Đang tải... (xem toàn văn)
Các phương pháp phân tích sắc kí
CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ MỞ ĐẦU Sắc kí điện di mao quản hiệu cao (HPCEC) kết hợp điện di cổ điển với tính chất cột sắc kí khí mao quản detector có độ nhạy cao kĩ thuật HPLC Dựa sở tính chất điện di phần tử chất tan (các ion chất tan, chất phân tích) ống mao quản (đường kính 25 - 100 μm) dung dịch chất điện giải chất đệm pH thích hợp, tác dụng điện trường E định cung cấp nguồn cao chiều (10 - 40 kV) đặt vào hai đầu ống mao quản Với lượng mẫu nạp vào cột tách nhỏ (khoảng - 20nL), thời gian phân tích ngắn (khoảng – 20 phút) nên kĩ thuật HPCEC có bước phát triển nhảy vọt Nó phát triển mức độ cao ứng dụng hiệu nhiều lĩnh vực khác khoa học công nghệ, y dược sinh học Trang CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ Trang GVHD: NGÔ VĂN TỨ CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ PHẦN I: NỘI DUNG I.1 Lớp điện kép thành mao quản Trong trình điện di, lớp điện kép Zêta sát thành mao quản xuất hiện, phụ thuộc vào lực ion dung dịch pha động điện di Yếu tố bề mặt mao quản, thành phần pH pha động có liên quan đến hình thành, độ lớn tồn lớp điện kép bề mặt mao quản Zêta Khi lực ion dung dịch điện di tăng lớp điện kép bị nén lại làm Zêta giảm ảnh hưởng đến dòng điện di thẩm thấu Hình Lớp điện kép thành mao quản (thành mao quản tích điện âm nhóm SiO-) Trang CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Độ lớn Zêta (Vzet) tính gần theo công thức: VZet = 4π RD q ε (1.1) Trong đó: ε số điện môi dung dịch pha động; q tổng điện tích dung dịch theo đơn vị thể tích; RD bán kính hydrat ion (bán kính Debye) xác định theo biểu thức: RD = ε kT 8π e I (1.2) Trong đó: e điện tích electron; k số Bolzoman; T nhiệt độ tuyệt đối; I lực ion dung dịch đệm điện di Công thức (1.2) cho thấy: nồng độ chất đệm điện li lớn, giá trị lực ion I lớn RD giảm dẫn đến Zeta giảm theo (1.1) Bên cạnh việc ảnh hưởng đến lớp điện kép bề mặt mao quản, nồng độ chất đệm, loại chất điện giải ảnh hưởng đến điện di chất tan Tác động thể qua ổn định trì dòng điện i dòng điện di thẩm thấu EOF mao quản Từ ảnh hưởng đến độ điện di hiệu lực μef chất phân tích Trang CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ I.2 Dòng điện di thẩm thấu (EOF) Trang GVHD: NGÔ VĂN TỨ CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ I 2.1 GVHD: NGÔ VĂN TỨ Khái niệm dòng điện di thẩm thấu Bản chất hoạt động ống mao quản HPCEC dòng chảy điện di thẩm thấu EOF, gọi tắt dòng điện di thẩm thấu Dòng EOF dòng chảy khối chất lỏng ống mao quản, quan hệ mật thiết với lớp điện tích thành mao quản Dòng EOF xác định thời gian tồn chất tan mao quản Nó bao trùm lên dòng di chuyển chất tan, nghĩa chất tan di chuyển dòng EOF I.2.2 Nguồn gốc dòng điện di thẩm thấu Khi điện di với mao quản silica, nhóm silanol (Si-OH) thành mao quản giải phóng ion H + bề mặt mao quản mang điện tích âm Do bề mặt mang điện tích âm nên cation lực hút tĩnh điện tạo thành lớp điện kép để cân điện tích tạo nên hiệu sát thành mao quản (thế Zeta) Hình Dòng điện di thẩm thấu EOF Trang CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Khi áp V vào đầu mao quản, cation lớp điện kép catot Nhưng cation bị sonvat hóa nên kéo khối dung dịch mao quản catot Sự di chuyển khối dung dịch mao quản silica tác dụng điện trường tạo nên dòng điện thẩm thấu EOF Tốc độ v dòng EOF tỉ lệ thuận điện trường E, với zeta V Zet tỉ lệ nghịch với độ nhớt η dung dịch đệm điện li theo công thức: vEOF = ε EVZet η (1.3) Tốc độ tuyến tính u uEOF = ε EVZet 4πη (1.4) Độ điện di dòng EOF: µEOF = εVZet η (1.5) Dòng EOF định V đặt vào đầu mao quản, pH dung dịch đệm điện li, chất điện giải, lớp điện kép, độ nhớt dung dịch pha động, số điện môi, độ xốp, cỡ hạt Nhờ đặc tính người ta chọn điều kiện tối ưu để có tốc độ dòng EOF phù hợp cho trình tách sắc kí Trang CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Hình Ảnh hưởng pH lên dòng EOF I.2.3 Đặc điểm dòng điện di thẩm thấu Dòng EOF có đặc điểm chính: Thứ nhất, dòng EOF dòng chuyển khối phẳng mao quản Có đặc điểm lực tạo di chuyển dòng EOF phân bố đồng dọc theo mao quản nên sụt áp mao quản Trong HPLC dòng chảy có dạng parabol hiệu ứng thành: phần tử dòng di chuyển nhanh, phần tử gần thành di chuyển chậm) Vì pic sắc kí HPCEC gọn sắc nét HPLC Trang CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Thứ hai, dòng EOF đưa tất tiểu phân có mặt dung dịch điện di, có mang điện hay không di chuyển theo hướng định từ anot (cực +) catot (cực -) (nếu pH ≥ 4): Các cation di chuyển nhanh catot với tốc độ khác tùy điện tích kích thước nó; Các phân tử trung hòa dòng EOF mang theo với tốc độ dòng EOF (nhưng chúng không tách CEC); Các anion di chuyển anot tốc độ lớn tốc độ dòng EOF Ngược lại chúng bị dòng EOF mang theo catot Trang CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Hình So sánh dòng chảy HPLC CEC Trang 10 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Hình Sự chuyển phần tử CEC Theo thứ tự rửa giải theo thời gian là: cation điện tích lớn, kích thước nhỏ → phân tử trung hòa → anion có điện tích lớn kích thước nhỏ sau (Hình 6) Hình Thứ tự rửa giải điện di đồ Trang 11 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ I.2.4 GVHD: NGÔ VĂN TỨ Các yếu tố ảnh hưởng đến dòng điện di thẩm thấu pH đệm: Ở pH cao nhóm silanol proton H+ nhiều nên trị số dòng EOF lớn Phụ thuộc vào điều kiện điện di cụ thể, khoảng pH - 12 dòng EOF thay đổi 10 lần Lực ion dung dịch: Lực ion dung dịch tăng lên, làm giảm Zeta nên dòng EOF giảm Trong số trường hợp dung dịch đệm nước có thêm số dung môi hữu methanol, acetonitril (để dễ hũa tan chất phân tích), số điện môi dung dịch diện di giảm xuống kéo theo giảm dòng EOF I.2.5 Kiểm tra khống chế dòng điện di thẩm thấu Theo ta thấy dòng EOF yếu tố thuận lợi có vai trò quan trọng kĩ thuật CEC nên cần kiểm tra khống chế mức độ phù hợp cho mục đích phân tích Các cách kiểm tra, khống chế dòng EOF tổng kết bảng Bảng Các cách kiểm tra, khống chế EOF Cách thức thay đổi Kết Nhận xét chung Điện trường E (tức Sự thay đổi tỉ lệ với + Độ phân giải số đĩa điện V) EOF lý thuyết hiệu lực giảm + Làm nóng mao quản Giá trị pH EOF giảm pH thấp + Cách tiện lợi để thay dung dịch đệm tăng pH cao đổi EOF điện di + Thay đổi điện tích, cấu trúc chất tan Lực ion, nồng độ Làm giảm zeta + Lực ion lớn, tạo dòng dung dịch đệm EOF tăng lực ion, điện lớn hiệu ứng Jun nồng độ dung dịch lớn Trang 12 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ đệm GVHD: NGÔ VĂN TỨ + Độ nét pic sắc kí bị ảnh hưởng độ dẫn khác độ dẫn mẫu + Hạn chế nạp mẫu Nhiệt độ Thay đổi độ nhớt – Dùng kiểm tra 3%/0C khống chế nhiệt độ tự động Dùng chất phụ Thay đổi zeta, độ + Thay đổi phức, xác gia, dung môi hữu nhớt, EOF bị giảm định dễ dàng thực nghiệm + Có thể thay đổi độ chọn lọc hệ pha Các chất hoạt động Hấp phụ lên thành + Chất hoạt động bề mặt mao quản qua tương ation làm tăng EOF, bề mặt tác ionic hay cation làm giảm EOF, có hydrophopic thể đổi chiều EOF Dùng polymer hydrophilic trung tính + Thay đổi độ chọn lọc Hấp phụ lên thành + Làm giảm EOF qua mao quản qua tương thay đổi điện tích bề mặt tác hydrophopic + Làm tăng độ nhớt Hoạt hóa bề mặt Tạo liên kết hóa học + Có nhiều cách thay cách cộng lên thành mao đổi: hydrophylicity, thay hợp quản đổi điện tích + Làm bền bề mặt mao quản PHẦN II: BÀI TẬP Trang 13 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Bài 1: Trong ống mao quản có chiều dài hiệu lực 50 cm, độ dài tổng cộng 58,5 cm đặt hiệu 25000 V Sau trình chạy sắc kí, sắc đồ người ta thu pic với thời gian lưu 38,4s, 50,7s, 93,1s ứng với chất X, Y, Z Tính độ điện di toàn phần, độ điện di hiệu lực X, Y, Z Biết Y chất trung tính, từ có nhận xét giá trị độ điện di hiệu lực μef ? Giải Ta có công thức µtot = µi + µEOF = → µtot ( X ) = µtot ( Z ) = tính độ điện di toàn phần: L.l V ti 58, 5.50 = 3,05.10-3 (cm2.V-1.s-1) 38, 4.25000 58, 5.50 -3 -1 -1 = 1,26.10 (cm V s ) 93,1.25000 Chất Y trung tính nên μi = 0, đó: µtot (Y ) = µEOF = 58, 5.50 = 2,31.10-3 (cm2.V-1.s-1) 50, 7.25000 Độ điện di hiệu lực: µef = µtot − µEOF → μef (X) = 3,05.10-3 - 2,31.10-3 = 7,40.10-3 (cm2.V-1.s-1) μef (Z) = 1,26.10-3 - 2,31.10-3 = -1,05.10-3 (cm2.V-1.s-1) μef (Y) = 2,31.10-3 (cm2.V-1.s-1) Nhận xét: μef (Z) < → Z anion; μef (X) > → X cation Bài 2: Tách protein HPCEC Mao quản dài 84 cm, điện di 25000 V Một phân tử trung hòa dòng EOF mang theo phải hết 308s để di chuyển đoạn 64 cm từ chỗ nạp mẫu đến Trang 14 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ detector Chất A có thời gian lưu 343s Tính độ điện di tổng cộng độ điện di hiệu lực chất A GIẢI Độ điện di tổng cộng chất A: Cường độ điện trường E: E = V/L = 25000/84 = 298 V/cm μtot = uA 64 / 343 = E 298 = 6,26.10-4 (cm2.V-1.s-1) Tốc độ tuyến tính dòng EOF: uEOF = 64 308 = 0,208 ( cm/s) Độ điện di dòng EOF: Từ uEOF = μEOF.E → μEOF = uEOF /E = 0,208 /298 = 6,98.104 (cm2.V-1.s-1) Độ điện di hiệu lực: µ ef = µ tot − µ EOF = 6,26.10-4 - 6,98.10-4 = -0,72.10-4 (cm2.V-1.s-1) Vì μef < nên suy A anion Bài Trong phép tách HPCEC, mao quản có chiều dài tổng 1m, chiều dài hiệu lực 90cm Thế áp đặt vào hai đầu ống mao quản 20 kV Detector đặt phía trước catot với chất đệm có pH = Trong dung dịch tiêu chuẩn, chất tan có thời gian lưu tm = 10 phút a) Tính độ điện di tổng cộng chất Trang 15 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ b) Nếu phân tử nhỏ không mang điện có thời gian lưu phút, xác định độ điện di dòng EOF c) Tính độ điện di hiệu lực chất d) Tính số đĩa lý thuyết N chất có hệ số khuếch tan D = 2.10 -5 cm2/s GIẢI: Tóm tắt: L = 1m = 100cm l= 90cm V= 20kV= 20000V tm = 10 phút a Độ điện di tổng cộng μtot : μtot = L.l 100.90 = = 7,5.10 −4 (cm V −1.s −1 ) V ti 20000.10.60 b Độ điện di dòng EOF có ti = phút: µ EOF = µtot (vì phân tử không mang điện) = L.l 100.90 = = 1,5.10−3 (cm V −1.s −1 ) V ti 20000.5.60 c Độ điện di hiệu lực: µ ef = µ tot − µ EOF = 7,5.10− − 1,5.10− = − 7,5.10− (cm2 V − 1.s − ) Vì μef < nên suy chất anion d Số đĩa lý thuyết N chất có hệ số khuếch tan D = 2.10 -5 cm2/s µtot V l 5.10−4.20000.90 N= = = 337500 −5 2.D.L 2.2.10 100 Trang 16 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Bài Phân tích sắc kí điện di mao quản với kỹ thuật CZE Mao quản có chiều dài tổng 32cm, chiều dài hiệu lực 24,5cm điện di 30 kV Dưới điều kiện thí nghiệm ghi môi trường trung tính xuất chất có thời gian lưu phút a) Tính độ điện di hiệu lực chất có thời gian lưu 2,5 phút b) Tính hệ số khuyếch tán điều kiện cho chất đó, biết số đĩa lý thuyết N = 80 000 GIẢI: a.Độ điện di hiệu lưc: μtot = L.l 32.24,5 = = 1, 742.10−4 (cm V −1.s −1 ) V ti 30000.2,5.60 chất môi trường trung tính nên µ ef = µ EOF ⇒ µ EOF = µi = 32.24,5 = 1, 452.10− (cm2 V − 1.s − ) 30000.3.60 Độ điện di hiệu lực chất có thời gian lưu 2,5 phút µ ef = µ tot − µ EOF = 1,742.10− − 1,452.10− = 2,88.10− (cm2 V − 1.s − ) b Hệ số khuyếch tán số đĩa lý thuyết N = 80 000: µ tot V l N= 2.D.L µ tot V l 1,742.10− 4.30000.24,5 ⇒ D= = = 2,5.10− (cm2 s − ) 2.L.N 2.32.80000 Trang 17 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Bài Cho cột mao quản dài 50cm áp đặt 30 000V, độ điện di tính với thời gian 10 phút 2.10 -8 m2s-1V-1 Tính số đĩa lý thuyết cho ion Li+ (D = 1,0.10-9 m2s-1) cho protein có phân tử khối 105 (D = 3.10-11m2s-1) Tóm tắt: L= 50cm V=30000V t = 10 phút DLi + = 10−9 m s −1 D proton = 3.10−11 m s −1 GIẢI: - Số đĩa lý thuyết cho ion Li+ N Li+ µ i V 2.10− 8.30000 đĩa = = = 3.10 −9 2.D 2.10 - Số đĩa lí thuyết cho proton: 2.10− 8.30000 đĩa N proton = = 10 − 11 2.3.10 Bài Định lượng vitamin B1 kĩ thuật CZE MEKC sử dụng chất nội chuẩn o-ethoxybenzamide Khi phân tích dung dịch chứa 100,0 ppm B1 100,0 ppm o- ethoxybenzamide diện tích pic B1 71% diện tích pic chất nội chuẩn Phân tích 0,125g thuốc viên vitamin B cho diện tích pic B 1,82 lần so với chất nội chuẩn Tính số mg vitamin B1 có thuốc này, biết thể tích dung dịch ban đầu 20 mL Trang 18 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ GIẢI: Áp dụng công thức phương pháp nội chuẩn: SA S IS = k CA CIS Trong đó: SA, SIS diện tích pic chất chuẩn chất nội chuẩn (o-ethoxybenzamide); CA, CIS nồng độ chất chuẩn chất nội chuẩn Theo đề ta có: SA = 0,71.SIS ; CA =100ppm; CIS =100ppm 0, 71.S IS 100 = k S IS 100 → k = 0,71 Đối với mẫu thuốc viên vitamin B ta có: SA = 1,81.SIS ; CA = ? ppm; CIS =100ppm 1,81.S IS C = 0, 71 A S IS 100 → CA = 256,338 ppm số mg vitamin B1 có thuốc là: 256,338 20 = 5,126( mg ) 1000 Bài Một cation vô có độ điện di 4,31.10 -4 cm2.V-1.s-1 hệ số khuếch tán 9,8.10-6 cm2.s-1 phân tích kĩ thuật CZE với mao quản dài 50 cm điện di 10 kV Trong điều kiện này, dòng điện di thẩm thấu có tốc đô 0,85 mm/s phía catot Nếu detector đặt cách điểm nạp mẫu 40 cm cation để đến detector ? Trang 19 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Tóm tắt: µtot = 4,31.10−4 cm V −1.s −1 D = 9,8.10-6 cm2.s-1 L = 50 cm , l =40cm V = 10000 V ν = 0,85 mm/s GIẢI: Ta có: l ti = V V =VEOF +Vi mà Vi = µi * Tính µi : µ tot = µ EOF + µ i Trang 20 V L CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Mà V ⇒ VEOF = µ EOF L L 0,85.500 ⇒ µ EOF = VEOF = = 0, 0425(mm / V s) V 10000 ε Vzet η ε V V VEOF = zet η L µ EOF = ⇒ µi = 4,31.10 −2 − 0, 0425 = 0, 0431( mm / V s) V = 0,862( mm / s ) L ⇒ V = Vi + VEOF = 0,862 + 0,85 = 1, 712( mm / s ) ⇒ Vi = µi ⇒t = Trang 21 l 400 = = 233, 64( s) = 3,9 phút V 0, 712 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ TÀI LIỆU THAM KHẢO Ngô Văn Tứ, Bài giảng sắc ký Phạm Luận (2002), Cơ sở lý thuyết Sắc kí điện di mao quản hiệu cao (HPCEC), ĐH KHTN – ĐHQG Hà Nội Robetr Weinberger Electrophoresis, AP (1999), Practical Capillary Ruth Freitag (2002), Modern Advances in Chromatography, University of California, USA Trang 22 [...]...CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Hình 5 Sự chuyển của các phần tử trong CEC Theo đó thứ tự rửa giải theo thời gian sẽ là: cation điện tích lớn, kích thước nhỏ ra đầu tiên → các phân tử trung hòa → anion có điện tích lớn và kích thước nhỏ ra sau cùng (Hình 6) Hình 6 Thứ tự rửa giải trên điện di đồ Trang 11 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ I.2.4 GVHD: NGÔ VĂN TỨ Các yếu tố... là o-ethoxybenzamide Khi phân tích dung dịch chứa 100,0 ppm B1 và 100,0 ppm o- ethoxybenzamide thì diện tích pic của B1 bằng 71% diện tích pic chất nội chuẩn Phân tích 0,125g thuốc viên vitamin B cho diện tích pic của B 1 bằng 1,82 lần so với chất nội chuẩn Tính số mg vitamin B1 có trong thuốc này, biết thể tích dung dịch ban đầu là 20 mL Trang 18 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ GIẢI:... L CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Mà V ⇒ VEOF = µ EOF L L 0,85.500 ⇒ µ EOF = VEOF = = 0, 0425(mm 2 / V s) V 10000 ε Vzet η ε V V VEOF = zet η L µ EOF = ⇒ µi = 4,31.10 −2 − 0, 0425 = 0, 0431( mm 2 / V s) V = 0,862( mm / s ) L ⇒ V = Vi + VEOF = 0,862 + 0,85 = 1, 712( mm / s ) ⇒ Vi = µi ⇒t = Trang 21 l 400 = = 233, 64( s) = 3,9 phút V 0, 712 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ... phụ lên thành + Làm giảm EOF qua mao quản qua tương thay đổi điện tích bề mặt tác hydrophopic + Làm tăng độ nhớt Hoạt hóa bề mặt Tạo liên kết hóa học + Có nhiều cách thay bằng cách cộng mới lên thành mao đổi: hydrophylicity, thay hợp quản đổi điện tích + Làm bền bề mặt mao quản PHẦN II: BÀI TẬP Trang 13 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Bài 1: Trong ống mao quản có chiều dài hiệu lực... 4,31.10 -4 cm2.V-1.s-1 và hệ số khuếch tán 9,8.10-6 cm2.s-1 được phân tích bằng kĩ thuật CZE với mao quản dài 50 cm và thế điện di 10 kV Trong điều kiện này, dòng điện di thẩm thấu có tốc đô 0,85 mm/s đi về phía catot Nếu detector được đặt cách điểm nạp mẫu 40 cm thì cation mất bao lâu để đến được detector ? Trang 19 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Tóm tắt: µtot = 4,31.10−4 cm 2 V −1.s −1... để thay dung dịch đệm và tăng ở pH cao đổi EOF điện di + Thay đổi được điện tích, cấu trúc chất tan Lực ion, nồng độ Làm giảm thế zeta và + Lực ion lớn, tạo dòng dung dịch đệm EOF khi tăng lực ion, điện lớn và hiệu ứng Jun nồng độ dung dịch lớn Trang 12 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ đệm GVHD: NGÔ VĂN TỨ + Độ nét pic sắc kí bị ảnh hưởng nếu độ dẫn khác độ dẫn của mẫu + Hạn chế sự nạp mẫu Nhiệt độ... (cm2.V-1.s-1) Nhận xét: μef (Z) < 0 → Z là một anion; μef (X) > 0 → X là một cation Bài 2: Tách các protein bằng HPCEC Mao quản dài 84 cm, thế điện di 25000 V Một phân tử trung hòa được dòng EOF mang theo phải mất hết 308s để di chuyển đoạn 64 cm từ chỗ nạp mẫu đến Trang 14 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ detector Chất A có thời gian lưu là 343s Tính độ điện di tổng cộng và độ điện... khống chế nó ở mức độ phù hợp cho mục đích phân tích Các cách kiểm tra, khống chế dòng EOF được tổng kết ở bảng 4 Bảng 1 Các cách kiểm tra, khống chế EOF Cách thức thay đổi Kết quả Nhận xét chung Điện trường E (tức Sự thay đổi tỉ lệ với + Độ phân giải và số đĩa điện thế V) EOF lý thuyết hiệu lực giảm + Làm nóng mao quản Giá trị pH của EOF giảm ở pH thấp + Cách tiện lợi để thay dung dịch đệm và tăng... 1,742.10− 4.30000.24,5 ⇒ D= = = 2,5.10− 5 (cm2 s − 1 ) 2.L.N 2.32.80000 Trang 17 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Bài 5 Cho một cột mao quản dài 50cm được áp đặt thế 30 000V, độ điện di tính được với thời gian 10 phút là 2.10 -8 m2s-1V-1 Tính số đĩa lý thuyết cho ion Li+ (D = 1,0.10-9 m2s-1) và cho một protein có phân tử khối 105 (D = 3.10-11m2s-1) Tóm tắt: L= 50cm V=30000V t = 10 phút DLi... được đặt phía trước catot với chất đệm có pH = 5 Trong một dung dịch tiêu chuẩn, chất tan có thời gian lưu là tm = 10 phút a) Tính độ điện di tổng cộng của chất đó Trang 15 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ b) Nếu một phân tử nhỏ không mang điện có thời gian lưu bằng 5 phút, hãy xác định độ điện di của dòng EOF c) Tính độ điện di hiệu lực của chất đó d) Tính số đĩa lý thuyết N nếu chất ... độ điện di hiệu lực μef chất phân tích Trang CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ I.2 Dòng điện di thẩm thấu (EOF) Trang GVHD: NGÔ VĂN TỨ CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ I 2.1 GVHD: NGÔ VĂN TỨ Khái...CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ Trang GVHD: NGÔ VĂN TỨ CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ PHẦN I: NỘI DUNG I.1 Lớp điện kép... chúng bị dòng EOF mang theo catot Trang CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Hình So sánh dòng chảy HPLC CEC Trang 10 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ GVHD: NGÔ VĂN TỨ Hình Sự chuyển