang tạo điều kiện thuận lợi trang thiết bị sở vật chất giúp em hồn thành nghiên cứu Cuối em xin bày tỏ lòng biết ơn sau sắc đến gia đình, bạn bè, người cổ vũ, động viên em suốt q trình học tập nghiên cứu Mặc dù có nhiều cố gắng để thực đề tài cách hồn chỉnh Song buổi đầu làm quen với cơng tác nghiên cứu khoa học, tiếp cận với thực tế sản xuất hạn chế kiến thức kinh nghiệm nên khơng thể tránh khỏi thiếu sót định mà thân chưa thấy Em mong góp ý q Thầy giáo bạn để đề tài hồn chỉnh Em xin chân thành cảm ơn! Nha Trang, ngày 28 tháng 06 năm 2015 Sinh viên thực Võ Thị Đầm ii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT viii LỜI NĨI ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan hải miên 1.1.1 Giới thiệu chung nguồn gốc .4 1.1.2 Đặc điểm ngành thân lỗ .5 1.1.3 Phân loại khoa học .5 1.1.4 Đặc tính hải miên .7 1.1.5 Phân bố sinh thái 1.1.6 Đặc điểm hình thái cấu trúc hải miên 10 1.1.7 Thành phần hóa học lồi: 12 1.1.8 Ứng dụng hải miên 13 1.2 Tổng quan q trình oxy hóa chất chống oxy hóa 21 1.2.1 Q trình oxy hóa 21 1.2.2 Chất chống oxy hóa 23 1.2.3 Đặc điểm nhóm hợp chất sinh học có hải miên 24 1.2.3.1 Nhóm hợp chất phenol 24 1.2.3.2 Nhóm hợp chất sterol 25 1.2.3.3 Nhóm hợp chất flavonoid 25 1.2.3.4 Nhóm hợp chất saponin 25 1.2.3.5 Nhóm hợp chất polypeptide 26 1.2.3.6 Nhóm hợp chất glycoside 26 1.2.3.7 Protein 26 iii 1.2.4 Các phương pháp phân tích hoạt tính chống oxy hóa 27 1.2.4.1 Phương pháp đánh giá hoạt tính chống oxy hóa dựa vào khả khử gốc tự DPPH l,l-diphenyl-2-picrylhydrazyl 27 1.2.4.2 Phương pháp phân tích hoạt tính chống oxy hóa dựa vào tổng lực khử28 1.3 Các phương pháp tách chiết xuất hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học từ hải miên 29 1.3.1 Ngun lý 29 1.3.2 Những yếu tố ảnh hưởng đến q trình chiết xuất: 29 1.3.3 Những yếu tố thuộc dung mơi: 30 1.3.4 Những yếu tố thuộc kỹ thuật: 31 1.3.5 Chiết với hỗ trợ siêu âm (Elma, S 300H, Elmasnonis, Germany) 32 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.1 Ngun liệu hóa chất 34 2.1.1 Ngun liệu 34 2.1.2 Hóa chất 34 2.2 Phương pháp nghiên cứu .34 2.2.1 Bố trí thí nghiệm 34 2.2.1.1 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng điều kiện chiết xuất (tỷ lệ dung mơi/ngun liệu, thời gian, nhiệt độ, số lần chiết) nước cất với hỗ trợ siêu âm đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng protein dịch chiết từ hải miên (Spongia sp.) 35 2.2.1.2 Bố trí thí nghiệm tối ưu hóa điều kiện chiết xuất để thu dịch chiết có hoạt tính chống oxy hóa cao từ hải miên (Spongia sp.) 43 2.2.2 Các phương pháp phân tích 50 2.2.2.1 Phương pháp phân tích khả khử gốc tự DPPH 50 2.2.2.2 Phương pháp phân tích tổng lực khử 50 2.2.2.3 Phương pháp phân tích hàm lượng protein 51 2.3 Phương pháp xử lý số liệu thực nghiệm 51 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ NGHIÊN CỨU THẢO LUẬN 52 iv 3.1 Ảnh hưởng điều kiện chiết xuất nước cất với hỗ trợ siêu âm đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng protein dịch chiết từ miên (Spongia sp.) 52 3.1.1 Ảnh hưởng tỷ lệ DM/NL (ml/g) đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng protein từ dịch chiết hải miên (Spongia sp.) 52 3.1.2 Ảnh hưởng thời gian chiết đến hoạt tính chổng oxy hóa dịch chiết từ hải miên (Spongia sp.) 56 3.1.3 Kết đánh giá ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng protein dịch chiết từ hải miên 60 3.1.4 Ảnh hưởng số lần chiết đến hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ hải miên 64 3.2 Kết thực nghiệm tối ưu hóa điều kiện chiết hoạt chất chống oxy hóa từ dịch chiết hải miên (Spongia sp.) .68 3.2.1 Xây dựng mơ tả tốn học cho hàm mục tiêu giá trị IC50 cho khả khử gốc tự DPPH 69 3.2.1.1 Tính hệ số bj 69 3.2.1.2 Kiểm định mức ý nghĩa hệ số bj 69 3.2.1.3 Kiểm định phù hợp phương trình hồi quy với thực nghiệm 70 3.2.2 Xây dựng mơ tả tốn học cho hàm mục tiêu giá trị IC50 cho khả khử gốc tự tổng lực khử 72 3.2.2.1 Tính hệ số bj 72 3.2.2.2 Kiểm định mức ý nghĩa hệ số bj 72 3.2.2.3 Kiểm định phù hợp phương trình hồi quy với thực nghiệm 73 3.2.2.4 Tối ưu hóa thực nghiệm để thu hàm lượng IC50 thấp (Y1Min) 74 3.2.3 Tối ưu hóa hàm đa mục tiêu phương pháp chập tuyến tính 75 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 78 Kết luận 78 Kiến nghị 78 TÀI LIỆU THAM KHẢO .80 PHỤ LỤC 82 v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Điều kiện thí nghệm chọn 44 Bảng 2.2 Ma trận thực nghiệm trực giao cấp I, k = hàm mục tiêu 45 Bảng 2.3 Bố trí thí nghiệm tìm hàm tuyến tính .45 Bảng 2.4 Thí nghiệm tâm 46 Bảng 2.5 Kết bước chuyển động phụ thuộc vào yếu tố 49 Bảng 2.6 Kết thí nghiệm theo hướng leo dốc 49 Bảng 3.1 Ma trận thực nghiệm trực giao cấp I, k=2 kết .68 Bảng 3.2 Kết bố trí thí nghiệm hàm tuyến tính .69 Bảng 3.3 Bảng hệ số bj .69 Bảng 3.4 Kết thí nghiệm tâm .69 Bảng 3.5 Kết tính Sbj 70 Bảng 3.6 Kết tính tj 70 Bảng 3.7: Kết kiểm định tương thích phương trình theo tiêu chuẩn Fisher 70 Bảng 3.8 : Kết bước chuyển động phụ thuộc vào yếu tố .71 Bảng 3.9 Kết thí nghiệm leo dốc .71 Bảng 3.10 Kết bố trí thí nghiệm hàm tuyến tính .72 Bảng 3.11 Bảng hệ số bj 72 Bảng 3.12 Kết thí nghiệm tâm .73 Bảng 3.13 Kết tính Sbj .73 Bảng 3.14 Kết tính tj 73 Bảng 3.15: Kết kiểm định tương thích phương trình theo tiêu chuẩn Fisher 74 Bảng 3.16 : Kết bước chuyển động phụ thuộc vào yếu tố 74 Bảng 3.17 Kết thí nghiệm leo dốc 75 Bảng 3.18 Tính hệ số phương trình hồi quy 75 Bảng 3.19 Tính bước chuyển động mức yếu tố .76 Bảng 3.20 Kết thí nghiệm leo dốc hàm chập YL 76 Bảng 3.21 Kết giá trị leo dốc hàm mục tiêu .77 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hải miên Spongia sp vùng biển Phú Quốc .4 Hình 1.2 Loại tế bào ngành thân lỗ Hình 1.3 Sinh sản vơ tính hải miên [3] Hình 1.4 Cấu trúc thân lỗ [3] 10 Hình 1.5 Các kiểu gai xương thân lỗ [3] 11 Hình 1.6 Cấu trúc hải miên 12 Hình 1.7.Hoạt dộng chuyển hóa chất có hải miên [1] 13 Hình.1.8 Sự hình thành gốc tự 22 Hình 1.9 Cơ chết hoạt động chất chống oxy hóa [17] .23 Hình 1.11 Sơ đồ phản ứng chất chống oxy hóa gốc tự DPPH .27 Hình 2.1 Lồi hải miên Spongia s,lấy mẫu vùng biển Phú Quốc 34 Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng tỷ lệ ngun liệu/dung mơi đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng protein dịch chiết từ hải miên 36 Hình 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng thời gian chiết đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng protein dịch chiết từ hải miên 38 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng protein dịch chiết từ hải miên 40 Hình 2.5 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng số lần chiết đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng protein dịch chiết từ hải miên 42 Hình 2.6 Sơ đồ bố trí thí nghiệm để tìm hàm tuyến tính thí nghiệm tâm 48 Hình 3.1 Ảnh hưởng tỷ lệ DM/NL (ml/g) đến khả khử gốc tự (a), tổng lực khử dịch (b) hàm lượng protein (c) dịch chiết hải miên (Spongia sp.) 53 Hình 3.2 Ảnh hưởng tỷ lệ DM/NL (ml/g) đến hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ hải miên (Spongia sp.) thể qua giá trị IC50; (a): khả khử gốc tự DPPH, (b): khả khử tổng lực khử 55 vii Hình 3.3 Ảnh hưởng thời gian chiết (phút) đến khả khử gố tự DPPH (a), tổng lực khử dịch (b) hàm lượng protein (c) dịch chiết hải miên (Spongia sp.) .57 Hình 3.4 Ảnh hưởng thời gian đến hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ hải miên (Spongia sp.) thể qua giá trị IC50, (a): khả khử gốc tự DPPH, (b): Tổng lực khử 59 Hình 3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết khác đến khả khử gốc tự DPPH (a), tổng lực khử(b) hàm lượng protein (c) dịch chiết hải miên (Spongia sp.) .61 Hình 3.6 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ hải miên (Spongia sp.) thể qua giá trị IC50 (a): Khả khử gốc tự DPPH, (b): Tổng lực khử 63 Hình 3.7 Ảnh hưởng số lần chiết khác đến khả khử gố tự DPPH (a), tổng lực khử (b) hàm lượng protein (c) dịch chiết hải miên (Spogia sp.) 65 Hình 3.8 Ảnh hưởng số lần chiết đến hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ hải miên (Spongia sp.) thể qua giá trị IC50 (a): Khả khử gốc tự DPPH, (b): Tổng lực khử .67 viii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DM/NL: Dung mơi/Nghiên liệu UV-Vis ( Ultraviolet – Visite ): Tử ngoại - khả kiến TN: Thí nghiệm STD: Độ lệch chuẩn TB: Trung bình 104 Bảng 9.3: Bảng số liệu cho bố trí thí nghiệm hàm tuyến tính, lặp lại lần Tỷ lệ Thời DM/NL gian (ml/g) (phút) OD sau pha lỗng A 0.2 lần 0.3 lần lần lần 0.4 lần lần 0.5 lần lần lần lần lần lần 10 0.3115 0.2775 0.2606 0.2468 0.2291 0.2767 0.2629 0.2451 0.2282 0.2745 0.2656 0.2478 0.2291 20 0.3115 0.2785 0.2581 0.2377 0.2161 0.2789 0.2582 0.2379 0.2167 0.2759 0.2539 0.2297 10 0.3115 0.2665 0.2475 0.2216 0.2121 0.2665 0.2471 0.2216 0.2124 0.2656 0.2597 0.2376 0.2213 20 0.3115 0.2754 0.2572 0.243 0.2258 0.2749 0.2528 0.236 0.21 0.2216 0.2792 0.2524 0.2375 0.2167 Nồng độ DPPH Mm/ml A 0.2 0.3 0.4 0.5 lần lần lần lần lần lần lần1 lần lần lần lần lần 0.1298 0.1159 0.109 0.1033 0.0961 0.1156 0.1099 0.1026 0.0957 0.1147 0.111 0.1037 0.0961 0.1298 0.1163 0.1079 0.0996 0.0908 0.1165 0.108 0.0997 0.091 0.1152 0.1062 0.0963 0.0883 0.1298 0.1114 0.1036 0.093 0.0891 0.1114 0.1034 0.093 0.0893 0.111 0.1086 0.0996 0.0929 0.1298 0.115 0.1076 0.1018 0.0947 0.1148 0.1058 0.0989 0.093 0.1166 0.1056 0.0995 0.091 105 Nồng độ DPPH bị khử trước pha lỗng Mm/ml 0.2 0.3 lần lần lần lần 0.4 lần lần lần IC50 0.5 lần lần lần lần lần lần lần lần TB STD 0.278 0.416 0.529 0.674 0.284 0.397 0.543 0.681 0.302 0.375 0.521 33.505 32.476 33.694 1.322 0.6741 35.102 7 0.27 0.602 0.775 0.291 0.471 0.669 19.581 17.932 18.504 18.672 0.837 0.436 0.603 0.780 0.266 0.8303 0.436 7 2 5 0.368 0.523 0.735 0.813 0.368 0.526 0.735 0.810 0.375 0.423 0.604 27.861 27.428 27.665 0.219 0.7379 27.707 8 8 0.295 0.444 0.560 0.701 0.299 0.480 0.617 0.735 0.264 0.483 0.605 29.279 30.587 31.425 30.430 1.081 0.7755 4 7 Bảng 9.4: Bảng số liệu cho bố trí thí nghiệm tâm Số lần lặp lại (lần ) tỉ lệ Thời DM/NL gian (ml/g) (phút) OD sau pha lỗng A 0.2 lần lần 0.3 lần lần lần 0.4 lần lần 0.5 lần lần lần lần lần 15 0.3718 0.3322 0.3118 0.3069 0.2838 0.3323 0.3121 0.3066 0.2833 0.3324 0.3119 0.3013 0.2906 15 0.3802 0.3394 15 0.3115 0.2682 0.2593 0.2424 0.2254 0.2582 0.2432 0.2272 0.2128 0.2611 0.2406 0.2224 0.2107 0.323 0.3053 0.2936 0.3408 0.3225 0.3057 0.293 0.3392 0.3229 0.3048 0.2934 106 Số lần chiết Số lần lặp lại (lần) Nồng độ DPPH Mm/ml 0.1545 0.1383 0.1299 0.1279 0.1185 0.1383 0.13 0.1278 0.1183 0.1383 0.1299 0.1256 0.1212 0.1579 0.1412 0.1345 0.1272 0.1225 0.1418 0.1343 0.1274 0.1222 0.1411 0.1344 0.127 0.1224 0.1298 0.1121 0.1084 0.1015 0.0946 0.108 0.1018 0.0953 0.0894 0.1092 0.1008 0.0933 0.0886 A 0.2 lần 0.3 lần lần lần 0.4 lần lần lần1 0.5 lần lần Nồng độ DPPH bị khử trước pha lỗng Mm/ml 0.2 lần 0.3 lần lần lần 0.4 lần lần lần lần lần lần IC50 0.5 lần lần lần lần lần lần lần TB STD lần 0.324 0.4908 0.5309 0.7199 0.3231 0.4884 0.5334 0.724 0.3223 0.49 0.5767 0.6643 19.1119 20.1429 12.2494 17.1681 4.2907 0.3338 0.4679 0.6127 0.7084 0.3223 0.472 0.6095 0.7134 0.3354 0.4688 0.6168 0.7101 18.5663 21.3974 18.2931 19.419 1.7188 0.3542 0.427 0.5653 0.7044 0.436 0.5587 0.6896 0.8074 0.4123 0.58 0.7289 0.8246 17.4249 18.8885 19.1743 18.4959 0.9385 107 Bảng 10: Tổng lực khử - Chiết dung mơi nước với tỉ lệ thời gian khác 10gam mẫu, số lần chiết 3, nhiệt độ 30 độ định mức đủ 240ml sau đem phân tích Dịch sau chiết pha lỗng 20 lần Bảng 10.1: Bảng số liệu cho bố trí thí nghiệm hàm tuyến tính Tỷ lệ Thời DM/NL gian (ml/g) (phút) OD Lần Lần Lần 0,2 0,3 0,4 0,5 0,2 0,3 0,4 0,5 0,2 0,3 0,4 0,5 0.2184 0,2871 0.3078 0,3678 0.3848 0,4591 0.1451 0,2093 0.2215 0,2895 0.2996 0,3679 0.3971 0,4578 0.1447 0,2099 0.2202 0,2837 0.3083 0,3656 0.3965 0,4514 10 20 0.1404 0,2087 10 0.1688 0.2332 0.3258 0.4102 0.1565 0.2258 0.3174 0.4075 0.1614 0.2316 0.3136 0.4132 20 0.1325 0.2021 0.2923 0.3819 0.1315 0.2022 0.2998 0.3826 0.132 0.2007 0.2981 0.3822 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml trước pha lỗng Lần 0,2 0,3 0,4 IC50 Lần 0,5 0,2 0,3 0,4 Lần 0,5 0,2 0,3 0,4 lần lần lần TB STD 0,5 1.5688 3.0186 4.6803 6.1115 1.6561 3.0762 4.5279 6.3401 1.6487 3.052 4.6896 6.329 72.9319 72.3288 72.3374 72.5327 0.3457 2,8383 4,2955 5,7955 7,4926 2,8494 4,3401 5,7974 7,4684 2,8606 4,2323 5,7546 7,3494 39,1588 38,1507 37,8489 38,3861 0,6859 2.0967 3.2937 5.0149 6.5836 1.868 3.1561 4.8587 6.5335 1.9591 3.2639 4.7881 6.6394 1.4219 2.7156 4.3922 6.0576 1.4033 2.7175 4.5316 6.0706 1.4126 2.6896 4.5 59.883 67.0187 69.8286 65.5768 5.1272 6.0632 81.2644 81.5065 81.5676 81.4461 0.1603 108 Bảng 10.2: Bảng số liệu cho bố trí thí nghiệm hàm tuyến tính Lặp lại lần Tỷ lệ Thời DM/NL gian (ml/g) (phút) OD 0.2 0.3 0.4 0.5 lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần 0.2156 0,2861 0.2967 0,3672 0.3903 0,4588 0.1444 0,2096 0.2162 0,2892 0.2979 0,3689 0.3905 0,4567 0.1473 0,2097 0.2141 0,2831 0.3058 0,3627 0.392 0,4512 10 20 0.1445 0,2098 10 0.1492 0.2268 0.3035 0.3773 0.1479 0.2233 0.3127 0.3818 0.1453 0.2269 0.3206 0.3829 20 0.1355 0.2011 0.2933 0.3822 0.1312 0.202 0.2988 0.3824 0.1319 0.2005 0.2978 0.3823 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml trước pha lỗng 0.2 lần lần 0.3 lần lần lần 0.4 lần lần lần IC50 0.5 lần lần lần lần lần lần TB STD lần 1.645 2.9665 4.474 6.2138 1.6431 2.9777 4.4963 6.2175 1.697 2.9387 4.6431 6.2454 73.1577 73.0285 72.0785 72.7549 0.5893 2,8587 4,2770 5,7844 7,4870 2,8550 4,3346 5,8160 7,4480 2,8569 4,2212 5,7007 7,3457 38,8635 37,8650 38,0354 38,2546 0,5341 1.7323 3.1747 4.6004 5.9721 1.7082 3.1097 4.7714 6.0558 1.6599 3.1766 4.9182 6.0762 65.4628 67.4294 67.5908 66.8277 1.1848 1.4777 2.697 4.4108 6.0632 1.3978 2.7138 4.513 6.0669 1.4108 2.6859 4.4944 6.0651 80.0954 81.5852 81.6966 81.1257 0.894 109 Bảng 10.3: Bảng số liệu cho bố trí thí nghiệm hàm tuyến tính Lặp lại lần Tỷ lệ Thời DM/NL gian (ml/g) (phút) OD 0.2 0.3 0.4 0.5 lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần 0.2177 0,2842 0.2957 0,3652 0.3907 0,4566 0.1497 0,2093 0.2158 0,2883 0.2988 0,3669 0.3903 0,4535 0.1462 0,2095 0.2135 0,2874 0.3064 0,3653 0.3918 0,4565 10 20 0.1425 0,2099 10 0.1589 0.2184 0.3049 0.3983 0.1582 0.2192 0.3077 0.3871 0.1572 0.2298 0.2308 0.3893 20 0.1343 0.2013 0.2936 0.3823 0.1317 0.2019 0.2985 0.3822 0.1317 0.2003 0.2986 0.3824 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml trước pha lỗng 0.2 lần lần 0.3 lần lần lần 0.4 lần lần lần IC50 0.5 lần lần lần lần lần lần TB STD lần 1.6078 3.0056 4.4554 6.2212 1.7416 2.9703 4.513 6.2138 1.6766 2.9275 4.6543 6.2416 73.663 70.5649 72.6816 72.3032 1.5833 2,8606 4,2416 5,7472 7,4461 2,8494 4,3178 5,7788 7,3885 2,8532 4,3011 5,7491 7,4442 38,7936 37,5408 38,2636 38,1993 0,6289 1.9126 3.0186 4.6264 6.3625 1.8996 3.0335 4.6784 6.1543 1.881 3.2305 3.2489 6.1952 66.6932 64.7221 65.9238 65.7797 0.9934 1.4554 2.7007 4.4164 6.0651 1.4071 2.7119 4.5074 6.0632 1.4071 2.6822 4.5093 6.0669 80.6078 81.3656 81.81 81.2611 0.6079 110 Bảng 10.4: Bảng số liệu cho bố trí thí nghiệm tâm Số lần lặp lại (phút) Số lần lặp lại (phút) tỉ lệ Thời NL/DM gian (w/v) (phút) OD 0.2 lần lần 0.3 lần lần lần 0.4 lần lần lần 0.5 lần lần lần lần 1/6 15 0.1684 0.2356 0.3167 0.4048 0.1634 0.2357 0.3138 0.4089 0.1648 0.2292 0.3149 0.4077 1/6 15 0.1593 0.233 0.3314 0.4017 0.1612 0.2299 0.3258 0.4159 0.1624 0.2323 0.3153 0.4162 1/6 15 0.1624 0.2331 0.3166 0.4014 0.1592 0.2379 0.3147 0.3979 0.1506 0.2372 0.3098 0.4096 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml trước pha lỗng 0.2 lần lần 0.3 lần lần lần 0.4 lần lần lần IC50 0.5 lần lần lần lần lần lần TB STD lần 2.0892 3.3383 4.8457 6.4833 1.9963 3.3401 4.7918 6.5595 2.0223 3.2193 4.8123 6.5372 58.7678 61.8619 62.5646 61.0648 2.02 1.9201 3.29 1.9777 3.2918 4.8439 6.4201 1.9182 3.381 4.8086 6.355 1.7584 3.368 4.7175 6.5725 66.4739 61.2456 67.5267 65.0821 3.3639 5.119 6.4257 1.9554 3.2323 5.0149 6.6896 1.9777 3.277 4.8197 6.6952 62.5219 65.0261 64.3494 63.9658 1.2954 111 Bảng 11:Tối ưu hóa tỉ lệ NL/DM thời gian chiết sau có phương trình hồi quy DPPH - Chiết dung mơi nước với tỉ lệ thời gian khác 10gam mẫu, số lần chiết 3, nhiệt độ 30 độ định mức đủ 240ml sau đem phân tích Dịch sau chiết pha lỗng lần Bang 11.1: Kết leo dốc cho Y1 A Tỷ lệ Thời DM/NL gian (ml/g) (phút) OD sau pha lỗng 0.2 lần 0.3 lần lần lần lần 0.4 lần lần lần 0.5 lần lần lần lần 15 0.4109 0.3835 0.3519 0.3255 0.3102 0.3844 0.3453 0.3267 0.3136 0.3838 0.3463 0.3295 0.3105 17 0.4109 0.3727 0.3434 0.3054 0.2981 0.3712 0.3439 0.3037 0.2976 0.3717 0.3443 0.3038 0.4109 19 0.4109 0.3882 0.3493 0.3284 0.3184 0.3882 0.3492 0.3282 0.3188 0.3891 0.3496 0.3294 0.3177 21 0.4109 0.3936 0.3619 0.3379 0.3236 0.3948 0.3618 0.3368 0.3258 0.3965 0.3612 0.3334 0.3233 10 23 0.4109 0.3943 0.3615 0.3388 0.3237 0.3956 0.3623 0.3377 0.3244 0.3945 0.3627 0.3378 0.3239 Nồng độ DPPH Mm/ml A 0.2 0.3 0.4 0.5 lần lần lần lần lần lần lần1 lần lần lần lần lần 0.1704 0.1592 0.1463 0.1355 0.1293 0.1596 0.1436 0.136 0.1306 0.1594 0.144 0.1371 0.1294 0.1704 0.1548 0.1428 0.1273 0.1243 0.1542 0.143 0.1266 0.1241 0.1544 0.1432 0.1266 0.1242 0.1704 0.1612 0.1452 0.1367 0.1326 0.1612 0.1452 0.1366 0.1328 0.1615 0.1454 0.1371 0.1323 0.1704 0.1634 0.1504 0.1406 0.1347 0.1639 0.1504 0.1401 0.1356 0.1646 0.1501 0.1387 0.1346 0.1704 0.1637 0.1502 0.141 0.1348 0.1642 0.1506 0.1405 0.1351 0.1637 0.1507 0.1405 0.1349 112 Nồng độ DPPH bị khử trước pha lỗng Mm/ml 0.2 lần 0.3 lần lần lần 0.4 lần lần lần 0.5 lần lần lần STD IC50 lần lần lần lần lần TB 0.056 0.1207 0.1747 0.2059 0.0542 0.1342 0.1722 0.199 0.0554 0.1321 0.1665 0.2053 0.1383 0.1341 0.1355 0.136 0.0021 0.0781 0.138 0.2158 0.2307 0.0812 0.137 0.2192 0.2317 0.0802 0.1362 0.219 0.2311 0.1131 0.1113 0.1121 0.1122 0.0009 0.0464 0.126 0.1687 0.1892 0.0464 0.1262 0.1691 0.1884 0.0446 0.1254 0.1667 0.1906 0.1432 0.143 0.1451 0.1438 0.0012 0.0354 0.1002 0.1493 0.1785 0.0329 0.1004 0.1515 0.174 0.0295 0.1016 0.1585 0.1792 0.168 0.1693 0.1686 0.1687 0.0006 0.0339 0.101 0.1475 0.1783 0.0313 0.0994 0.1497 0.1769 0.0335 0.0986 0.1495 0.1779 0.1689 0.1712 0.1699 0.17 0.0011 113 Bảng 11.2: Kết leo dốc cho Y1 theo Y2 A Tỷ lệ Thời DM/NL gian (ml/g) (phút) 17 OD sau pha lỗng 0.2 0.3 0.4 0.5 lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần 0,3711 0,3448 0,3077 0,2923 0,3708 0,3431 0,3075 0,2927 0,3708 0,3435 0,3074 0,2928 0,4109 Nồng độ DPPH Mm/ml A 0,1704 0.2 lần 0,1542 lần 0,1434 0.3 lần 0,1282 0.4 lần 0,1219 lần 0,154 0.5 lần lần1 0,1427 0,1281 lần 0,1221 Nồng độ DPPH bị khử trước pha lỗng Mm/ml 0.2 lần 0,081 0.3 lần 0,135 lần 0,211 lần 0,242 0.4 lần lần 0,08 0,138 lần 0,211 lần lần 0,08 0,137 lần 0,1429 lần 0,1281 lần 0,1221 IC50 0.5 lần 0,241 lần 0,154 lần 0,211 lần 0,241 Lần Lần Lần TB 0,113 0,112 0,112 0,112 8 STD 0,000 114 Bảng 11.3: Kết leo dốc cho Y1 theo YL Tỷ lệ Thời DM/NL gian (ml/g) (phút) A OD sau pha lỗng 0.2 0.3 0.4 0.5 lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần 0,4018 0,3816 0,3512 0,3232 0,3012 0,3833 0,3513 0,3222 0,3003 0,3817 0,3506 0,3248 0,3008 15 17 0,4018 0,3706 0,3434 0,3081 0,2945 0,3709 0,3436 0,3073 0,2933 0,3708 0,3436 0,3057 0,2945 19 0,4018 0,3833 0,3562 0,3282 0,3038 0,3833 0,3513 0,3272 0,3043 0,3837 0,3516 0,3278 0,3048 21 0,4018 0,3896 0,3559 0,3289 0,3106 0,3888 0,3568 0,3288 0,3108 0,3895 0,3562 0,3284 0,3103 10 23 0,4018 0,3989 0,3596 0,3283 0,3156 0,3987 0,3594 0,3283 0,3186 0,3993 0,3589 0,3292 0,3178 Nồng độ DPPH Mm/ml A 0.2 0.3 0.4 0.5 lần lần lần lần lần lần lần1 lần lần lần lần lần 0.1667 0.1585 0,154 0.146 0,1428 0.1346 0,1284 0.1256 0,1228 0.1592 0,1541 0.1461 0,1429 0.1342 0,1281 0.1252 0,1223 0.1585 0,154 0.1458 0,1429 0.1352 0,1274 0.1254 0,1228 0.1667 0.1592 0.1481 0.1366 0.1266 0.1592 0.1461 0.1362 0.1268 0.1593 0.1462 0.1365 0.127 0.1667 0.1617 0.1479 0.1369 0.1294 0.1614 0.1483 0.1369 0.1295 0.1617 0.1481 0.1367 0.1293 0.1667 0.1655 0.1495 0.1367 0.1315 0.1655 0.1494 0.1367 0.1327 0.1657 0.1492 0.137 0.1324 0.1667 115 Nồng độ DPPH bị khử trước pha lỗng Mm/ml 0.2 lần 0.3 lần lần lần 0.4 lần lần lần 0.5 lần lần lần STD IC50 lần lần lần lần lần TB 0.122 0.059 0.1794 0.2244 0.0564 0.1219 0.1814 0.2262 0.1233 0.1761 0.2252 0.135 0.1368 0.1353 0.1357 0.001 0,082 0,13 0,210 0,238 0,081 0,137 0,211 0,240 0,08 0,137 0,215 0,238 0,11 0,112 0,111 0,112 0,000 8 2 0.0599 0.0564 0.055 0.111 0.1213 0.1691 0.219 0.0564 0.1219 0.1712 0.218 0.0436 0.112 0.043 0.150 0.1677 0.2051 0.0452 0.1106 0.1679 0.2047 0.1119 0.1687 0.2057 0.1508 0.1509 0.1509 0.0001 0.0245 0.104 0.023 0.166 0.1689 0.1949 0.025 0.1053 0.1689 0.1888 0.1063 0.1671 0.1904 0.1661 0.1669 0.1664 0.0004 0.17 0.217 0.143 0.1386 0.1395 0.1404 0.0024 116 Bảng 12: Tối ưu hóa tỉ lệ NL/DM thời gian chiết sau có phương trình hồi quy Tổng lực khử- Chiết dung mơi nước với tỉ lệ thời gian khác 10gam mẫu, số lần chiết 3, nhiệt độ 30 độ định mức đủ 240ml sau đem phân tích Dịch sau chiết pha lỗng lần Bang 12.1: Kết leo dốc cho Y1 Tỷ lệ Thời DM/NL gian (ml/g) (phút) 16 OD 0.2 0.3 0.4 0.5 lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần 0.2017 0.2947 0.3902 0.4226 0.2014 0.2931 0.3909 0.4246 0.2013 0.2937 0.3912 0.4249 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml trước pha lỗng 0.2 lần lần 0.3 lần lần lần 0.4 lần lần lần IC50 0.5 lần lần lần lần lần lần TB STD lần 2.7082 4.4368 6.2119 6.8141 2.7026 4.4071 6.2249 6.8513 2.7007 4.4182 6.2305 6.8569 0.037 0.0358 0.0358 0.0362 0.0007 117 Bảng 12.2: Kết leo dốc Y2 theo Y1 Tỷ lệ Thời DM/NL gian (ml/g) (phút) OD 0.2 0.3 0.4 0.5 lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần lần 15 0.1771 0.2475 0.3052 0.3696 0.1775 0.2472 0.3086 0.3694 0.1776 0.2482 0.3089 0.3691 16 0.1619 0.2368 0.2839 0.3489 0.1615 0.2363 0.2937 0.3484 0.1777 0.2358 0.2957 0.3452 17 0.2071 0.2995 0.3852 0.4296 0.2075 0.2992 0.3856 0.4294 0.2076 0.2992 0.3859 0.4294 18 0.1617 0.2378 0.2937 0.3488 0.1611 0.2378 0.2936 0.3487 0.1619 0.2351 0.2932 0.3467 10 19 0.1564 0.2241 0.2856 0.3344 0.1562 0.2249 0.2847 0.3349 0.1566 0.2242 0.2848 0.3346 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml trước pha lỗng 0.2 lần lần 0.3 lần 2.2509 3.5595 4.632 lần lần 0.4 lần lần lần IC50 0.5 lần lần lần lần lần lần TB STD lần 5.829 2.2584 3.5539 4.6952 5.8253 2.2602 3.5725 4.7007 5.8197 0.0443 0.0441 0.0437 0.044 0.0003 1.9684 3.3606 4.2361 5.4442 1.961 3.3513 4.4182 5.4349 2.2621 3.342 4.4554 5.3755 0.0508 0.0509 0.0512 0.0509 0.0002 2.8086 4.526 6.119 6.9442 2.816 4.5204 6.1264 6.9405 2.8178 4.5204 6.132 6.9405 0.031 0.0309 0.0308 0.0309 0.0001 1.9647 3.3792 4.4182 5.4424 1.9535 3.3792 4.4164 5.4405 1.9684 3.329 4.4089 5.4033 0.0504 0.0507 0.0506 0.0506 0.0001 1.8662 3.1245 4.2677 5.1747 1.8625 3.1394 4.2509 5.184 1.8699 3.1264 4.2528 5.1784 0.0541 0.0541 0.054 0.0541 0.0001 118 Bảng 12.2: Kết leo dốc Y2 theo YL Tỷ lệ Thời DM/NL gian (ml/g) (phút) OD 0.2 0.3 0.4 0.5 lần 0,2096 lần 0,2994 lần 0,3951 lần 0,4291 lần 0,2086 lần 0,2987 lần 0,3967 lần 0,4291 lần 0,2081 lần 0,2993 lần 0,3857 lần 0,4298 15 17 0.1989 0.2883 0.3874 0.4218 0.1965 0.2881 0.3871 0.4274 0.1982 0.2889 0.3867 0.4271 19 0.1776 0.2474 0.3051 0.3691 0.1768 0.2487 0.3087 0.3691 0.1781 0.2483 0.3085 0.3698 21 0.1679 0.2373 0.2954 0.3598 0.1665 0.2381 0.2971 0.3593 0.1682 0.2388 0.2987 0.3581 10 23 0.1562 0.2237 0.2842 0.3468 0.1562 0.2269 0.2839 0.3462 0.1786 0.2354 0.2861 0.3461 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml trước pha lỗng 0.2 lần lần 0.3 lần lần lần 0.4 lần lần lần IC50 0.5 lần lần lần lần lần lần TB STD lần 2,855 4,5242 6,303 6,9349 2,8364 4,5112 6,3327 6,9349 2,8271 4,5223 6,1283 6,948 0,0299 0,0305 0,0307 0,0303 0,0004 2.6561 4.3178 6.1599 6.7993 2.6115 4.3141 6.1543 6.9033 2.6431 4.329 6.1468 6.8978 0.0349 0.0318 0.0329 0.0332 0.0016 2.6561 4.3178 6.1599 6.7993 2.6115 4.3141 6.1543 6.9033 2.6431 4.329 6.1468 6.8978 0.0349 0.0318 0.0329 0.0332 0.0016 2.2602 3.5576 4.6301 5.8197 2.2454 3.5818 4.697 5.8197 2.2695 3.5743 4.6933 5.8327 0.0439 0.0439 0.0436 0.0438 0.0002 2.0799 3.3699 4.4498 5.6468 2.0539 3.3848 4.4814 5.6375 2.0855 3.3978 4.5112 5.6152 0.0498 0.0501 0.0487 0.0495 0.0007 1.8625 3.1171 4.2416 5.4052 1.8625 3.1766 4.2361 5.3941 2.2788 3.3346 4.277 5.3922 0.0573 0.0562 0.0523 0.0553 0.0026 [...]... đến hoạt tính chống oxy hóa và hàm lương protein từ dịch chiết hải miên (Spongia sp. ) Xác định ảnh hưởng của thời gian đến hoạt tính chống oxy hóa và hàm lượng protein từ dịch chiết hải miên (Spongia sp. ) Xác định ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính chống oxy hóa và ham lượng protein từ dịch chiết hải miên (Spongia sp. ) Xác định ảnh hưởng của số lần chiết đến hoạt tính chống oxy hóa và hàm lượng protein. .. cứu ảnh hưởng của điều kiện chiết xuất bằng nước cất với sự hỗ trợ của siêu âm đến hoạt tính chống oxy hóa và hàm lượng protein của dịch chiết từ hải miên (Spongia sp. ) Nhằm tìm ra điều kiện chiết hoạt chất chống oxy hóa và hàm lượng protein từ hải miên là tốt nhất, nhằm góp phần nào đó vào nền y học hiện tại 3 2 MỤC ĐÍCH VÀ Ý NGHĨA CỦA ĐỀ TÀI 1.1 Mục đích đề tài: Xác định ảnh hưởng tỷ lệ NL/DM đến. .. protein từ dịch chiết hải miên (Spongia sp. ) Tối ưu hóa điều kiện chiết xuất để thu được dịch chiết có hoạt tính chống oxy hóa cao từ hải miên (Spongia sp. ) 1.2 Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn Là cơ sở để áp dụng vào việc nghiên cứu tách chiết các chất có hoạt tính chống oxy hóa từ các loài hải miên nói chung và các sinh vật biển nói riêng Thành công của đề tài sẽ tạo ra chấtc có hoạt tính chống oxy. .. chống oxy hóa mạnh so với vitamin E và vitamin C Nghiên cứu của Li và cộng sự (199 4) cho thấy các hoạt chất sinh học chiết xuất từ hải miên Aspergillus có khả năng chống oxy hóa cao hơn đáng kể so với hydroxytoluene butylated (BHT) Ngoài ra Sato và cộng sự (200 6) cũng đã tìm thấy các hợp chất carotenoids, polyphenol, glutathione trong một số loài hải miên, đây là những hợp chất có hoạt tính chống oxy. .. polypeptide có hoạt tính chống oxy hóa in vitro như khử các gốc tự do diphenyl-1-picryhydradzyl (DPPH), superoxide, hydroxyl, tạo phức càng với ion kim loại, khử sắt và chống oxy hóa acid linoleic (Elias và cộng sự, 200 8) Đặc tính chống oxy hóa của polypeptide phụ thuộc vào cấu trúc, thành phần acid amin và khối lượng phân tử của peptide (Tang và cộng sự, 2009; Udenigwe và Aluko, 201 1) Nước và các dung... thế nghiên cứu hoạt tính chống oxy hóa từ dịch chiết hải miên là một vấn đề rất nóng và mới ở Việt Nam Khi nói đến hải miên nhiều người vẫn chưa biết đến, cũng chưa hình dung ra chúng như thế nào, dịch chiết sẽ là chất có hoạt tính sinh học cao không, đó là vấn đề mà nhiều người muốn biết Xuất phát từ những điều kiện thực tế trên với sự hướng dẫn của TS Huỳnh Nguyễn Duy Bảo, em đã thực hiện đề tài: Nghiên. .. sinh sản) Hải miên có hai hình thức sinh sản là sinh sản vô tính và sinh sản hữu tính Trong đó sinh sản vô tính bằng cách phân mảnh, mọc chồi, và bằng cách sản xuất gemmules Hình 1.3 Sinh sản vô tính của hải miên [3] Những mảnh vỡ của hải miên được tách ra và đi theo dòng chảy hoặc sóng vỗ, chúng sử dụng đặc tính di chuyển của mình gắn vào một bề mặt phù hợp nào đó, hình thành nên hải miên mới và ổn... các dược liệu từ biển Manzamine A có tác dụng chống sốt rét rất cao, hoạt động của chúng được cho là hoạt động tăng cường đáp ứng miễn dịch của cơ thể Một số hoạt tính khác của các hợp chất phân lập được từ hải miên Bên cạnh các hoạt tính kháng viêm, chống khối u và kháng sinh, các hoạt chất từ hải miên cũng thể hiện rất nhiều hoạt động dược học đa dạng khác như các hoạt tính chống lao, điều hòa cơ,... (một protein có hoạt tính kháng nhiều thuốc) và làm bất hoạt protein này đã tăng hiệu quả điều trị khối u của nó Halichondrin B, Loganzo và các cộng sự đã tiến hành nghiên cứu sâu trên các dẫn xuất tổng hợp từ hemiasterin, một tripeptide dị thường phân lập từ Auletta sp Những nghiên cứu này đã dẫn đến sự phát triển dẫn xuất có tên HTI-286 Một hợp chất mới hiên đang được nghiên cứu tiền lâm sàng trong chống. .. thái của ấu trùng, vvv Sự đa dạng của các loài khác nhau cho thấy những đặc tính khác nhau 1.1.4 Đặc tính của hải miên Màu sắc trong hải miên có thể thay đổi Hải miên nước sâu này thường hiển thị một màu trung tính, màu nâu xám hoặc nâu; Hải miên nước nông, thường có màu sắc rực rỡ, phạm vi từ màu đỏ, vàng, và màu cam sang tím và đôi khi màu đen 8 Hầu hết các loại hải miên đá vôi có màu trắng Spongia ... âm đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng protein dịch chiết từ miên (Spongia sp. ) 52 3.1.1 Ảnh hưởng tỷ lệ DM/NL (ml/g) đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng protein từ dịch chiết hải miên (Spongia. .. lần chiết) nước cất với hỗ trợ siêu âm đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng protein dịch chiết từ hải miên (Spongia sp. ) a Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng tỷ lệ DM/NL đến hoạt tính chống oxy hóa hàm. .. định ảnh hưởng tỷ lệ NL/DM đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lương protein từ dịch chiết hải miên (Spongia sp. ) Xác định ảnh hưởng thời gian đến hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng protein từ dịch chiết