TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA MỘT SỐ LOẠI THUỐC PHÒNG BỆNH VIÊM VÚ BÒ SỮA Giáo viên hướng dẫn Sinh viên thực hiện Th.S BÙI THỊ LÊ MINH HỒ HUỲNH PHƯỚC NGUYÊN Th.S NGUYỄN THỊ ÁNH TUYẾT MSSV: LT11660 LỚP: THÚ Y LT K37 CẦN THƠ - 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y HỒ HUỲNH PHƯỚC NGUYÊN ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA MỘT SỐ LOẠI THUỐC PHÒNG BỆNH VIÊM VÚ BÒ SỮA LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y CẦN THƠ - 2013 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài “Đánh giá hiệu quả của một số loại thuốc phòng bệnh viêm vú bò sữa” đƣợc thực hiện tại các hộ chăn nuôi của hợp tác xã bò sữa Long Hòa thuộc Thành phố Cần Thơ, hợp tác xã bò sữa EVERGROWTH thuộc Tỉnh Sóc Trăng do sinh viên Hồ Huỳnh Phƣớc Nguyên thực hiện từ tháng 08 đến tháng 12 năm 2013. Cần Thơ, ngày … tháng … năm … Cần Thơ, ngày … tháng … năm … Duyệt bộ môn Duyệt Giáo viên hƣớng dẫn Bùi Thị Lê Minh Cần Thơ, ngày … tháng … năm … Duyệt Khoa Nông nghiệp & SHƢD i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của bản thân tôi, các số liệu, các kết quả trình bày trong luận văn là trung thực và chƣa đƣợc công bố trong bất kỳ công trình luận văn nào trƣớc đây. Tác giả luận văn Hồ Huỳnh Phƣớc Nguyên ii LỜI CẢM ƠN Xin chân thành cảm ơn: Cô Bùi Thị Lê Minh đã hết lòng lo lắng, quan tâm, hƣớng dẫn và giúp đỡ tôi hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp. Cô Nguyễn Thị Ánh Tuyết – Trƣởng phòng Chăm Sóc Khách Hàng Công ty Cổ Phần Sản Xuất Kinh Doanh Vật Tƣ và Thuốc Thú Y Vemedim đã tận tình giúp đỡ, hƣớng dẫn, tạo điều kiện cho tôi đƣợc học tập và hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp. Đồng gửi lời cảm ơn đến anh Bùi Hoàng Huy, anh Võ Duy Thanh đã giúp đỡ nhiệt tình và hƣớng dẫn tôi trong suốt thời gian thực hiện đề tài. Xin chân thành cảm ơn và chúc sức khỏe đến quí thầy cô Bộ môn Thú Y – Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng - Trƣờng Đại Học Cần Thơ đã tận tình giảng dạy, truyền đạt cho tôi những kiến thức quí báu của đời mình. Cảm ơn các bạn lớp Thú Y LT K37 đã đồng hành, chia sẽ và động viên tôi trong suốt thời gian qua. Một lần nữa, tôi xin chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày 26 tháng 12 năm 2013 iii TÓM LƢỢC Qua thời gian thử nghiệm các loại thuốc bơm vú cạn sữa để phòng bệnh viêm vú trên bò sữa chúng tôi nhận thấy sau khi sử dụng thuốc tỉ lệ bò sữa bị viêm vú tiềm ẩn chiếm 17,65%. Hiệu quả phòng bệnh viêm vú của các loại thuốc thử nghiệm là khá cao chiếm tỉ lệ 82,35% trong đó hiệu quả của thuốc Ceptifi for DC (91,67%), CEQUIN for DC (91,67%), SPECTRAMAST DC (80%), MAMIFORT SECADO (75%), BIO-TETRA MAS (66,67%), CLOXAMAM (66,67%). Ngoài ra, kết quả nghiên cứu cho thấy các mẫu sữa viêm vú có sự hiện diện của vi khuẩn Staphylococcus aureus là 88,88%, E.coli là 33,33%, chưa phát hiện vi khuẩn Streptococcus spp. Các loại vi khuẩn phân lập được đều nhạy cảm với các kháng sinh như Ceptiofur (100%), Cefquinome (100%), Marbofloxacin (100%), Doxycycline (100%), Florfenicol (95,83%), Norfloxacin (100%), Enrofloxacin (100%) và Danofloxacin (100%). iv MỤC LỤC Trang Trang duyệt .......................................................................................................................i Lời cam đoan .................................................................................................................. ii Lời cảm ơn ..................................................................................................................... iii Tóm lƣợc.........................................................................................................................iv Mục lục ............................................................................................................................ v Danh mục chữ viết tắt .................................................................................................. viii Danh mục bảng ...............................................................................................................ix Danh mục hình ................................................................................................................ x Danh mục sơ đồ ..............................................................................................................xi CHƢƠNG 1. ĐẶT VẤN ĐỀ........................................................................................... 1 CHƢƠNG 2. CƠ SỞ LÝ LUẬN ..................................................................................... 2 2.1 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nƣớc về bệnh viêm vú bò sữa ........................ 2 2.1.1 Tình hình nghiên cứu ngoài nƣớc ........................................................................... 2 2.1.2 Tình hình nghiên cứu trong nƣớc ........................................................................... 3 2.2 Cấu tạo tuyến sữa, bầu vú và chu kỳ tiết sữa ............................................................ 4 2.3 Sơ lƣợc về bệnh viêm vú ........................................................................................... 4 2.3.1 Nguyên nhân gây bệnh viêm vú ............................................................................. 5 2.3.2 Vi khuẩn gây bệnh viêm vú bò sữa ........................................................................ 5 2.3.2.1 Vi khuẩn Staphylococcus aureus ........................................................................ 5 2.3.2.2 Vi khuẩn Streptococcus spp ................................................................................. 7 2.3.2.3 Vi khuẩn Escherichia coli .................................................................................... 8 2.3.3 Các dạng viêm vú ................................................................................................. 10 2.3.3.1 Viêm vú tiềm ẩn ................................................................................................ 10 2.3.3.2 Viêm vú lâm sàng .............................................................................................. 10 2.3.4 Một số phƣơng pháp chẩn đoán bệnh viêm vú ..................................................... 12 2.4 Quy trình cạn sữa ..................................................................................................... 12 2.4.1 Thời gian cạn sữa.................................................................................................. 13 2.4.2 Phƣơng pháp cạn sữa ............................................................................................ 13 v 2.4.2.1 Cạn sữa chậm ................................................................................................... 13 2.4.2.2 Cạn sữa nhanh ................................................................................................... 13 2.4.3 Kiểm soát bệnh viêm vú ở bò cạn sữa .................................................................. 14 2.5 Giới thiệu về thuốc thử nghiệm ............................................................................... 14 2.5.1 Thuốc Ceptifi for DC ............................................................................................ 14 2.5.2 Thuốc CEQUIN for DC ........................................................................................ 15 2.5.3 Thuốc BIO-TETRA MAS .................................................................................... 16 2.5.4 Thuốc MAMIFORT SECADO ............................................................................ 16 2.5.5 Thuốc CLOXAMAM ........................................................................................... 17 2.5.6 Thuốc SPECTRAMAST DC ................................................................................ 18 CHƢƠNG 3. PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ........................ 20 3.1 Nội dung nghiên cứu ............................................................................................... 20 3.2 Phƣơng tiện nghiên cứu ........................................................................................... 20 3.2.1 Thời gian, địa điểm và đối tƣợng nghiên cứu ...................................................... 20 3.2.2 Dụng cụ và hóa chất ............................................................................................. 20 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu ......................................................................................... 21 3.3.1 Bố trí thí nghiệm ................................................................................................... 21 3.3.2 Phƣơng pháp tiến hành ......................................................................................... 21 3.3.2.1 Kiểm tra bò sữa ................................................................................................. 21 3.3.2.2 Cách tiến hành bơm thuốc cạn sữa ................................................................... 22 3.3.2.3 Phương pháp lấy mẫu sữa ................................................................................. 22 3.3.2.4 Phương pháp thử CMT (California Mastitis Test) ............................................ 23 3.3.2.5 Phương pháp kiểm tra dựa vào biểu hiện lâm sàng .......................................... 24 3.3.2.6 Phương pháp nuôi cấy, phân lập vi khuẩn ........................................................ 24 3.3.2.7 Phương pháp thực hiện kháng sinh đồ .............................................................. 30 3.4 Chỉ tiêu theo dõi ...................................................................................................... 32 3.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu ....................................................................................... 32 CHƢƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ................................................................ 33 4.1 Tình hình chăn nuôi bò sữa tại hợp tác xã EVERGROWTH và Long Hòa ............ 33 4.1.1 Phƣơng thức chăn nuôi ......................................................................................... 33 vi 4.1.2 Phƣơng thức vắt sữa ............................................................................................. 33 4.1.3 Phƣơng thức cạn sữa............................................................................................. 34 4.1.4 Tình hình vệ sinh ở những nông hộ nuôi bò sữa .................................................. 34 4.2 Tỉ lệ bò sữa bị viêm vú đƣợc khảo sát trƣớc sử dụng thuốc bơm vú cạn sữa ......... 34 4.3 Tỉ lệ và mức độ bò sữa bị viêm vú sau khi sử dụng thuốc bơm vú ......................... 35 4.4 Kết quả phân lập vi khuẩn ....................................................................................... 37 4.5 Kết quả kháng sinh đồ ............................................................................................. 38 4.6 Kết quả thử nghiệm thuốc ....................................................................................... 40 CHƢƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ ..................................................................... 42 5.1 Kết luận.................................................................................................................... 42 5.2 Đề nghị .................................................................................................................... 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO ............................................................................................. 43 PHỤ LỤC vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Diễn giải BA Blood Agar EMB Eosin Methylene Blue Agar KIA Kligler Iron Agar MC MacConkey Agar MHA Mueller Hinton Agar MR Methyl Red VP Voges ProsKauer NA Nutrient Agar NB Nutrient Broth MSA Mannitol Salt Agar TSA Tryptycase Soy Agar CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute CFU Colony Forming Unit CMT California Mastitic Test S.aureus Staphylococcus aureus E.coli Escherichia coli viii DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1 Chia 6 lô thuốc để thử nghiệm 21 2 Số lƣợng mẫu sữa 23 3 Đọc kết quả CMT 23 4 Giải thích kết quả CMT 23 5 Đặc tính sinh hóa đặc trƣng của vi khuẩn Staphylococcus aureus 24 6 Đặc tính sinh hóa đặc trƣng của vi khuẩn E.coli 28 7 Bảng đƣờng kính vòng vô khuẩn chuẩn của một số kháng sinh đối với vi khuẩn Staphylococcus aureus và Streptococcus spp 31 8 Bảng đƣờng kính vòng vô khuẩn chuẩn của một số kháng sinh đối với vi khuẩn E.coli 31 9 Tỉ lệ số bò sữa viêm vú đƣợc khảo sát bằng phƣơng pháp CMT 34 10 Tỉ lệ bò sữa bị viêm vú sau khi sử dụng thuốc bơm vú 35 11 Số lƣợng bò sữa bị viêm vú theo số vú 36 12 Mức độ viêm vú ở bò sữa đƣợc kiểm tra bằng phƣơng pháp CMT 37 13 Kết quả kiểm tra mẫu sữa 38 14 Kết quả phân lập vi khuẩn đối với mẫu sữa 38 15 Kết quả kháng sinh đồ đối với vi khuẩn Staphylococcus aureus 39 16 Kết quả kháng sinh đồ đối với vi khuẩn Escherichia coli 39 17 Kết quả phòng bệnh viêm vú cho bò sữa trong giai đoạn cạn sữa 40 ix DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Trang 1 Các yếu tố gây viêm vú bò 5 2 Quan hệ giữa các nguyên nhân gây viêm vú bò 5 3 Nhuộm Gram vi khuẩn Staphylococcus aureus 6 4 Vi khuẩn Staphylococcus aureus trên môi trƣờng thạch máu 6 5 Nhuộm Gram vi khuẩn E.coli 9 6 Nuôi bò sữa ở nông hộ Cần Thơ 20 7 Nuôi bò sữa ở nông hộ Sóc Trăng 20 8 Lau sạch bầu vú 22 9 Vắt sữa ra hết hoàn toàn 22 10 Sát trùng bằng Vime-Iodine 0,5% 22 11 Bơm thuốc bơm vú cạn sữa 22 12 Lấy mẫu sữa kiểm tra 24 13 Kiểm tra sữa bò bằng phƣơng pháp CMT 24 14 Vi khuẩn Staphylococcus aureus trên môi trƣờng MSA 26 15 Staphylococcus aureus sinh men catalase 26 16 Staphylococcus aureus làm đông huyết tƣơng thỏ 26 17 Phản ứng sinh hóa vi khuẩn E.coli 28 18 Vi khuẩn E.coli trên môi trƣờng EMB 28 19 Kháng sinh đồ vi khuẩn Staphylococcus aureus 30 20 Kháng sinh đồ vi khuẩn E.coli 30 x DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ Tên sơ đồ 1 Quy trình phân lập vi khuẩn Staphylococcus aureus 25 2 Quy trình phân lập vi khuẩn Streptococcus spp 27 3 Quy trình phân lập vi khuẩn E.coli 29 Trang xi CHƢƠNG 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, nuôi bò sữa nông hộ đã trở thành phổ biến tại các địa phương như Bình Dương, Long An, Thành phố Cần Thơ, Bến Tre, Sóc Trăng, … đã đạt đươc nhiều hiệu quả. So với chăn nuôi heo và gà, thì chăn nuôi bò sữa cho hiệu quả kinh tế cao và ổn định hơn. Chăn nuôi bò sữa đã mang lại cho người chăn nuôi nguồn thu nhập khá cao do sữa có giá trị dinh dưỡng cao nên nhu cầu sử dụng sữa và các sản phẩm từ sữa ngày càng tăng cao. Do đó, vấn đề đặt ra cho ngành chăn nuôi - thú y là phải đảm bảo đàn bò sữa khỏe mạnh để cung cấp nguồn sữa chất lượng cao cho con người. Song song với lợi nhuận to lớn từ sữa mang lại cho người chăn nuôi thì vấn đề dịch bệnh diễn biến ngày càng phức tạp hơn, làm cho việc chăn nuôi bò sữa gặp nhiều khó khăn và hạn chế. Một trong những bệnh làm ảnh hưởng trực tiếp đến sản lượng và chất lượng sữa bò là bệnh viêm vú bò sữa.Vì vậy, việc hạn chế bò sữa bị bệnh viêm vú là rất quan trọng và cấp thiết hiện nay. Được sự phân công của bộ môn Thú Y, Khoa Nông Nghiệp & Sinh học Ứng Dụng Trường Đại Học Cần Thơ và sự hỗ trợ của Công ty Cổ Phần Sản Xuất Kinh Doanh Vật Tư và Thuốc Thú Y Vemedim, chúng tôi tiến hành đề tài: “Đánh giá hiệu quả của một số loại thuốc phòng bệnh viêm vú bò sữa” nhằm mục tiêu đánh giá hiệu quả của thuốc bơm vú bò để phòng bệnh viêm vú trên bò sữa. 1 CHƢƠNG 2 CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nƣớc về bệnh viêm vú bò sữa 2.1.1 Tình hình nghiên cứu ngoài nƣớc Byarugaba et al. (2004), kết quả khảo sát 60 hộ nuôi bò sữa ở Uranda với tổng số bò đang cho sữa là 172 con bò tương ứng với 688 thùy vú được lấy mẫu để kiểm tra bằng phương pháp CMT cho thấy tỉ lệ bò dương tính là 61,3%, thùy vú viêm tiềm ẩn là 60,7%, đồng thời phân lập vi sinh vật trên mẫu sữa cho thấy tỉ lệ nhiễm E.coli (14,4%), Pseudomonas aeruginosa (1,2%), Staphylococcus aureus (11,19%), Staphylococcus spp (30,5%), Streptococcus (2%). Abdel – Rady và ctv (2009), kết quả kiểm tra 350 con bò khỏe mạnh đang cho sữa (khác nhau về giống, lứa tuổi, địa điểm sống nhưng giống nhau về điều kiện chăm sóc nuôi dưỡng) tại Assiut Governorate, Ai Cập bằng phương pháp CMT sau đó phân tích vi sinh các mẫu sữa để xác định tác nhân chính gây viêm vú được thực hiện từ tháng 6 năm 2006 đến tháng 7 năm 2007 thu được như sau tỉ lệ bò viêm vú tiềm ẩn chiếm 19,14%; tỉ lệ nhiễm Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, E.coli lần lượt là 52,50%; 31,25% và 16,25%. Mekibib và ctv (2010), kiểm tra 107 con bò đang cho sữa bằng phương pháp CMT tại thị trấn Holeta – Ethiophia từ tháng 11 năm 2008 đến tháng 4 năm 2009, kết quả tỉ lệ bò viêm vú lâm sàng và tiềm ẩn lần lượt là 22,40% và 48,60%; tỉ lệ thùy vú viêm lâm sàng và tiềm ẩn lần lượt là 10% và 34,80%. Qua phân tích vi sinh các mẫu sữa viêm cho thấy Staphylococcus aureus (47,10%), Staphylococcus âm tính với Coagulase (30,10%), Streptococcus (7,20%), E.coli (4,6%), Micrococcus species (3,30%), Klebsiella pneumonia (3,30%), Enterobacter aerogen (1,30%), Corynebacterium species (2%) và Bacillus (1,30%). Hashemi và ctv (2011), tiến hành kiểm tra 1545 con bò sữa tại khu vực trung tâm tỉnh Fars, phía Nam Iran bằng phương pháp CMT. Kết quả tỉ lệ bò bị viêm vú tiềm ẩn chiếm 42,50%; viêm vú lâm sàng chiếm 2,20%; tỉ lệ thùy vú viêm theo thể lâm sàng và tiềm ẩn lần lượt là 0,71% và 21,60%. Kết quả phân lập vi khuẩn trên các mẫu sữa viêm cho thấy vi khuẩn Staphylococcus aureus chiếm chủ yếu, kế đến là Streptococcus và E.coli. Shrestha và ctv (2012), kiểm tra 200 mẫu sữa thu thập từ 50 con bò sữa tại Bhaktapur, Nepal bằng phương pháp CMT. Kết quả bò bị viêm vú tiềm ẩn chiếm 52%, qua phân tích vi sinh những mẫu dương tính với CMT cho thấy tỉ lệ nhiễm Staphylococcus spp (5%), Streptococcus spp (27%), E.coli (1%), Corynebacterium (8%), Salmonella (4%) và Enterobacter spp (1%). 2 2.1.2 Tình hình nghiên cứu trong nƣớc Nguyễn Văn Phát et al. (1999), khảo sát đàn bò đang cho sữa của 80 hộ chăn nuôi thuộc Huyện Bình Chánh, TP. Hồ Chí Minh vào hai thời điểm tháng 3/1999 và tháng 4/ 1999, kết quả cho thấy trung bình hàng tháng có 2,54% bò đang cho sữa bị viêm vú lâm sàng và 26,02% bò bị viêm vú tiềm ẩn. Những loại vi khuẩn chính gây nên bệnh gồm: Staphylococcus aureus, Streptococcus spp và E.coli. Những vi khuẩn này nhạy cảm với Norfloxacin, Gentamycin và Cephalosporin. Nguyễn Thị Kim Loan (2000), phân lập vi sinh trên 100 mẫu sữa bò viêm vú tiềm ẩn ở 4 khu vực Thuận An, Bến Cát – Bình Dương, Hóc Môn –TP. Hồ Chí Minh và trại bò An Phước, kiểm tra thấy: Streptococcus agalactiae (49%), Staphylococcus aureus (33%), E.coli (20%), Enterobacter (4%). Nguyễn Đức Lục (2003), khảo sát tình hình bệnh viêm vú trên đàn bò của một số hộ chăn nuôi thuộc xí nghiệp bò sữa An Phước, ghi nhận kết quả như sau: tỉ lệ bò bị viêm vú tiềm ẩn là 65,36%, trong đó mức CMT 1+ là 55,30%, CMT 2+ là 41,01%, CMT 3+ là 3,69%. Tỉ lệ viêm vú tiềm ẩn đối với bò viêm 1 vú là 15,46%; viêm 2 vú là 32,42%; viêm 3 vú là 26,97%; viêm 4 vú là 25,15%. Nguyễn Ngọc Thanh Hà (2004), khảo sát 638 bầu vú trên 229 con bò trên địa bàn TP. Cần Thơ, kết quả khảo sát có 269 mẫu CMT dương tính, tỉ lệ 42,16%. Kết quả phân lập vi khuẩn cho thấy tỉ lệ nhiễm Staphylococcus aureus chiếm 22,26%, E.coli là 8,62% và Streptococcus agalactiae 5,8%. Kết quả nuôi cấy, phân lập vi khuẩn E.coli, Staphylococcus aureus của Nguyễn Thị Thu Thảo (2008) trong sữa và môi trường vắt sữa ở một số hộ chăn nuôi bò sữa thuộc TP. Cần Thơ cho thấy tỉ lệ nhiễm E.coli, Staphylococcus aureus từ các mẫu sữa lần lượt là 9,15% và 18,64% và từ môi trường lần lượt là 33,58% và 29,10%. Nguyễn Minh Trí (2008), khảo sát tỉ lệ viêm vú trên đàn bò sữa thuộc Trung tâm Giống Nông Nghiệp TP. Cần Thơ thu được kết quả như sau tỉ lệ bò viêm vú (52.78%), trong đó tỉ lệ viêm vú tiềm ẩn (41,67%). Kết quả phân lập vi khuẩn cho thấy tỉ lệ nhiễm cao nhất là Staphylococcus aureus (47,06%), E.coli (21,57%) và Streptococcus spp (17,65%). Huỳnh Thị Mỹ Hạnh (2010), khảo sát tình hình viêm vú trên đàn bò sữa tại TP. Cần Thơ, kết quả ghi nhận như sau: tỉ lệ viêm vú lâm sàng (2,41%), tỉ lệ viêm vú tiềm ẩn (27,71%). Tỉ lệ nhiễm vi khuẩn Staphylococcus aureus trong sữa (71,42%), E.coli (59,18%), Streptococcus spp (2,04%). Kết quả kiểm tra kháng sinh đồ cho thấy Staphylococcus aureus nhạy cảm với Amoxicillin (91,67%), Fosfomycin (75%), Enrofloxacin (66,67%), Norfloxacin (58,33%), E.coli nhạy cảm với Amoxicillin (100%), Fosfomycin (88,89%), Gentamycin (88,89%), Doxycycline (44,44%), Enrofloxacin (66,67%), Norfloxacin (77,78%). 3 Nguyễn Minh Tiến (2012), thử nghiệm hiệu quả điều trị bệnh viêm vú, viêm tử cung, viêm khớp trên bò sữa của thuốc Cequin 750 tại TP. Cần Thơ, kết quả ghi nhận như sau: tỉ lệ bò viêm vú (78,79%), tỉ lệ thùy vú viêm (57,83%). Vi khuẩn gây bệnh viêm vú chủ yếu là E.coli (85,71%), Streptococcus spp (57,14%), Staphylococcus aureus (42,86%). Kết quả kiểm tra kháng sinh đồ cho thấy Staphylococcus aureus nhạy cảm với Ceftiofur (81,82%), Doxycycline (81,82%), E.coli nhạy cảm với Marbofloxacin (90,48%), Norfloxacin (85,71%), còn vi khuẩn Streptococcus spp nhạy cảm với Doxycycline (83,33%), Florfenicol (83,33%), Fosfomycin (66,67%). Nguyễn Hoàng Nhẩn (2012), khảo sát tình hình chăn nuôi và bệnh viêm vú trên đàn bò sữa tại hợp tác xã bò sữa Long Hòa thành phố Cần Thơ, kết quả khảo sát 72 con bò đang vắt sữa trong đó có 37 con bò bị viêm vú thể cận lâm sàng chiếm 51,39%, 2 con bò viêm vú lâm sàng chiếm 2,78%. Tỉ lệ nhiễm E.coli, Staphylococcus aureus và Streptococcus agalactiae từ các mẫu sữa phân tích lần lượt là 17,95%; 64,10% và 10,26%. Tỉ lệ nhiễm E.coli, Staphylococcus aureus trong mẫu môi trường phân tích lần lượt là 53,85% và 58,12%, không tìm thấy vi khuẩn Streptococcus agalactiae trong mẫu môi trường. Kết quả kiểm tra kháng sinh đồ cho thấy vi khuẩn E.coli nhạy cảm cao với Colistin, Neomycin, Norfloxacin. Staphylococcus aureus nhạy cảm cao với Neomycin, Norfloxacin, Oxytetracyline, Cephalexin. Streptococcus agalactiae nhạy cảm cao với Amoxcillin, Norfloxacin và đề kháng 100% với Colistin. 2.2 Cấu tạo tuyến sữa, bầu vú và chu kỳ tiết sữa Tuyến sữa hay còn gọi là tuyến vú là cơ quan sản xuất sữa của bò. Tuyến sữa bao gồm mô tuyến, mô liên kết, hệ cơ, các mạch máu và thần kinh. Bầu vú bò gồm có 4 vú phân biệt, 2 vú trước và 2 vú sau. Nửa vú sau thường lớn hơn nửa trước và chứa đến 60% tổng lượng sữa. Giữa các vú có các vách ngăn bằng mô liên kết chạy theo chiều ngang và dọc chia bầu vú thành các phần độc lập với nhau. Núm vú dạng hình trụ tròn hoặc hình nón cụt, ngắn dài tuỳ giống và tùy cá thể. Sau khi đẻ, tuyến sữa bắt đầu tiết sữa liên tục cho đến khi cạn sữa chuẩn bị cho kỳ đẻ kế tiếp. Một giai đoạn như vậy gọi là chu kỳ tiết sữa. Một chu kỳ tiết sữa của bò sữa thường kéo dài 10 tháng (305 ngày). Thời kỳ này gọi là giai đoạn cạn sữa, thường kéo dài từ 45 -60 ngày. Trong một chu kỳ tiết sữa, lượng sữa thường đạt đến đỉnh cao (vào tháng thứ 2 - 3) rồi giảm dần trở lại. Trong một đời bò sữa, bò thường đạt năng suất cao nhất vào chu kỳ thứ 3 (Vương Ngọc Long, 2007). 2.3 Sơ lƣợc về bệnh viêm vú Viêm vú là sự viêm của một hay nhiều thùy vú với sự hiện diện của một hay nhiều loài vi khuẩn trong mô vú dẫn đến sự gia tăng số lượng tế bào thân (somatic cells) trong sữa, đặc biệt là tế bào bạch cầu, đồng thời làm thay đổi tính chất vật lý và hóa học của sữa, hậu quả là làm giảm sản lượng sữa, nghiêm trọng có thể gây chết thú (Phạm Hồng Phương, 2005). 4 2.3.1 Nguyên nhân gây bệnh viêm vú Theo Vương Ngọc Long (2007), có ba nguyên nhân chính gây bệnh viêm vú ở bò sữa: Vật nuôi: do bò sữa có bầu vú quá to, núm vú quá dài thường gặp nhất trên bò sữa cao sản. Trong quá trình vắt sữa làm xây xát, bầu vú bị tổn thương tạo điều kiện cho vi khuẩn xâm nhập vào cơ thể qua các vết thương hở này. Môi trƣờng: do quy trình chăn nuôi vệ sinh kém, chuồng trại không thông thoáng, thiếu ánh sáng, mật độ nuôi dầy, dinh dưỡng thì kém, do thao tác vắt sữa không đúng và không đảm bảo yêu cầu vệ sinh khi vắt sữa cho bò sữa. Vi khuẩn: do nhiều loại vi khuẩn và nấm gây bệnh xâm nhập vào tuyến qua các vết thương ở bầu vú, núm vú. Sữa là môi trường rất tốt cho vi khuẩn và nấm sinh sôi phát triển nhanh gây ra các ổ viêm, phá hoại các tổ chức tuyến sữa. Các loài vi khuẩn gây bệnh viêm vú thường gặp là Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, E.coli. Hình 1. Các yếu tố gây viêm vú bò Hình 2. Quan hệ giữa các nguyên nhân gây bệnh viêm vú bò (Hình 1. http://www.sonongnghiep.hochiminhcity.gov.vn) (Hình 2. http://www.vcn.vnn.vn/Pictures/Upload_VCN/quytrinh/QT_2008/tc__so6.jpg) 2.3.2 Vi khuẩn gây bệnh viêm vú bò sữa 2.3.2.1 Vi khuẩn Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus (S.aureus) là loại vi khuẩn sinh mủ điển hình, phân bố rộng rãi trong thiên nhiên. Da và niêm mạc là nơi cư trú chủ yếu của tụ cầu khuẩn, ngoài ra còn có các tổ chức khác như lông, móng, tuyến mồ hôi, tuyến mỡ, lỗ chân lông, mũi, mắt, họng, niêm mạc đường tiêu hóa (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977). Ngoài ra, Staphylococcus aureus còn gây bệnh mạnh đối với tuyến vú từ thể tiềm ẩn đến thể cấp tính. Các vi khuẩn xâm nhập và phát triển trong ống dẫn sữa, đặc biệt là 5 những nơi có tổn thương hoặc viêm ở lổ tiết đầu núm vú. S.aureus truyền từ nơi bị nhiễm sang những núm vú khác thông qua các phương tiện vắt sữa, khăn lau bầu vú và tay người vắt sữa (Phùng Quốc Quảng, 2001). Đặc điểm hình thái: Đường kính 0,5 – 1,5 µm, gồm nhiều cầu khuẩn gắn liền nhau tạo thành hình giống như chùm nho, bắt màu Gram dương, không có lông, không có nha bào, thường không có vỏ nhày (Asperger, 1994). Đặc tính nuôi cấy và sinh hóa S.aureus chịu được nồng độ muối từ 10 – 15%, thích hợp điều kiện hiếu khí hoặc kỵ khí (hiếu khí tùy nghi). Nhiệt độ thích hợp 30-37oC, pH tốt nhất là 7,0 – 7,5 (Asperger, 1994). S.aureus dễ mọc trên các môi trường nuôi cấy thông thường như môi trường nước thịt, môi trường thạch thường, thạch máu, môi trường Gelatin Chuyển hoá đường: Tụ cầu có khả năng lên men đường: glucose, lactose, levulose, mannose, mannit, saccarose, không lên men đường galactose. Phản ứng catalase dương tính (Nguyễn Như Thanh et al., 1997). Môi trường thạch Mannitol Salt Agar (MSA): Sau 12 – 24 giờ S.aureus mọc thành từng đám nhỏ, tròn, màu vàng, rìa gọn, khô, môi trường thạch chuyển sang màu vàng. Môi trường Gelatin: S.aureus làm tan Gelatin rất rõ (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977). Môi trường thạch máu: S.aureus làm dung huyết. S.aureus làm đông huyết tương thỏ, sinh catalase, đây là điểm phân biệt với liên cầu khuẩn. Tụ cầu khuẩn chịu được điều kiện khô, nóng, ở nhiệt độ 50oC trong vòng 30 phút vẫn sống (Trần Thị Phận, 2004). Hình 3. Nhuộm Gram vi khuẩn Hình 4. Vi khuẩn Staphylococcus aureus trên môi trƣờng thạch máu Staphylococcus aureus (Hình 3. http://24.media.tumblr.com/tumblr_ltmzk1LgN81r4zla1o1_400.jpg) (Hình 4. http://www.impe-qn.org.vn/impe-qn/vn/portal/InfoPreview.jsp?ID=2745) 6 Sức đề kháng S.aureus đề kháng với nhiệt độ và hóa chất cao hơn các vi khuẩn không có nha bào khác. Nhiệt độ 80oC diệt vi khuẩn trong 1 giờ. Đun sôi 100 oC chết sau 1 - 2 phút. S.aureus dễ bị tiêu diệt bởi các thuốc sát trùng thông thường nhưng đề kháng với sự khô và sự đóng băng. Ở nơi khô ráo, S.aureus sống từ 4 - 5 tháng (Trần Thị Phận, 2004). Tính gây bệnh Nhiễm khuẩn ngoài da: S.aureus làm mưng mủ các vết thương, nơi tổn thương trên da, làm các tổ chức bị sưng, tạo thành ổ mủ (abcess). Nhiễm khuẩn huyết: từ các ổ nhiễm trùng ngoài da, S.aureus xâm nhập vào máu gây chứng huyết nhiễm mủ và theo máu đi tới các cơ quan gây nên các ổ abcess. S.aureus là nguyên nhân gây viêm xoang, viêm amidan, viêm vú cho người (Trần Thị Phận, 2004). Một số nghiên cứu gần đây về tính nhạy cảm của kháng sinh đối với vi khuẩn S.aureus gây bệnh viêm vú trên bò cho thấy S.aureus nhạy cảm với Ciprofloxacin (95,00%), Gentamycin (95,00%), Neomycin (100%), Streptomycin (80,00%) (Nguyễn Ngọc Thanh Hà, 2004). Theo Hồ Như Thủy (2006), S.aureus nhạy cảm với Amoxycillin (95,00%), Cefotaxime (85,00%), Ofloxacin (85,00%), Ciprofloxacin (55,00%), Norfloxacin (85,00%). Theo Võ Thị Huyền Trân (2007), S.aureus nhạy cảm với Ciprofloxacin (85,36%), Neomycin (85,36%), Norfloxacin (95,12%), Gentamycin (87,80%). Các kháng sinh có tỷ lệ nhạy cảm thấp như: Tetracycline (41,46%), Ampicillin (36,95%), S.aureus đã đề kháng với Erythomycin (70,73%). 2.3.2.2 Vi khuẩn Streptococcus spp Streptococcus spp là những cầu khuẩn xếp thành chuỗi, uốn khúc dài ngắn khác nhau. Liên cầu có khắp nơi trong tự nhiên như đất, nước, không khí...Trong cơ thể động vật và người thì sống hoại sinh ở đường tiêu hóa, hô hấp (mũi), ở âm đạo và thường thấy trên da, niêm mạc (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977). Streptococcus spp là tác nhân gây bệnh cần đến mô tuyến vú để phát triển và nhân lên. Vi khuẩn gây viêm tiềm ẩn, đôi khi thành bệnh viêm vú thể cấp tính. Về cơ bản việc lây truyền bệnh là do người vắt sữa. Vắt sữa không cạn làm tăng mức độ trầm trọng của bệnh (Phùng Quốc Quảng, 2001). Liên cầu khuẩn có hình cầu hoặc hình bầu dục, đường kính có khi đến 1 µm, đôi khi có vỏ, bắt màu Gram dương, không di động. Liên cầu xếp thành chuỗi vì nó phân chia trong mặt phẳng thẳng góc trục của chuỗi, chiều dài của chuỗi tùy thuộc vào điều kiện môi trường (Nguyễn Như Thanh et al, 1997). Đặc tính nuôi cấy và sinh hóa Streptococcus spp là vi khuẩn hiếu khí hay kỵ khí tùy tiện, mọc tốt ở tất cả môi trường phần lớn các liên cầu gây bệnh phát triển thích hợp ở 37oC. Môi trường nước thịt sau 7 24 giờ nuôi cấy, môi trường trong, đáy ống có cặn. Môi trường thạch thường: vi khuẩn hình thành khuẩn lạc dạng S, khuẩn lạc nhỏ, tròn, lồi, bóng, màu hơi xám. Khi làm tiêu bản, liên cầu không xếp thành chuỗi dài mà thường hình thành chuỗi ngắn. Chuyển hóa đường: lên men đường Glucose, Lactose, Saccarose, Salixin. Không lên men đường: Mannit, Inulin. Cho phản ứng Indole, H2S, Catalase, Coagulase âm tính (Nguyễn Như Thanh, 1997). Sức đề kháng Đề kháng kém đối với nhiệt độ và hóa chất: ở 70oC chết trong vòng 35 - 40 phút, ở 100oC chết trong một phút. Các chất sát trùng thông thường dể tiêu diệt được liên cầu (Nguyễn Như Thanh, 1997). Tính gây bệnh Trong tự nhiên: gây bệnh viêm vú truyền nhiễm ở bò sữa. Ở dê, gây chứng nung mủ, viêm vú, viêm phổi và viêm ngoại tâm mạc…Trong phòng thí nghiệm: Thỏ là động vật dễ cảm thụ nhất. Nếu tiêm liên cầu khuẩn vào dưới da cho thỏ sẽ thấy áp xe tại nơi tiêm. Nếu tiêm liên cầu khuẩn vào tĩnh mạch hay phúc mạc thỏ chết nhanh do nhiễm khuẩn huyết. Ngoài ra còn có thể dùng chuột nhắt để gây bệnh (Nguyễn Như Thanh, 1997). 2.3.2.3 Vi khuẩn Escherichia coli Escherichia coli (E.coli) thuộc họ Enterobacteriaeceae được Escherich người Đức phân lập đầu tiên và đưa ra đặc điểm của vi khuẩn vào năm 1885. E.coli là loài quan trọng được tìm thấy trong phân (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977). Vi khuẩn dạng Coli gồm E.coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca và Enterobacter aerogens. Bệnh do nuôi dưỡng bò trong môi trường không vệ sinh trong thời kỳ cạn sữa, trong khu vực ô nhiễm vắt sữa trễ khi bò bắt đầu cho sữa (Phạm Hồng Phương, 2005). Đặc điểm hình thái E.coli là trực khuẩn hình gậy ngắn, kích thước là 2 x 0,6 – 3 x 0,6 µm. Trong cơ thể có hình cầu trực khuẩn, đứng riêng lẻ, đôi khi xếp thành chuỗi ngắn. Phần lớn E.coli có khả năng di động do có lông ở xung quanh thân. Vi khuẩn không sinh nha bào, có thể có giáp mô. Vi khuẩn bắt màu Gram âm, có thể bắt màu đều hay sẩm ở hai đầu, khoảng giữa nhạt hơn. Nếu lấy vi khuẩn từ khuẩn lạc nhầy để nhuộm có thể thấy giáp mô, còn khi soi tươi không thấy được (Nguyễn Như Thanh, 1997). Đặc tính nuôi cấy và sinh hóa E.coli là trực khuẩn hiếu khí và yếm khí tùy tiện, nhiệt độ thích hợp là 37oC, có thể thay đổi từ 10 – 46oC. Mọc dễ dàng trên môi trường Mac Conkey Agar (MC), Eosin 8 Methylene Blue Agar (EMB), Nutrient Broth (NB). Một số hóa chất ức chế sự phát triển của E.coli như chlorine và dẫn xuất của nó (Nguyễn Thanh Bảo, 2006). Trên thạch thường, sau 24 giờ thành những khuẩn lạc tròn, ướt, không trong suốt, màu tro, trắng nhạt, hơi lồi đường kính 2 – 3 mm. Nuôi lâu khuẩn lạc gần như nâu nhạt và mọc rộng ra. Trong môi trường nước thịt E.coli phát triển làm môi trường rất đục, có cặn màu tro nhạt lắng xuống đáy, đôi khi có mảng màu xám nhạt trên mặt, môi trường có mùi thối. Chuyển hóa đường: E.coli lên men sinh hơi các loại đường fructose, glucose, lactose, levulose, galsctose, xylose, ramnose, manitol, H2S âm tính (Nguyễn Như Thanh, 1997). Hình 5. Nhuộm Gram vi khuẩn E.coli (http://www.phanvienthuy.com.vn/others/uploadimages/E_coli_2000_P7201172.jpg) Môi trường EMB vi khuẩn E.coli có khuẩn lạc to tròn, hơi lồi, bóng, màu tím bầm, có ánh kim (Trần Thị Phận, 2004). Trên môi trường MC vi khuẩn E.coli hình thành khuẩn lạc to tròn đều, hơi lồi, màu hồng nhạt, kích thước 2 - 3 mm (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977). Các phản ứng khác: E.coli thường sinh Indole, Methyl Red dương tính, VogesProskauer âm tính, không có khả năng sử dụng citrate, khử nitrate thành nitrite và lên men decarboxylase với arginine, lysine (Trần Linh Thước, 2005). Sức đề kháng Vi khuẩn E.coli không hình thành nha bào nên sức đề kháng yếu, bị diệt ở nhiệt độ 55oC trong vòng một giờ, ở 60oC sống được 15 – 30 phút. Các chất sát trùng như acid phenic, clorua thủy ngân, formol có thể diệt E.coli trong vòng 5 phút, nhưng vi khuẩn đề kháng mạnh với sự sấy khô (Lê Văn Tạo, 2006). Tuy nhiên ở môi trường bên ngoài E.coli độc có thể tồn tại được 4 tháng (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977). 9 Tính gây bệnh Hầu hết các loài động vật đều mẫn cảm với bệnh: các loài gia súc, gia cầm, chim, bò sát, đều có thể bị bệnh do E.coli. Chúng bị nhiễm bệnh qua nhiều con đường khác nhau, nhưng chủ yếu là qua đường tiêu hoá. E.coli có sẵn trong ruột động vật nhưng chỉ tác động gây bệnh khi sức đề kháng của con vật giảm sút do chăm sóc nuôi dưỡng, bị cảm lạnh hay cảm nóng, mắc bệnh truyền nhiễm hay không truyền nhiễm, bệnh kí sinh trùng. E.coli thường gây bệnh cho gia súc mới đẻ từ 2 - 3 ngày hoặc 4 - 8 ngày (Đào Trọng Đạt et al., 2001). Một số nghiên cứu gần đây về tính nhạy cảm của kháng sinh đối với vi khuẩn E.coli gây bệnh viêm vú trên bò cho thấy E.coli nhạy cảm với Ciprofloxacin (100%), Gentamycin (100%), Neomycin (100%), Ofloxacin (100%), Kanamycin (100%), Ampicillin (86,67%), Bactrim (80,00%) (Nguyễn Ngọc Thanh Hà, 2004). Theo Hồ Xuân Ngân (2007), E.coli nhạy cảm với Gentamycin (100%), Norfloxacin (96,40%), Bactrim (60,71%), nhạy cảm trung bình với Neomycin (71,43%), E.coli đề kháng cao với Ampicillin (96,40%). 2.3.3 Các dạng viêm vú 2.3.3.1 Viêm vú tiềm ẩn Bệnh viêm vú tiềm ẩn rất phổ biến và gây những thiệt hại kinh tế rất lớn vì nó làm giảm sản lượng sữa và chất lượng sữa. Bệnh này nguy hiểm ở chỗ là nó duy trì mầm bệnh, lây lan cho những bò khác mà người chăn nuôi vẫn không biết. Bò ít có triệu chứng bên ngoài, nhưng thường thì kém ăn, thỉnh thoảng sữa bò bị tủa và không có biểu hiện triệu chứng ở bầu vú (Vương Ngọc Long, 2007). 2.3.3.2 Viêm vú lâm sàng Viêm vú thể thanh dịch (Mastitis serosa) Triệu chứng: tuyến vú sưng to ở một thùy hay toàn bộ bầu vú. Khi sờ vào vú có cảm giác nóng, lúc đầu con vật không thấy đau, về sau ấn mạnh tay vào bầu vú, bò bị đau. Lúc đầu sữa biến đổi không rõ về sau khi bệnh lan rộng trong tuyến sữa và bộ phận tiết sữa thì sữa sẽ loãng và lợn cợn. Con vật biểu hiện trạng thái đau nhẹ, giảm ăn, sốt 39,5-40oC, ủ rũ mệt nhọc, bệnh xuất hiện sau khi đẻ 1 - 2 tuần (Trần Tiến Dũng et al., (2002). Nguyên nhân: do Staphylococcus, Streptococcus, E.coli đi vào tổ chức liên kết của bầu vú khi bầu vú bị xây xát. Bệnh có thể kế phát do viêm tử cung hoặc viêm nội mạc tử cung, vi khuẩn vào máu và đi đến tuyến vú (Vương Ngọc Long, 2007). Chẩn đoán: chẩn đoán phân biệt với bệnh bầu vú thủy thũng. Ở bệnh này bầu vú sưng, nóng, đỏ, đau, hạch lâm ba vú cũng sưng to. Xét nghiệm sữa, kiểm tra vi khuẩn gây bệnh (Vương Ngọc Long, 2007). 10 Viêm vú thể Cata (Mastitis Catarrhalis) Triệu chứng: đặc trưng là tế bào thượng bì bị tróc ra, ở những ổ viêm có dịch thẩm xuất. Sữa bò cặn hoặc cục sữa vón do dịch thẩm xuất và bạch cầu. Thể viêm vú này thường không làm bầu vú bò sưng nhưng làm cho núm vú tăng thể tích do biểu bì dầy lên. Nguyên nhân: do Staphylococcus, Streptococcus, E.coli xâm nhập vào, do cơ vòng đầu vú khép không kín làm sữa rò rỉ ra ngoài, vi khuẩn từ nền chuồng, tay người vắt sữa, khăn lau vú bẩn theo đó xâm nhập vào bể sữa đến các tuyến vú gây viêm. Chẩn đoán: chẩn đoán thông qua sờ nắn, đặc biệt là xem xét kích thước núm vú. xét nghiệm sữa, kiểm tra vi khuẩn gây bệnh (Vương Ngọc Long, 2007). Viêm vú có mủ ( Mastitis purulenta) Nguyên nhân: do kế phát viêm Cata, do vi khuẩn đa số là Streptococcus, Staphylococcus, E.coli và các vi khuẩn gây mủ khác. Bệnh có tính lây lan khi nuôi nhốt chung bò bệnh với bò khỏe. Triệu chứng: Thể cấp tính: thùy vú sưng, nóng, đỏ, đau, lượng sữa giảm và ngưng hẳn. Sữa loãng màu hồng nhạt do sung huyết và xuất huyết tuyến sữa. Trong sữa có những lợn cợn và có những dịch mủ. Con vật sốt 40 - 41oC, mạch nhanh, ủ rũ kém ăn. Thể mãn tính: thú bệnh qua các thời kỳ cấp tính sau 3 - 4 ngày trở thành mãn tính. Các triệu chứng trên giảm dần, bầu vú giảm hiện tượng sưng đỏ, giảm đau nhưng lượng sữa vẫn ít và loãng màu hồng nhạt. Chẩn đoán: ngoài chẩn đoán triệu chứng lâm sàng và biến đổi chất lượng sữa, chẩn đoán vi khuẩn học có tính quyết định. Nếu kiểm tra dưới kính hiển vi thấy nhiều liên cầu trùng, tụ cầu trùng hoặc các vi khuẩn khác thì có thể xác định là viêm có mủ. Chuỗi vi khuẩn dài hay ngắn tùy thuộc vào thời kỳ mắc bệnh. Bệnh cấp tính thì chuỗi ngắn, mãn tính thì chuỗi dài (Trần Tiến Dũng et al., (2002). Viêm vú thể áp xe (Abcessus uberi) Nguyên nhân: tái phát của viêm vú có mủ, khi đường tiết sữa bị tắt thì bọc mủ hình thành. Triệu chứng: thùy vú sưng đỏ, nóng, đau, sờ thấy bùng nhùng bên trong. Nếu bọc mủ cạn thì thấy rõ, nếu có nhiều bọc mủ thì trên bề mặt thùy vú có nhiều chỗ phồng lên, lượng sữa giảm, chất lượng sữa thay đổi. Sữa tiết ra có mủ khi tuyến vú bị nhiễm mủ, nếu bọc mủ to thì bầu vú vỡ mủ, bò đi lại khó khăn. Chẩn đoán: dựa vào triệu chứng cục bộ và sự thay đổi thành phần sữa, xử lý bọc mủ kịp thời nếu không sẽ dẫn đến huyết nhiễm mủ (Vương Ngọc Long, 2007). 11 Viêm vú có máu ( Mastitis haemorrhagica) Nguyên nhân: do kế phát viêm thanh dịch, viêm cata, cũng có thể là triệu chứng nhiễm trùng toàn thân. Triệu chứng: thường ở thể cấp tính ảnh hưởng một hoặc cả tuyến vú, con vật sốt 40 41oC, ủ rủ, kém ăn hoặc bỏ ăn. Bầu vú bệnh sưng to rõ rệt, có đám tụ huyết đỏ sẫm, con vật đau đớn khi ấn tay vào hay khi vắt sữa. Sữa loãng có màu hồng hoặc đỏ như máu, có những mảnh sữa vón lại. Chẩn đoán: dựa vào sự biến đổi của bầu vú, sữa và dựa vào triệu chứng toàn thân. Theo nhận định của Nguyễn Hữu Ninh (1994) thì bệnh tiến triển nhanh, biến chứng thường gặp là nhiễm trùng máu và bò bệnh sẽ chết sau 7 - 9 ngày (trích dẫn Vương Ngọc Long, 2007). 2.3.4 Một số phƣơng pháp chẩn đoán bệnh viêm vú Chẩn đoán lâm sàng: những trường hợp viêm nặng có thể chẩn đoán bằng mắt và sờ nắn bầu vú. Cần chú ý đến trạng thái sữa như vón cục, màu hơi vàng có mủ lẫn máu đều là những dấu hiệu của viêm vú (Trần Tiến Dũng et al., 2002). Chẩn đoán bằng phương pháp CMT (California Mastitic Test): xét nghiệm dựa trên tác động phá hủy màng tế bào của thuốc thử Leucocytest, sau đó thuốc gắn với acid derocyribonucleic được giải phóng ra và làm biến đổi trạng thái ban đầu của sữa. Xét nghiệm được xem là dương tính khi trong 1ml sữa có trên 500000 tế bào ( Phùng Quốc Quảng, 2001). Chẩn đoán vi khuẩn: phân lập vi khuẩn từ sữa là phương pháp tốt nhất để chẩn đoán bệnh viêm vú. Dùng phép thử CMT để chọn bầu vú dùng nuôi cấy. Mẫu sữa phải được làm lạnh ngay để ngăn chặn vi khuẩn môi trường phát triển (Asberger, 1994). 2.4 Quy trình cạn sữa Theo Vương Ngọc Long (2007), cạn sữa là một thời gian quan trọng trong chu kỳ sản xuất sữa của bò sữa. Nhiều người chăn nuôi thường có quan niệm sai lầm về việc chăm sóc bò trong thời gian cạn sữa hoặc khai thác quá mức, thời gian cạn sữa ngắn, không có đủ thời gian cho bò hồi phục và chuẩn bị cho kỳ vắt sữa kế tiếp. Giai đọan cạn sữa là quan trọng vì:  Sự hồi phục của tuyến vú sau thời gian cho sữa kéo dài.  Thiết lập lại sự cân bằng thần kinh thể dịch.  Tích lũy chất dinh dưỡng chuẩn bị cho chu kỳ sản xuất sữa kế tiếp nhất là chuẩn bị cho việc hình thành sữa đầu.  Tập trung dưỡng chất cho sự phát triển của bào thai trong hai tháng cuối (thời gian thai phát triển nhanh nhất). 12  Thời gian xử lý và điều trị bệnh viêm vú đặc biệt là các bệnh viêm vú lây nhiễm gây ra do các vi khuẩn nhóm Streptococcus. 2.4.1 Thời gian cạn sữa Thời gian cạn sữa tốt nhất ở bò là 2 tháng. Đối với bò tơ và bò cao sản thì thời gian này có thể kéo dài hơn. Người ta nhận thấy thời gian cạn sữa quá ngắn sẽ ảnh hưởng trọng lượng sơ sinh của bê, chất lượng sữa đầu (vì thế bê dễ bệnh hơn, sức đề kháng kém hơn), năng suất giảm. 2.4.2 Phƣơng pháp cạn sữa Nguyên tắc cơ bản của cạn sữa là làm ngừng quá trình tiết sữa (bằng các biện pháp tác động lên hệ thần kinh thể dịch liên quan đến quá trình tiết sữa, thay đổi chế độ dinh dưỡng). Một vấn đề mà người chăn nuôi cần phải chú ý là trong giai đọan cạn sữa, nguy cơ bò bị viêm vú cũng lớn như trong giai đọan bò vắt sữa nhưng nguy hiểm hơn vì không được quan sát, kiểm tra hằng ngày. Vì vậy phải chú ý quan sát bầu vú bò trong suốt thời gian bò cạn sữa để can thiệp đúng lúc. Có 2 phương pháp cạn sữa: 2.4.2.1 Cạn sữa chậm Phương pháp này thường áp dụng với bò có năng suất đang còn cao (trên 10kg/ con/ ngày) và nhất là đối với bò đã bị bệnh viêm vú trong gian đoạn vắt sữa. Khi bò bắt đầu được cạn sữa tiến hành các bước sau:  Tác động vào phản xạ tiết sữa của bò: thay đổi địa điểm, thời gian, người vắt sữa.  Giảm dần số lần vắt sữa: từ 2 lần/ ngày xuống 3 lần/ 2 ngày xuống 1 lần/ ngày rồi 2 ngày vắt 1 lần.  Thay đổi chế độ dinh dưỡng: giảm lượng thức ăn tinh và thay thế dần bằng thức ăn xanh.  Khi bò đã có mức sản xuất thấp nhất (1 - 2 kg/con/ngày) thì tiến hành cạn sữa hẳn: vắt thật cạn sữa, sát trùng núm vú, tiếp tục giảm thức ăn và nước uống; hằng ngày phải tiếp tục sát trùng núm vú; tiếp tục kiểm tra 1 - 2 ngày nếu thấy sữa không xuống, bầu vú không sưng đỏ thì sát trùng bầu vú cẩn thận bằng dung dịch sát trùng sau đó bơm một ống thuốc bơm vú cạn sữa (đây là loại đặc trị sử dụng trong giai đoạn cạn sữa, vì thời gian tồn lưu của thuốc trong mô tuyến vú đến 30 ngày) vào mỗi thùy vú bò và chuyển bò vào nhóm bò cạn sữa. Trong trường hợp sữa vẫn còn xuống, bầu vú sưng thì phải tiếp tục làm lại từ khâu vắt cạn sữa và cho nhịn ăn, uống triệt để. 2.4.2.2 Cạn sữa nhanh Phương pháp này thường áp dụng với bò đã có năng suất sữa thấp (dưới 10kg/ con/ 13 ngày). Tuy nhiên hiện nay, người ta áp dụng phương pháp này phổ biến hơn và hạn chế phương pháp cạn sữa chậm (vì kéo dài thời gian và áp dụng chế độ giảm thức ăn sẽ ảnh hưởng đến quá trình tích lũy dưỡng chất và nuôi dưỡng thai). Phương pháp tiến hành cũng tương tự như phương pháp cạn sữa chậm nhưng thời gian rút ngắn lại. Việc tiến hành hạn chế thức ăn và nước uống sẽ thực hiện triệt để hơn như giảm thức ăn tinh, giảm thức ăn thô xanh chỉ cho ăn thức ăn thô khô (cỏ khô, rơm). Hiện nay, nhờ vào các loại kháng sinh mới có hiệu quả hơn, người ta áp dụng phương pháp cạn sữa cấp tốc. Lưu ý là phương pháp này chỉ áp dụng với bò không bị viêm vú và đòi hỏi người chăn nuôi phải có kinh nghiệm. Các bước tiến hành như sau:  Nhịn uống: bò được cho nhịn uống nước nữa ngày.  Nhịn ăn: giảm toàn bộ thức ăn tinh, thô xanh và cho ăn thức ăn thô khô hạn chế (khoảng 3 - 4kg vật chất khô/con/ngày).  Ngừng vắt sữa: ngừng vắt sữa và bơm thuốc bơm vú cạn sữa vào bầu vú (mỗi thùy vú một ống).  Quan sát theo dõi: thường xuyên quan sát và sát trùng các núm vú. 2.4.3 Kiểm soát bệnh viêm vú ở bò cạn sữa Theo Vương Ngọc Long (2007), trong chương trình kiểm soát và hạn chế bệnh viêm vú, giai đoạn bò cạn sữa là giai đoạn rất quan trọng. Giai đoạn này là giai đoạn điều trị dứt điểm các bò bị viêm vú trong giai đoạn vắt sữa mà còn tiềm ẩn ở giai đọan này. Trong giai đoạn cạn sữa, người ta thường tiến hành xử lý kháng sinh để tiêu diệt hẳn các mầm bệnh viêm vú mà trong giai đoạn khai thác sữa không xử lý được. Để kiểm soát được bệnh viêm vú trong giai đoạn cạn sữa cần tiến hành các biện pháp sau:  Điều trị triệt để các bò bị viêm vú.  Tuân thủ đúng quy trình cạn sữa cho bò, nhất là khâu sát trùng núm vú và dùng thuốc bơm vú cạn sữa.  Thường xuyên theo dõi và kiểm tra.  Chế độ nuôi dưỡng phải phù hợp, trong giai đoạn cạn sữa chủ yếu cho ăn thức ăn thô xanh chất lượng cao, cân bằng đạm (protein) và khoáng. 7 - 14 ngày trước khi đẻ cho bò ăn lượng thức ăn tinh chất lượng tốt tăng dần lên. 2.5 Giới thiệu về thuốc thử nghiệm 2.5.1 Thuốc Ceptifi for DC của Công ty Cổ Phần Sản Xuất Kinh Doanh vật tư và thuốc thú y Vemedim Thành phần: mỗi ống bơm 10 ml chứa: Ceftiofur (hydrochloride) ............................. 500 mg Microcrystalline Wax ................................... 700 mg 14 Labrafil ......................................................... 500 mg Cottonseed oil ............................................... qs Công dụng: Đặc trị viêm vú cận lâm sàng ở bò sữa giai đoạn khô sữa do các vi khuẩn Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalactia, S.uberis và S.agalactia. Cách dùng: Mỗi ống thuốc dùng cho một thùy vú. Điều trị cùng lúc cho cả 4 thùy vú. Dùng một liều duy nhất ngay sau lần vắt sữa cuối cùng của chu kỳ cho sữa. Thời gian ngƣng sử dụng thuốc: Trước khi giết mổ: Bò sữa 16 ngày; bê sinh từ bò mẹ điều trị Ceptifi for DC: 0 ngày. Trước khi lấy sữa: Bò có thời gian khô sữa từ 30 ngày trở lên, có thể lấy sữa ngay sau khi sinh. Bảo quản: nơi khô mát không quá 25oC, tránh ánh sáng, bảo quản trong hộp trước khi sử dụng. 2.5.2 Thuốc CEQUIN for DC của Công ty Cổ Phần Sản Xuất Kinh Doanh vật tư và thuốc thú y Vemedim Thành phần: mỗi ống bơm 3 ml chứa: Cefquinome (sulfate) .................................... 150 mg Công dụng: Đặc trị viêm vú thể cận lâm sàng ở bò khô sữa và phòng các nhiễm trùng ở bầu vú trong giai đoạn khô sữa do các vi khuẩn nhạy cảm với Cefquinome gây ra như Streptococcus uberis, Streptococcus dysgalactia, Streptococcus agalactia, Staphylococcus aureus, Staphylococcus spp… Cách dùng: Mỗi ống thuốc dùng cho một thùy vú. Điều trị cùng lúc cho cả 4 thùy vú. Dùng một liều duy nhất ngay sau lần vắt sữa cuối cùng của chu kỳ cho sữa. Thời gian ngƣng sử dụng thuốc: Trước khi giết mổ: 2 ngày. Trước khi lấy sữa: Nếu bò khô sữa hơn 5 tuần thì có thể lấy sữa một ngày sau khi bò sinh. Nếu bò khô sữa ít hơn 5 tuần thì có thể lấy sữa sau khi điều trị 36 ngày. Bảo quản: nơi khô mát không quá 25oC, tránh ánh sáng, bảo quản trong hộp trước khi sử dụng. 15 2.5.3 Thuốc BIO-TETRA MAS của Công ty Liên Doanh Bio-Pharmachemie Thành phần: Trong 100 ml Oxytetracycline ..............................................5 g Prednisolone .......................................... 100 mg Soybean Oil vừa đủ ............................... 100 ml Công dụng: Đặc trị viêm vú ở thể cấp tính và thể tiềm ẩn trên bò sữa, trâu bò giống hoặc phòng ngừa viêm vú khi cạn sữa. Liều lƣợng và cách dùng: Tra đầu kim vào núm vú, bơm 10 ml thuốc vào mỗi thùy vú, bít núm vú rồi dùng tay thoa đều bầu vú từ dưới lên. Mỗi ngày bơm thuốc 2 lần ngay sau khi vắt sữa. Điều trị viêm vú: Dùng liên tục 3 - 4 ngày. Phòng ngừa viêm vú: Dùng trong 1 - 2 ngày lúc cạn sữa. Thời gian ngƣng sử dụng thuốc: Không sử dụng sữa trong vòng 3 ngày sau khi dùng thuốc. Lƣu ý:"Không dùng quá liều quy định". Bảo quản: Nơi khô thoáng, nhiệt độ không quá 30oC. 2.5.4 Thuốc MAMIFORT SECADO của Công ty SYVA LABORA TOROIS Tây Ban Nha Thành phần: Mỗi týp 8g gồm có: Cloxacilline (sodium)………………………... 500 mg Ampicillin (sodium)…………………………. 250 mg Dung môi……………………………………... vừa đủ Đặc tính: Sự phối hợp giữa Ampicillin và Cloxacillin trong cùng nhóm kháng sinh Betalactam có tác động hiệp lực chống lại các vi khuẩn: - Ampicillin có hoạt phổ rộng trên cả vi khuẩn Gram dương và Gram âm gây viêm vú như E.coli, Haemophilus, Salmonella, Shigella, Proteus, Neisseria, Bordetella pertussis. - Cloxacillin có ái lực mạnh với các vi khuẩn Gram dương như Staphylococcus aureus (đã kháng với penicillin), Streptococcus spp (cả với Enterococcus), Corynebacterium pyogenes, Clostridium perfringens, Cl.Pseudotuberculosis, Listeria monocytogenes, Bacillus anthracis. 16 - Với hàm lượng kháng sinh cao và dung môi đặc biệt nên Mammifort secado có tác dụng kéo dài đến 30 ngày trong mô sữa. Chỉ định: Phòng trị viêm vú cho trâu, bò, dê, cừu trong thời gian cạn sữa. Liều dùng – cách dùng: Ngay trước khi cạn sữa, vắt hết sữa ra ngoài và lau sạch bầu vú với dung dịch khử trùng, sau đó bơm trực tiếp vào ống dẫn sữa với liều như sau: Trâu bò: 1 ống Mamifort Secado cho mỗi thùy vú. Dê, cừu: 1/2 ống syringe Mamifort Secado cho mỗi thùy vú. Tác dụng tới 30 ngày mà chỉ ngừng sữa 4 ngày. Sau khi bơm vào, nên xoa nhẹ bầu vú để thuốc được hấp thu tốt hơn. Thời gian bài thải: Thịt: 28 ngày và sữa: 96 giờ Bảo quản: Nơi mát, tránh ánh nắng trực tiếp 2.5.5 Thuốc CLOXAMAM của Công Ty Coophavet, Saint Herblon, 44150 Ancenis, Pháp Thành phần: Trong ống 9,1 g sản phẩm có chứa: Cloxacilline (dạng benzathine) ............................ 500 mg Octyl gallate ........................................................ 0,45 mg Propyl gallate ...................................................... 0,45 mg Tá dược có tác dụng kéo dài, vừa đủ ....................... 9,1 g Công dụng: Trị viêm vú do các vi khuẩn mẫn cảm với Cloxacilline gây ra trên bò trong giai đoạn cạn sữa. Điều trị các bệnh viêm vú do: Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactia, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis. Phòng các trường hợp nhiễm trùng khác. Đƣờng cấp thuốc: Bơm vào bầu vú. Liều dùng: Bò cái: 01 ống Cloxamam cho mỗi ¼ bầu vú. Áp dụng các biện pháp vệ sinh sát trùng trước khi điều trị. Chú ý: Không dùng cho bò cái trong giai đoạn khai thác sữa. Thời gian ngƣng sử dụng thuốc: + Thịt: Không. + Sữa: 0 ngày sau khi sinh nếu thời gian khô sữa được hơn 6 tuần, và 14 ngày sau khi sinh sớm, nếu thời gian khô sữa ít hơn 6 tuần. Bảo quản: Bảo quản ở nhiệt độ dưới 25oC. 17 Dạng bào chế: Thuốc dạng kem. 2.5.6 Thuốc SPECTRAMAST DC của công ty Pharmacia & Upjohn Company - A division of Pfizer Inc Thành phần: Mỗi xy lanh nhựa 10 ml chứa: Ceftiofur (ở dạng muối hydrochloride) ............... 500 mg Microcrystalline wax ........................................... 700 mg Labrafil M 1944 CS ............................................. 500 mg Cottonseed Oil ...................................................... vừa đủ Chỉ định: SPECTRAMAST DC chỉ định điều trị viêm vú bán lâm sàng trên bò cái ở giai đoạn cạn sữa có kết hợp với Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalactiae, và Streptococcus uberis. Liều lƣợng: Bơm một ống bơm cho mỗi ¼ bầu vú bị viêm nhiễm vào thời gian cạn sữa. Hƣớng dẫn sử dụng: Rửa thạt sạch núm vú với nước ấm có dung dịch thuốc sát trùng dùng cho bò sữa. Lau khô núm vú. Vắt thật cạn sữa của phần vú đó (nếu có). Dùng khăn cồn được cung cấp, lau sạch phần đầu vú viêm, dùng khăn riêng cho mỗi bầu vú. Chọn cách đưa đầu ống bơm vào toàn phần hoặc một phần vào ống vú; bơm toàn bộ thuốc vào, xoa bớp phần vú đó để thuốc phân bố đều trong bầu sữa. Tái nhiễm: sau khi điều trị thành công, tái nhiễm vẫn có thể xảy ra mặc dù việc quản lý đàn, vệ sinh và các biện pháp cơ khí an toàn được thực hiện. Cần theo dõi kỹ các bò cái viêm vú nhằm phát hiện tái nhiễm và có thể lây sang những con khác. Chống chỉ định: Không dùng SPECTRAMAST DC cho những thú trước đó đã bị quá mẫn đối với thuốc. Thận trọng khi sử dụng thuốc: - Không dùng quá liều quy định. - Không để thuốc tiếp xúc với da, mắt, miệng và quần áo. - Những người dị ứng với penicillin hoặc cephalosporin cần tránh tiếp xúc với sản phẩm này. - Nếu rủi ro bị trúng thuốc vào mắt, rửa sạch với nước trong 15 phút. Nếu thuốc trúng vào da, rửa da với xà phòng và nước. Thay đổi quần áo có dính thuốc.Nếu bị dị ứng xảy ra, nên đến bác sĩ khám. - Theo sau việc dùng kháng sinh bơm vào vú bò, sữa từ bò cái đang điều trị và từ bò cái đang trong giai đoạn bỏ sữa, cần được bỏ và không dùng nuôi bê. - Để xa tầm tay trẻ em. 18 Thời gian ngƣng sử dụng thuốc: Sữa lấy từ bò cái đã hoàn tất giai đoạn 30 ngày cạn sữa có thể dùng làm thức ăn mà không bỏ sữa do tồn dư ceptiofur. - Theo toa, không có thời gian ngưng thuốc trước khi giết mổ đối với bê đã bú sữa đầu từ những bò cái đã được điều trị. - Theo sau lần bơm thuốc vào vú, cần ngưng thuốc 16 ngày trước khi giết mổ những bò cái đã được điều trị. - Sử dụng sản phẩm này theo cách khác hơn với những chỉ định dưới liều có thể dẫn đến tồn dư thuốc. Bảo quản: Bảo quản ở nơi mát. Tránh ánh sáng. Quy cách: Hộp 12 ống. Mỗi ống bơm SPECTRAMAST DC chứa 10 ml kem thuốc vô trùng, dùng bơm 1 lần. 19 CHƢƠNG 3 PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Nội dung nghiên cứu Thử nghiệm hiệu quả của thuốc bơm vú bò để phòng bệnh viêm vú bò sữa trong giai đoạn bò cạn sữa. Dùng phương pháp CMT để đánh giá mức độ viêm vú bò sữa và lấy mẫu sữa để phân lập, kiểm tra sự hiện diện của các loài vi khuẩn gây bệnh có trong sữa. Kiểm tra tính nhạy cảm của kháng sinh đối với các chủng vi khuẩn phân lập được. 3.2 Phƣơng tiện nghiên cứu 3.2.1 Thời gian, địa điểm và đối tƣợng nghiên cứu Thời gian nghiên cứu: Đề tài thực hiện từ tháng 08 đến tháng 12 năm 2013 Địa điểm nghiên cứu: - Đề tài thực hiện tại các hộ chăn nuôi của hợp tác xã bò sữa Long Hòa thuộc Thành phố Cần Thơ, hợp tác xã bò sữa EVERGROWTH thuộc Tỉnh Sóc Trăng. - Nuôi cấy phân lập vi khuẩn: Phòng vi sinh – Trung tâm nghiên cứu và phát triển, Công ty Cổ Phần Sản Xuất Kinh Doanh Vật Tư và Thuốc Thú Y Vemedim. Đối tượng nghiên cứu: Bò sữa trong giai đoạn cạn sữa ở các hộ chăn nuôi bò sữa. Hình 6. Nuôi bò sữa ở nông hộ Cần Thơ Hình 7. Nuôi bò sữa ở nông hộ Sóc Trăng (Hình ghi nhận trong quá trình thực hiện luận văn) 3.2.2 Dụng cụ và hóa chất Dụng cụ: Găng tay, kéo, ống đong, que cấy, ống nghiệm, đĩa petri, đèn cồn, tampon vô trùng, cân điện tử, thùng trữ mẫu, autoclave, tủ sấy, tủ ấm, tủ lạnh, buồng cấy vô trùng, kính hiển vi. 20 Hóa chất: Cồn 70o, nước cất, Thuốc thử California Mastitis Test (CMT), Thuốc thử Kovac’s, Voges Proskauer, Methyl Red, H2O2 và môi trường nuôi cấy, phân lập vi khuẩn gồm Nutrient Agar (NA), Nutrient Broth (NB), Mannitol Salt Agar (MSA), Tryptycase Soy Agar (TSA), Eosin Methylene Blue Agar (EMB), Kligler Iron Agar (KIA), Methyl Red - Voges ProsKauer (MR-VP), Mueller Hinton Agar (MHA), MacConkey Agar (MC), Blood Agar (BA). Thuốc sử dụng: - Ceptifi for DC, CEQUIN for DC của Công ty Cổ Phần Sản Xuất Kinh Doanh vật tư và thuốc thú y Vemedim. - BIO-TETRA MAS của Công ty Liên Doanh Bio-Pharmachemie. - MAMIFORT SECADO của Công ty SYVA LABORA TOROIS Tây Ban Nha. - CLOXAMAM của Công Ty Coophavet, Saint Herblon, 44150 Ancenis, Pháp. - SPECTRAMAST DC của công ty Pharmacia & Upjohn Company - A division of Pfizer Inc. 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 3.3.1 Bố trí thí nghiệm Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với 6 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức tương ứng với một loại thuốc thử nghiệm. Số bò bố trí trong các nghiệm thức được trình bày ở bảng 1. Bảng 1. Chia 6 nghiệm thức để thử nghiệm thuốc Nghiệm thức Thuốc thử nghiệm Nghiệm thức 1 Ceptifi for DC 12 Nghiệm thức 2 CEQUIN for DC 12 Nghiệm thức 3 BIO-TETRA MAS 3 Nghiệm thức 4 MAMIFORT SECADO 16 Nghiệm thức 5 CLOXAMAM 3 Nghiệm thức 6 SPECTRAMAST DC 5 Tổng cộng Số lƣợng bò (con) 51 3.3.2 Phƣơng pháp tiến hành 3.3.2.1 Kiểm tra bò sữa Cần kiểm tra bò trước khi bơm thuốc cạn sữa vào bầu vú, kiểm tra bầu vú có còn tiết sữa nữa không. Nếu bò đã có mức sản xuất sữa thấp 1 - 2 kg sữa/ ngày thì tiến hành cạn sữa hẳn: vắt cho bầu vú khô hết sữa, sát trùng núm vú, tiếp tục giảm thức ăn và 21 nước uống. Sau đó, tiếp tục kiểm tra 1 - 2 ngày nếu thấy bầu vú không còn tiết sữa nữa, bầu vú không sưng đỏ thì tiến hành bơm thuốc cạn sữa cho bò. 3.3.2.2 Cách tiến hành bơm thuốc cạn sữa Sau khi đã kiểm tra bầu vú không còn tiết sữa nữa, bầu vú không sưng đỏ thì tiến hành bơm thuốc thử nghiệm cho bò như sau: Dùng khăn sạch lau vú sạch sẽ, vắt sữa trong bầu vú ra hết hoàn toàn, sử dụng dung dịch Vime - Iodine 0,5% để sát trùng núm vú, dùng thuốc bơm vú cạn sữa bơm vào bầu vú, mỗi thùy vú một ống (4 ống/ con), sau khi bơm thuốc bơm vú cạn sữa vào bầu vú, một tay giữ đầu núm vú, tay kia xoa đẩy nhẹ cho thuốc lên phía trên bầu vú để thuốc được lan tỏa và hấp thu tốt hơn, sau đó sát trùng núm vú một lần nữa bằng dung dịch Vime - Iodine 0,5%. Hình 8. Lau sạch bầu vú Hình 9. Vắt sữa ra hết hoàn toàn Hình 10. Sát trùng bằng Vime - Iodine 0,5% Hình 11. Bơm thuốc bơm vú cạn sữa (Hình ghi nhận trong quá trình thực hiện luận văn) 3.3.2.3 Phƣơng pháp lấy mẫu sữa Mẫu sữa được lấy sau khi đã dùng thuốc bơm vú cạn sữa, mẫu được lấy ngay sau khi bò sữa đẻ (không lấy sữa đầu) đem nuôi cấy, phân lập vi khuẩn, làm kháng sinh đồ trong phòng thí nghiệm, cách tiến hành như sau: 22 Mẫu sữa: làm vệ sinh cho bò trước khi lấy mẫu, dùng khăn lau sạch bầu vú, tiếp tục sát trùng bầu vú bằng cồn 70o. Tay được mang bao tay, vắt bỏ vài tia sữa đầu, sau đó vắt sữa cho vào túi nylon khoảng 10 ml, ghi lại số tai bò, ngày lấy sữa. Sữa được bảo quản lạnh đưa về phòng thí nghiệm trong 2 – 8 giờ. Bảng 2. Số lƣợng mẫu sữa Địa điểm Số lƣợng EVERGROWTH 45 Long Hòa 6 Tổng cộng 51 3.3.2.4 Phƣơng pháp thử CMT (California Mastitis Test) Dùng thuốc thử Leucocytest (có màu tím) thử sữa từ mỗi thùy vú của bò, theo tỉ lệ sữa và thuốc thử là 1 : 1 (2 ml sữa : 2 ml thuốc thử). Đây là phản ứng bán định lượng để đánh giá sự hiện diện của tế bào bạch cầu (Somatic cell) trong sữa. Cách tiến hành: Lau rửa sạch bầu vú, vắt bỏ những tia sữa đầu tiên trên từng thùy vú nhằm tránh tạp khuẩn. Sau đó trên mỗi thùy vú lấy khoảng 2 ml sữa cho vào 1 trong 4 đĩa trong khay thử theo thứ tự trước trái (A), trước phải (B), sau trái (C), sau phải (D). Cho thêm 2 ml thuốc thử vào các đĩa trên khay đã có 2 ml sữa, lắc nhẹ qua lại vài lần để cho dung dịch trộn đều với nhau. Quan sát và đọc kết quả. Bảng 3. Đọc kết quả CMT (Lý Thị Liên Khai, 1999) Độ đồng nhất Màu sắc Hỗn hợp đồng nhất Xám Hỗn hợp hơi lợn cợn Xám hơi ngã tím 1+ Sự hóa gel bền và nhìn thấy Xám tím 2+ Sự hóa gel dày thành đám nhớt Tím 3+ Sự hóa gel dày giống như lòng trắng trứng Tím đậm 4+ Kết luận - Bảng 4. Giải thích kết quả CMT (Lý Thị Liên Khai, 1999) Điểm số Mức độ nhiễm Số lƣợng tế bào bạch cầu/ml sữa 0 (-) Không 100000 1 (1+) Có nguy cơ bị nhiễm với số lượng vi khuẩn ít 300000 2 (2+) Viêm vú cận lâm sàng 900000 3 (3+) Viêm vú cận lâm sàng 2700000 4 (4+) Ranh giới giữa viêm vú cận lâm sàng, lâm sàng 8100000 23 Sữa có vấn đề sẽ có số lượng tế bào bạch cầu trên 300000 tế bào/ml sữa (Nguyễn Văn Thành, 2005). Hình 13. Kiểm tra sữa bò bằng Hình 12. Lấy mẫu sữa kiểm tra phƣơng pháp CMT (Hình ghi nhận trong quá trình thực hiện luận văn) 3.3.2.5 Phƣơng pháp kiểm tra dựa vào biểu hiện lâm sàng Kiểm tra bằng cảm quan, biểu hiện bên ngoài của bầu vú và tính chất của sữa: Khi bò bị bệnh viêm vú: tuyến vú sưng to ở một thùy hay toàn bộ bầu vú. Khi sờ vào vú có cảm giác nóng. Lúc đầu sữa biến đổi không rõ về sau khi bệnh lan rộng trong tuyến sữa và bộ phận tiết sữa thì sữa sẽ loãng và lợn cợn. Con vật biểu hiện trạng thái đau nhẹ, giảm ăn, sốt 39,5 - 40oC, ủ rũ mệt nhọc. 3.3.2.6 Phƣơng pháp nuôi cấy, phân lập vi khuẩn  Phƣơng pháp nuôi cấy, phân lập vi khuẩn Staphylococcus aureus Trên đĩa môi trường MSA: khuẩn lạc Staphylococcus aureus tròn, màu vàng, rìa gọn, khô, lồi, chuyển môi trường từ màu đỏ sang vàng. Vi khuẩn được cấy thuần trên môi trường NA, sau đó tiến hành kiểm tra các phản ứng sinh hóa. Quy trình nuôi cấy, phân lập vi khuẩn Staphylococcus aureus được thể hiện qua sơ đồ 1. Bảng 5. Đặc tính sinh hóa đặc trƣng của vi khuẩn Staphylococcus aureus Đặc tính sinh hóa đặc trƣng của vi Kết quả khuẩn Staphylococcus aureus Sinh men catalase + Đông huyết tương thỏ + Dung huyết + 24 Mẫu sữa Cho mẫu sữa vào môi trường NB 37oC/24giờ Phân lập trên môi trường MSA 37oC/24giờ. Khuẩn lạc S.aureus tròn, màu vàng, rìa gọn, khô. Nhuộm Gram Cầu khuẩn Gram (+) Kiểm tra đặc tính sinh hóa 37oC/24giờ Phản ứng Phản ứng Catalase đông huyết tương thỏ (+) Phản ứng dung huyết (+) (+) 37oC/24giờ Staphylococcus aureus 37oC/24giờ Kháng sinh đồ Sơ đồ 1. Quy trình phân lập vi khuẩn Staphylococcus aureus (Công ty Vemedim) 25 Hình 14. Vi khuẩn Staphylococcus aureus trên môi trƣờng MSA 1 Hình 15. Staphylococcus aureus sinh men catalase 2 3 4 Hình 16. Staphylococcus aureus làm đông huyết tƣơng thỏ Ống 1,2: Đông huyết tương Ống 3,4: Ống đối chứng (Hình ghi nhận trong quá trình thực hiện luận văn)  Phƣơng pháp nuôi cấy, phân lập vi khuẩn Streptococcus spp Trên môi trường BA: khuẩn lạc nghi Streptococcus tròn, nhỏ li ti, trong như hạt sương và làm tiêu huyết môi trường. Vi khuẩn được cấy thuần trên môi trường NA, sau đó tiến hành kiểm tra các phản ứng sinh hóa. Quy trình nuôi cấy, phân lập vi khuẩn Streptococcus spp được thể hiện qua sơ đồ 2. Đặc tính sinh hóa của vi khuẩn Streptococcus spp: Phản ứng Catalase (-). Môi trường NaCl 6,5%, pH 9.6: Streptococcus spp làm đục môi trường NaCl 6,5%. 26 Mẫu sữa NB 37oC/24giờ Phân lập trên thạch máu BA 37oC/24giờ. Khuẩn lạc tròn, nhỏ li ti, trong như hạt sương và làm tiêu huyết môi trường. Kiểm tra đặc tính sinh hóa 37oC/24giờ Nhuộm Gram Liên cầu khuẩn Gram (+) Phản ứng Catalase (-) Phát triển trong NaCl 6,5%, pH 9.6 Streptococcus spp 37oC/24giờ Kháng sinh đồ Sơ đồ 2. Quy trình phân lập vi khuẩn Streptococcus spp (Công ty Vemedim) 27  Phƣơng pháp nuôi cấy, phân lập vi khuẩn E.coli Trên môi trường EMB: khuẩn lạc E.coli to, tròn, hơi lồi, bóng, màu tím ánh kim. Vi khuẩn được cấy thuần trên môi trường NA, sau đó tiến hành kiểm tra các phản ứng sinh hóa. Quy trình nuôi cấy, phân lập vi khuẩn E.coli thể hiện qua sơ đồ 3. Đặc tính sinh hóa của vi khuẩn E.coli Bảng 6. Đặc tính sinh hóa đặc trƣng của vi khuẩn E.coli Đặc tính sinh hóa đặc trƣng của Kết quả vi khuẩn E.coli Lactose/glucose +/+ H2S - Gas + Citrate - Di động + VP - MR + Indol + 1 2 3 4 Hình 17. Phản ứng sinh hóa vi khuẩn E.coli Hình 18. Vi khuẩn E.coli trên môi trƣờng EMB Ống 1: Citrate (-) Ống 2: Indol (+) Ống 3: Methyl red (+) Ống 4: Voges – Proskauer (-) (Hình ghi nhận trong quá trình thực hiện luận văn) 28 Mẫu sữa NB 37oC/24giờ Phân lập trên môi trường EMB 37oC/24giờ. Khuẩn lạc to, tròn, hơi lồi, bóng, màu tím ánh kim. Nhuộm Gram Trực khuẩn Gram (-) Kiểm tra đặc tính sinh hóa KIA Glucose Lactose H2 S (+) (+) (-) Indol MR VP Simmons Citrate (+) (+) (-) (-) Escherichia coli Kháng sinh đồ Sơ đồ 3. Quy trình phân lập vi khuẩn E.coli (Công ty Vemedim) 29 3.3.2.7 Phƣơng pháp thực hiện kháng sinh đồ Kiểm tra tính nhạy cảm của kháng sinh đối với vi khuẩn Staphylococcus aureus, Streptococcus spp, E.coli dựa trên nguyên tắc kháng sinh từ đĩa giấy sẽ khuếch tán làm ức chế vi sinh vật kiểm nghiệm, tạo nên vòng vô khuẩn quanh đĩa giấy. Môi trƣờng: Môi trường tiêu chuẩn là môi trường MHA. Bề dày của thạch khoảng 4 mm, pH từ 7,2 - 7,6 ở nhiệt độ phòng thí nghiệm. Chuẩn bị canh khuẩn: Staphylococcus aureus, Streptococcus spp, E.coli đã qua phản ứng sinh hóa dương tính, làm thuần trên môi trường NA, chuyển khuẩn lạc vào ống có chứa 9 ml nước muối sinh lý 9o/oo sao cho canh khuẩn có độ đục tương đương độ đục ống chuẩn Mc.Farland 0,5 (tương đương 108 CFU/ml), sau đó pha tiếp canh khuẩn có độ đục 106 CFU/ml. Các đĩa kháng sinh: Cefquinome, Oxytetracycline, Marbofloxacin, Doxycycline, Florfenicol, Fosfomycin, Danofloxacin, Enrofloxacin, Norfloxacin, Gentamycin, Ceftiofur. Phƣơng pháp làm kháng sinh đồ Dùng pipet hút 100 μl canh khuẩn 106 CFU/ml, trãi đều vi khuẩn trên mặt thạch MHA. Chờ mặt thạch khô dùng kẹp vô trùng lấy các đĩa kháng sinh đặt lên mặt thạch. Khi đặt, phải ép nhẹ mỗi đĩa kháng sinh để bảo đảm chúng tiếp xúc hoàn toàn với mặt thạch. Đặt đĩa kháng sinh phải đảm bảo các tâm đĩa kháng sinh không gần nhau dưới 24 mm. Kháng sinh khuếch tán ngay sau khi đĩa kháng sinh chạm mặt thạch, vì vậy không nên dời chỗ các đĩa kháng sinh sau khi đã đặt lên mặt thạch. Ủ đĩa thạch ở 37oC, sau 16 – 24 giờ, đọc kết quả (Phạm Hùng Vân, 2002). Hình 19. Kháng sinh đồ vi khuẩn Hình 20. Kháng sinh đồ vi khuẩn E.coli Staphylococcus aureus (Hình ghi nhận trong quá trình thực hiện luận văn) Đọc kết quả kháng sinh đồ: kết quả thử nghiệm kháng sinh được kết luận bằng cách so sánh với bảng đường kính chuẩn ở bảng 8 và 9. 30 Bảng 7. Đƣờng kính vòng vô khuẩn chuẩn của một số loại kháng sinh đối với vi khuẩn Staphylococcus aureus và Streptococcus spp (NCCLS, 2004; CLSI, 2012) TT Kháng sinh Kí hiệu Hàm lƣợng kháng sinh/đĩa (µg) Đƣờng kính vòng vô khuẩn (mm) Kháng (≤) Trung bình Nhạy (≥) 1 Ceftiofur Xnl 30 17 18-20 21 2 Cefquinome C10 10 15 16-21 22 3 Marbofloxacin Mar 5 14 15-19 20 4 Doxycycline Do 30 12 13-15 16 5 Florfenicol Ffc 30 14 15-18 19 6 Fosfomycin Fos 50 12 13-15 16 7 Gentamycin Ge 10 12 13-14 15 8 Enrofloxacin Enr 5 16 17-22 23 9 Norfloxacin Nr 10 12 13-16 17 10 Danofloxacin Dn 30 12 13-15 16 11 Oxytetracycline O 30 14 15-18 19 Bảng 8. Đƣờng kính vòng vô khuẩn chuẩn của một số loại kháng sinh đối với vi khuẩn E.coli (NCCLS, 2004; CLSI, 2012) Đƣờng kính vòng vô khuẩn (mm) TT Kháng sinh Hàm lƣợng kháng Kí hiệu sinh/ đĩa (µg) Kháng (≤) Trung bình Nhạy (≥) 1 Ceftiofur Xnl 30 17 18-20 21 2 Cefquinome C10 10 15 16-21 22 3 Marbofloxacin Mar 5 14 15-19 20 4 Doxycycline Do 30 10 11-13 14 5 Florfenicol Ffc 30 14 15-18 19 6 Fosfomycin Fos 50 12 13-15 16 7 Gentamycin Ge 10 12 13-14 15 8 Enrofloxacin Enr 5 16 17-22 23 9 Norfloxacin Nr 10 12 13-16 17 10 Danofloxacin Dn 30 10 11-13 14 11 Oxytetracycline O 30 14 15-18 19 31 3.4 Chỉ tiêu theo dõi Đánh giá hiệu quả của thuốc dựa vào các tiêu chí: Số bò không mắc bệnh Hiệu quả phòng bệnh (%) = x 100 Tổng số bò được phòng bệnh Số vú bò không bệnh x 100 Tỉ lệ vú bò không bệnh (%) = Tổng số vú bò được phòng 3.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu Số liệu được phân tích thống kê bằng phương pháp Chi-Square Test sử dụng phần mềm Minitab 16 và Chi_square_Yates. 32 CHƢƠNG 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Tình hình chăn nuôi bò sữa tại hợp tác xã EVERGROWTH và Long Hòa 4.1.1 Phƣơng thức chăn nuôi - Bò sữa ở các hộ dân trong hợp tác xã bò sữa Long Hòa chủ yếu sử dụng thức ăn là các loại cỏ như cỏ voi, cỏ lông tây, thân cây đậu phộng; ngoài ra còn có các loại thức ăn khác như thân cây bắp, cỏ tạp, hèm bia, vỏ khóm ủ chua, … Thức ăn hỗn hợp sử dụng của các công ty như công ty CP, công ty Proconco, … Chuồng trại nuôi bò sữa được xây dựng bán kiên cố, nền chuồng bằng xi măng, mái lợp tole, diện tích tương đối nhỏ, không có nơi vắt sữa riêng. Bò được tiêm phòng vaccine phòng bệnh lở mồm long móng và bệnh tụ huyết trùng. - Bò sữa ở các hộ dân trong hợp tác xã bò sữa EVERGROWTH đa số đều được nuôi nhốt. Chuồng trại được xây dựng bán kiên cố, nền chuồng bằng xi măng, mái được lợp tole hay mái lá, có máng ăn và máng uống, diện tích tương đối nhỏ. Bê được nuôi chung với bò mẹ. Không có nơi vắt sữa riêng, sữa được vắt trực tiếp ở tại chuồng nuôi. Thức ăn sử dụng chủ yếu ở đây là các loại cỏ như cỏ xả, cỏ lông tây, cỏ mềm; ngoài ra còn có các loại thức ăn khác như thân cây bắp, hèm bia, rơm khô, … Thức ăn hỗn hợp được sử dụng là thức dạng viên và dạng bột của công ty Proconco sản xuất. Ngoài ra, các hộ dân nuôi bò sữa còn sử dụng đá liếm. Nước sử dụng cho bò uống chủ yếu là nước sông và nước giếng. Bò được tiêm phòng vaccine phòng bệnh lở mồm long móng và bệnh tụ huyết trùng. 4.1.2 Phƣơng thức vắt sữa Sữa được vắt 2 lần/ ngày vào buổi sáng và buổi chiều sau khi tắm bò, vệ sinh chuồng trại. Tùy vào điều kiện kinh tế của mỗi gia đình mà có hộ vắt sữa bằng máy hoặc bằng tay. Đa số các hộ dân chủ yếu vắt sữa bằng tay, vắt sữa tại chuồng nuôi bò. Một số hộ thì sữa được vắt bằng máy. Trước khi vắt sữa, bò được lùa vào chuồng ép, dùng khăn lau sạch bầu vú, vắt bỏ vài tia sữa đầu và lắp máy vắt sữa vào bầu vú. Sau khi vắt sữa xong, ở hợp tác xã Long Hòa thì sử dụng Vime - Iodine để sát trùng núm vú; ở hợp tác xã EVERGROWTH thì tùy hộ chăn nuôi, có hộ sử dụng Vime – Iodine để sát trùng núm vú, có hộ không có sát trùng núm vú. Nguồn tiêu thụ sữa: - Ở hợp tác xã bò sữa Long Hòa thì sữa được bán cho công ty Vinamilk Cần Thơ. - Ở hợp tác xã bò sữa EVERGROWTH thì sữa được bán cho công ty Cô gái Hà Lan DUTCH LADY tại Bình Dương. 33 4.1.3 Phƣơng thức cạn sữa Bò sữa ở các hộ chăn nuôi thường cạn sữa vào lúc 2 tháng trước khi đẻ. Nhưng đa số hộ chăn nuôi thường có quan niệm sai lầm về việc chăm sóc bò trong thời gian cạn sữa như không áp dụng quy trình cạn sữa hoặc khai thác quá mức, thời gian cạn sữa ngắn, trung bình là dưới 30 – 35 ngày, không có đủ thời gian cho bò hồi phục và chuẩn bị cho kỳ vắt sữa kế tiếp. Khi bò bắt đầu được cạn sữa tiến hành như sau:  Thay đổi địa điểm, thời gian, người vắt sữa.  Giảm dần số lần vắt sữa.  Hạn chế nước uống và chỉ cho bò ăn rơm, không cho ăn thức ăn tinh và thức ăn xanh.  Mỗi ngày vắt bầu vú thật cạn sữa.  Sau khi thấy bầu vú không còn tiết sữa thì tiến hành bơm thuốc bơm vú cạn sữa vào bầu vú, sử dụng Vime – Iodine 0,5% để sát trùng núm vú. 4.1.4 Tình hình vệ sinh ở những nông hộ nuôi bò sữa Chuồng trại tại các hộ chăn nuôi bò sữa ở hợp tác xã được quét dọn 2 lần/ ngày vào buổi sáng và buổi chiều trước khi vắt sữa. Thường không có sát trùng chuồng trại định kỳ, nước thải và phân không qua xử lý, được thải trực tiếp xuống ao gần khu vực nuôi bò. Khăn lau vú được giặt sạch bằng xà phòng và phơi nắng cho khô sau mỗi lần vắt sữa, các dụng cụ vắt sữa được rữa sạch bằng xà phòng và được rữa lại bằng nước sạch và phơi khô. Tuy nhiên, người vắt sữa không đeo găng tay và giữa các lần vắt sữa của những bò sữa không sát trùng tay, một số hộ chăn nuôi không sát trùng núm vú sau khi vắt sữa. Những con bò bị viêm vú không được cách ly với những con khác trong đàn. 4.2 Tỉ lệ bò sữa bị viêm vú đƣợc khảo sát trƣớc sử dụng thuốc bơm vú cạn sữa Qua khảo sát ở hợp tác xã EVERGROWTH và Long Hòa cho thấy, số lượng bò sữa bị viêm vú được kiểm tra bằng phương pháp CMT được trình bày ở bảng 9 như sau: Bảng 9. Tỉ lệ bò sữa viêm vú đƣợc khảo sát bằng phƣơng pháp CMT Số bò thử CMT (con) Địa điểm Số vú khảo sát Số bò khảo sát Dương tính TL(%) Số vú khảo sát Dương tính TL(%) EVERGROWTH 143 74 51,75a 572 184 32,17a Long Hòa 142 39 27,46b 568 97 17.08b Tổng cộng 285 113 39,65 1140 281 24,65 Ghi chú: a,b các giá trị cùng một cột mang các kí tự giống nhau thì khác nhau không có ý nghĩa thống kê (P>0,05), khác nhau thì khác nhau có ý nghĩa thống kê (P0,05), khác nhau thì khác nhau có ý nghĩa thống kê (P 0,05). Đồng thời, kết quả cũng cho thấy tỉ lệ thùy vú bị viêm chiếm 6,37%, trong đó tỉ lệ thùy vú bị viêm của bò sữa ở hợp tác xã EVERGROWTH chiếm 6,67% cao hơn tỉ lệ thùy vú bị viêm ở hợp tác xã Long Hòa chiếm 4,17%. Qua phân tích thống kê cho thấy tỉ lệ thùy vú bị viêm tiềm ẩn ở bò của hai hợp tác xã khác biệt không có ý nghĩa thống kê (P > 0,05). Qua quá trình sử dụng thuốc bơm vú cạn sữa cho thấy số bò sữa bị viêm vú là khá thấp, có thể là do các nguyên nhân sau: - Số lượng bò sữa được kiểm tra: bò sữa đã được sử dụng thuốc bơm vú cạn sữa để phòng bệnh viêm vú trong giai đoạn cạn sữa. - Áp dụng đúng quy trình cạn sữa và bơm thuốc cạn sữa đúng thời điểm. - Người chăn nuôi có ý thức hơn trong việc phòng bệnh viêm vú cho đàn bò sữa. Điều kiện vệ sinh: công tác vệ sinh cá nhân người vắt sữa, vệ sinh đàn bò, vệ sinh chuồng trại nền chuồng được chú trọng hơn. - Công tác quản lý, kiểm tra định kỳ để phát hiện bò sữa bị viêm vú tiềm ẩn ở các hộ gia đình được quan tâm hơn được sự giúp đỡ của các thành viên trong hợp tác xã. Tất cả các nguyên nhân trên góp phần làm cho tỉ lệ bò sữa bị viêm vú giảm xuống đáng kể. Bảng 11. Số lƣợng bò sữa bị viêm vú theo số vú Số con bò bị viêm vú Viêm 1 vú (con) Tỉ lệ (%) Viêm 2 vú (con) Tỉ lệ (%) EVERGROWTH 8 4 50,00 4 50,00 Long Hòa 1 1 100 0 0 Tổng cộng 9 5 55,56a 4 44,44a Địa điểm Ghi chú: a,b các giá trị cùng một hàng mang các kí tự giống nhau thì khác nhau không có ý nghĩa thống kê (P>0,05), khác nhau thì khác nhau có ý nghĩa thống kê (P 0,05). Điều này cho thấy khi sử dụng thuốc để phòng bệnh viêm vú cho bò sữa thì khả năng bò bị viêm 3 vú và viêm 4 vú là hoàn toàn không có, chỉ thấy sự hiện diện của bò bị viêm 1 vú và 2 vú, từ đó có thể khẳng định 36 hiệu quả của việc sử dụng thuốc cạn sữa để phòng bệnh viêm vú trên bò sữa sẽ cao hơn khi không sử dụng thuốc cạn sữa để phòng bệnh viêm vú cho bò sữa. Bảng 12. Mức độ viêm vú ở bò sữa đƣợc kiểm tra bằng phƣơng pháp CMT 1+ 2+ 3+ 4+ Số vú dƣơng tính SL TL (%) SL TL (%) SL TL (%) SL TL (%) EVERGROWTH 12 7 58,34 4 33,33 1 8,33 0 0 Long Hòa 1 0 0 1 100 0 0 0 0 Tổng cộng 13 7 53,85 5 38,46 1 7,69 0 0 Địa điểm (SL là số lượng; TL là tỉ lệ) Kết quả ở bảng 12 cho thấy có 13 thùy vú bị viêm vú tiềm ẩn của 9 con bò sữa cho kết quả CMT dương tính ở từng mức độ như sau: mức CMT 1+ chiếm tỉ lệ 53,85%, mức CMT 2+ chiếm tỉ lệ 38,46% và mức CMT 3+ chiếm tỉ lệ 7,69%. Kết quả này cho thấy tỉ lệ dương tính ở mức CMT 3+ là rất thấp và mức CMT 4+ là không nhiễm, cho thấy các thuốc thử nghiệm có hiệu quả trong việc phòng bệnh viêm vú ở bò sữa (viêm vú lâm sàng). Tuy nhiên, sau khi sử dụng thuốc vẫn còn tỉ lệ dương tính ở mức CMT 1+ và mức CMT 2+ là do người chăn nuôi có sử dụng thuốc bơm vú cạn sữa để phòng bệnh viêm vú nhưng do một số ít người chăn nuôi chưa có ý thức tốt trong việc chăm sóc đàn bò, cũng như việc dọn rửa, vệ sinh và tiêu độc chuồng trại chưa tốt, còn để phân xung quanh chuồng, không có hệ thống thoát nước, nền chuồng luôn ẩm ướt tạo điều kiện thuận lợi cho các loại mầm bệnh lưu trú trong khu vực chuồng nuôi, khi bò giảm đề kháng chúng sẽ xâm nhập và gây bệnh. Chính vì vậy, tuy đã sử dụng thuốc để phòng bệnh viêm vú nhưng vẫn có một số ít bò sữa bị mắc bệnh. Kết quả của chúng tôi tương đối phù hợp với kết quả của Nguyễn Đức Lục (2003) với mức CMT 1+, CMT 2+, CMT 3+ lần lượt là 55,30%, 41,01% và 3,69%. 4.4 Kết quả phân lập vi khuẩn Qua quá trình nuôi cấy, phân lập các mẫu sữa sau khi đã sử dụng thuốc bơm vú cạn sữa tại Phòng vi sinh – Trung tâm nghiên cứu và phát triển, Công ty Cổ Phần Sản Xuất Kinh Doanh Vật Tư và Thuốc Thú Y Vemedim, cho kết quả như sau: 37 Bảng 13. Kết quả kiểm tra mẫu sữa Số mẫu sữa Số mẫu sữa bị viêm vú Tỉ lệ (%) EVERGROWTH 45 8 17,78 Long Hòa 6 1 16,67 Tổng cộng 51 9 17,65 Địa điểm Chúng tôi tiến hành kiểm tra 51 mẫu sữa của 51 con bò sữa được sử dụng thuốc bơm vú cạn sữa cho kết quả như sau: trong đó số mẫu sữa số mẫu sữa dương tính chiếm tỉ lệ 17,65%. Kết quả số mẫu sữa dương tính tương đối thấp có thể là do các nguyên nhân sau: Số lượng mẫu sữa được kiểm tra được lấy từ những bò sữa đã được sử dụng thuốc bơm vú cạn sữa để phòng bệnh viêm vú trong giai đoạn cạn sữa. Điều kiện vệ sinh: công tác vệ sinh cá nhân người vắt sữa, vệ sinh đàn bò, vệ sinh chuồng trại nền chuồng được chú trọng hơn. Kết quả của chúng tôi cho thấy số mẫu sữa dương tính ở mức tương đối thấp, từ đó thấy được hiệu quả của thuốc bơm vú cạn sữa, có khả năng ngăn ngừa được một số mầm bệnh gây viêm vú cho bò sữa. Bảng 14. Kết quả phân lập vi khuẩn đối với mẫu sữa Địa điểm Số lƣợng mẫu Staphylococcus aureus Streptococcus spp SL (con) TL (%) SL (con) TL (%) SL (con) TL (%) E.coli EVERGROWTH 8 7 87,5 - - 3 37,5 Long Hòa 1 1 100 - - - - Tổng 9 8 88,88 - - 3 33,33 (SL là số lượng; TL là tỉ lệ; - là chưa phát hiện) Qua kiểm tra 9 mẫu sữa bị viêm vú tiềm ẩn cho thấy có sự hiện diện của vi khuẩn Staphylococcus aureus là khá cao (88,88%), vi khuẩn E.coli chiếm tỉ lệ 33,33%, chưa phát hiện sự hiện diện vi khuẩn Streptococcus spp trong các mẫu sữa viêm. 4.5 Kết quả kháng sinh đồ Kết quả kháng sinh đồ nhằm kiểm tra khả năng nhạy cảm của các vi khuẩn gây bệnh viêm vú trên bò sữa đối với các loại kháng sinh được trình bày ở bảng 15 và bảng 16 như sau: 38 Bảng 15. Kết quả kháng sinh đồ đối với vi khuẩn Staphylococcus aureus (n = 24 ) TT Loại kháng sinh Nhạy Tỉ lệ (%) Trung bình Tỉ lệ (%) Kháng Tỉ lệ (%) 1 Ceftiofur 24 100 0 0,00 0 0,00 2 Cefquinome 24 100 0 0,00 0 0,00 3 Marbofloxacin 24 100 0 0,00 0 0,00 4 Doxycycline 24 100 0 0,00 0 0,00 5 Florfenicol 23 95,83 0 0,00 1 4,17 6 Fosfomycin 24 100 0 0,00 0 0,00 7 Gentamycin 19 79,17 5 20,83 0 0,00 8 Enrofloxacin 24 100 0 0,00 0 0,00 9 Norfloxacin 24 100 0 0,00 0 0,00 10 Danofloxacin 23 95,83 1 4,17 0 0,00 11 Oxytetracycline 4 16,67 5 20,83 15 62,50 Từ kết quả bảng 15 chúng tôi nhận thấy vi khuẩn Staphylococcus aureus nhạy cảm cao với các kháng sinh Ceptiofur, Cefquinome, Marbofloxacin, Doxycycline, Fosfomycin, Enrofloxacin và Norfloxacin là 100%, nhạy thấp với Florfenicol và Danofloxacin là 95,83%, Gentamycin là 79,17% và kháng với kháng sinh Oxytetracycline là 62,50%. Bảng 16. Kết quả kháng sinh đồ đối với vi khuẩn Escherichia coli (n = 9 ) TT Loại kháng sinh Nhạy Tỉ lệ (%) Trung bình Tỉ lệ (%) Kháng Tỉ lệ (%) 1 Ceftiofur 9 100 0 0,00 0 0,00 2 Cefquinome 9 100 0 0,00 0 0,00 3 Marbofloxacin 9 100 0 0,00 0 0,00 4 Doxycycline 9 100 0 0,00 0 0,00 5 Florfenicol 9 100 0 0,00 0 0,00 6 Fosfomycin 6 66,67 0 0,00 3 33,33 7 Gentamycin 1 11,11 8 88,89 0 0,00 8 Enrofloxacin 9 100 0 0,00 0 0,00 9 Norfloxacin 9 100 0 0,00 0 0,00 10 Danofloxacin 9 100 0 0,00 0 0,00 11 Oxytetracycline 0 0,00 0 0,00 9 100 39 Kết quả bảng 16 cho thấy vi khuẩn E.coli nhạy nhiều nhất với Ceftiofur, Cefquinome, Marbofloxacin, Doxycycline, Florfenicol, Norfloxacin, Enrofloxacin và Danofloxacin là 100%, nhạy thấp với Fosfomycin là 66,67%, trung bình với Gentamycin là 88,89%, và kháng với kháng sinh Oxytetracycline là 100%. Qua kết quả kháng sinh đồ cho thấy các vi khuẩn phân lập được đều nhạy cảm với các loại kháng sinh như Ceptiofur (100%), Cefquinome (100%), Marbofloxacin (100%), Doxycycline (100%), Florfenicol (95,83%), Norfloxacin (100%), Enrofloxacin (100%) và Danofloxacin (100%). 4.6 Kết quả thử nghiệm thuốc Qua quá trình thử nghiệm 6 loại thuốc bơm vú cạn sữa để phòng bệnh viêm vú trên bò sữa tại các hộ chăn nuôi bò sữa ở hợp tác xã EVERGROWTH và hợp tác xã Long Hòa, kết quả thử nghiệm thuốc được trình bày ở bảng 17 như sau: Bảng 17. Kết quả phòng bệnh viêm vú cho bò sữa trong giai đoạn cạn sữa Thuốc thử nghiệm Số lƣợng (con) Số con không mắc bệnh Số con Tỉ lệ (%) Ceptifi for DC 12 11 91,67a CEQUIN for DC 12 11 91,67a BIO-TETRA MAS 3 2 66,67a MAMIFORT SECADO 16 12 75,00a CLOXAMAM 3 2 66,67a SPECTRAMAST DC 5 4 80.00a Tổng cộng 51 42 82,35 Ghi chú: a,b các giá trị cùng một cột mang các kí tự giống nhau thì khác nhau không có ý nghĩa thống kê (P>0,05), khác nhau thì khác nhau có ý nghĩa thống kê (P 0,05), chính vì vậy có thể sử dụng rộng rãi các loại thuốc này để phòng bệnh viêm vú cho bò sữa trong giai đoạn cạn sữa. Qua khảo sát thực tế trong quá trình nghiên cứu đề tài chúng tôi nhận thấy rằng hiệu quả sử dụng thuốc bơm vú cạn sữa có thể bị ảnh hưởng do trường hợp bò bị viêm vú trong thời gian dài nhưng không được điều trị dẫn đến tình trạng bò bị viêm vú suốt thời gian cạn sữa, khi có chu kỳ sữa mới thì sữa đã bị nhiễm. Do đó nên dùng thuốc 40 cạn sữa khi bò không viêm hoặc viêm nhẹ. Khi bò bị viêm nặng nên điều trị rồi mới cạn sữa để bảo vệ chu kỳ sữa kế tiếp. Ngoài ra việc khai thác quá mức, kéo dài thời gian khai thác, thời gian cạn sữa ngắn (dưới 30 – 35 ngày) cũng là yếu tố gây bất lợi cho các biện pháp phòng bằng thuốc bơm vú, đồng thời bò mẹ cũng mất sức, chu kỳ cho sữa sau sẽ không đạt yêu cầu về sản lượng và chất lượng. Cho nên khi áp dụng phương pháp này cần có sự tập huấn và thuyết phục người chăn nuôi thấy được tầm quan trọng và lợi ích của việc sử dụng thuốc cạn sữa. 41 CHƢƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Qua thời gian thử nghiệm các loại thuốc bơm vú cạn sữa để phòng bệnh viêm vú trên bò sữa chúng tôi nhận thấy: Trước khi sử dụng thuốc bơm vú cạn sữa, tỉ lệ bò sữa bị viêm vú tiềm ẩn chiếm 39,65% và tỉ lệ thùy vú bò sữa bị viêm tiềm ẩn chiếm 24,65%. Sau khi sử dụng thuốc bơm vú cạn sữa, tỉ lệ bò sữa bị viêm vú tiềm ẩn chiếm 17,65% và tỉ lệ thùy vú bò sữa bị viêm tiềm ẩn chiếm 6,37% trong đó tỉ lệ bò sữa bị viêm 1 vú chiếm tỉ lệ 55,56% và viêm 2 vú chiếm tỉ lệ 44,44%. Các vi khuẩn phân lập được trên mẫu sữa viêm gồm Staphylococcus aureus chiếm tỉ lệ là 88,88%, E.coli là 33,33%, chưa phát hiện vi khuẩn Streptococcus spp. Các loại vi khuẩn phân lập được đều nhạy cảm với các kháng sinh như Ceptiofur (100%), Cefquinome (100%), Marbofloxacin (100%), Doxycycline (100%), Florfenicol (95,83%), Norfloxacin (100%), Enrofloxacin (100%) và Danofloxacin (100%). Hiệu quả phòng được bệnh viêm vú của các loại thuốc thử nghiệm là khá cao chiếm tỉ lệ 82,35%. Trong đó, hiệu quả của thuốc Ceptifi for DC (91,67%), CEQUIN for DC (91,67%), SPECTRAMAST DC (80%), MAMIFORT SECADO (75%), BIO-TETRA MAS (66,67%), CLOXAMAM (66,67%). 5.2 Đề nghị Người chăn nuôi có thể sử dụng rộng rãi các loại thuốc thử nghiệm trong nghiên cứu này để phòng bệnh viêm vú cho bò sữa trong giai đoạn cạn sữa. Nên áp dụng quy trình cạn sữa từ 45 – 60 ngày vì khai thác sữa quá mức hay thời gian cạn sữa ngắn sẽ ảnh hưởng đến số lượng và chất lượng của chu kỳ cho sữa kế tiếp. Thường xuyên kiểm tra sữa bằng phương pháp thử cồn, CMT để phát hiện sớm và điều trị kịp thời các trường hợp viêm vú tiềm ẩn vì đây là nguyên nhân làm giảm số lượng và chất lượng sữa, gây thiệt hại không nhỏ về kinh tế của người chăn nuôi bò sữa và cũng là nguồn gieo rắc mầm bệnh cho toàn đàn cũng như khả năng loại thải sớm. Khi bò bị viêm vú phải điều trị khỏi trước khi cho cạn sữa để tránh ảnh hưởng đến chu kỳ cho sữa sau. Các hộ chăn nuôi nên quan tâm đến công tác vệ sinh vắt sữa, vệ sinh chuồng trại, kỹ thuật vắt sữa, cạn sữa, xử lý phân và chất thải để hạn chế bò sữa bị nhiễm bệnh. 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt 1. Nguyễn Thanh Bảo (2006), Vi sinh thú y, NXB Nông Nghiệp, pp 101-104. 2. Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phượng, Lê Ngọc Mỹ, Huỳnh Văn Kháng (2001), Bệnh ở heo nái và heo con, NXB Nông Nghiệp, pp 52-82. 3. Trần Tiến Dũng, Dương Đình Long, Nguyễn Văn Thanh (2002), Sinh sản gia súc, Nhà Xuất Bản Nông Nghiệp Hà Nội. 4. Nguyễn Ngọc Thanh Hà (2004), Điều Tra Tình Hình Chăn Nuôi, Nuôi Cấy, Phân Lập Và Thử Kháng Sinh Đồ Một Số Loại Vi Khuẩn Gây Viêm Vú Tiềm Ẩn Trên Bò Sữa Thành Phố Cần Thơ, Luận Án Thạc Sĩ Khoa Học Nông Nghiệp, Trường Đại Học Cần Thơ. 5. Huỳnh Thị Mỹ Hạnh (2010), Tình hình viêm vú trên đàn bò sữa tại TP. Cần Thơ và thử nghiệm hiệu quả điều trị của thuốc forloxin, amogen, penstrep, Luận văn tốt nghiệp đại học Thư viện khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại Học Cần Thơ. 6. Lý Thị Liên Khai (1999), Kiểm soát vệ sinh thú y các sản phẩm động vật-an toàn thực phẩm, pp 169-173. 7. Nguyễn Thị Kim Loan (2000), Khảo sát khả năng sản xuất sữa và tình hình bệnh viêm vú trên đàn bò sữa lai 1/2, 3/4, 7/8 Holstein Friesian ở khu vực An Phước thuộc Huyện Long Thành Tỉnh Đồng Nai, Luận văn Bác sĩ Thú Y, Trường Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh. 8. Vương Ngọc Long (2007), Tài liệu tập huấn kiểm soát bệnh viêm vú trong chăn nuôi bò sữa, Công ty cổ phần sữa Vinamilk phòng phát triễn vững nguyên liệu. pp 3-4, 6, 9-17, 33-34, 36 (http://luanvan.net.vn/luan-van/kiem-soat-benh-viem-vu-trong-chan-nuoi-bo-sua-6249/). 9. Nguyễn Đức Lục (2003), Khảo sát tình hình bệnh viêm vú trên đàn bò sữa của một số hộ chăn nuôi thuộc xí nghiệp bò sữa An Phước, Luận Văn Thạc Sĩ Khoa Học Nông Nghiệp, Trường Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh. 10. Hồ Xuân Ngân (2007), Phân lập vi khuẩn Escherichia coli gây viêm vú trên đàn bò sữa tại thành phố Cần Thơ, Luận văn tốt nghiệp, Trường Đại Học Cần Thơ. 11. Nguyễn Hoàng Nhẩn (2012), Khảo sát tình hình chăn nuôi và bệnh viêm vú trên đàn bò sữa tại hợp tác xã bò sữa Long Hòa thành phố Cần Thơ, Luận Văn Thạc Sĩ Khoa Học Nông Nghiệp, Trường Đại Học Cần Thơ. 12. Nguyễn Hữu Ninh, Bạch Đăng Phong (1994), Bệnh Sinh Sản Gia Súc, Nhà Xuất Bản Nông Nghiệp Hà Nội. 13. Trần Thị Phận (2004), Bài giảng vi sinh vật thú y, Trường Đại Học Cần Thơ, pp5-7,18-21. 14. Nguyễn Văn Phát (1999), Điều Tra Bệnh Viêm Vú Trên Đàn Bò Sữa Khu Vực TP. Hồ Chí Minh, Luận Án Thạc Sĩ Khoa Học Nông Nghiệp, Trường Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh. 43 15. Nguyễn Vĩnh Phước (1977), Vi Sinh vật học Thú Y, Tập II, Nhà Xuất Bản Đại Học Và Trung Học Chuyên Nghiệp. 16. Phạm Hồng Phương (2005), Xác định mức độ nhiễm và hiệu quả của một số biện pháp phòng và trị bệnh viêm vú trên bò sữa tại Nông Trường Sông Hậu Thành Phố Cần Thơ, Luận văn tốt nghiệp Kỹ Sư Chăn Nuôi Thú Y, Trường Đại Học Cần Thơ. 17. Phùng Quốc Quảng (2001), Nuôi bò sữa năng suất cao hiệu quả lớn, NXB Nông Nghiệp Hà Nội. 18. Lê Văn Tạo (2006), Bệnh do vi khuẩn Escherichia coli gây ra ở lợn, Khoa học Kỹ Thuật Thú y 13. 19. Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiền, Trần Thị Lan Hương (1997), Vi Sinh vật Thú Y, Nhà xuất bản Nông Nghiệp. 20. Nguyễn Văn Thành (2005), Bài Giảng Sản Khoa, Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh. 21. Nguyễn Thị Thu Thảo (2008), Nuôi cấy, phân lập và kiểm tra tính nhạy cảm đối với kháng sinh của vi khuẩn Escherichia coli, Staphylococcus aureus trong mẫu sữa và môi trường vắt sữa ở một số hộ chăn nuôi bò sữa thuộc Thành Phố Cần Thơ, Luận văn tốt nghiệp đại học Thư viện khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại Học Cần Thơ. 22. Trần Linh Thước (2005), Phương pháp phân tích vi sinh vật trong nước - thực phẩm và mĩ phẩm, NXB Giáo Dục. 23. Hồ Như Thủy (2006), Khảo sát tình hình viêm vú tiềm ẩn trên bò sữa ở một số huyện thuộc TP. Hồ Chí Minh, Luận văn tốt nghiệp, Trường Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh, pp 38-44. 24. Nguyễn Minh Tiến (2012), Thử nghiệm hiệu quả điều trị bệnh viêm vú, viêm tử cung, viêm khớp trên bò sữa của thuốc Cequin 750 tại TP. Cần Thơ, Luận văn tốt nghiệp đại học Thư viện khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại Học Cần Thơ. 25. Võ Thị Huyền Trân (2007), Phân lập vi khuẩn Staphylococcus aureus gây bệnh viêm vú trên đàn bò sữa thuộc Thành Phố Cần Thơ, Trường Đại Học Cần Thơ, pp 42-43. 26. Nguyễn Minh Trí (2008), Kiểm soát bệnh viêm vú trên đàn bò sữa nuôi tập trung tại Trung Tâm Giống Nông Nghiệp Thành Phố Cần Thơ, Luận án thạc sĩ khoa học Nông Nghiệp, Trường Đại Học Cần Thơ. 27. Phạm Hùng Vân (2002), Cẩm nang các kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng dùng cho các phòng thí nghiệm bệnh viện, Trường Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh, Bộ Y tế. Tài liệu tiếng nƣớc ngoài 1. Abdel – Rady A., Sayed M. (2009), Epidemiological studies on subclinical: mastitis in dairy cows in Assiut Governorate, Veterinary World. 44 2. Asberger H (1994), “The Significance of Pathogenic Microorganisms in Raw Mikl”, International Dairy Federation. 3. Byarugaba D. K, J. L. Nakavuma, M. Vaarst and C. Laker (2004), mastitis occurrence and constraints to mastitis control in smallholder dairy farming systems in Uganda. 4. CLSI (2012), Clinical and Laboratory Standards Institute, Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty-Second Informational Supplement, M100 - S22 Vol. 32 No. 1. 5. Hashemi M., Kafi M. and Safdarian M. (2011), The prevalence of clinical and subclinical mastitis in dairy cows in the central region of Fars province south of Iran, Iranian Journal of Veterinary Research, Shiraz University. 6. Mekibib B., Furgasa M., Abunna F., Megersa B., Regassa A. (2010), Bovine Mastitis: Prevalence, Risk Factors and Major Pathogens in Dairy Farms of Holeta Town, Central Ethiopia, Vet World. 7. NCCLS (2004), Performance standards for antimicrobial susceptibility testing, M100-S16, Wayne, Pa, USA. 8. Shrestha S. and Bindari Y. R. (2012), Prevalence of subclinical mastitis among dairy cattle in Bhaktapur District – Nepal, Inter J Agri Biosci. Website http://www.sonongnghiep.hochiminhcity.gov.vn http://www.vcn.vnn.vn/Pictures/Upload_VCN/quytrinh/QT_2008/tc__so6.jpg http://24.media.tumblr.com/tumblr_ltmzk1LgN81r4zla1o1_400.jpg http://www.impe-qn.org.vn/impe-qn/vn/portal/InfoPreview.jsp?ID=2745 http://www.phanvienthuy.com.vn/others/uploadimages/E_coli_2000_P7201172.jpg 45 PHỤ LỤC 1. So sánh tỉ lệ số bò dƣơng tính ở địa điểm EVERGROWTH và Long Hòa Số bò thử CMT (con) Địa điểm Số vú khảo sát Số bò thử CMT Dương tính TL(%) Số vú khảo sát Dương tính TL(%) EVERGROWTH 143 74 51,75 572 184 32,17 Long Hòa 142 39 27,46 568 97 17.08 Tổng cộng 285 113 39,65 1140 281 24,65 Chi-Square Test: Số con dương tính, Số con âm tính Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Số con dương tính 74 56.70 5.280 Số con âm tính 69 86.30 3.469 2 39 56.30 5.317 103 85.70 3.493 142 Total 113 172 285 1 Total 143 Chi-Sq = 17.558, DF = 1, P-Value = 0.000 Kết quả: Tỉ lệ số bò dương tính ở địa điểm EVERGROWTH và Long Hòa khác nhau có ý nghĩa thống kê (P < 0,05).  So sánh tỉ lệ số vú dƣơng tính ở địa điểm EVERGROWTH và Long Hòa Chi-Square Test: Số vú dương tính, Số vú âm tính Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Số vú dương tính 184 140.99 13.118 Số vú âm tính 388 431.01 4.291 2 97 140.01 13.211 471 427.99 4.322 568 Total 281 859 1140 1 Total 572 Chi-Sq = 34.942, DF = 1, P-Value = 0.000 Kết quả: Tỉ lệ số vú dương tính ở địa điểm EVERGROWTH và Long Hòa khác nhau có ý nghĩa thống kê (P < 0,05). 46 2. So sánh tỉ lệ số bò dƣơng tính ở địa điểm EVERGROWTH và Long Hòa Số bò thử CMT (con) Địa điểm Số vú kiểm tra Số bò thử CMT Dương tính TL (%) Số vú kiểm tra Dương tính TL (%) EVERGROWTH 45 8 17,78 180 12 6,67 Long Hòa 6 1 16,67 24 1 4,17 Tổng cộng 51 9 17,65 204 13 6,37 m= 2 n= Trị số Chi Bình Phương 0.21429 Độ Tự do 1 P (Ho) = 0.64343 NS 2 Kết quả: Tỉ lệ số bò dương tính ở địa điểm EVERGROWTH và Long Hòa khác nhau không có ý nghĩa thống kê (P > 0,05).  So sánh tỉ lệ số vú dƣơng tính ở địa điểm EVERGROWTH và Long Hòa m= 2 n= 2 Trị số Chi Bình Phương 0.01312 Độ Tự do 1 P (Ho) = 0.90881 NS Kết quả: Tỉ lệ số vú dương tính ở địa điểm EVERGROWTH và Long Hòa khác nhau không có ý nghĩa thống kê (P > 0,05). 3. So sánh tỉ lệ giữa viêm 1 vú và viêm 2 vú Số con bò bị viêm vú Viêm 1 vú Tỉ lệ (%) Viêm 2 vú Tỉ lệ (%) EVERGROWTH 8 4 50,00 4 50,00 Long Hòa 1 1 100 0 0 Tổng cộng 9 5 55,56 4 44,44 Địa điểm m= 2 n= 2 Trị số Chi Bình Phương 0.45156 Độ Tự do 1 P (Ho) = 0.50159 NS Kết quả: Tỉ lệ giữa viêm 1 vú và viêm 2 vú khác nhau không có ý nghĩa thống kê (P > 0,05). 47 4. So sánh tỉ lệ số con không mắc bệnh giữa các loại thuốc thử nghiệm Thuốc thử nghiệm Kết quả phòng bệnh Số lƣợng (con) Số con không mắc bệnh Số con mắc bệnh Ceptifi for DC 12 11 1 CEQUIN for DC 12 11 1 BIO-TETRA MAS 3 2 1 MAMIFORT SECADO 16 12 4 CLOXAMAM 3 2 1 SPECTRAMAST DC 5 4 1 Tổng cộng 51 42 9 m= 2 n= Trị số Chi Bình Phương 1.24918 Độ Tự do 5 P (Ho) = 0.94007 NS 6  So sánh tỉ lệ của thuốc Ceptifi for DC và thuốc BIO-TETRA MAS m= 2 n= Trị số Chi Bình Phương 0.91106 Độ Tự do 1 P (Ho) = 0.33983 NS 2  So sánh tỉ lệ của thuốc Ceptifi for DC và thuốc MAMIFORT SECADO m= 2 n= Trị số Chi Bình Phương 0.72337 Độ Tự do 1 P (Ho) = 0.39504 NS 2  So sánh tỉ lệ của thuốc Ceptifi for DC và thuốc SPECTRAMAST DC m= 2 n= Trị số Chi Bình Phương 0.29625 Độ Tự do 1 P (Ho) = 0.58624 NS 2 48  So sánh tỉ lệ của thuốc BIO-TETRA MAS và thuốc MAMIFORT SECADO m= 2 n= Trị số Chi Bình Phương 0.16168 Độ Tự do 1 P (Ho) = 0.68761 NS 2  So sánh tỉ lệ của thuốc BIO-TETRA MAS và thuốc SPECTRAMAST DC m= 2 n= Trị số Chi Bình Phương 0.17778 Độ Tự do 1 P (Ho) = 0.67329 NS 2  So sánh tỉ lệ của thuốc MAMIFORT SECADO và thuốc CLOXAMAM m= 2 n= Trị số Chi Bình Phương 0.12106 Độ Tự do 1 P (Ho) = 0.72789 NS 2  So sánh tỉ lệ của thuốc MAMIFORT SECADO và thuốc SPECTRAMAST DC m= 2 n= Trị số Chi Bình Phương 0.08863 Độ Tự do 1 P (Ho) = 0.76592 NS 2  So sánh tỉ lệ của thuốc CLOXAMAM và thuốc SPECTRAMAST DC m= 2 n= Trị số Chi Bình Phương 0.17778 Độ Tự do 1 P (Ho) = 0.67329 NS 2 Kết Luận: Tỉ lệ số con không mắc bệnh giữa các loại thuốc thử nghiệm khác nhau không có ý nghĩa thống kê (P > 0,05). 49 PHIẾU ĐIỀU TRA GIA SÚC THỬ NGHIỆM Tên chủ gia súc: .................................................................................................................... Địa chỉ : Ấp (Khu Vực): .............................................. Xã (Phường): .................................. Huyện (Quận): ......................................................... Điện thoại: .......................................... Loài gia súc: ............................... Trọng lượng (kg): ......................... Số lượng (con):.......... Giới tính: Đực (con): ................................ Cái (con): ............................ Số tai: ................... Hình thức chăn nuôi:.......................................... Phương thức nuôi: .................................... Chuồng trại:  Kiên cố,  Bán kiên cố; Điều kiện vệ sinh: ............................................... Thức ăn: ................................................................................................................................ Nguồn nước sử dụng: ............................................................................................................ Vaccine đã tiêm phòng: ........................................................................................................ Tình trạng sức khỏe: Thân nhiệt: ............................................................................................................................ Hô hấp: .................................................................................................................................. Tiêu hóa: ............................................................................................................................... Sinh dục: ............................................................................................................................... Triệu chứng khác: ................................................................................................................. Bệnh xảy ra gần đây: ............................................................................................................ Thuốc điều trị: ....................................................................... Liều lượng (ml/kgP) .............. ....................................................................... Liều lượng (ml/kgP) .............. ....................................................................... Liều lượng (ml/kgP) .............. ....................................................................... Liều lượng (ml/kgP) .............. Ngày bắt đầu điều trị:............................................................ Ngày kết thúc: ....................... Ghi nhận khi sử dụng thuốc thử nghiệm: Thuốc thử nghiệm: ................................................................................................................ Thời gian mang thai: ............................................................................................................ Thời gian cạn sữa: ................................................................................................................ Thời gian lấy mẫu sữa: ......................................................................................................... Ngày bắt đầu thử nghiệm thuốc: ........................................... Ngày kết thúc: ....................... Ghi nhận kết quả sau khi sử dụng thuốc thử nghiệm: Bò không mắc bệnh viêm vú: .................................................................................... Viêm vú ngay sau khi sinh:........................................................................................ Số lượng vú bị viêm:.................................................................................................. 50 HÌNH GHI NHẬN TRONG QUÁ TRÌNH THỰC HIỆN LUẬN VĂN Hình 21. Ceptifi for DC Hình 22. CEQUIN for DC Hình 23. BIO – TETRA MAS Hình 24. CLOXAMAM Hình 25. SPECTRAMAST DC Hình 26. MAMIFORT SECADO Hình 27. Vime – Iodine 51 Thuốc sử dụng trong quá trình thực hiện luận văn Vime – Iodine Thành phần: Povidone iodine ……………… 10.000mg Exp ………………………………...100ml Công dụng: - Thuốc sát trùng phổ rộng, có khả năng tiêu diệt nhanh chóng tất cả các loại mầm bệnh bao gồm: virus, vi khuẩn, Mycoplasma và nấm mốc như virus cúm gia cầm, lở mồm long móng, Newcastle, dịch tả, PRRS ... - Rất an toàn cho người và gia súc, có thể sử dụng để sát trùng nước uống, sát trùng chuồng trại, dụng cụ, trang thiết bị, nhà ấp, máy ấp trứng, xưởng chế biến thức ăn gia súc, ... - Sát trùng bầu vú, vết thương, sát trùng da chuẩn bị phẩu thuật, tiêm, thiến,... - Giúp phòng bệnh và ngăn chặn hữu hiệu sự lây truyền bệnh trong chăn nuôi gia súc, gia cầm. - Hiệu quả tác dụng lâu dài trên 24 giờ, không ăn mòn kim loại. Cách dùng: - Sát trùng chuồng trại, phương tiện vận chuyển, lò giết mổ, chợ buôn bán gia súc, gia cầm: 15ml/ 4 lít nước. Phun xịt với lượng 1 lít / 5m3 nền. - Sát trùng bầu vú, vết thương, móng: Pha 10ml/2 lít nước. - Sát trùng da khu vực chuẩn bị phẫu thuật, nơi tiêm, thiến: Pha 10ml/1lít nước. - Phun sương trực tiếp trên chuồng có gia súc gia cầm phòng bệnh do vi khuẩn, virus, nấm gây ra: Pha 15ml/4 lít nước. - Tẩy rửa chuồng trại, máng ăn máng uống, ủng cao su, rửa lò ấp: pha 10ml/ 4 lít nước. - Sát trùng trứng trước khi đưa vào lò ấp: Pha 10ml/ 10lít nước. - Xử lý nước uống cho gia cầm chống mầm bệnh: Pha 10ml/ 20 lít nước. - Sát trùng hố chôn GSGC bệnh: đổ trực tiếp dung dịch thuốc nguyên chất xuống hố chôn và lấp đất nén chặt. Chú ý : Dung dịch sau khi pha sử dụng trong vòng 24 giờ. Bảo quản : nơi khô mát, tránh ánh sáng trực tiếp. 52 [...]... thiết hiện nay Được sự phân công của bộ môn Thú Y, Khoa Nông Nghiệp & Sinh học Ứng Dụng Trường Đại Học Cần Thơ và sự hỗ trợ của Công ty Cổ Phần Sản Xuất Kinh Doanh Vật Tư và Thuốc Thú Y Vemedim, chúng tôi tiến hành đề tài: Đánh giá hiệu quả của một số loại thuốc phòng bệnh viêm vú bò sữa nhằm mục tiêu đánh giá hiệu quả của thuốc bơm vú bò để phòng bệnh viêm vú trên bò sữa 1 CHƢƠNG 2 CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1... E.coli 31 9 Tỉ lệ số bò sữa viêm vú đƣợc khảo sát bằng phƣơng pháp CMT 34 10 Tỉ lệ bò sữa bị viêm vú sau khi sử dụng thuốc bơm vú 35 11 Số lƣợng bò sữa bị viêm vú theo số vú 36 12 Mức độ viêm vú ở bò sữa đƣợc kiểm tra bằng phƣơng pháp CMT 37 13 Kết quả kiểm tra mẫu sữa 38 14 Kết quả phân lập vi khuẩn đối với mẫu sữa 38 15 Kết quả kháng sinh đồ đối với vi khuẩn Staphylococcus aureus 39 16 Kết quả kháng sinh... PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Nội dung nghiên cứu Thử nghiệm hiệu quả của thuốc bơm vú bò để phòng bệnh viêm vú bò sữa trong giai đoạn bò cạn sữa Dùng phương pháp CMT để đánh giá mức độ viêm vú bò sữa và lấy mẫu sữa để phân lập, kiểm tra sự hiện diện của các loài vi khuẩn gây bệnh có trong sữa Kiểm tra tính nhạy cảm của kháng sinh đối với các chủng vi khuẩn phân lập được 3.2 Phƣơng tiện... dụng: Đặc trị viêm vú ở thể cấp tính và thể tiềm ẩn trên bò sữa, trâu bò giống hoặc phòng ngừa viêm vú khi cạn sữa Liều lƣợng và cách dùng: Tra đầu kim vào núm vú, bơm 10 ml thuốc vào mỗi thùy vú, bít núm vú rồi dùng tay thoa đều bầu vú từ dưới lên Mỗi ngày bơm thuốc 2 lần ngay sau khi vắt sữa Điều trị viêm vú: Dùng liên tục 3 - 4 ngày Phòng ngừa viêm vú: Dùng trong 1 - 2 ngày lúc cạn sữa Thời gian... ngừng vắt sữa và bơm thuốc bơm vú cạn sữa vào bầu vú (mỗi thùy vú một ống)  Quan sát theo dõi: thường xuyên quan sát và sát trùng các núm vú 2.4.3 Kiểm soát bệnh viêm vú ở bò cạn sữa Theo Vương Ngọc Long (2007), trong chương trình kiểm soát và hạn chế bệnh viêm vú, giai đoạn bò cạn sữa là giai đoạn rất quan trọng Giai đoạn này là giai đoạn điều trị dứt điểm các bò bị viêm vú trong giai đoạn vắt sữa mà... đàn bò sữa khỏe mạnh để cung cấp nguồn sữa chất lượng cao cho con người Song song với lợi nhuận to lớn từ sữa mang lại cho người chăn nuôi thì vấn đề dịch bệnh diễn biến ngày càng phức tạp hơn, làm cho việc chăn nuôi bò sữa gặp nhiều khó khăn và hạn chế Một trong những bệnh làm ảnh hưởng trực tiếp đến sản lượng và chất lượng sữa bò là bệnh viêm vú bò sữa. Vì vậy, việc hạn chế bò sữa bị bệnh viêm vú là... bò 3.3.2.2 Cách tiến hành bơm thuốc cạn sữa Sau khi đã kiểm tra bầu vú không còn tiết sữa nữa, bầu vú không sưng đỏ thì tiến hành bơm thuốc thử nghiệm cho bò như sau: Dùng khăn sạch lau vú sạch sẽ, vắt sữa trong bầu vú ra hết hoàn toàn, sử dụng dung dịch Vime - Iodine 0,5% để sát trùng núm vú, dùng thuốc bơm vú cạn sữa bơm vào bầu vú, mỗi thùy vú một ống (4 ống/ con), sau khi bơm thuốc bơm vú cạn sữa. .. tra bò sữa Cần kiểm tra bò trước khi bơm thuốc cạn sữa vào bầu vú, kiểm tra bầu vú có còn tiết sữa nữa không Nếu bò đã có mức sản xuất sữa thấp 1 - 2 kg sữa/ ngày thì tiến hành cạn sữa hẳn: vắt cho bầu vú khô hết sữa, sát trùng núm vú, tiếp tục giảm thức ăn và 21 nước uống Sau đó, tiếp tục kiểm tra 1 - 2 ngày nếu thấy bầu vú không còn tiết sữa nữa, bầu vú không sưng đỏ thì tiến hành bơm thuốc cạn sữa. .. về bệnh viêm vú Viêm vú là sự viêm của một hay nhiều thùy vú với sự hiện diện của một hay nhiều loài vi khuẩn trong mô vú dẫn đến sự gia tăng số lượng tế bào thân (somatic cells) trong sữa, đặc biệt là tế bào bạch cầu, đồng thời làm thay đổi tính chất vật lý và hóa học của sữa, hậu quả là làm giảm sản lượng sữa, nghiêm trọng có thể gây chết thú (Phạm Hồng Phương, 2005) 4 2.3.1 Nguyên nhân gây bệnh viêm. .. lại số tai bò, ngày lấy sữa Sữa được bảo quản lạnh đưa về phòng thí nghiệm trong 2 – 8 giờ Bảng 2 Số lƣợng mẫu sữa Địa điểm Số lƣợng EVERGROWTH 45 Long Hòa 6 Tổng cộng 51 3.3.2.4 Phƣơng pháp thử CMT (California Mastitis Test) Dùng thuốc thử Leucocytest (có màu tím) thử sữa từ mỗi thùy vú của bò, theo tỉ lệ sữa và thuốc thử là 1 : 1 (2 ml sữa : 2 ml thuốc thử) Đây là phản ứng bán định lượng để đánh giá