B GIO DC V O TO TRNG I HC NễNG NGHIP H NI V NGC QUí XC NH VAI TRề GY BNH VIấM PHI MNG PHI LN CA VI KHUN ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIAE, PASTEURELLA MULTOCIDA V TH NGHIM VACXIN PHềNG BNH LUN VN THC S NễNG NGHIP Chuyờn ngnh : TH Y Mó s : 60.62.50 Ngi hng dn khoa hc: PGS.TS C HU PH H NI - 2008 LI CAM OAN Tụi xin cam ủoan ủõy l cụng trỡnh nghiờn cu ca riờng tụi Cỏc s liu, kt qu nờu lun l trung thc v cha tng ủc cụng b bt kỡ cụng trỡnh no khỏc Tụi xin cam ủoan rng cỏc thụng tin trớch dn lun ủu ủó ủc ch rừ ngun gc H Ni, ngy thỏng nm 2008 Tỏc gi V Ngc Quý Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip i LI CM N Tụi xin chõn thnh cm n: - PGS.TS Cự Hu Phỳ, ngi hng dn khoa hc trc tip ủó giỳp ủ, hng dn, ch bo tn tỡnh, to ủiu kin cho tụi quỏ trỡnh thc hin ủ ti v hon thnh lun ny - TS Nguyn Hu Nam, cỏc thy cụ b mụn Vi sinh vt - Truyn nhim - Bnh lý cựng ton th cỏc thy cụ giỏo Khoa Thỳ y; khoa Sau ủi hc-Trng i hc Nụng nghip H Ni ủó tn tỡnh giỳp ủ v to mi ủiu kin cho tụi hon thnh lun ny - Cỏn b nghiờn cu cụng tỏc ti B mụn Vi trựng- Vin Thỳ y - S giỳp ủ nhit tỡnh ca lónh ủo Cụng ty Ging Chn nuụi Thỏi Bỡnh, Hi Phũng, H Tõy v cỏc bn ủng nghip ủc bit l gia ủỡnh ủó to mi ủiu kin thun li nht giỳp ủ tụi quỏ trỡnh thc hin ủ ti H Ni, Ngy thỏng nm 2008 Tỏc gi V Ngc Quý Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip ii MC LC Li cam ủoan i Li cỏm n ii Mc lc iii Danh mc cỏc ch vit tt v ký hiu v Danh mc bng vi Danh mc biu, hỡnh vii M u 1 Tng quan ti liu 10 1.1 Vi khun Pasteurella multocida v bnh vi khun gõy ln 10 1.2 Vi khun Actinobacillus pleuropneumoniae v bnh vi khun gõy ln 20 Ni dung - nguyờn liu v phng phỏp nghiờn cu 37 2.1 Ni dung nghiờn cu 37 2.2 Nguyờn liu nghiờn cu 37 2.3 Phng phỏp nghiờn cu 40 Kt qu nghiờn cu v tho lun 46 3.1 Kt qu thu thp mu bnh phm ủng hụ hp 46 3.2 T l nhim vi khun Actinobacillus v Pasteurella ủng hụ hp ca ln theo phng 3.3 47 Kt qu phõn lp vi khun Actinobacillus v Pasteurella t dch ngoỏy hng v phi ca ln 50 3.4 Kt qu phõn lp vi khun ủng hụ hp ca ln theo cỏc la tui 53 3.5 Kt qu giỏm ủnh hỡnh thỏi, nuụi cy v mt s ủc tớnh sinh hoỏ ca cỏc vi khun phõn lp ủc 3.5.1 c ủim hỡnh thỏi v tớnh cht nuụi cy 55 55 3.5.2 Kt qu giỏm ủnh mt s ủc tớnh sinh hoỏ ca cỏc vi khun phõn lp ủc Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip iii 59 3.5.3 Kt qu kim tra kh nng lờn men ủng ca cỏc vi khun phõn 3.6 lp ủc 60 Kt qu kim tra ủc lc ca vi khun phõn lp ủc 62 3.6.1 Kt qu kim tra ủc lc ca vi khun P multocida phõn lp ủc 63 3.6.2 Kt qu kim tra ủc lc ca vi khun A pleuropneumoniae phõn lp ủc 64 3.7 Kt qu xỏc ủnh serotype ca vi khun ủng hụ hp phõn lp ủc 66 3.8 Kt qu ch to th nghim Autovacxin phũng bnh viờm phi mng phi cho ln 70 3.8.1 Ch Autovacxin vụ hot cú b tr keo phốn phũng bnh viờm phi - mng phi cho ln 70 3.8.2 Kt qu kim tra an ton v hiu lc vacxin trờn chut thớ nghim 71 3.8.3 Kt qu th nghim autovacxin trờn ln 73 Kt lun v ủ ngh 77 4.1 Kt lun 77 4.2 ngh 78 Ti liu tham kho 79 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip iv DANH MC CC CH VIT TT V Kí HIU AGID: Agargel Immuno Diffuse A pleuropneumoniae: Actinobacillus pleuropneumoniae B bronchiseptica: Bordetella bronchiseptica BHI: Brain Heart Infusion CAMP: Christie Atkinson Munch Peterson CFT: Complement Fixation Test cs: cng s DNA: Deoxyribonucleic Acid EDTA: Ethylene Diamine Tetra Acetic acid ELISA: Enzyme linked Immunosorbant assay H parasuis: Haemophilus parasuis H pleuropneumoniae: Haemophilus pleuropneumoniae IHA: Indirect Haemagglutination test LPS: LypoPolysaccarit M hyopneumoniae: Mycoplasma hyopneumoniae MR: Methyl red NAD: Nicotinamide Adenine Dinucleotide OIE: Organisation for International Epidemic PBS: Phosphat buffer solution PCR: Polymerase Chain Reaction P multocida: Pasteurella multocida PRRS: Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome TSA: Tryptic Soy Agar vk: vi khun VP: Voges - Prokauer Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip v DANH MC BNG STT Tờn bng Trang 2.1 Trỡnh t cỏc cp mi dựng ủ xỏc ủnh type giỏp mụ A, B, D ca vi khun P multocida 3.1 Kt qu thu thp mu bnh phm 44 47 3.2 T l nhim vi khun Actinobacillus v Pasteurella ủng hụ hp ca ln theo phng 48 3.3 Kt qu phõn lp vi khun Actinobacillus v Pasteurella t dch ngoỏy hng v phi ca ln 3.4 Kt qu phõn lp vi khun ủng hụ hp ca ln theo cỏc la tui 51 54 3.5 Kt qu giỏm ủnh mt s ủc tớnh sinh hoỏ ca cỏc chng vi khun phõn lp ủc 59 3.6 Kt qu kim tra kh nng lờn men ủng ca cỏc chng vi khun phõn lp ủc 3.7 Kt qu kim tra ủc lc ca vi khun P multocida phõn lp ủc 61 63 3.8 Kt qu kim tra ủc lc ca vi khun A pleuropneumoniae phõn lp ủc 65 3.9 Kt qu xỏc ủnh serotype ca cỏc chng vi khun A pleuropneumoniae v P multocida phõn lp ủc 67 3.10 Kt qu kim tra mt s ch tiờu cỏc lụ vacxin 71 3.11 Kt qu th hiu lc ca vacxin trờn chut bch 72 3.12 Kt qu th hiu lc vacxin trờn ln 74 3.13 Kt qu kim tra hiu giỏ khỏng th ca ln sau tiờm vacxin 75 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip vi DANH MC BIU, HèNH Biểu đồ 3.1 Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Actinobacillus Pasteurella đờng hô hấp lợn theo địa phơng 49 Biểu đồ 3.2 Kết phân lập vi khuẩn Actinobacillus Pasteurella từ dịch ngoáy họng phổi lợn 52 ảnh 3.1 Bệnh tích phổi lợn bị viêm phổi - màng phổi 53 ảnh 3.2 Khuẩn lạc vi khuẩn Pasteurella phân lập đợc môi trờng thạch máu 56 ảnh 3.3 Hình thái vi khuẩn Pasteurella phân lập đợc (1500 x) 57 ảnh 3.4 Khuẩn lạc vi khuẩn Actinobacillus phân lập đợc môi trờng thạch máu 57 ảnh 3.5 Hình thái vi khuẩn Actinobacillus phân lập đợc (1500 x) 58 ảnh 3.6 Phản ứng lên men đờng vi khuẩn Actinobacillus phân lập đợc 62 ảnh 3.7 Phản ứng lên men đờng vi khuẩn Pasteurella phân lập đợc 62 ảnh 3.8 Kết phản ứng PCR định type vi khuẩn P multocida 69 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip vii M U Hin chn nuụi gia sỳc núi chung v chn nuụi ln núi riờng chim mt v trớ quan trng ngnh nụng nghip nc ta, ủc bit l nhng tnh thuc ủng bng Bc b Bi vỡ s dõn s nc ta sng nụng thụn v ngun sng da c vo nụng nghip, ủú ch yu l trng lỳa v chn nuụi ln Tht ln l ngun thc phm chớnh ba n hng ngy ca mi ngi dõn chỳng ta, sn phm tht ln phn ln l ủ ủỏp ng nhu cu nc v mt phn dnh cho xut khu, ln cng l ngun cung cp phõn hu c cho thõm canh tng nng sut cõy trng Trong nhng nm gn ủõy, ngnh thỳ y ủó cú mt s thnh tu mi gúp phn phũng chng dch bnh, bo v ủn ln Tuy nhiờn, tng lỳc tng ni m ủiu kin sinh thỏi khụng thun li, mt s dch bnh xy gõy nhng thit hi ủỏng k cho ủn ln, ủc bit l ln trc v sau cai sa vỡ ln giai ủon ny va thay ủi ủiu kin sinh lý va dn thớch nghi vi ủiu kin sng mi nờn rt d mc bnh Cú rt nhiu cỏc loi bnh khỏc ln, ủú phi k ủn cỏc bnh v ủng hụ hp nh: Ho th truyn nhim, viờm phi, viờm ph qun, viờm teo mi truyn nhim, õy l nhng bnh ủỏng quan tõm nht giai ủon hin ca ngnh chn nuụi ln Trong chn nuụi ln núi chung, cỏc bnh v ủng hụ hp thng khụng gõy t l cht ln cao nh cỏc bnh dch t ln, t huyt trựng, nhng chỳng gõy tn tht nng n v mt kinh t cho ngnh chn nuụi, gõy thit hi cho nn kinh t quc dõn Ln thng mc bnh hụ hp, ủc bit ủi vi ln chn nuụi trung v bnh li xut hin quanh nm Ln mc bnh b cũi cc, chm ln, tiờu tn thc n nhiu nhng tng trng kộm v chi phớ ủiu tr ln ủng hụ hp trờn ca ln cỏc la tui thng cú mt s loi vi khun c trỳ thng trc nh cỏc vi khun: Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida, Haemophillus parasuis, Bordetella bronchiseptica, Streptococcus suis Khi sc ủ khỏng ca c th gia sỳc gim xung ủiu kin nuụi dng, v sinh, chm súc kộm, cỏc vi khun ny s nhõn lờn nhanh chúng v s lng v tng cng ủc lc phỏt thnh bnh v gõy thit hi ln cho ủn ln Vỡ vy ủ gúp phn gii quyt nhng yờu cu thc t ca sn xut, giỳp ngi chn nuụi cú bin phỏp phũng tr bnh ủng hụ hp cú c s khoa hc, chỳng tụi tin hnh nghiờn cu ủ ti: Xỏc ủnh vai trũ gõy bnh viờm phi mng phi ln ca vi khun Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida v th nghim vacxin phũng bnh Mc ủớch ca ủ ti Xỏc ủnh t l nhim mt s loi vi khun c trỳ ti ủng hụ hp trờn ca ln cỏc la tui khe mnh v nghi mc bnh ủng hụ hp Xỏc ủnh ủc lc ca vi khun ủng hụ hp phõn lp ủc ủ nhng ủỏnh giỏ v vai trũ gõy bnh hụ hp ca mt s vi khun ny Ch to v th nghim Autovacxin s dng phũng bnh ủng hụ hp cho ln Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip trựng A pleuropneumoniae v P multocida ủng nht Sau ủú pha canh trựng vi nc sinh lý vụ trựng, b sung keo phốn vi t l 1/5, ủ vi liu tiờm ml/con cha - t khỏng nguyờn, ri lc ủu ủ khỏng nguyờn v keo phốn gn kt tt vi Sau ủú tin hnh ly mu ủ kim tra an ton v hiu lc trờn ủng vt thớ nghim - Kim tra an ton trờn chut bch: Chn 10 chut khe mnh tiờm vacxin vi liu 0,5 ml/con vo phỳc xoang v chn chut tiờm 0,2 ml nc phớa trờn l vacxin vo tnh mch ủuụi Theo dừi sau ngy cho thy tt c chut ủc tiờm vacxin ủu sng khe mnh, khụng no cú biu hin phn ng sau tiờm iu ny ủó khng ủnh rng vacxin ủó ủt yờu cu v ủ an ton trờn ủng vt thớ nghim v cú th tin hnh kim tra hiu lc ca vacxin trờn ủng vt thớ nghim - Kim tra hiu lc bo h ca vacxin trờn chut bch: Chn 10 chut khe mnh, mi tiờm 0,2 ml vacxin vo di da v chut ủi chng khụng tiờm vacxin Sau 21 ngy, tin hnh th thỏch cng ủc vi hn hp canh trựng A pleuropneumoniae v P multocida tng ng, vi liu 0,5 ml/con cho tt c chut thớ nghim v ủi chng Kt qu thu ủc trỡnh by bng 3.11 Bng 3.11 Kt qu th hiu lc ca vacxin trờn chut bch Thi gian theo dừi S chut cht (con) S chut sng (con) T l bo h (%) 0,5 ngy 10 100,0 0,5 24-48 gi 0,0 Lụ S chut TN (con) Liu tiờm VX (ml) Liu cụng (ml) TN 10 0,2 C Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 72 Kt qu cho thy: lụ thớ nghim, chut ủc tiờm dch vi liu 0,2 ml/con ủu sng kho mnh v sau 21 ngy, th thỏch cng ủc vi hn hp canh trựng A pleuropneumoniae v P multocida tng ng vi chng sn xut vacxin, vi liu 0,5 ml/con thỡ khụng cú chut no b cht, ủiu ủú cú ngha l 100% s chut ủc bo h Trong ủú, c chut lụ ủi chng khụng ủc tiờm vacxin, sau cụng cng ủc vi liu tng t ủu b cht vũng 24 - 48 gi (t l cht 100%) v ủu phõn lp li ủc loi vi khun ny t mỏu tim Tng hp cỏc kt qu kim tra an ton v hiu lc bo h ca vacxin trờn chut bch ca lụ vacxin ch th, so sỏnh vi tiờu chun ca Trung tõm Kim nghim thuc thỳ y quc gia v kim nghim vacxin cht cú b tr keo phốn, cho phộp ủỏnh giỏ: Lụ vacxin ủt ch tiờu an ton 100% v cú hiu lc bo h cao trờn chut bch (100%), ủ tiờu chun ủ kim tra trờn bn ủng vt 3.8.3 Kt qu th nghim autovacxin trờn ln 3.8.3.1 Kt qu th hiu lc autovacxin trờn ln ủỏnh giỏ hiu lc ca vacxin trờn ln, chỳng tụi ủó tin hnh thớ nghim nh sau: - Lụ thớ nghim: Chỳng tụi chn 10 ln trờn 35 ngy tui, kho mnh, cha ủc tiờm bt k loi vacxin no m vacxin cú cha khỏng nguyờn A pleuropneumoniae v P multocida Chỳng tụi cng ủó tin hnh ly mỏu ca 10 ln thớ nghim, kim tra huyt v ủu thy mỏu ủu õm tớnh vi loi vi khun ny Chỳng tụi ủó tiờm vacxin cho ln vi liu ml/con vo di da gc tai, sau ủú theo dừi cỏc phn ng cc b v ton thõn - Lụ ủi chng: Chn ln trờn 35 ngy tui cng ủỏp ng nhng ủiu kin nh ln lụ thớ nghim Nhng ln ny khụng ủc tiờm vacxin Ln c lụ ủc nuụi cỏc ụ chung cú ủiu kin chm súc nuụi dng ging Sau 21 ngy, tin hnh cụng cng ủc cho ln c lụ Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 73 bng hn hp canh trựng cỏc chng A pleuropneumoniae v P multocida tng ng vi cỏc chng ủó dựng ủ ch vacxin Theo dừi 10 ngy Kt qu thu ủc trỡnh by bng 3.12 Bng 3.12 Kt qu th hiu lc vacxin trờn ln Tiờm vacxin Cụng cng ủc Kt qu S ln TN Liu tiờm ng tiờm Liu tiờm ng tiờm S sng/ s cụng T l TN 10 2ml Di da 2ml Di da 10/10 100% C - 2ml Di da 1/5 20% Lụ ln (%) Kt qu cho thy: - Lụ thớ nghim: Sau tiờm vacxin, c 10 ln ủu kho mnh, n ung ủi li bỡnh thng Sau tin hnh cụng cng ủc v theo dừi vũng 10 ngy, tt c ln lụ ny kho mnh v phỏt trin bỡnh thng, khụng thy cú biu hin triu chng bnh ủng hụ hp Chng t vacxin cú hiu qu bo h tt vi t l 100% - Lụ ủi chng: Sau cụng cng ủc, c ln ủu cú biu hin bnh ủng hụ hp nng: st, b n, ho, r, Sau ủú t ngy th ủn ngy th 5, ln lt ln lụ ny b cht, ch cũn ln sau 10 ngy theo dừi cũn sng nhng cú biu hin hụ hp nng Khi tin hnh m khỏm nhng ln cht v c ln cũn sng ủu cú bch tớch ủin hỡnh ca bnh viờm phi - mng phi nh phi ủu b viờm nng, cú nhng ủỏm t huyt, xut huyt, cú hin tng viờm dớnh vo lng ngc vv ng thi chỳng tụi cng ủó phõn lp ủc c loi vi khun A pleuropneumoniae v P multocida t mỏu tim ln Qua kt qu ny cú th khng ủnh rng ủiu kin thớ nghim Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 74 vacxin m chỳng tụi ch to cú kh nng bo h tt cho ln vi bnh viờm phi - mng phi loi vi khun A pleuropneumoniae v P multocida gõy ủỏnh giỏ ủc hiu qu thc ca vacxin, cn tin hnh th nghim trờn din rng ủ cú kt qu ủỏnh giỏ chớnh xỏc kt qu phũng bnh ca vacxin trờn thc 3.8.3.2 Kt qu kim tra hiu giỏ khỏng th ca ln sau tiờm vacxin ủỏnh giỏ kh nng to ủỏp ng dch ca vacxin cho ln, chỳng tụi tin hnh ly mỏu cht huyt ủ kim tra hiu giỏ khỏng th ca ln thớ nghim sau tiờm vacxin 21 ngy vi khỏng nguyờn vi khun A pleuropneumoniae v P multocida, s dng phng phỏp ngng kt hng cu giỏn tip (IHA) Kt qu thu ủc trỡnh by bng 3.13 Bng 3.13 Kt qu kim tra hiu giỏ khỏng th ca ln sau tiờm vacxin TT Ln TN Hiu giỏ khỏng th A pleuropneumoniae P multocida 1/64 1/64 2 1/64 1/32 3 1/32 1/64 4 1/64 1/128 5 1/32 1/64 6 1/64 1/32 7 1/64 1/64 8 1/32 1/64 9 1/64 1/64 10 10 1/32 1/64 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 75 Kt qu bng 3.13 cho thy: - Hu ht cỏc mu huyt ca cỏc ln thớ nghim ủu cú hiu giỏ ngng kt cao vi khỏng nguyờn vi khun A pleuropneumonia, s mc 1/64, vi mu; cũn li mu cú hiu giỏ ngng kt ủt 1/32 l cỏc mu huyt ca cỏc ln s 3, 5, 8, 10 - Kt qu tng t vi khỏng nguyờn vi khun P multocida, s cỏc ln cú mu huyt vi hiu giỏ ngng kt ủt 1/64 (7 ln), ch ln cú hiu giỏ 1/32 l ln s v s 6, v ủc bit cú ln cú hiu giỏ khỏng th ủt 1/128 l ln s Theo quy ủnh vi vacxin phũng bnh viờm phi - mng phi cho ln ủt hiu giỏ 1/16 l cú kh nng bo h tt cho ln ủc tiờm vacxin T kt qu bng trờn cho thy, vacxin m chỳng tụi sn xut cú kh nng bo h tt ln, ủt yờu cu dựng lm vacxin phũng bnh viờm phi - mng phi cho ln loi vi khun A pleuropneumoniae v P multocida gõy Do ủú, cú th nghiờn cu th nghim trờn din rng ủ ỏp dng vo sn xut Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 76 KT LUN V NGH 4.1 Kt lun T cỏc kt qu thu ủc, chỳng tụi rỳt cỏc kt lun nh sau: 4.1.1 T l nhim vi khun Actinobacillus v Pasteurella ủng hụ hp ca ln cỏc phng cú s khỏc nhau, nhng s sai khỏc l khụng ln Vi 236 mu bnh phm cú 25 mu phõn lp ủc vi khun Pasteurella, chim t l 10,59% v 15 mu phõn lp ủc Actinobacillus, chim t l 6,35% H Tõy t l phõn lp ủc Pasteurella l 15,00% v Actinobacillus l 8,33% Hi Phũng, t l phõn lp ủc Pasteurella l 10,00% v Actinobacillus l 7,78%; cũn t l phõn lp ủc Pasteurella v Actinobacillus Thỏi Bỡnh ln lt l 8,14% v 3,39% 4.1.2 Cỏc chng vi khun Pasteurella v Actinobacillus phõn lp ủc mang ủy ủ cỏc ủc tớnh sinh vt húa hc ca P multocida v A pleuropneumoniae nh cỏc ti liu v ngoi nc ủó cụng b 4.1.3 Vi khun phõn lp ủc cú ủc lc mnh: Cú chng P multocida git cht 100,0% chut thớ nghim vũng 24 - 48 gi v cú chng A pleuropneumoniae git cht 100,0% chut vũng 12 - 24 gi 4.1.4 Trong s 15 chng vi khun A pleuropneumoniae phõn lp ủc chng thuc serovar (6,67%), 11 chng thuc serovar (73,33%) v chng thuc serovar (20%) Trong ủú 22/25 chng P multocida phõn lp ủc thuc serotype A (88,0%), ch cú 3/25 chng thuc serotype D (12,0%) 4.1.5 Chn ủc chng A pleuropneumoniae v chng P multocida ủ ch th nghim autovacxin phũng bnh viờm phi mng phi cho ln Autovacxin ch di dng vụ hot cú b tr keo phốn vi liu tiờm ml/ cú cha - t khỏng nguyờn 4.1.6 Autovacxin an ton v bo h 100% trờn chut v trờn ln thớ nghim Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 77 Ln 35 ngy tui sau tiờm vacxin mỏu cú khỏng th khỏng A pleuropneumoniae v P multocida vi hiu giỏ cao Cú kh nng bo h vi bnh viờm phi - mng phi vi khun A pleuropneumonia v P multocida gõy ln 4.2 ngh - Tip tc th nghim ủ ủỏnh giỏ kh nng bo h ca Autovacxin vi bnh viờm phi mng phi ln nuụi ti cỏc c s - Xỏc ủnh ủ di dch ca Autovacxin ủ ủ xut quy trỡnh s dng v lch tiờm phũng vacxin phự hp Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 78 TI LIU THAM KHO Ti liu Ting Vit: Nguyn Xuõn Bỡnh (1996), Nghiờn cu ủc ủim dch t bnh t huyt trựng gia cm Long An v bin phỏp phũng tr thớch hp Lun ỏn Phú tin s khoa hc nụng nghip, H Ni M W Eastaugh (2001), Bnh hụ hp ca ln Tng quan (Thanh Thun dch) Tp KHKT thỳ y, 7(2), tr 76-82 Nguyn Lờ Hoa (2001), Xỏc ủnh t l nhim v mt s ủc tớnh sinh vt hoỏ hc ca vi khun gõy bnh ủng hụ hp ln: P multocida, B bronchiseptica, H parasuis, A pleuropneumonia v bin phỏp phũng tr Lun Thc s khoa hc nụng nghip, Vin Thỳ y quc gia, H Ni Trnh Quang Hip (2004), Xỏc ủnh mt s ủc tớnh sinh vt hoỏ hc, ủc lc v vai trũ gõy bnh viờm phi ln ca mt s vi khun: Actinobacilus, Pasteurella v Streptococcus Bc ủu th nghim bin phỏp phũng tr Lun Thc s khoa hc nụng nghip, Vin Thỳ y quc gia, H Ni Nguyn Ngc Nhiờn, Nguyn Th Ni, Khng Bớch Ngc (1994), Nghiờn cu ch to vacxin phũng Hi chng ho th truyn nhim ln v kt qu ỏp dng sn xut Tp khoa hc - cụng ngh v qun lý kinh t, 9/1994, tr 356 - 357 Nguyn Ngc Nhiờn (1996), Vai trũ ca mt s vi khun ủng hụ hp hi chng ho th truyn nhim ln v bin phỏp phũng tr Lun ỏn Phú tin s khoa hc nụng nghip, H Ni Cự Hu Phỳ, Nguyn Ngc Nhiờn, Nguyn Thu Hng, u Xuõn Tun, Nguyn Bớch Thu, V Ngc Quý (2005) Xỏc ủnh nguyờn nhõn gõy Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 79 bnh ủng hụ hp ca ln nuụi ti mt s tnh phớa Bc Tp KHKT thỳ y, 7(4), tr 25-32 Nguyn Vnh Phc (1978) Giỏo trỡnh bnh truyn nhim gia sỳc Nh xut bn Nụng thụn Nguyn Nh Thanh (2001) Giỏo trỡnh Vi sinh vt thỳ y Nh xut bn Nụng nghip 10 Ngc Thuý v cs (2007) ng dng k thut PCR ủ ủnh type giỏp mụ ca cỏc chng vi khun P multocida phõn lp ủc t vt nuụi Tp KHKT thỳ y, 14(1), tr 36-41 11 Trn ỡnh T v cs (1992) Nghiờn cu mt s ủc ủim sinh hoỏ v s mn cm khỏng sinh ca cỏc chng vi khun Pasteurella multocida phõn lp t cỏc loi ủng vt nuụi Tha Thiờn - Hu K yu khoa hc Trng HNL Hu, tr 150 - 154 Ti liu nc ngoi: 12 Ahn, D C and Kim, B H (1994), Toxigenicity and capsular serotypes of pasteurella multocida isolated from pneumonic lungs of slaughter pigs, Proc, Int, Pig vet, Soc Congr, p 165 13 Bain, R V S.; De Alwis, M C L.; Carter, G R and Gupta, B K (1982), Haemorrhagic septicemiae, Animal Production and Health, Paper N033, FAO, Roma 14 Bergey's Manual of Determinative Bacteriology Ninth Edition (1994) 15 Biberstein, L Ernst (1990), Our understanding of the Pasteurellaceae, Can j Vet Res, (54), p 78-82 16 Brandreth, S R and Smith, I M (1985), Prevenlence of pig herds affected by pleuropneumonia associated with Haemophilus pleuropneumoniae in eastern England, Vet Rec 117: p 143 - 147 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 80 17 Buttenschon, J (1991), The Primary structure of staphylococcal enterotoxin B.3 The cyanogen bronmide peptides of reduced and aminoethylated enterotoxin B, and the complete amino acid sequence 18 Carter, G R (1952), Type specific capsular antigens of Pasteurella multocida Canadian Journal of Medical Science, 30: p 48 53 19 Carter, G R (1955), Studies on Pasteurella multocida I.A Haemagglutination test for identification of serological types American Journal of Veterinary Research, 16: p 481 - 484 20 Carter, G R (1984), Pasteuralla, Yersinia, and Franciella, p 111 - 121 in: Diagnostic procedures in veterinary bacteriology and Mycology 4th ed (Carter G.R, ed) Charles C, Thomas Publisher, Springfield 21 Carter, G R (1987), Serological classification of Pasteurella multocida Vet Rec, 121(16), p 382-383 22 Cho, W S and Chae, C (2001), Expression of the Apx IV Gene in pigs naturally infected with Actinobacillus pleupneumoniae, J Comp Path 125, p 34-40 23 De Alwis, M C L (1992), Areview: Pasteurellosis in production animals ACIAR proceedings, 43, p 11-19 24 Desrosiers, R.; Mittal, K R.; and Malo, R (1984), Porcine pleuropneumonia associated with Haemophilus pleuropneumoniae serotype in Quebec Vet Rec 115: p 628 - 629 25 Dubreuil, J D.; Jacques, M ; Mittal, K R v Gottschalk, M (2000), Actinobacillus pleuropneumoniae surface Polysaccarits: their role in diagnosis and immunogenicity Animal Health Res Rev 2, p 73-93 26 Frey, J.; Bosse, J T (1993), Actinobacillus pleuropneumoniae RTX toxins: Uniform designation of haemolysins, cytolysins pleurotocin and Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 81 their genes J Gen Microbiol, 139: p 1723 - 1728 27 Fuentes, M and Pijoan, C (1986), Phagocytosis and intracellular killing of Pasteurella multocida by porcine alveolar macrophages after infection with pseudorabies virus Vet Immunol Immunopathol, 13(1-2), p: 165-172 28 Gilbride, K A and Rosendal, S (1984), Antimicrobial susceptibility of 51 strains of Heamophilus pleuropneumoniae Can J Comp Med, 48: p 47 - 50 29 Heddleston, K L (1972), Fowl cholera: Gel Diffusion Precipitation test for serotyping Pasteurella multocida of avian species Avian disease, 16, p 925-936 30 Inoue, A.; Yamamoto, K.; Hirano, N.; and Murakami, T (1984), Drug susceptibility of Haemophilus pleuropneumoniae strains isolated from pigs Jpn J Vet Sci, 46: p 175 - 180 31 Iwamatsu, S., and Sawada, T (1988), Relationship between serotypess, dermonecrotic toxin production of Pasteurella multocida isolation and pneumonic lesions of porcine lungs Jpn J Vet Sci 50: p 1200 1206 32 Inzana, T J (1991), Virulence properties of Actinobacillus pleuropneumoniae Microb Path 11, p 305-316 33 Inzana, T J.; Todd, J and Veit, H P (1993), Safety, stability and efficacy of nonencapsulated mutants of Actinobacillus pleuropneumoniae for use in live vaccines Infect Immun, 47, p 1682-1686 34 Jacobsen, M J and Nielsen, J P (1995), Development and evaluation of a selective and indicator medium for isolated of Actinobacillus pleuropneumoniae from tonsils Vet Micro 47: p 191 - 197 35 Jacques, M (1987), Adherence of Actinobacillus pleuropneumoniae to porcine upper respiratory tract cells Current Microbiol 15: p 115 - 119 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 82 36 Jensen, A E and Bertram, T A (1986), Morphological and biochemical comparison of virulent and avirulent isolates of Haemophilus pleuropneumoniae serotype Infect Immun, 51, p 419-424 37 Kilian, M.; Nicolet, J.; and Biberstein, E L (1978), Biochemical and serological characterization of Haemophilus pleuropneumoniae Int J Syst Bacteriol 28: p 20 - 26 38 Lariviere, S.; Nadaeu, M.; Higgins, R.; and Martineau, G P (1988), Minimal inhibitory concentrations of antimicrobial agents againts Actinobacillus pleuropneumoniae Can J Vet Res 52: p 315 - 318 39 Manninger, R (1991), Concerning a mutation of the fowl cholera bacillus Zentralblbakteriol Abt I Orig, 83, p 520 - 528 40 Mittal, K R.; Higgins, R.; and Lariviere, S (1983), An evaluation of agglutination and coagglutination techniques for serotyping of Haemophilus pleuropneuminiae isolates Am J Vet Res 48: p 219 - 226 41 Moeller, K.; Nielsen, R.; Andersen, L V., and Killian, M (1996), Clonal analysis of the Actinobacillus pleuropneumoniae population in a geographically - restricted area by multilocus enzyme elctrophoresis J Clin Micro, 30: p 623 - 627 42 Moore, G M.; Basson, R P.; and Tonkinson, L.V., (1996), Clinical trials with tilmicosin phosphate in feed for the control of naturally - acquired pleuropneumonia caused by Actinobacillus plauroneumoniae and Pasteurella multocida in swine Am J Vet Res 57: p 224 - 228 43 Nicolet, J and Schifferli, D (1982), In vitro susceptibility of Heamophilus pleuropneumoniae to antimicrobial substances Proc Int Congr Pig Vet Soc 7: p 71 44 Nicolet, J (1995), Taxonomy and serological indentification of Actinobacillus pleuropneumoniae Can Vet J, 29: p 578 - 580 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 83 45 Nielsen, J P and Rosdahl, V T (1988), Phage - typing of toxigenic Pasteurella multocida Proc Int Congr Pig Vet Soc 10: 34 46 Pattison, I H.; Howell, D G and Elliot, J (1957), A Haemophilus like organism isolated from pig lung and associated pneumonic lesion J Comp Pathol, 67, p 320-329 47 Perry, M B.; Altman, E.; Brisson, J R.; Beynon, L M and Richards, J C (1990), Structural characteristics of the antigenic capsular Polysaccarits and Lipopolysaccarits involved in the serological classification of Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae strains Serodiagnosis and Immunotherapy in Inf Dis, 4: p 299 - 308 48 Pijoan, C and Fuentes, M (1987), Severe pleuritis associated with certain strains of Pasteurella multocida in swine J Am Vet Med Assoc ,191: p 823826 49 Pijoan, C and Fuentes, M (1989), Pleuritis effect on growth understimated Int Pig Lett 9: p 17 - 19 50 Pijoan, C and Trogo, E (1989), Bacterial adhesion to mucosal surfaces with special reference to the Pasteurella multocida isolates from atrophic rhinitis Can J vet Sci 54: p 516 - 521 51 Pohl, S.; Bertschinger, H U.; Frederiksen, W and Maheim, W (1983), Transfer of Haemophilus pleuropneumoniae and the Pasteurella haemolytica - like organism causing porcine necrotic pleuropneumonia to the genus Actinobacillus (Actinobacillus pleuropneumoniae comb Nov.) on the basis of phenotypic and deoxyribonucleic acid relatedness Inst J Syst Bacteroil 33: p 510 - 514 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 84 52 Prescott, J F and Baggot J D (1993), Antimicrobial Therapy in veterinary Medicine Ames: Iowa State Univ Press 53 Rapp - Gabrielson, V J; Kocur, G J.; Clark, J T.; and Muir, S K (1985), Virulence of different serovars of Haemophilus parasuis for cesarean derived, colostrum deprived pigs In Haemophilus, Actinobacillus, and pasteurella Ed W Donachie, F.A Lainson, and J.C Hodgson New York: Plenum Press, p 204 54 Salmon, S A.; Watts, J.L.; Case , C.A.; Hoffman L.J.; Wegener, H.C.; and Yancey, R.J Jr., (1995), Comparison of MICs of Ceftiofur and other antimicrobial agent against bacterial pathogens of swine from the United State Canada and Denmark J Clin Microbiol 33 (9): p 2435 2444 55 Smith, I M and Baskerville, A J A selection medium for isolation of Pasteurella multocida in nasal specimens pigs British Veterinary Journal, 139 183, p 476-486 56 Steffens, W L.; Byrd, W and Kadis, S (1990), identification and localization of surface sialylated glycoconjugates in Actinobacillus pleuropneumoniae by direct enzyme-colloidal gold cytochemistry Vet Microbiol 25, p 217-227 57 Straw, B.; DAllaire, A.; Mengalem, W and Taylor, D (1999), Diseases of Swine 8th Edition Iowa State University Press, p 343-354 58 Townsend, K M.; Hanh, T X.; OBoyle, D.; Wilkie, I.; Phan, T T.; Wijewardana, T G.; Trung, N T and Frost, A J (2000), PCR detection and analysis of Pasteurella multocida from the tonsils of slaughtered pigs in Vietnam Vet Microbiol, 72, p 69-78 59 Verma, N D (1988), Pasteurella multocida B:2 in haemorrhagic septicaemia outbreak in pigs in India Vet Rec, 123 (2): 63 60 Ward, C K and Inzana, T J (1997), Identification and Characterization of a DNA Region Involved in the Export of Capsular Polysaccarit by Actinobacillus Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 85 pleuropneumoniae Serotype 5a Infect Immun, 65, p 2491-2496 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip 86 [...]... lệ nhất ñịnh vi khuẩn cư trú ở niêm mạc ñường hô hấp trên của nhiều lợn khỏe mạnh và không gây bệnh Tuy nhiên, khi sức ñề kháng của cơ thể lợn bị giảm sút do ñiều kiện ngoại cảnh tác ñộng thì những vi khuẩn này sẽ nhanh chóng tăng cường về số lượng, ñộc lực, xâm nhập sâu vào bên trong ñường hô hấp ñến phổi và gây bệnh 1.1.2 Bệnh vi m phổi ở lợn do vi khuẩn P multocida gây ra Vi khuẩn P multocida có... carbohydrat của phân tử LPS 1.2.2 Bệnh vi m phổi - màng phổi ở lợn do vi khuẩn A pleuropneumoniae gây ra Vi khuẩn A pleuropneumoniae là một tác nhân gây bệnh vi m phổi màng phổi ở lợn ðây là một bệnh truyền nhiễm quan trọng ở ñường hô hấp của lợn và xảy ra ở hầu hết các nước có nền công nghiệp chăn nuôi tiên tiến, nhất là với hình thức chăn nuôi lợn tập trung Bệnh ñã gây nhiều thiệt hại cho Trường ðại... hơn, vi m màng phổi tơ huyết trên vùng phổi tổn thương trở nên xơ và có thể dính rất chặt màng phổi vào thành ngực Ở thể mãn tính, bệnh tích quan sát thấy là các ổ áp xe có kích thước khác nhau nằm chủ yếu ở trên thùy hoành và giới hạn với tổ chức xung quanh bởi một vỏ mô liên kết mỏng, một số vùng của màng phổi có thể bị vi m dính vào thành ngực 1.2.2.4 Bệnh lý học Bệnh lý học của bệnh vi m phổi - màng. .. ñịnh mức ñộ nghiêm trọng của bệnh Triệu chứng lâm sàng của bệnh ở thể này giống như vi m màng phổi do A pleuropneumoniae gây ra, nhưng những ñặc ñiểm phân biệt chính là bệnh vi m phổi do P multocida hiếm khi gây ra chết ñột ngột, hơn nữa lợn mắc bệnh vi m phổi do P multocida gây ra có thể tồn tại một thời gian dài - Thể mãn tính: ðây là thể ñặc trưng thường thấy của bệnh, lợn bệnh thỉnh thoảng xuất hiện... vi m phổi do P multocida gây ra cho lợn Hiện nay, ở nước ta ñã có một số loại vacxin vô hoạt dùng cho vi c phòng bệnh vi m phổi do P multocida Tại Vi n Thú y quốc gia, Nguyễn Ngọc Nhiên, Cù Hữu Phú và cs ñã và ñang nghiên cứu thử nghiệm loại vacxin vô hoạt có bổ trợ keo phèn phòng bệnh ñường hô hấp cho lợn do một số loại vi khuẩn ñường hô hấp gây ra trong ñó có vi khuẩn P multocida 1.1.2.6 ðiều trị... aureus, trực khuẩn dạng bạch cầu và Fusobacterium necrophorum ðồng thời, khi chẩn ñoán bệnh vi m phổi – màng phổi do A pleuropneumoniae gây nên cần phải phân biệt với các bệnh khác như vi m phổi ñịa phương do Mycoplasma, hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn (PRRS), bệnh cúm và vi m phổi do Salmonella choleraesuis,… và chẩn ñoán phân biệt với một số vi khuẩn khác trong họ Pasteurellae như P multocida, ... Campuchia, Triều Tiên và Vi t Nam, ở tất cả các ñiều kiện khí hậu và ñiều kiện chăn nuôi Vì vi khuẩn P multocida thường cư trú ở ñường hô hấp trên của lợn ở hầu hết các lứa tuổi, ở cả lợn khỏe mạnh nên rất khó tiêu diệt Vi khuẩn P multocida gây bệnh thường kết hợp với những tác nhân khác như vi khuẩn M hyopneumoniae, A pleuropneumoniae, H parasuis, B bronchiseptica, làm cho quá trình vi m phổi càng nặng... thuốc và thường kết hợp gây bệnh với một số loại vi khuẩn ñường hô hấp khác như Mycoplasma, Actinobacillus, 1.2 Vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae và bệnh do vi khuẩn gây ra ở lợn 1.2.1 Vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae Vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae thuộc họ Pasteurellae, thuộc giống Actinobacillus, trước ñây còn có tên là Haemophilus parahaemolyticus hay H pleuropneumoniae, ñã... không gây hoại tử khác với tổn thương ñặc trưng của vi m phổi - màng phổi Song LPS chắc chắn kết hợp với ñộc tố Apx làm tăng ñộc lực và tăng tính mãnh liệt cho ñộc tố Apx LPS có vai trò quan trọng trong sự bám dính của vi khuẩn lên tế bào biểu mô và lớp màng nhầy khí quản của lợn (Perry và cs, 1990 [47]) Bám dính là hoạt ñộng ban ñầu giúp cho sự xâm nhập của vi khuẩn và có thể là ñặc tính gây bệnh, ... phát hoặc thứ phát gây ra bệnh vi m phổi ở lợn, bệnh có thể gây chết lợn hoặc làm giảm khả năng tăng trọng của lợn do vậy gây thiệt hại rất lớn cho người chăn nuôi Theo Pijoan (1989) [50], vi c nhiễm P multocida ở phổi lợn thường Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………14 thấy ở giai ñoạn cuối của dịch vi m phổi ñịa phương hay hội chứng ho thở truyền nhiễm do