Đang tải... (xem toàn văn)
KHẢO SÁT HIỆU SUẤT THU NHẬN CHẾPHẨM ENZYME PROTEASE TỪCANH TRƯỜNG VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS VỚI CÁC LOẠI TÁC NHÂN TỦA KHÁC NHAU
1. KHẢO SÁT HIỆU SUẤT THU NHẬN CHẾ PHẨM ENZYME PROTEASE TỪ CANH TRƯỜNG VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS VỚI CÁC LOẠI TÁC NHÂN TỦA KHÁC NHAU Bảng 1.1: Lượng chế phẩm enzyme protease thu được và hiệu suất thu nhận với các loại tác nhân tủa khác nhau. Tác nhân tủa enzyme Khối lượng canh trường (g) Khối lượng tủa (g) Khối lượng tủa trung bình (g) Hiệu suất thu nhận (%) 1 2 3 Cồn 50 2,59 2,74 2,68 2,67 5,34 Acetone 50 1,84 1,87 1,83 1,85 3,70 Amoni sulfat 50 1,16 0,96 1,09 1,07 2,14 Nhận xét : Lượng chế phẩm enzyme thu được và hiệu suất thu nhận enzyme cao nhất là trong trường hợp tác nhân tủa là cồn. 2. KHẢO SÁT HOẠT Độ PROTEASE . 2.1 Đường chuẩn Tyrosin : Bảng 2.1: Đường chuẩn Tyrosin . Lượng Tyrosin(µmol) 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 OD (750 nm) 0 0,181 0,355 0,529 0,704 0,878 THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 NỒNG ĐỘ TYROSIN (µmol) MẬT ĐỘ QUANG OD (750 nm) Hình 2.1 : Đường chuẩn Tyrosin. 2.2 Khảo sát hoạt độ protease trong canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis: Cân 20 g canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis, tiến hành như mục II.3.1, phần dịch thu được 200 ml, pha lỗng 2 lần, đem 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo phương pháp Anson cải tiến như mục II.3.2 Bảng 2.2: Hoạt độ protease của canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis. Lần OD M OD ĐC ∆OD = OD M - OD ĐC µmol Tyrosin Hoạt độ (UI/g CT) Hoạt độ trungbình (UI/g CT) 1 0,998 0,915 0,083 0,091 1,46 1,63 2 1,012 0,915 0,097 0,107 1,71 3 1,013 0,915 0,098 0,108 1,73 Nhận xét : Hoạt độ protease của canh trường vi khuẩn là 1,63 UI/g CT (giá trị trung bình) . THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 2.3 Khảo sát hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng cồn 96 0 : Cân 1g chế phẩm enzym protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha lỗng 2 lần, lấy 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo phương pháp Anson cải tiến như mục II.3.2 Bảng 2.3: Hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng cồn 96 0 . Lần OD M OD ĐC ∆OD = OD M - OD ĐC µmol Tyrosin Hoạt độ (UI/g CPE) Hoạt độ trung bình (UI/g CPE) 1 0,425 0,300 0,125 0,139 22,24 22,61 2 0,427 0,310 0,117 0,130 20,80 3 0,429 0,290 0,139 0,155 24,80 Nhận xét : Hoạt độ của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng cồn 96 0 là 22,61 UI/g CPE (giá trị trung bình) . 2.4 Khảo sát hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng aceton : Cân 1g chế phẩm enzym protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha lỗng 2 lần, lấy 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo phương pháp Anson cải tiến như mục II.3.2 Bảng 2.4: Hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng acetone. Lần OD M OD ĐC ∆OD = OD M - OD ĐC µmol Tyrosin Hoạt độ (UI/g CPE) Hoạt độ trung bình (UI/g CPE) 1 0,493 0,410 0,083 0,091 14,56 14,29 2 0,492 0,402 0,090 0,099 15,84 THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 3 0,495 0,424 0,071 0,078 12,48 Nhận xét : Hoạt độ của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng aceton là 14,29 UI/g CPE (giá trị trung bình) . 2.5 Khảo sát hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng amoni sulfat: Cân 1g chế phẩm enzym protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha lỗng 2 lần, lấy 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo phương pháp Anson cải tiến như mục II.3.2 Bảng 2.5: Hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng Amoni sulfat. Lần OD M OD ĐC ∆OD = OD M - OD ĐC µmol Tyrosin Hoạt độ (UI/g CPE) Hoạt độ trung bình (UI/g CPE) 1 0,517 0,458 0,059 0,064 10,24 6,93 2 0,489 0,462 0,027 0,027 4,32 3 0,524 0,487 0,037 0,039 6,24 Nhận xét : Hoạt độ của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng muối amoni sulfat là 6,93 UI/g CPE (giá trị trung bình) . 2.6 Sự so sánh hoạt độ các CPE protease tủa bởi các tác nhân khác nhau: Bảng 2.6: So sánh hoạt độ của các CPE protease với tác nhân tủa khác nhau. Tác nhân tủa Hoạt độ (UI/g CPE) Hoạt độ trung bình (UI/g CPE) Cồn 96 0 22,24 22,61 20,80 24,80 THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Acetone 14,56 14,29 15,84 12,48 Amoni sulfat 10,24 6,93 4,32 6,24 Nhận xét : Trong các loại chế phẩm protease, chế phẩm có hoạt độ cao nhất là chế phẩm enzyme được tủa bằng cồn (22,61 UI/g CPE). 3. KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG PROTEIN THEO PHƯƠNG PHÁP LOWRY . 3.1 Đường chuẩn Albumin : Bảng 3.1: Đường chuẩn Albumin Nồng độ protein (µg/ml) 0 50 100 150 200 250 OD (750 nm) 0 0,208 0,404 0,598 0,795 0,988 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 0 50 100 150 200 250 300 NỒNG ĐỘ ALBUMIN (µg/ml) MẬT ĐỘ QUANG OD (750 nm) Hình 3.1: Đường chuẩn Albumin THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 3.2 Khảo sát hàm lượng protein trong canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis : Cân 20 g canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis, tiến hành như mục II.3.1, phần dịch thu được 200 ml, pha lỗng 50 lần, đem1ml tiến hành thí nghiệm theo phương pháp Lowry như mục II.3.3 Bảng 3.2: Hàm lượng protein của canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis : Lần OD M OD ĐC ∆OD = OD M - OD ĐC Nồng độ protein tương ứng (µg/ml) Hàm lượng protein (mg/g CT) Hàm lượng protein trung bình (mg/g CT) 1 0,774 0,035 0,739 187,872 93,94 94,92 2 0,783 0,035 0,748 190,179 95,09 3 0,788 0,035 0,753 191,462 95,73 Nhận xét : Hàm lượng protein của canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis là 94,92 mg/g CT (giá trị trung bình) . 3.3 Khảo sát hàm lượng protein của CPE protease được tủa bằng cồn 96 0 : Cân 1g chế phẩm enzyme protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha lỗng 20 lần, lấy 1ml xác định hàm lượng protein theo phương pháp Lowry như mục II.3.3 Bảng 3.3: Hàm lượng protein của chế phẩm enzyme được tủa bằng cồn 96 0 . Lần OD M OD ĐC ∆OD =OD M - OD ĐC Nồng độ protein tương ứng (µg/ml) Hàm lượng protein (mg/g CPE) Hàm lượng protein trung bình (mg/g THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN CPE) 1 0,631 0,035 0,666 169,154 338,31 318,60 2 0,639 0,035 0,604 153,256 306,51 3 0,645 0,035 0,610 155,487 310,97 Nhận xét : Hàm lượng protein của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng cồn 96 0 là 318,60 mg/g CPE (giá trị trung bình) . 3.4 Khảo sát hàm lượng protein của CPE protease được tủa bằng aceton: Cân 1g chế phẩm enzyme protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha lỗng 20 lần, lấy 1ml xác định hàm lượng protein theo phương pháp Lowry như mục II.3.3 Bảng 3.4: Hàm lượng protein của chế phẩm enzyme được tủa bằng cồn Acetone. Lần OD M OD ĐC ∆OD = OD M - OD ĐC Nồng độ protein tương ứng (µg/ml) Hàm lượng protein (mg/g CPE) Hàm lượng protein trung bình (mg/g CPE) 1 0,598 0,035 0,563 142,744 285,49 284,63 2 0,594 0,035 0,559 141,718 283,44 3 0,597 0,035 0,562 142,478 284,97 Nhận xét : Hàm lượng protein của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng aceton là 284,63 mg/g CPE (giá trị trung bình) . 3.5 Khảo sát hàm lượng protein của CPE protease được tủa bằng muối amoni sulfat : THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Cân 1g chế phẩm enzyme protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha lỗng 20 lần, lấy 1ml xác định hàm lượng protein theo phương pháp Lowry như mục II.3.3 Bảng 3.5: Hàm lượng protein của chế phẩm enzyme được tủa bằng amoni sulfat. Lần OD M OD ĐC ∆OD = OD M - OD ĐC Nồng độ protein tương ứng (µg/ml) Hàm lượng protein (mg/g CPE) Hàm lượng protein trung bình (mg/g CPE) 1 0,456 0,035 0,421 106,333 212,67 203,44 2 0,414 0,035 0,379 95,564 191,13 3 0,444 0,035 0,409 103,256 206,51 Nhận xét : Hàm lượng protein của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng aceton là 203,44 mg/g CPE (giá trị trung bình) . 3.6 Sự so sánh hàm lượng protein của chế phẩm protease tủa bởi các tác nhân khác nhau : Bảng 3.6: So sánh hàm lượng protein của các loại chế phẩm enzyme protease với tác nhân tủa khác nhau. Tác nhân tủa Hàm lượng protein (mg/g CPE) Hàm lượng protein trung bình (mg/g CPE) Cồn 96 0 338,31 318,60 306,51 310,97 Aceton 285,49 284,63 283,44 284,97 THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Amoni sulfat 212,67 203,44 191,13 206,51 Nhận xét : Hàm lượng protein cao nhất ở chế phẩm enzyme protease được tủa bằng cồn 96 0 là 307,85 mg/g CPE (giá trị trung bình ) 4. HOẠT ĐỘ RIÊNG CỦA PROTEASE . Bảng 4.1: Hoạt độ riêng của canh trường vi khuẩn. Hoạt độ protease (UI/g CT) Hàm lượng protein (mg protein/g CT) Hoạt độ riêng (UI/mg Pr) 1,63 94,92 0,017 Bảng 4.2: So sánh hoạt độ riêng của từng loại chế phẩm enzyme protease với tác nhân tủa khác nhau. Tác nhân tủa Hoạt độ protease (UI/g CPE) Hàm lượng protein (mg Pr/g CPE) Hoạt độ riêng (UI/mg Pr) Cồn 96 0 22,61 318,60 0,072 Acetone 14,29 284,63 0,050 Amoni sulfat 6,93 203,44 0,034 Nhận xét : Hoạt độ riêng của chế phẩm enzyme protease được tủa bằng cồn là cao nhất 0,072 UI/mg CPE (giá trị trung bình) 5. KHẢO SÁT SỰ PHỤ THUỘC HOẠT ĐỘ CỦA CÁC CHẾ PHẨM ENZYME PROTEASE VÀO NHIỆT ĐỘ. 5.1 Khảo sát sự phụ thuộc hoạt độ của CPE protease (tủa bằng cồn) theo nhiệt độ: THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Cân 1g chế phẩm enzym hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha lỗng 2 lần, ở mỗi nhiệt độ khảo sát từ 30 0 C đến 80 0 C, lấy 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo Anson cải tiến như mục II.3.2 Bảng 5.1: Khảo sát sự phụ thuộc hoạt độ protease của CPE (tủa bằng cồn) theo nhiệt độ. Nhiệt độ ( o C) Lần OD M OD ĐC ∆OD = OD M - OD ĐC µmol Tyrosin Hoạt độ (UI/g CPE) Hoạt độ trung bình (UI/g CPE) 30 1 0,425 0,300 0,125 0,139 22,24 22,61 2 0,427 0,310 0,117 0,130 20,80 3 0,429 0,290 0,139 0,155 24,80 40 1 0,484 0,320 0,164 0,184 29,44 28,59 2 0,487 0.324 0,163 0,183 29,28 3 0,480 0.329 0,151 0,169 27,04 50 1 0,563 0,332 0,231 0,260 41,60 41,71 2 0,565 0,329 0,236 0,266 42,56 3 0,564 0,337 0,227 0,256 40,96 55 1 0,707 0,365 0,342 0,387 61,92 63,40 2 0,730 0,359 0,371 0,420 67,20 3 0,705 0,367 0,338 0,382 61,12 60 1 0,705 0,367 0,338 0,382 61,12 61,55 2 0,698 0,365 0,333 0,377 60,32 3 0,708 0,359 0,349 0,395 63,20 70 1 0,532 0,441 0,091 0,100 16,00 13,55 2 0,526 0,445 0,081 0,089 14,24 3 0,498 0,438 0,060 0,065 10,40 1 0,480 0,463 0,017 0,016 2,56 THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN [...]... m protease THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN M CL C 1 KH O SÁT HI U SU T THU NH N CH PH M ENZYME PROTEASE T CANH TRƯ NG VI KHU N BACILLUS SUBTILIS V I CÁC LO I TÁC NHÂN T A KHÁC NHAU 1 2 KH O SÁT HO T PROTEASE 1 2.1 ư ng chu n Tyrosin : 1 2.2 Kh o sát ho t protease trong canh trư ng vi khu n Bacillus subtilis: 2 2.3 Kh o sát ho t protease c a ch ph m enzyme ư c t a... protein c a CPE protease ư c t a b ng aceton: 7 3.5 Kh o sát hàm lư ng protein c a CPE protease ư c t a b ng mu i amoni sulfat : 7 3.6 S so sánh hàm lư ng protein c a ch ph m protease t a b i các tác nhân khác nhau : 8 4 HO T RIÊNG C A PROTEASE 9 5 KH O SÁT S PH THU C HO T ENZYME PROTEASE VÀO NHI T 5.1 Kh o sát s ph thu c ho t nhi t C A CÁC CH PH M 9 c a CPE protease (t... o sát ho t protease c a ch ph m enzyme ư c t a b ng aceton : 3 2.5 Kh o sát ho t protease c a ch ph m enzyme ư c t a b ng 4 2.6 S so sánh ho t các CPE protease t a b i các tác nhân khác nhau: 4 3 KH O SÁT HÀM LƯ NG PROTEIN THEO PHƯƠNG PHÁP LOWRY 5 3.1 ư ng chu n Albumin : 5 3.3 Kh o sát hàm lư ng protein c a CPE protease ư c t a b ng c n 960 : 6 3.4 Kh o sát. .. 9 THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 5.2 Kh o sát s ph thu c ho t enzyme vào nhi t i v i CPE (t a b ng aceton) : 11 5.3 Kh o sát s ph thu c ho t enzyme vào nhi t i v i CPE (t a b ng amoni sulfat) : 13 6 KH O SÁT S T BI N I HO T C A CH PH M PROTEASE BACILLUS SUBTILIS THEO pH 15 7 KH O SÁT Q TRÌNH TH Y PHÂN PROTID C A CH PH M PROTEASE 17 7.1 Kh o sát q trình th... THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 550C, ch ph m enzyme protease ư c t a b ng aceton có Nh n xét : ho t cao nh t là 42,88 UI/g CPE (giá tr trung bình) 50 40 30 HOẠT ĐỘ 20 (UI/g CPE) 10 0 -10 0 20 40 60 80 100 NHIỆT ĐỘ (ĐỘ C) Hình 5.2: S ph thu c c a ho t theo nhi t ch ph m protease (t a b ng aceton) 5.3 Kh o sát s ph thu c ho t enzyme vào nhi t i v i CPE (t a b ng amoni sulfat) : Cân 1g ch ph m enzym protease. .. 31,57 9,71 0,96 THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 550C, ch ph m enzyme protease ư c t a b ng mu i Nh n xét : amoni sulfat có ho t cao nh t là 37,33 UI/g CPE (giá tr trung bình) 40 35 30 25 HOẠT ĐỘ 20 (UI/g CPE) 15 10 5 0 0 20 40 60 80 100 NHIỆT ĐỘ (ĐỘ C) Hình 5.3: S ph thu c c a ho t sulfat) theo nhi t 6 KH O SÁT S PROTEASE T ch ph m protease (t a b ng amoni BI N I HO T C A CH PH M BACILLUS SUBTILIS THEO pH...THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 80 2 0,482 0,460 0,022 0,022 3,52 3 0,484 0,465 0,019 0,018 2,88 Nh n xét : có ho t 2,99 550C, ch ph m enzyme protease ư c t a b ng c n 960 cao nh t là 63,40 UI/g CPE (giá tr trung bình) 70 60 50 HOẠT ĐỘ 40 (UI/g CPE) 30 20 10 0 0 20 40 60 NHIỆT ĐỘ (ĐỘ C) Hình 5.1: S ph thu c c a ho t nhi t 80 100 ch ph m protease (t a b ng c n) theo 5.2 Kh o sát s ph thu c ho t enzyme. .. sát s ph thu c ho t enzyme vào nhi t i v i CPE (t a b ng aceton) : Cân 1g ch ph m enzym protease hòa tan trong 100ml nư c c t, sau ó pha lỗng 2 l n, hành xác nh ho t m i nhi t kh o sát t 300 C n 800 C, l y 0,5ml ti n theo Anson c i ti n như m c II.3.2 THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN B ng 5.2: Kh o sát s ph thu c ho t enzyme vào nhi t iv i CPE (t a b ng aceton) : Nhi t L n ODM OD C ∆OD = OD (oC) ODM µmol... 40 30 20 10 0 0 2 4 6 8 10 12 pH Hình 6.1: S ph thu c ho t c a ch ph m protease (t a b ng c n) theo pH 7 KH O SÁT Q TRÌNH TH Y PHÂN PROTID C A CH PH M PROTEASE 7.1 Kh o sát q trình th y phân albumin : V i i u ki n nhi t 550C ; pH = 6,0 THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN B ng 7.1: S bi n i lư ng NF theo th i gian th y phân albumin b i CPE protease Cơ ch t Th i V NaOH 0,1N (ml) Lư ng N-formol tương Trung gian... 1g ch ph m enzym protease hòa tan trong 100ml nư c c t, sau ó pha lỗng 2 l n, hành xác nh ho t m i nhi t kh o sát t 300 C n 800 C, l y 0,5ml ti n theo Anson c i ti n như m c II.3.2 THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN B ng 5.3: Kh o sát s ph thu c ho t amoni sulfat) theo nhi t Nhi t L n C c a CPE protease (t a b ng ODM OD ∆OD = OD (oC) ODM µmol Ho t - Tyrosin (UI/g CPE) trung bình C (UI/g CPE) 1 0,027 0,027 . 1. KHẢO SÁT HIỆU SUẤT THU NHẬN CHẾ PHẨM ENZYME PROTEASE TỪ CANH TRƯỜNG VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS VỚI CÁC LOẠI TÁC NHÂN TỦA KHÁC NHAU . Lượng chế phẩm enzyme protease thu được và hiệu suất thu nhận với các loại tác nhân tủa khác nhau. Tác nhân tủa enzyme Khối lượng canh trường (g)
