BÔ Y TÊ T R l/Ô N G D A I H O C D Ü O C H À N Ô I • • • • NGUYÊN THI HONG PHIJC TIÉP TUC GÔP PHÂN NGHIÊN ClltJ THÀNH PHÂN HOÂ HOC VÀ MÔT SÔ TÂC DUNG SINH HOC CÜA VITHUÔC LA LOT • • • ( K h o â lu â n t ô t n g h iê p D u a c s ï d a i h o c k h o â 1 9 9 8 - 2 0 0 3 ) N guài huâng dân: TSVÜVÀN DIÈN Noi thuc hiên: Bô mon Duac hoc co truyén Thoi gian thuc hiên: Tù 1/3—20/5/2003 MUC LUC ■ ■ Trang Dat van d e .................................................................................... 1 Phàn I: Tong quan........................................................................ 2 2.1 .Dâc diëm thuc vât cüa cây La \6 t..................................................... 2 2.2. Dâc diëm phân bo, thu hâi, ché bien...............................................2 2.3. Thành phàn hoâ hoc ........................................................................3 2.4. Tac dung duoc lÿ .............................................................................. 3 2.5. Công nàng và chu tri.........................................................................4 2.6 Mot so bài thuôc co vi La lot dâ duoc dùng trong dièu t r i ............ 4 Phàn II: Thuc nghiêm và ket quâ .........................................................7 3.1.Nguyên lieu và phuong phâp nghiên ciïu ....................................... 7 3.1.1. Nguyên lieu, hoâ châ't và phuong tiên nghiên cu n ............ 7 3.1.2. Phuong phâp nghiên crïu.............................................................. 7 3.2. Thuc nghiêm và kê't q u â.................................................................8 3.2.1.Chiét xuât flavonoid toàn phàn......................................................8 3.2.2.Phân lâp câc thành phân.............................................................. 12 3.2.3.Nhân dang PI và P 2 .................................................................... 14 3.2.4.Thû mot so tâc dung sinh h o c ....................................................18 Bàn luân ...................................................................................................... 26 Phàn III :Kêt luân và de xuât............................................................ 28 Nhüïig qui ifôc vë chCf viet tat C hûfviéttât SKLM: UV : Dl: SK: Dd: Nôi dung Sàc kÿ lôp mông Utra violet Duüc lieu Sac kÿ Dung dich LÔI CAM on Vôi long biét an sâu sac, em xin chân thành câm an TS VüVân Diên - Bô mon Duac hoc co truyên dâ giao de tài và tân tinh giûp dâ em hoàn thành khoâ luân này. Em xin chân thành câm an GS-TS Chu Dinh Kinh -Viên Hoâ TTKHTN và CNQG dâ giûp dâ em trong viêc xâc dinh eau truc cüa câcchât. Em xin chân thành câm an toàn thé câc thây giâo , côgiâo,câc cô kÿ thuât viên bô mon Duac hoc co truyên, Bô mon Duac lue và ban bè dâ luôn giûp dô dông viên và tao dieu kiên cho em làm viêc trong suot quâ trînh hoc tâp và hoàn thành khoâ luân này. H à nôi thâng 5 , nam 2003 Sinh viên: Nguyên Thi Hong Phuc I DAT VÂM Dl Cây La lot vùa là cây thuoc vùa là cây gia vi dâ duoc sur dung trong nhân dân ta tù rat lâu [1,4,7,8,21,23,25 ] . Vè mat làm thuoc vi La lot cô tac dung ôn trung tan hàn, ha khi chî thông de chüa câc tru'ông hop phong hàn thâp tay chân tê bai, dau moi xirong khôp, roi loan tiêu hoâ, dày chuông khi, non mira, îa chây, thé tà, hàn ly , thân, bàng quang lanh, dau rang, dau dàu [18,21,22,23 ]. Cây rat san à nuôc ta vôi tru luong lôn, moc hoang và rat dê trong cô mât à khàp moi noi trong câ nuôc [7,8 ]. Viêc nghiên cuti cây La lot hàu nhu côn ft tac gia nghiên ciru và viêc nghiên cirn con lè tè chua cô hê thông và chat chê, nhât là dôi vôi cây La lot moc à Viêt Nam. Vi vây chüng tôi dât van dê nghiên cuu cây này vôi mue dich là: hê thông hoâ câc nghiên cuu truôc dây, nghiên cûu bo sung de chüng minh gia tri sû dung cua cây này, tù dô cô bien phâp khai thâc nguôn tài nguyên sàn cô trong nuôc dé phât huy nôi lue mot câch hop lÿ và hiêu quâ hôn. Trong luân vân này mue dfch chmh là phân lâp mot thành phân và thâm dô mot sô tac dung cüa nuôc sâc. Vôi mue dich nhu trên chüng tôi tien hành nghiên cüu mot sô nôi dung sau: - Chiêt xuâ't, phân lâp và xâc dinh câu trüc cüa mot sô chat trong cây La lot. - Thü tac dung: Chông viêm, giâm dau cüa dich sac cây La lot (2:1). 1 >\ A PHAN I 5ÏONG QÜAN 2.1. Dâc diëm thuc vât cüa cây la lot: Cây La lot (Piper lolot C.DC.)_Ho Ho Tïtu(Piperaceae), côn c6 tên khâc là : Tât Bât [1,4,7,8,18,26]. Cây thuôc loai thân thâo, moc bô, sông nhiêu nam, cao 30-50 cm. Thân hïnh tru, phông lên câc mâu, co long nhô. Thân non màu xanh, già chuyën sang màu nâu. Toàn cây cô mùi thom . La don, nguyên, moc so le, phién la mông, hînh trâi tim, dàu la nhon, dài tù 5-13cm, rông tîr 4-11cm. Gân la toâ ra tù cuông chînh, mot gân giüa thang, rô, câc gân bên hinh cung . Cuông la dài 2-5 cm cô be ô gôc ôm lây thân. Hoa moc thành bông don trnh, moc à kê la, bông dài khoâng 1 cm mang truc cô long, cuông dài 1cm. Qüa mong, mot hat moc thành tùng chùm màu vàng nâu [ 1,7,8,12,13,18,26] . Mùa ra hoa và quâ tù thang 8 dén thang 10. 2.2. Dâc diëm phân bô,thu hâi ,che bien Cây La lot moc hoang và duoc trông tai nhiêu noi à nuôc ta, thuông duoc trông bàng câc mâu doan thân, giâm à noi âm uôt, duôi bông cây mât. Ngoài ra cây côn moc à mot sô nuôc khâc nhu :Lào , Campuchia , Malaysia v .v...Nhân dân ta trông lây lâ làm gia vi hay làm thuôc. 2 Thu hâi quanh nâm , cô thé dùng toàn thân ,câ rê .Sau khi thu hâi , rua sach phai hoâc sây khô de dùng. Thucfng cât thành tùng doan 3-4cm phüi khô dé dùng làm thuôc[l,7,8,18,26,27]. 2.3. Thành phàn hoâ hoc : Trong toàn cây La lot co chtfa tinh dàu, alkaloid, flavonoid, tanin[9,12,29,30,32]. Hàm luong tinh dàu trong la non la chiém tÿ le là : 0,17%, côn trong la già chiém tÿ le : 0,20% và trong cong thân chiém khoâng 0,06% . Câc chî sô tinh ddu:d25 : 0,9677; n23D: 1,5202; c?3D: -4. Chî sô'acid: 0,697. Chî so ester: 6,256. Chî sôacetyl: 32,820 [ 26,28,29 ]. Thành phàn tinh dàu co trên 35 hçfp chat trong do dâ xâc dinh duoc 25 chat bang sàc kÿ khi [ 26,27 ] . Chat cô hàm luong lcm nhâ't là: P-caryophylline và bomyl acetate[29,]. Alcaloid dâ xâc dinh duoc 2 chat là: Piperin và Piperridin[l2,21]. Hàm luong tanin:0,63%.[ 14 ] Cho dén nay con ît câc tài lieu nghiên ciïu vê hop châ't Flavonoid, tanin, cô trong cây Lâ lo t. 2.4. Tac dung duoc lÿ: Théo mot so tài lieu dâ chrïng minh nuôc sâc Lâ lot cô tâc dung khâng khuan vôi chüng: Staphylococcus aureus, Sacrina lutea, Bacillus subtilis, Bacillus varians. Ngoài ra lâ lot con cô tâc dung khâng câc chûng : Bacillus mycoides, Candida albicans , Escherichia coli, Salmonella paratyphy B, Shigella flexneri [21,24]. 3 Cao long La lot 10% cô tac dung giâm viêm trên chuôt nhàt cho uông vôi liêu 20g dl khô/ 20g chuôt và tac dung giàm viêm cüng thé hiên rô trên thô cho uông vôi liêu 20g dl khô/ 1kg cân nàng[ 17 ]. 2.5.Công nâng và chü tri : - Công nâng: La lot cô vi cay, mùi thom, trnh âm, qui vào kinh tÿ, vi, p h é . Cô tac dung ôn trung , tan hàn , ha k h i, chî thông[ 1,20,23,25,27,32 ] . - Chu tri : Chü'ng hàn thap, chân tay lanh, tê bai, dau lung, dau nhùc xuong, non mua, dày hoi, dau bung îa chây, dau rang, dau dau, phù thüng, ngoài ra côn duoc dùng dé làm gia vi[ 1,18,21,23,29 ]. - Liêù dùng : Liêu thuông dùng 5-10g duoc liêu khô hoâc 15-30g duoc liêu tuoi , dem sàc vôi nuôc, uông 3 làn /I ngày, uông hàng ngày. Hoâc cô thé dùng nuôc sàc de ngâm chân tay chüa dau co khôp và chân tay hay dô mô hôi[18]. 2.6.Môt so bài thuoc cô vi la lot dâ duoc dùng trong dieu tri : - Duoc si Triêu Dâc (nâm 1962) dâ dùng nuôc sàc La lot kêt hop vôi dàu hat doc dé diêu tri câc vêt thuong và thây cô kêt quâ tô t. - Viên Quân Y 108, 198, 354 dâ dùng cây La lot de diêu tri viêm loi trong khoa Ràng hàm mat và cho mot kêt quâ tôt. - Mot sô chê phâm dâ duoc bào ché tù cây Là lot: * Dentoxit: Thành phân gom: -Cao côn La lot 10% : 70ml -Methanol: 4g -Tinh dàu Huong nhu : 21g - Clorophin : 4 lg Câch sü dung: tam dich vào bông dât vào chô dau rang, sau 5-10 phüt suc miêng sach bâng nuôc soi dé nguôi. Công dung: Tâc dung giâm dau, tri viêm rang câp, sâu rang, viêm khôp dây chàng à rang . «fc Pipêlô ngâm: 1 ong 10ml: Thành phàn gôm : -Cao mêm Lâ lot : 2g - Ducmg kmh : 2g - Nuôc cât vira dû: 10 ml. Câch dùng: Ngâm 1 ong / làn x 3-4 lân / ngày. Công dung : Chûa dau nhûc rang loi. * Pipêlo uông:viên Thành phàn 1 viên: -Cao mêm Lâ lot : 0,250 g -Bôt dao: 0,200g - Bôt cam thâo : 0,020g -MgC03 : 0,010g -Bôt gôm: 0,010g Câch dùng: Uông 9-12 viên / ngày . - Théo tù diën cây thuôc Viêt Nam : Lâ lot vôi Ngâi ciru, lieu luong bàng nhau, giâ nât chê' giâm, chung nông de dàp cô tâc dung chüa tê thâp, dau ngang lung, sung dàu gôi, bàn chân tê buôt. - Bênh viên Thuân Châu (Son La) dùng Lâ lot 15g, Vâ day 30g, Bach hoa xà 10g, Thiên niên kiên 20g, Rê Cô xuôc 20g, rê cây Xâu ho 30g, Côt toâi bo 15g, gùng, sac, uông, liên tue trong vông 10 ngày. Dùng dé dieu tri dau khôp. 5 - Bac si Lo Kim (BV Thuân Châu ) và Bac si Lo Cam ( BV 103) dâ dùng bài thuôc gia truyên dé diêu tri cho bênh nhân bi dau khôp à bênh viên Thuân Châu và nhân dân trong vùng cô tac dung tôt. • Chiïa phù thüng: La lô't tuoi 40g, Ngâi cûu tuoi 40g , la Sâ tuoi 40g, Nghê tuoi 10g .Tât câ sao vàng, cho 900ml nuôc sâc côn lai 300ml, chia làm 3 làn / ngày. * Chüa say nam , ran can: La lot tuoi gia nât, phôi hop vôi la Khé, Dâu van trang, Môi vi 50g, thêm nuôc, loc lây nuôc dé uông. 6 PHAN II; 3.1 .Nguyên liêu và phucmg phâp nghiên cüu: 3.1.1.Hguyên liêu, hoâ chat phucmg fién nghiên eüru: • Duac liêu: Rê, thân, la cüa cây La lot duoc thu hâi vào thâng 2 /2003 à tînh Phü Tho . Duoc liêu sau khi thu hâi rüa sach thâi nhô, sây khô ô nhiêt dô 50-60°C, bâo quân trong tüi nilon dé nghiên ciru. tiêu chuân phân tfch, mua tai cua hàng hoâ chât 18- Lê Thânh Tông. • Phuong tiên, thiet bi: - Do phô tu ngoai UV-VIS trên mây quang pho tu ngoai -khâ bien Biochom 4060 vôi detector PDA ( Thuy Diën). - Do pho hông ngoai trên mây IFS (Dùc),kÿ thuât FT -IR,màng KBR. - Ghi pho khôi trên mây MS-ENGIN 5989 N/S. - Ghi ph6 công huông trên mây Brucker AM 300 (Duc). 3.1.2.Phirong phâp nghiên cüru : • Chiêt xuât Flavonoid : Chiêt bàng dung môi thich hop, loai bôt tap chât, cât thu hôi dung môi duoc cân toàn phân. • Phân lâp câc thành phân: Dùng sac kÿ côt de phân lâp vôi dung môi rüa giâi thich hop, kiëm tra câc thành phân trong tùng phân doan bàng SKLM, don câc phân cô cùng mot chât lai vôi nhau. Kiëm tra dô tinh khiét cüa don châ't. Do hông ngoai, tu ngoai .Xâc dinh câu truc bang pho công hu'ông tir hat nhân , pho khoi.[ 18.26]. • Xâc dinh câu truc: tai viên Hoâ _TTKHTN và CNQG vôi su giüp do cüa GSTS- Chu Dinh Krnh [24] • Thu mot so tac dung sinh hoc: * Thu tac dung chông viêm theo phuong phâp gây viêm thuc nghiêm cüa Winter [ 30] : Nguyên tac: Cho chuôt uông thuôc thür, do thé tîch chân chuôt truôc - khi gây viêm, gây viêm bàn chân phâi sau cüa chuôt bàng câch tiêm dung dich Carragenin 1%. Do thé tich chân chuôt sau khi gây viêm trong nhüng khoâng thôi gian nhât dinh. Tfnh tÿ le phù, tÿ le ûc chê phù chân chuôt, so sanh gia tri trung bïnh cüa lô thü so vôi lô trang và lô chüïig. - Ty lê phù duoc tinh theo công thûc V t-V o j/% = i L _ ^ xioo Vo Trong do: (l) Vo: The tîch chân chuôt truôc khi gây viêm Vt: Thé tîch chân chuôt sau khi gây viêm à thôi diëm t V%:Tÿ lê phù. Tù tÿ lê phù chân chuôt ta tfnh ra tÿ lê % ûc chê' phù chân chuôt theo công thûc : Vc V c-Vt Z% = — xlOO (2) Trong dô: Z%: Dô giâm phù trung binh cüa chân chuôt. Vc : Tÿ lê phù trung binh cüa chân chuôt ôf lô chûng Vt : Tÿ lê phù trung bînh cüa chân chuôt ô lô thu . * Thu tâc dung giàm dau theo phuong phâp cua Koster và Tumer vôi tâc nhân gây dau la Acid acetic 1% [30,31]. Nguyên tac: Cho chuôt uông ché phâm truôc, sau dô gây dau bâng câch tiêm 0,5 ml dung dich acid acetic 1% vào màng bung, dém so làn quân dau sau khoâng thôi gian nhât dinh. Két quâ giâm dau thé hiên qua sô làn quân giâm dau cüa lô thir so vôi lô trang và lô chûng. Con dau duoc thé hiên bàng chuôt choâi hai chân sau, quân nguôi bung sât xuông sàn. Môi làn nhu vây duoc tmh là mot con quân dau. Câc két quâ thu: tâc dung duoc lÿ duoc sir lÿ theo phuong phâp thông kê ring dung trong y duoc [16] và chuong trînh Excel 2000. 3.2. Thuc nghiêm và ket quâ: 3.2.1. Chiê'l xual Flavonoid toàn phân : Lây 50g duoc lieu dâ tân nhô , sây khô à 50_60° C . Gôi vào tüi vâi nhô, cho vào Sohxlet và chiét bàng côn 90° trong 12h. Lây dich chiét cât thu hôi dung môi ta thu duoc cao dâc. Thêm vào 50ml nuôc cât , dun câch thuÿ cho hoà tan hét, dé két tüa trong tû lanh mot ngày mot dêm, gan, loc lây dich. Cho dich này vào binh gan 500ml, chiét bàng Ethyl acetat nhiêu làn dén khi dich Ethyl acetat không cô màu nOa. Gôp dich Ethyl acetat lai dem cât thu hôi Ethyl acetat thu duoc Flavonoid toàn phàn . Qui trînh chiét xuât duoc tôm tât trong hinh 1: 9 Hînh 1 : So dô chiét xuâ't Flavonoid toàn phân + Kiém tra câc thành phân trong dich chiét bàng SKLM: Dich châ'm sac ky :Hoà tan mot ît càn Flavonoid toàn phân trong Con 90°. Ban mông: Silicagen GF254 (Merck)dâ trâng san. Khai triën sâc kÿ lôp mông (SKLM) bàng câc hê dung môi sau: Hê I:n-Butanol bâo hoà nuôc. Hê II: Ethyl acetat: Methanol: Nuôc [100:17:13]. * Hê III: Toluen: Ethyl acetat: Acid Formic[5:6:1,5] Hê IV: Ethyl acetat: Buthanol: Acid acetic: Nuôc[5:2:2:l]. Hê V: Methanol: Cloroform[ 8:2] 10 Hiên màu : Soi bàng dèn tû ngoai à birôc song 366nm .Ho trên dung dich * Amoniac dàc. Két quâ hê I và hê II tâch tôt hon câ két quà duoc ghi à bâng 1 và bâng 2. Bâng 1 : Két quâ SKLM Flavonoid toàn phân vôi hê dung môi I. TT vét UV NH3 dàc 1 Màu xanh Màu vàng 2 Màu hông Màu vàng 3 Màu nâu Màu nâu dâm 4 Màu vàng nhat Màu vàng 5 Màu vàng Màu vàng 6 Màu nâu Màu nâu 7 Màu vàng Màu vàng Bâng 2: Két quâ SKLM Flavonoid toàn phàn vôi hê dung môi II TT vét UV 1 Hong 2 Vàng Vàng 3 Vàng Vàng 4 Nâu Nâu dâm 5 Vàng nhat Vàng 6 Xanh Vàng 7 Vàng dâm Vàng dâm 8 Vàng Vàng NH 3 dàc Vàng 11 Nhân xét: Trong dich chiét câc Flavonoid toàn phàn cô rat nhiêu thành phàn khâc nhau hê dung môi I cô 7 vét và hê dung môi II cô 8 vêt và 2 hê dung môi này cô khâ nâng tâch duoc nhiêu vêt hon câc hê dung môi khâc. 3.2.2. Phân lâp câc thành phân bàng sac ky eôî : • Chuân bi côt: Chon côt cô kfch thuôc l,5x 80 cm cô khoâ km, rira sach, sây khô. Sau dô lot bông à dây côt và tien hành nhôi côt bàng câch hoà Silicagen cô kfch thuôc 0,04_0.063 mm vào dung môi càn rira giâi tao thành hôn dich và dô tù tù vào côt cô chua sàn dung môi càn rua giâi ( de dung môi khoâng 1/3 côt) khi cho vào gô nhe ngoài côt, cho dên khi côt cô dô dài hâp phu 50 cm, dô ngâp dung môi khoâng 3 cm (luôn luôn phâi giû ngâp) dây km dé ôn dinh 12h . Khi cho Silicagen vào cô mô khoâ duôi cho dung môi chây ra dé kiëm tra. • Chuân bi ong hüng: Dùng câc ong Penicilin cü, rüa sach, sây khô de hûng. • Chuân bi bân mông: dé phât hiên câc thành phàn trong tùng phân doan chây - Trâng bân mông: Dùng câc lam kfnh thuÿ tinh rua sach, sây khô. Bôt Silicagen SKLM do viên kiëm nghiêm sân xuât hoà vào nuôc cât. Dô mot lôp mông lên lam kfnh dë khô tu nhiên.Sau dô cho vào tü sây hoat hoâ à 110°C. - Bân mông Sillicagen GF254 trâng ^«(M erck): Cât bân mông theo kfch thuôc 2,5x6cm . Hoat hoâ à tü sây nhiêt dô trong lh 110°C. Kiëm tra so bô câc phân doan bàng bân mông tu trâng, sau khi phât hiên phân doan nào cô cùng mot vêt cô Rf gàn tuong duong nhau thi ta kiëm tra lai bàng bân mông trâng san, sau dô don lai và kiëm tra lai dô tinh khiêt. • Chuân bi hê dung môi rüa giâi: 12 Tien hành rira giâi vôi ba hê dung môi: Hê I: Ethyl acetat:Methanol:Nuôc [100:17:13] Hê II: Methanol:Cloroform [80:20] HêlII: Methanol:Cloroform [70:30]. • Chuân bi chat chav côt : Lây 2g Flavonoid toàn phân trôn dêu vôi mot bôt Sillicagen , sây à 60° C tao thành bôt khô toi, dua nhe lên bê mât c ô t, sau dô phu mot lôp mông Sillicagen lên trên và cho dung môi rüa giâi ngâp. • Tien hành chav côt: Cho dung dich rüa giâi I chay ra vôi toc dô 15 giot/ phüt và hûng môi phân doan là 5ml và hüng duoc 75 phân doan sau dô kiëm tra bàng SKLM thây phân doan 13 cô mot vêt. Goi là Pl. Tiêp tue chay hê dung môi II nhu trên và thu duoc à phân doan 32 cô mot vêt. Goi là P2. Tien hành chay 3 côt vôi diêu kiên giông nhu chay làn dàu de thu duoc hop chât PI và P2 nhiêu hon dû dë xâc dinh câu truc. • Kiëm tra dô tinh khiét cüa PI và P2: Dùng SKLM châ'm chât PI và P2 triën khai trên nhiêu hê dung môi khâc nhau néu tât câ câc hê chî cô mot vêt thî chât này tuong dôi sach. Kêt quâ ghi à bâng 3&4 _ £ 13 2-' é>^ Bâng 3 :Ket quâ SKLM cüa P, Hê dung môi Tÿ lê So vêt Et0Ac:M e0H:H20 100:17:13 1 vêt MeOH :Cloroform 80:20 1 vêt MeOH :Cloroform 70:30 1 vét n-Buthanol bâo hoà nuôc 1 vêt Toluen :EtO Ac :Aceton :HCOOH 5:2 :2:1 1 vêt Tât câ câc hê trên dêu cho 1 vêt, nhu vây chat P, là mot don chat sach . Bâng 4: Két quâ SKLM chat P2 Hê dung môi Tÿ lê So vét EtO Ac :MeOH :H20 100:17:13 1 vêt MeOH :Cloroform 80:20 1 vét MeOH :Cloroform 70:30 1 vét n-Buthanol bâo hoà nuôc 1 vét Toluen :EtO Ac :Aceton :HCOOH 5:2 :2:1 1 vét Tât câ câc hê trên dêu cho 1 vêt, nhu vây chât P2 là mot don chat sach. 3.2.3.Rhân dang chat Pt và P2: Chât PI và P2 dêu duoc do và nhân dang tai TTKHTN và Công nghê Quôc Gia. 14 * Nhân dang câu truc cùa P, : * Câc dâc tinh cüa P, : Là chat vô dinh hînh tan trong dung môi hîru co không tan trong nuôc, * Pho tü ngoai. (Hînh 1- Phu lue): Pho tuf ngoai cûa PI do trong dung dich Methanol cho câc dînh eue dai là^maxi:418,5 nrnAmax2:276,0 nm, ?imax3 :227,0 nm. *Pho hông ngoai.(Hinh 2-Phu lue): Pho hông ngoai cüa PI do duôi dang viên nén KBr ,cho pic dâc chung cüa nhôm chûc : Nhân thom: 1552,39;1465,45 c m 1 Carbonyl: 1732,95 cm'1. * Pho khoi:( Hinh 3 - Phu lue). Trong pho khôi luçmg ghi theo EI-MS cho ion phân tü [M]+ là 390, phân tü luong M= 390. Tuong üng vôi công thûc ngoài ra côn cô câc pic khâc thë hiên cho phân mânh cüa PI khi bi phâ vô. Dôi chiéu vôi thu viên dû lieu pho khôi cho thây PI gân trùng vôi pho khôi cüa : 1,2- Benzenedicarboxylic acid -2 ethylhexyl esther * Pho công htiâng tùhat nhân 'H-NMR và13 C-NMR cüa P, : Dua vào pho 13C-NMR và'H- NMR ( Hinh 4,5- Phu lue) : 15 \ / f Bâng 5:Pho 13C -NM R , 1H -N M R cüa P I . 13C-NMR ‘H- NMR Kÿ hiêu ôc(ppm) Kÿ hiêu ôc(ppm) 1H 7,716 3-CH, 6-CH 132,365 1H 7,618 4-CH, 5-CH 129,847 2H 1,372 CH, CH 69,107 1H 1,336 c h 2, c h 2 40.189 2H 1,332 CH, CH 31,633 2H 0,918 c h 2, c h 2 30,138 2H 1,424 c h 2, c h 2 24,032 3H 0,964 c h 3,c h 3 14,398 3H 1,372 c h 2, c h 2 24,695 3H 1,685 c h 3,c h 3 11,416 7-C,8-C 133,594 1-C,2-C 169,286 16 Nhîn trên pho 13C -NM R và DEPT cho thây trong phân tir cô 12 cacbon .Pho *H -NM R cô vùng truông dâc trimg cho câc proton cüa nhân benzen. Trên pho DEPT cho thây PI cô 2 cacbon bâc 4, trong dô cô 1 cacbon à vùng trirông cô proton dâc trimg cho câu truc -0 -C = 0 . Cacbon côn lai o trong nhân thom cô nôi vôi mot nhôm thê' dang -C = 0 , nghîa là cô khâ nâng tôn tai mânh câu truc C6H5C00-. Trong dô dua vào pho 'H -NMR, cô thé nhân thây su cô mât cüa 3 nhôm CH, và 2 nhôm CH cô dô dich chuyën diën hinh cho nhôm CH à nhân thom. Cô 5 nhôm CH2 dua vào phô COSY, HMBC và trên co sô nhüng nhân xét trên chüng tôi chung minh su tôn tai cüa câu truc sau: ch 2— ch 3 fî C - OCH 2CHCH 2CH 2CH 2CH 3 Câu truc trên môi chî chüa 1/2 nhân thom .Dieu dô cho phép ta nghî tôi dây chî là mot nüa câu truc dôi xûng , nüa này cô sô khôi là 195m.u. Khâo sât pho EI-MS, FAB-MS cho pic phân tü = 390m.u. Trnh toân giüa sô luong C,H và O thë hiên trên pho NMR và sô khôi cüa pic phân tü thây cô su chênh lêch gâp dôi sô luong câc nguyên tô này . Vây trong phân tü PI phâi cô câu truc dôi xüng tuyêt dôi .Công thüc cüa PI là [16,24]: o ch 2- ch 3 .C— OCH 2CHCH 2CH 2CH 2CH 3 'C — OCH 2CHCH 2CH 2CH 2CH 3 O C H 2 -C H 3 Di(2 ’ -ethy-1 ’=hexyl) phtalat. C24H380 4 ;m=390. Càn cû vào dû lieu ph6 do duoc và so sanh vôi pho khoi chüng tôi khâng dinh chât PI là Di(2’-ethyl 1’-hexyl)phtalat. * Nhân dang câu truc cùa P2 : * Câc dac tinh cüa P2 .Tinh thé màu vàng nhat, tan tôt trong dung môi nhu M ethanol, Ethylacetat, Côn, không tan trong nuôc. * Pho tü ngoai cüa P2: (Hînh: 7 Phu lue ) Pho tû ngoai cûa P2 do trong dung dich Methanol cho câc dînh eue là:À maxl:286,0nm; À,max2:226,0nm. *Pho khoi EIMS: ( Hinh :8,9 Phu lue): Cho câc phân mânh cô sô khôi sau: [M]+=288 m.u và côn câc pic thé hiên cho câc phân mânh cüa P2 khi bi phâ vô. Dôi chiêu vôi thu viên dû lieu pho cho thây P2 trùng voi pho khôi cüa 14 betaPregnane. Cô công thûc phân tü :C2lH36 [5,6,24]. Công thûc cüa P2 là: 3.2.4.Thur ïâc dung sinh hoc: 3.2.4.1. Thü tâc dung chông viêm: • Chuân bi chê phâm thü : * Nuôc sac (2:1):Lâ lot tuoi , rüa sach , thâi nhô, sây à 50-60°C cho tôi khô. Cân 100g cho vào nôi nhôm thêm nuôc tôi ngâp duoc lieu 2-3 cm . 1S s Dun soi lüa nhô trong 1 h . Sau do gan , loc lây dich , bâ côn lai dem sâc vôi nuôc 2 làn nùa. Gôp dich sâc cô dén 50ml ta thu duoc dich sac 2:1 * Nuôc muoi sinh ly :100ml * Hôn dich Apirin 10% :100ml. * Thu nghiêm và két quâ: Chuôt công trâng khoè manh , nâng 80-100g chia ngâu nhiên thành 3 lô. Môi lô 6 con. - Lô I: ( lô chufng ) uông nuôc muoi sinh ly , liêu 1ml/100g chuôt. - LôII: (lô chuân) uông hôn dich Aspirin 10% , liêu 1ml/100g chuôt - Lô III: ( lô thu*) uông dich sâc, liêu lml/lOOmg. Chuôt duoc nuôi ôn dinh 36h truôc khi thi nghiêm. Vôi lô III cho chuôt uông ché pham 2 ngày truôc khi gây viêm , môi ngày mot làn vào 10 giô sang. Vào ngày thu 3 truôc khi gây viêm 1 h , cho câ 3 lô uông nhu trên .Do thë tich bàn chân phâi sau cüa chuôt truôc khi gây viêm (Vo), sau dô gây viêm bàng câch tiêm vào duôi da long bàn chân sau cüa chuôt 0,05ml nhü dich Carragenin 1% .Do thë tich chân chuôt vào câc thoi diëm 1, 2, 3, 4, 5, 6, 20 và 24 giô sau khi gây viêm(Vt). Kêt quâ thuc nghiêm duoc à duôi bàng 6,7,8,9. 19 X Bâng 6: Tÿ lê phù chân chuôt â lô trang(%). stt XI X2 X3 X4 X5 X6 X20 X24 X30 1 50,00 55,00 60,00 65,00 70,00 60,00 25,00 25,00 20,00 2 68,42 68,21 94,74 94,74 89,47 78,95 52,63 31,58 36,84 3 68,42 94,74 94,74 94,74 89,47 84,21 47,37 31,58 26,32 4 36,84 78,95 100,00 110.5 110,53 110,5 52,63 47,37 36,84 5 47,37 68,42 78,95 78,95 68,42 57,89 31,58 26,32 21,01 6 36,84 78,95 89,47 89.47 78,95 78,95 36,84 26,32 36,84 51,32+ 76,71+ 15 14,3 86,32+ 88,90± 84,47+ 78,42± 41,01± 31,36± 26,65± 14,40 16,3 20 16,40 20,0 12,1 8,70 8,57 Bàng 7: Ty lê phù chân chuôt ( Lô Aspirin) lô chuan STT XI X2 X3 X4 X5 X6 X20 X24 X30 1 6,25 37,50 62,50 68,75 62,50 62,50 37,50 25,00 25,00 2 17,65 67,06 64,71 76,47 76,47 76,47 29,41 37,29 29,41 47,37 3 15,79 57,89 68,42 78,95 89,47 100,00 57,89 4 22,22 38,89 66,67 77,78 83,33 120,00 44,44 38,89 33,33 5 6,67 86,67 106,6 113,3 120,00 78,95 73,33 73,33 60,00 6 10,53 36,84 63,16 73,68 73,68 78,95 26,32 26,32 15,79 13,1± 50,8± 72,0± 81,49 84,24± 86,19± 44,82± TB 6,67 20,20 17,90 ±16,8 20,70 21,40 18,80 P [...]... 3.2.4.Thur ùõc dung sinh hoc: 3.2.4.1 Thỹ tõc dung chụng viờm: Chuõn bi chờ phõm thỹ : * Nuục sac (2:1):Lõ lot tuoi , rỹa sach , thõi nhụ, sõy 50-60C cho tụi khụ Cõn 100g cho vo nụi nhụm thờm nuục tụi ngõp duoc lieu 2-3 cm 1S s Dun soi lỹa nhụ trong 1 h Sau do gan , loc lõy dich , bõ cụn lai dem sõc vụi nuục 2 ln nựa Gụp dich sõc cụ dộn 50ml ta thu duoc dich sac 2:1 * Nuục muoi sinh ly :100ml * Hụn... 3.3.4.2.Thu tac dung giõm dau: Chuõn bi chộ phõm thu: * Nuục sõc (2:1): Nhu mue 3.3.4.1 *Nuục muoi sinh ly : 100ml *Hụn dich Aspirin 4%: 100ml * Dung dich Acid acetic 1%: 100ml Thuc nghiờm v kột quõ: Chuụt nht khoố manh , nõng tự 18_20 g ,chia ngõu nhiờn thnh ba lụ Mụi lụ 8 con - Lụ I: (lụ chỹng )uụng nuục muoi sinh l , liờu 0,5 ml/20g chuụt - Lụ II: (Lụ chuan) uụng hụn dich Aspirin 4% , liờu 0,5 ml/20... 2:1 * Nuục muoi sinh ly :100ml * Hụn dich Apirin 10% :100ml * Thu nghiờm v kột quõ: Chuụt cụng trõng khoố manh , nõng 80-100g chia ngõu nhiờn thnh 3 lụ Mụi lụ 6 con - Lụ I: ( lụ chufng ) uụng nuục muoi sinh ly , liờu 1ml/100g chuụt - LụII: (lụ chuõn) uụng hụn dich Aspirin 10% , liờu 1ml/100g chuụt - Lụ III: ( lụ thu*) uụng dich sõc, liờu lml/lOOmg Chuụt duoc nuụi ụn dinh 36h truục khi thi nghiờm Vụi... ngoai, tu ngoai Xõc dinh cõu truc bang pho cụng hu'ụng tir hat nhõn , pho khoi.[ 18.26] Xõc dinh cõu truc: tai viờn Hoõ _TTKHTN v CNQG vụi su giỹp do cỹa GSTS- Chu Dinh Krnh [24] Thu mot so tac dung sinh hoc: * Thu tac dung chụng viờm theo phuong phõp gõy viờm thuc nghiờm cỹa Winter [ 30] : Nguyờn tac: Cho chuụt uụng thuục thỹr, do thộ tợch chõn chuụt truục - khi gõy viờm, gõy viờm bn chõn phõi sau... :Ty le ỷc chộ dau so või lụ thỹ Lụ T lờ ỹc chộ dau (%) Chỹng Aspirin 72,59 85,80 Dich sc + Nhõn xột : - Dich nuục sc 2:1 cụ tac dung giõm dau tuong dụi tụt 85,8% so vụi lụ chỹng cho uụng nuục muoi sinh l, cụ phn hon cõ Aspirin 3.3 Bn luõn: - Trong quõ trợnh chiột xuõt cõc thnh phn chỹng tụi chiột xuõt theo huụng cõc hop chat Flavonoid, nhung khi tõch ra lai duoc cõc chat khụng phõi l Flavonoid Cụ ... Bụ mon Duac lue v ban bố dõ luụn giỷp dụ dụng viờn v tao dieu kiờn cho em lm viờc suot quõ trợnh hoc tõp v hon thnh khoõ luõn ny H nụi thõng , nam 2003 Sinh viờn: Nguyờn Thi Hong Phuc I DAT VM... Nuục muoi sinh ly :100ml * Hụn dich Apirin 10% :100ml * Thu nghiờm v kột quõ: Chuụt cụng trõng khoố manh , nõng 80-100g chia ngõu nhiờn thnh lụ Mụi lụ - Lụ I: ( lụ chufng ) uụng nuục muoi sinh ly... truc: tai viờn Hoõ _TTKHTN v CNQG vụi su giỹp cỹa GSTS- Chu Dinh Krnh [24] Thu mot so tac dung sinh hoc: * Thu tac dung chụng viờm theo phuong phõp gõy viờm thuc nghiờm cỹa Winter [ 30] : Nguyờn