BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ư ợ c HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THANH XUÂN GÓP PHẦN NGHIÊN cúll Mỗ HÌNH GÂY TĂNG CHOLESTEROL MÁU TRÊN THỎ VÀ THỬ TÁC DỤNG ■ SINH HỌC CỦA MỘT CHÈ THUỐC ĐÔNG ■ m Dược m (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1998 - 2003) Người hướng dẫn TS. Nguyễn Văn Đồng Nơi thực hiện Bộ môn hoá sinh Thời gian thực hiện 3/03-5/03 ẩ r C] HÀ NỘI,THÁNG 05 - 2003 VV " 1* LÒI CAM ON D c h o à n thảnh đ ư ọ c k hoá luậíi t ố t íig h iộ p lìàỵ, đ ầu tiê n em xiíi cliâíi thàíih cam o il tiế n s ĩ N guyễn Yăíi Đ ổ íig người thầy đ ã tận tìíili hưỏíig dẫn, g iú p đC3, đ ộ íig v iổ íi cm tro íig s u ố t thời gian th ự c liiện k h oá luận íìậ ỵ .cả m Oil c ô N guỵễn Thị Nga b ộ môíi b à o c lic Ìigười đ ã g iú p đ ỡ cm tro n g kỹ thuật b à o chế chè thuốc, cảm Oil các tliầỵ cô trong bộ môíi Hoá sinh đã luôn luôn tạo những đ iổ u k iện t ố t nhất c h o ch ú íig em . C u ố i cù íig, x iíỉ cảm ƠÍ1 tấ t c ả - c á c b ạ n cìư ig th ự c hiộíi k lioá luậíi tại b ộ môíi, nhữíig íigư òi b ạ n đ ã luôíi b ê n cạíili đ ộ íig v iê íi g iú p đ ỡ tô i tro n g th òi gian q u a. Hả Nội25/5/03. CHÚ GIẢI CÁC CHỮ VIẾT TẮT CH cholesterol CHE cholesterol esterase CHO cholesteroloxydase CM chylomicron GK glycerol kinase GOP glycerol-3phosphate oxydase HDL lipoprotein tỷ trọng HDL-C cholesterol trong HDL HDL-C/Ctp tỷ lệ cholesterol trong HDL trên cholesterol toàn ph HMG-CoA hydroxymethyl glutaryl-CoenzymA IDL lipoprotein tỷ trọng trung bình LDL lipoprotein tỷ trọng Lp lipoprotein LPL lipoprotein lipase NXB nhà xuất bản POD peroxydase TG triglycerid VLDL lipoprotein tỷ trọng rất thấp VXĐM vữa xơ động mạch cao thấp MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỂ..............................................................................................................1 PHẦN 1: TỔNG QUAN..............................................................................................3 1.1.Đại cương về lipid..........................................................................................3 1.1.1.Thành phần và vai trò sinh lý của lipid.................................................. 3 1.1.2. Lipoprotein và sự vận chuyển lipid.............................................. 3 1.1.3.Cholestero l ................................................................................................ 6 1.2. Bệnh tăng lipid máu và VXĐM................................................................7 1.2.1.Bệnh căn tăng lipid máu.......................................................................... 7 1.2.2.Bệnh căn VXĐM........................................................................................ 7 1.2.3. Tăng lỉpỉd maú với VXĐM..............................................................9. 1.3. Thuốc điều trị tăng lipid máu và VXĐM........................................... .9 1.3.1. Các thuốc theo y học hiện đại..................................................................9 1.3.2. Các thuốc đông dược............................................................................... 11 1.4. Chè thuốc..................................................................................................... 12 1.5. VXĐM thực nghiệm.......................................................... ........................ 12 PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ............................................................ 14 2.1. Đối tượng và phương pháp nghiên cứ u ...................................................16 2.1.1. Bài thuốc...................................................................................................ỉ 9 2.1.2. Mô hình gây tăng cholesterol trên thỏ và tác dụng trên thỏ của chè thuốc....................................................................................................................2 ỉ 2.1.3. Các xét nghiệm đánh giá .......................... ............................................22 2.1.4. Phương pháp xử lý kết q u ả.......................... ......................................... 22 2.2. Nội dung thực nghiệm và kết q u ả ......................................................... 23 2.2.1. Chế biến chè thuốc.................................................................................. 24 2.2.2. Định lượng CH trong óc lợn.....................................................................30 2.2.3. Khảo sát sự ảnh hưởng của chế độ ăn giầu lipid đến các chỉ sốlipid theo thời g ia n ...................................................................................................... 24 2.2.4.Đánh giá tác dụng hạ lipid máu của chè thuốc .................. .................30 2.2.5. Nhận xét tổng quát và bàn luận..................................................... 33 PHẦN 3:KẾT LUẬN VÀ ĐỀ x u ấ t ........................................................................36 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỂ Tăng lipid máu, một trong những yếu tố nguy hại quan trọng nhất tác động đến quá trình hình thành và phát triển của vữa xơ động mạch (VXĐM). Đây là một bệnh phổ biến mang tính thời đại là nguyên nhân dẫn đến nhiều tai biến tim mạch nguy hiểm. Sự gia tăng cũng như tai biến của nó liên quan trực tiếp đến sức khoẻ và đời sống của con người, là nguyên nhân tử vong hàng đầu của nhiều nước công nghiệp phát triển, ở nước ta những năm gần đây, bệnh này đang có chiều hướng gia tăng theo nhịp điệu phát triển của xã hội. Do vậy vấn đề nghiên cứu về việc phòng và điều trị bệnh VXĐM ngày càng được ngành y tế quan tâm. Hiện nay, các thuốc có tác dụng hạ lipid máu và điều trị tăng cholesterol có rất nhiều, nhưng chủ yếu là hoá dược. Đa số các thuốc này đều có cơ chế tác dụng rõ ràng, nhưng thường phải dùng lâu dài nên gây ra nhiều tác dụng phụ. Để hạn chế được nhược điểm này xu thế hiện nay là sử dụng thuốc có nguồn gốc tự nhiên đặc biệt là từ thảo mộc. Bài thuốc H 3LIM đã được tiến sỹ Nguyễn Văn Đồng và Thạc sỹ Nguyễn Thuỳ Dương xây dựng và thử tác dụng trên thỏ gây VXĐM đã chứng tỏ dịch sắc bài thuốc được uống đồng thời với chế độ ăn giàu lipid trong 90 ngày đã có tác dụng hạ cholesterol toàn phần, TG, giảm bớt tỷ lệ tổn thương của động mạch chủ và động mạch vành. Với mục đích tiếp tục nghiên cứu bài thuốc dưới dạng chè thuốc, thử tác dụng dịch hãm chè thuốc trên thỏ đã gây tăng cholesterol máu. Đồng thời theo dõi sự biến đổi lipid máu ở nhiều thời điểm khác nhau trên thỏ được gây tăng CH có điều trị và không được điều trị. Chúng tôi đã tiến hành thực hiện theo các nội dung sau: - Sơ bộ xây dựng quy trình bào chế chè thuốc 1 - Góp phần nghiên cứu hoàn thiện mô hình gây VXĐM trên thỏ từ nguồn thức ăn giàu lipid - Đánh giá tác dụng của chè thuốc, tới các chỉ số lipid: + Nồng độ cholesterol toàn phần + Nồng độ cholesterol trong HDL + Nồng độ triglycerid + Tỷ lệ cholesterol trong HDL trên cholesterol toàn phần 2 PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1. Đai cương về lipid 1.1.1. thành phần và vai trò của Iipid[3] Lipid là sản phẩm ngưng tụ của acid béo và alcol hầu hết dưới dạng este có trong động vật và thực vật. Trong cơ thể người và động vật lipid có vai trò chính là cung cấp, dự trữ năng lượng và tham gia cấu tạo tế bào. Ngoài ra lipid còn có vai trò trong điều hoà thân nhiệt, hấp thụ và vận chuyển các chất tan trong dầu đặc biệt là vitamin A,D,E,K và các steroid. Thành phần của lipid máu gồm triglycerid, cholesterol, phospholipid, sterid và các lipid phức tạp khác. Chúng được vận chuyển dưới dạng Lp. 1.1.2. Lipoprotein (Lp) và sự vận chuyển Iipid[3,4,15] * Cấu tạo và phân loại Lp Tính chất chung của lipid là không tan trong nước. Trong máu nó kết hợp với protein (apolipoproíein) để chuyển thành dạng hoà tan lưu thông trong máu gọi là Lp. Lp có dạng gần như hình cầu đường kính từ 100 đến 800 Angstron phần vỏ của hình cầu (phân cực)'apolipoprotein và phospholipid làm cho Lp hoà tan trong huyết tương, tiếp theo là CH tự do, phần trung tâm (không phân cực) gồm TG và CH este hoá. + Phân loại Theo tỷ trọng được phân làm 5 loạixhylomicron, lipoprotein tỷ trọng rất thấp (VLDL), lipoprotein tỷ trọng thấp (LDL), lipoprotein tỷ trọng trung bình (IDL), lipoprotein tỷ trọng cao (HDL) 3 Bảng: phân loại tính chất của các lipoprotein huyết tương Chylomicron VLDL IDL - LDL HDL [...]... Nội và được xử lý theo tiêu chuẩn DĐVN qui định tiến hành chế biến chè thuốc 2.1.2 Mô hình gây tăng Cholesterol trên thỏ và thử tác dụng sinh học của chè thuốc * Động vật thí nghiệm Thỏ thực nghiệm khỏe mạnh mua tại Viện Vệ Sinh Dịch Tễ TW Trọng lượng ban đầu 1,8 - 2,2kg, số lượng 20 con, giới tính là đực (nhằm tránh hiện tượng sinh sản gây sai lệch kết quả thực nghiệm) * Nguyên tắc Mô hình gây tăng cholesterol. .. sung cholesterol trên chuột nhắt, chuột cống, trên gà Gần đây đã xây dựng được mô hinh VXĐM thực nghiệm trên thỏ với nhiều kết quả tốt Việc xây dựng mô hinh VXĐM thực nghiệm trên động vật sẽ là một trong những tiền đề quan trọng trong công tác nghiên cứu, thử tác dụng sinh học của các thuốc sau này 13 PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 Đối tương và phương pháp nghiên cứu 2.1.1 Bài thuốc nghiên cứu *... nghiệm và kinh phí cao vì vậy thực nghiệm trên thỏ hay được sử dụng Trên thực nghiệm, người ta có thể gây VXĐM bằng 2 cách: 12 + Gây VXĐM bằng phương pháp gây tăng cholesterol ngoại sinh + Gây VXĐM bằng phương pháp gây tăng cholesterol nội sinh * Gây VXĐM bằng phương pháp gây tăng cholesterol ngoại sinh Mô h ình thực nghiệm của Anitchkow được coi là kinh điển và được nhiều nước trên thế giới áp dụng. .. trị tăng Cholesterol huyết - Chế phẩm Cholestin của Danaphar với thành phần Ngưu tất, Nghệ, Hoa hoè có tác dụng điều trị Cholesterol cao, phòng ngừa VXĐM 11 - Nguyễn Văn Đồng và c/s (Trường ĐH Dược Hà Nội) ngiên cứu tác dụng của một số vị Xuyên khung, Đương qui, Đào nhân, Đan sâm Trên chuột gây tăng CH ngoại sinh thấy giảm rõ rệt CH huyết, lipid toàn phần 1.4 Chè thuốc [11] Chè thuốc là một loại thuốc. .. chậm tiến triển của VXĐM, ngoài tác dụng trên cholesterol Vitamin E, c , beta caroten (tiền chất của vitamin A) có tác dụng chống oxy hoá mạch, làm giảm biến cố mạch vành * Các aid béo không no omega —3 Các acid béo này có tác dụng làm giảm TG và VLDL là chính, giảm nhẹ cholesterol toàn phần, LDL và tăng nhẹ HDL 1.3.2 Các thuốc đông dược [1,8,16] * Thuốc chống đông máu: thuốc có tác dụng tăng cường sự... dụng hạ huyết áp làm tăng lưu lượng máu động mạch vành tim của chó gây mê Thuốc có tác dụng ức chế sự ngưng tập tiểu cầu, phòng nhồi máu cơ tim, hồng hoa còn có tác dụng chống đông máu và tiêu fibrin trên invivo có tác dụng hạ cholesterol trên mô hình gây tăng cholesterol ngoại sinh 15 - Liều dùng: 6 - 12g + Ngưu tất (Radix Achyranthis Bidentatae): [1,5,8,9] Là rễ đã phơi hay sấy khổ của cây Ngưu tất (Achyranthes... xây dựng mô hình VXĐM trên động vật từ lâu đã được các nhà khoa học ở nhiều nước nghiên cứu, đề cập đến Trên thực tế có thể gây VXĐM cho nhiều loài động vật còn có những mô hình thực nghiệm trên gà trống (Dauber, Katz), trên chim, trên chó và gần đây đã tiến hành thực nghiệm trên khỉ (Taylor và B.Cox) đã gây được những tổn thương VXĐM điển hình với nồng độ cholesterol cao Trong đó gây VXĐM trên khỉ... đó tăng thoái hoá VLDL và giảm TG máu Fibrat cũng làm giảm sinh tổng hợp cholesterol và tăng tiết cholesterol vào mật Chỉ định chủ yếu của các ílbrat là làm giảm TG máu ở các bệnh nhân tăng TG máu có cholesterol bình thường * Probucol và các chất chống oxy hoá Probucol có thể làm giảm cholesterol máu, trong đó giảm LDL và HDL-C, tác dụng với TG dao động Hạ HDL-C là tác dụng không mong muốn của các thuốc. .. có tác dụng hạ lipid máu được công bố và áp dụng như: - Ngưu tất có tác dụng hạ cholesterol huyết trên thỏ, trên lâm sàng hạ cholesterol huyết ở người cholesterol cao Viện dược liệu và XNDPTW 25 sản xuất viên Bidentin dạng nang điều trị chứng cholesterol huyết cao, VXĐM - Nghệ cũng gây tác dụng hạ cholesterol trên thỏ, điều trị cho bệnh nhân VXĐM thấy làm giảm cholesterol XNDPTW 25 sản xuất viên Cholestan... pháp gây tăng cholesterol nội sinh Dùng dẫn chất của estrogen tiêm cho gà hoặc tiêm Triton trên chuột nhắt hay chuột cống đều gây được VXĐM Dùng adreanlin, muối kim lơại nặng của ecgotamin, adreanlin phối hợp với thyroxin hoặc với vitamin D liều cao có thể gây được xơ cứng động mạch Với việc áp dụng những mô hình thực nghiệm trên, tại trường ĐH Dược Hà Nội đã có nhiều công trình nghiên cứu gây tăng cholesterol ... mục đích tiếp tục nghiên cứu thuốc dạng chè thuốc, thử tác dụng dịch hãm chè thuốc thỏ gây tăng cholesterol máu Đồng thời theo dõi biến đổi lipid máu nhiều thời điểm khác thỏ gây tăng CH có điều... bào chế chè thuốc - Góp phần nghiên cứu hoàn thiện mô hình gây VXĐM thỏ từ nguồn thức ăn giàu lipid - Đánh giá tác dụng chè thuốc, tới số lipid: + Nồng độ cholesterol toàn phần + Nồng độ cholesterol. .. quan trọng công tác nghiên cứu, thử tác dụng sinh học thuốc sau 13 PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 Đối tương phương pháp nghiên cứu 2.1.1 Bài thuốc nghiên cứu * Công thức thuốc gồm vị: Sơn