Bộ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI TRẦN THỊ ĐẢM NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG METRONIDAZOL BANG PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ HÂP THỤ TỬ NGOẠI TRONG MƠI TRƯỜNG KIỂM KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP D ợ c s ĩ KHỐ (1997 - 2002) Ngưòi hướng dẫn : TS. T R Ầ N đ ứ c h ậ u Nơi thực : BỘ MƠN HỐ Dược. Thòi gian thực : 03 / 2002 HÀ NỘI, THÁNG 05 - 2002 05 / 2002 h ê íy t i ỉ iit h ụ ^ Í Ả Im iụ . h iê í đ tL ÇỵfỴỵcỈQl SÂ U sắ e n h ấ t tố i 'X)cÂ(ÌẨ.f nạuằi thầụ. irựe. iìêịi hưầềỉg. dẫn, ỉtă dành nhiều eồnạ. iứe ạẦúệL ĩtẵ im tv4ujjềềL đại nhữníẬ kình Míịhiêm q u í háu trs*iạ. »nối qitá trình- tồi thựe. hiên téa luăểi ỉế í ngJUtêfL. Çỵèi ddn ehăn thành eăwt đtL ếe thầiẬ eA íịĩáí%^ ếe kụ thuật úiĩn â hẠ wimi hjấ€L dượ^ ạiúfL đẵ tọí% điều kiên đê tồi ố ihê kữàn thành tết khóa luản. Q uếi énựf tồi úẠ étiíỊ. eArn đếi ạia Ểtinh^ imn lứ oủ n íịu ồì thân ¿tã ĩtẵnạ. úỉẻn ŨỈ! hêí iầềiụ. ụiÚỊL ítẵ ỉtê tồi hũìin thĩinh Ulióíi luận tất nghiêfL nàij 'Tõà nài, nạàụ. 20 tháníỊ. 05 năm 2002. Sink úìêềt Çỵvun Çỵhi ảm. MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN 1. TỔNG QUAN 1.1. Sơ lược Metronidazol 1.1.1. Cơng thức 1.1.2. Các dạng khác củaMetronidazol 1.1.3. Điều chế L IA Tính chất 1.1.5. Tác dụng dược lý. 1.1.6. Những ý sử dụng. 1.1.7. Dạng bào chế. 1.2. Điểm qua sơ'phương pháp định lượng Metronidazol. 1 .2 . . Phương pháp định lượng Metronidazol ngun liệu. 1.2.2. Phưoỉng pháp định lượng Metronidazol viên nén. 1.3. Nhận x é t. PHẦN 2. THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ 11 2.1. Đối tượng nghiên cứu. 11 2.1.1. Dụng cụ 11 2.1.2. Hóa chất. 11 2.2. Phương pháp nghiên cứu. 11 2.3. 12 Kết nghiên cứu. 2.3.1. Khảo sát điều kiện định lượng 12 2.3.2. Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ đến độ hấp thụ dung dịch. 14 2.3.3. Theo dõi độ ổn định dung dịch sản phẩm cuối cùng. 15 2.3.4. Xây dụng phương pháp ứng dụng. 15 2.3.5. Đánh giá phương pháp 17 2.3.6. Xây dựng phương pháp định lượng Metronidazol trongviên nén. PHẦN 3. KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO. 20 26 ĐẶT VẤN ĐỂ • Metronidazol dẫn chất imidazol ethanol, thường sử dụng điều trị nhiễm khuẩn, kị khí tác dụng nhanh ổn định với Bacteroides fragilis (là khuẩn kị khí chủ yếu gây bệnh). Mặt khác Metronidazol khuyếch tán mơ, nên dùng tốt nhiễm khuẩn tồn thân, viêm màng tim, nhiễm khuẩn thần kinh trung ương (áp xe não, viêm màng não mủ .) nhiễm khuẩn vùng đầu cổ, viêm phổi, áp xe phổi, nhiễm khuẩn đường tiêu hóa, nhiễm khuẩn đường tiết niệu [2]. Ngồi ra, Metronidazol dùng phối hợp với số thuốc khác điều trị viêm lt dày, tá tràng. Metronidazol nhờ nhóm Imidazol có hoạt tính dược lý kháng ký sinh đơn bào ( Protozoa ) Entamoeba, Trichomonas, Giardia khoang phủ tạng, mơ kháng vi khuẩn kỵ khí. Trong pH sinh lý ( pH = 6,6 ), Metronidazol khơng bị ion hố hấp thu bỏfi vi sinh vật tính thân mỡ cao phân tử. Cơ chế tác dụng bẻ gãy DNA vi smh vật [6 ]. Hiện nay, thị trường có nhiều dạng bào chế Metronidazol như: viên nén, thuốc mỡ, thuốc tiêm, thuốc đặt trực tràng, thuốc đặt âm đạo V .V với nhiều biệt dược khác nhau. Vì vấn đề kiểm tra chất lượng ngun liệu làm thuốc thành phẩm nhiệm vụ quan trọng. Trong DĐVN III có chun luận Metronidazol dạng ngun liệu viên nén. Song để mở rộng thêm phưcỉng pháp định lượng Metronidazol, góp phần làm sở cho cơng tác kiểm nghiệm thuốc, khn khổ khố luận tơì nghiệp chúng tơi dự định tiến hành nghiên cứu nội dung sau: Nghiên cứu định lượng Metronidazol (ngun liệu viên nén) phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại mơỉ trường kiềm. PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1. sơ Lược VỂ METRONIDAZOL 1.1.1. Cơng thức: [1] • Cơng thức cấu tạo: CH2 - C H - O H 02N ^N ^C H -N • Cơng thức phân tử: QH9N3O3 • Phân tử lượng : 171,16 • Tên khoa học: - ( ß - hydroxyethyl) - -methyl - - nitroimidazol 1.1.2. Các dạng khác Metronidazol; [10, 15, 16] • Dang muối hvdroclorid: - Cơng thức phân tử: QH9N3O3.HCI - Phân tử lượng : 207,6 • Dang muối benzoat: - Cơng thức phân tử: QH9N3O3.C7H4O - Phân tử lượng : 275,3 1.1.3. Điều chế: [1] Metronidazol điều chế cách ngưng tụ 2-methyl-5nitroimidazol với ethylen clorohydrin. Phương pháp tổng hợp sau: Cho lượng dư lớn ethylen clorohydrin ngưng tụ với - methyl - nitroimidazol cách đun nóng. Sau tách clohydrin dư, chiết cắn nước, kiềm hố dịch chiết chiết cloroform. Bốc cloroform Metronidazol thơ, đem kết tinh lại ethyl acetat. H CH2 - C H - O H ,o — N + C I - C H 2- C H - O H 02N ^^N CH3 I —N 1.1.4. Tính chất; • Tinh thể hay bột kết tinh trắng vàng, khơng mùi, vững bền ngồi khơng khí bị sẫm màu dần tiếp xúc với ánh sáng [1,7,10] • Nhiệt độ nóng chảy: 159 - 163°c • tan nước (1/100), ethanol (1/200), cloroform (1/250) ether. Hơi tan aceton dicloromethan, tan dimethyl formamid, tan dung dịch acid lỗng [9]. Độ tan Metronidazol cải thiện dùng chất làm tăng độ tan hỗn hợp dung mơi tan nước. • Phổ tử ngoại: Metronidazol hấp thụ cực đại ánh sáng mơi trường acid bước sóng 277nm, mơi trường kiềm 319nm [9] nước 324nm [8 ]. • Một số tác giả nhận xét rằng: chế phẩm chứa Metronidazol có độ ổn định tốt pH « [8 ]. 1.1.5. Tác dụng dược lý: [5,10] • Dược lực ( phổ kháng khuẩn, chế tác dụng ): - Metronidazol thuốc có tác dụng ngun sinh động vật ( Trichomonas vaginalis, Amip, Giardia lambia ) nhiều vi khuẩn kị khí ( gồm Bacteroides ữagilis, Eusobacterium sporulae, Clostridium perfrungens .), cầu khuẩn kỵ khí. - Có tác dụng diệt vi khuẩn Helicobacter pylori gây bệnh viêm dày mạn tính lt dày tá tràng. - Cơ chế tác dụng: sau uống, Metronidazol bị vi khuẩn ruột đặc biệt vi khuẩn kỵ khí khử nhóm nitro, tạo thành sản phẩm trung gian gắn vào vị trí quan trọng tế bào vi khuẩn với phá vỡ ức chế tổng hợp ADN. Q trình oxy hố khử chịu ảnh hưởng rõ rệt protein vận chuyển điện tử oxy hố khử thấp đóng vai trò việc chuyển hố vi khuẩn kị khí. Tác dụng Metronidazol Trichomonas, Amip Giardia lambía phá vỡ ức chế tổng hợp ADN. • Dược động học: - Hấp thu: thuốc hấp thu nhanh uống, tiêm tĩnh mạch hay đặt trực tràng. Dạng thuốc đặt âm đạo hấp thu ít. Dạng thuốc mỡ bơi da hấp thu tốt. Chế phẩm gel bơi âm đạo đạt sinh khả dụng khoảng 56% [10]. - Phân bố: thể, Metronidazol phân bố rộng rãi có mặt nhiều mơ dịch thể ( mật, xương, sữa mẹ, dịch não tuỷ, áp xe gan, nước bọt, tinh dịch, dịch tiết âm đạo ) với nồng độ tương tự huyết tương. Thuốc qua thai vào tuần hồn thai nhi nhanh chóng. Liên kết với protein huyết tưcmg khơng q 20%. - Chuyển hố: Metronidazol chuyển hố qua gan cách oxy hố mạch nhánh liên hợp glucuronic. - Thải trừ: thải trừ qua nước tiểu, chủ yếu dạng chất chuyển hố thời gian 48 giờ, lượng nhỏ thải trừ qua phân. Thời gian bán huỷ khoảng lâu người bị bệnh gan. • Chỉ định [5]: - Viêm niệu đạo âm đạo Trichomonas, lỵ amip, viêm miệng, nhiễm khuẩn vi khuẩn kị khí. - Tiêm truyền tĩnh mạch trường hợp bệnh nhân khơng dùng thuốc uống để điều trị nhiễm khuẩn máu vi khuẩn kị khí nhiễm khuẩn ngực, bụng, đường sinh dục tiết niệu phụ nữ, áp xe não màng não, xưcmg khớp, viêm màng tim nhiễm khuẩn Bacteroides fragilis kháng Penicillin Aminosid. - Phòng tái phát bệnh lt tá tràng. Uống kết hợp với Amoxyciclin Bismuth nitrat kiềm. - Điều trị mụn trứng cá thơng thường mụn trứng cá đỏ, mụn mủ viêm nhiễm da, vết thương, vết bỏng lên da, hăm da trẻ em. • Liều dùng [10,15,16]: - Amip ruột gây lỵ: Người lớn: Trẻ em: l,5g/ngày chia lần 30 - 40mg/kg/ngày chia lần. - Amip gan gây áp xe gan, dẫn lưu mủ song song với điều trị Metronidazol l,5g/ngày liên tục ngày. - Bệnh Trichomonas: gây viêm âm đạo phụ nữ đường niệu nam. Liều 2g 250mg/lần X lần/ngày điều trị 10 ngày. - Bệnh Giardia intertinalis: điều trị ngày. Tuỳ theo tuổi. Người lớn: 0,75 - Ig/ngày Trẻ em: 10 - 15 tuổi: 500mg/ngày - tuổi: 375mg/ngày - tuổi: 250mg/ngày - Bệnh vi khuẩn kị khí; gây bệnh nhiễm khuẩn huyết, viêm phúc mạc, viêm ruột thừa, lt dày Người lớn: - l,5g/ngày Trẻ em: 20 - 80mg/kg/ngày. - Dự phòng nhiễm khuẩn vi khuẩn kị khí phẫu thuật: phối hợp Metronidazol SOOmgAần X lần/ngày với thuốc đặc hiệu vi khuẩn đường ruột. Bắt đầu dùng từ 48 giờ, trước phẫu thuật. Với trẻ em: 20 - 30 mg/kg/ngày. 1.1.6. Những ý sử dụng: [10, 15, 16] • Tác dụng phụ: - Buồn nơn, chán ăn, vị kim loại miệng, viêm miệng với lưỡi đen, ngồi phân lỏng, mề đay ngứa. - Với hệ thần kinh: gặp, dễ gặp dùng liều cao dài ngày, thường gây viêm dây thần kinh cảm giác, vận động, bệnh não co giật. - Với hệ tạo máu có thơng báo viêm xương bất sản tuỷ giảm bạch cầu, giảm hồng cầu rõ rệt, triệu chứng tan huyết, urê huyết, gây rối loạn đơng máu. - Với phụ nữ có thai: nghiên cứu động vật cho thấy Metronidazol khơng gây qi thai khơng độc phơi thai, phụ nữ có thai tháng đầu khơng thấy độc khơng có trường hợp dị dạng nào, khơng chống định với phụ nữ có thai tháng đầu trừ trường hợp cần thiết. • Chống định: - Mẫn cảm với dẫn chất thuộc nhóm Imidazol, bệnh nhân có tiền sử bị rối loạn tâm thần rối loạn đơng máu. - Hạn chế sử dụng với phụ nữ có thai cho bú. • Tương tác thuốc: Tránh phối hợp với: - Disulfuram: gây hoang tưởng, rối loạn tâm thần. - Với alcol: gây hiệu ứng anabuse ( nóng, đỏ, nơn mửa, tim đập nhanh ). - Thuốc chống đơng máu tăng nguy xuất huyết ( giảm chuyển hố g a n ). - Với Vecuromin ( dẫn chất cura khơng khử cực ) Metronidazol làm tăng tác dụng nó. KẾT QUẢ NGHIÊN c ứ u 2.3. 2.3.1. Khảo sát điều kiện định lượng: Để khảo sát điều kiện định lượng, chúng tơi tiến hành sau: Cân lượng Metronidazol ngun liệu, hồ tan dung dịch NaOH đo phổ hấp thụ dung dịch tạo thành từ bước sóng 220nm đến 500nm. Kết cho thấy mơi trưòỉng kiềm, Metronidazol có cực đại hấp thụ 319nm, bước sóng mơi trường acid, Metronidazol khơng có cực đại hấp thụ. Từ đó, chúng tơi tiến hành khảo sát sau: * Khảo sát ảnh hưởng nồng độ NaOH đến độ hấp thụ dung dịch: Để tiến hành khảo sát chúng tơi làm thực nghiệm sau: • Thực nghiệm 1: Cân xác 0,lg Metronidazol, cho vào bình định mức có dung tích lOOml. Thêm 15ml dung dịch NaOH 0,01N, lắc tan hồn tồn. Sau bổ sung dung dịch NaOH 0,0IN vừa đủ đến vạch, trộn đều. Hút xác Iml dung dịch cho vào bình định mức có dung tích lOOml, bổ sung dung dịch NaOH 0,0IN vừa đủ đến vạch, lắc đều. Tiến hành đo mật độ quang dung dịch bước sóng 319nm, cuvet dày Icm. Mẫu trắng dung dịch NaOH 0,0IN. Kết ghi bảng 1. STT Thời gian ( phút) Độ hấp thụ Đo 0,509 10 0,524 15 0,528 20 0,526 30 0,529 Thực nghiệm 2: tiến hành phần thực nghiệm thay NaOH 0,0 IN NaOH 0,1N. Kết ghi bảng Bảng 2: Ảnh hưởng dung dịch NaOH 0,1N đến độ hấp thụ dung dịch. STT Thời gian ( phút) Độ hấp thụ Đo 0,532 10 0,530 15 0,531 20 0,532 30 0,531 45 0,527 Nhân xét: Qua số liệu thu bảng 1, chúng tơi thấy: Khi dùng dung dịch NaOH 0,0IN độ hấp thụ dung dịch khơng ổn định. Nhưng chuyển sang dùng NaOH 0,1N độ hấp thụ dung dịch sản phẩm cao hofn ổn định. Vì chúng tơi chọn dung dịch NaOH 0,1N để hồ tan Metronidazol. Metronidazol tan chậm mơi trường kiềm, chúng tơi đun nóng nhận thấy Metronidazol tan nhanh . Để làm rõ điều chúng tơi tiến hành thực nghiệm sau: • Thực nghiêm 1: Cân xác khoảng 0,lg Metronidazol ngun liệu, cho vào bình định mức dung tích lOOml, thêm 15ml NaOH 0,1N cho vào bình định mức. Đun cách thuỷ 80°c Metronidazol tan hồn tồn. Lấy làm nguội vòi nước, sau thêm dung dịch NaOH 0,1N vừa đủ đến vạch, trộn đều. Hút xác Iml dung dịch cho vào bình định mức dung tích lOOml, bổ sung NaOH 0,1N vừa đủ đến vạch, trộn đều. Đo mật độ quang dung dịch bước sóng 319nm, cuvet dày Icm. Kết trình bày bảng 3. Bảng 3: Ảnh hưởng nhiệt độ đến độ hấp thụ dung dịch. STT Thời gian ( phút) Độ hấp thụ Đo 0,515 10 0,509 15 0,506 20 0,504 30 0,500 Nhân xét: qua số liệu bảng 3, chúng tơi thấy: đun cách thuỷ 80°c thời gian hồ tan có nhanh độ hấp thụ dung dịch sản phẩm khơng ổn định. Điều cho thấy nhiệt độ sản phẩm muối tạo thành (pseudonitro) khơng bền dễ bị phân huỷ. Như từ kết qủa chúng tơi chọn cách tiến hành thực nghiệm . 2.3.3. Theo dõi độ ổn định dung dịch sản phẩm: Từ số liệu ghi bảng 2, dùng dung dịch NaOH 0,1 N, hồ tan nhiệt độ thưcmg độ hấp thụ dung dịch sản phẩm khơng thay đổi ổn định khoảng thời gian 30 phút. Khi đến 45 phút độ hấp thụ dung dịch lại giảm. Vì chúng tơi chọn thời gian đo độ hấp thụ dung dịch 30 phút kể từ lúc pha. 2.3.4. Xây dựng phương pháp ứng dụng: • Xáy dựng phương pháp: Từ kết khảo sát trên, chúng tơi xây dựng bước tiến hành định lượng sau: Cân xác khoảng 0,lg Metronidazol ngun liệu, cho vào bình định mức có dung tích lOOml, thêm 15ml dung dịch NaOH 0,1N, lắc tan hồn tồn. Bổ sung dung dịch NaOH 0,1N vừa đủ đến vạch, lắc đều. Hút xác Iml dung dịch vừa pha trên, cho vào bình định mức dung tích lOOml khác, thêm dung dịch NaOH 0,1N vừa đủ đến vạch, trộn đều. Song song tiến hành làm mẫu chuẩn chất đối chiếu Metronidazol, Đo mật độ quang dung dịch bước sóng 319nm, cuvet dày Icm, mẫu trắng dung dịch NaOH 0,1N. • Cách tính kết quả: Theo phuofng pháp so sánh, hàm lượng % tính theo cơng thức: c% = A lĨM l X c Ac^mt Trong đó: - c% : Hàm lượng % Metronidazol có mẫu thử. - C: Hàm lượng % Metronidazolco mẫu chuẩn. - Aj : Độ hấp thụ dung dịch thử. - A(.: Độ hấp thụ dung dịch chuẩn. - nit : Khối lượng tính gam Metronidazol bột ngun liệu cân để pha dung dịch thử. - nie: Khối lượng tính gam Metronidazol chuẩn cân để pha dung dịch chuẩn. ứng dụng: Chúng tơi sử dụng phương pháp xây dựng để định lượng mẫu ngun liệu Metronidazol mơn hố dược - trưòỉng Đại học Dược Hà Nội cung cấp dùng chất đối chiếu hố học Metronidazol hàm lượng 99,3% mua Viện kiểm nghiệm. Tiến hành định lượng mẫu. Kết ghi bảng 4. Bảng 4: Kết định lượng Metronidazol ngun liệu. STT Khối lượng cân ( g ) Độ hấp thụ c% 0,0999 0,533 99,78 0,1001 0,531 99,21 0,1002 0,533 99,48 0,1000 0,531 99,87 0,1001 0,530 99,03 Chuẩn 0,1002 0,532 99,30 Các đại lượng thống kê đặc trưng với p = 0,05 x=99,47% s = 0,359 AX = 0,45 RSD (%) = 0,36 Vậy theo phương pháp định lượng chúng tơi xây dựng, hàm lượng Metronidazol bột ngun liệu Bộ mơn Hố dược- trường Đại Học Dược Hà Nội- cung cấp là: 99,47% ± 0,45 2.3.5. Đánh giá phương pháp: • Xác định tính xác phương pháp: Theo kết bảng ta có: - Giá trị trung bình: X = 99,47% - Độ lệch chuẩn : s = 0,359. Khoảng tin cậy giá tri trung bình : X (%) = 99,47% ± 0,45 - Độ lệch chuẩn tương đ ố i: RSD = 0,36% < 2% Vậy phương pháp xác. • Xác định tính phương pháp: Cân mẫu chất đối chiếu Metronidazol ( nồng độ 99,3% ) Viện kiểm nghiệm cung cấp với khối lượng từ 0,0800 đến 0,1200g ( khoảng 80 đến 120% so với lượng cân dùng định lượng ). Tiến hành theo phương pháp xây dựng. Kết thu ghi bảng 5. Lượng Metronidazol Lượng hoạt Lượng tìm Phần trăm tìm cho vào (g) chất có thực (g) lại (g) lại (%) 0,0801 0,0795 0,0792 99,62 0,0903 0,0897 0,0896 99,89 0,1001 0,0994 0,0990 99,60 0,1105 0,1097 0,1088 99,18 0,1204 0,1196 0,1185 99,08 0,1008 0,1000 0,1000 100 STT Từ kết bảng ta có: Phưomg trình hồi quy mối tương quan lượng hoạt chất ban đầu lượng hoạt chất tìm lại là: y= 0,976x + 0,002. Hệ số tương quan: r = 0,9999 Độ lệch chuẩn y_intercept: Sß = 0,0070 Khoảng tin cậy y_intercept: = 0,0223 ^ -0,0203 < B < 0,0243 Độ lệch chuẩn độ dốc: Khoảng tin cậy độ dốc: -> Sa = 0,001 = 0,074 0,9020 < A < 1,050 Kết luận: Khơng có sai số hệ thống định khoảng tin cậy y_intercept chứa . Khơng có sai số hệ thống tỷ lệ khoảng tin cậy độ dốc chứa 1. Giá trị trung bình tỷ lệ thu lại 99,47% nghĩa nằm khoảng từ 98% đến %. Như vậy, phưcmg pháp đưa khoảng khảo sát. Xác định tính tuyến tính phương pháp: Từ kết bảng 5, chúng tơi thiết lập phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ dung dịch để xây dựng tính tuyến tính phương pháp. Kết trình bày bảng . Bảng : Sự phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ dung dịch STT C(gA) 0,00795 0,00897 0.00994 0,01097 0,01196 A 0,426 0,480 0,528 0,580 0,632 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ dung dịch - Phương trình hồi quy mối tương quan mật độ quang nồng độ dung dịch là: y= 51,99x + 0,020 - Hệ số tương quan: r= 0,999 - Độ lệch chuẩn y_intercept:SB = 0,032 - Khoảng tin cậy y_intercept: Aq= 0,102 ^ -0,082 < B < 0,122 Từ kết cho thấy, hệ số tưcmg quan đường hồi quy vượt q 0,99 . Tất giá trị đo nằm đưcmg hồi quy phân bố đồng phía đường hồi quy. Khoảng tin cậy y_intercept chứa 0. Vậy phương pháp tuyến tính khoảng nồng độ từ 80% đến 120% nồng độ làm việc. 2.3.6. Xây dựng phương pháp định lượng Metronidazol viên nén đo quang phổ tử ngoại bước sóng 319nm: Dựa vào khảo sát định lượng Metronidazol ngun liệu, chúng tơi xây dựng cách tiến hành định lượng viên nén Metronidazol. Việc nghiên cứu tiến hành viên nén xí nghiệp Dược phẩm Hà Nội (SKS: 02090801), với cơng thức bào chế tính cho viên là: Metronidazol 250mg Tricalciphosphat lOmg Bột sắn 40mg Mg stearat 2% Cách tiến hành định lượng viên nén Metronidazol sau: Lấy 10 viên nén đem cân. Tính khối lượng trung bình viên. Nghiền 10 viên thành bột mịn cối sứ, trộn đều. Cân xác khoảng 0,15g bột viên (tương ứng với khoảng 0,1050g Metronidazol) cho vào bình định mức lOOml. Hồ tan bột 80ml dung dịch NaOH 0,1N, lắc dung dịch có màu hồng, bổ sung dung dịch NaOH 0,1N vừa đủ đến vạeh, lắc đều. Lọc qua giấy lọc, bỏ 20ml dịch lọc đầu thu lấy dịch lọc lại. Hút xác Iml dịch lọc cho vào bình định mức lOOml, thêm dung dịch NaOH 0,1N vừa đủ đến vạch, lắc đều. Song song tiến hành vói mău Metronidazol đối chiếu. Tiến hành đo độ hấp thu dung dịch ò bước sóng 329nm, cuvet dày Icm, mẫu trắng dung dịch NaOH 0,1N. Hàm lượng % Metronidazol viên tính theo cơng thức: % Metronidazol = X Pgh Trong đó: - A t. Độ hấp thụ dung dịch thử. -Ac :Độ hấp thụ dung dịch chuẩn. - nit: Khối lượng (g) bột viên cân mẫu thử. - rrig: Khối lượng (g) Metronidazol cân mẫu chuẩn. - ứng : hàm lượng % Metronidazol đối chiếu. m V: khối lượng trung bình viên nén. m: hàm lượng Metronidazol viên ghitrên nhãn. dụng : Chúng tơi sử dụng phương pháp xâydựngtrên, để tiến hành định lượng viên nén Metronidazol Xí nghiệp Dược phẩm Hà Nội (SKS 02090801). Tiến hành định lượng mẫu. Kết thu bảng Khối lượng hoạt chất tính theo hàm lương ghi nhãn (g) 0,10526 A c% Khối lượng bột viên (g) 0,1499 0,553 98,96 0,1501 0,10540 0,554 98,30 0,1502 0,10577 0,550 97,53 0,1501 0,10540 0,558 99,01 0,1500 0,10533 0,534 96,77 0,1002 0,532 99,30 STT Chuẩn Các đại lượng thống kê đặc trưng với p = 0,05. x = 98,ll% s = 0,96 AX= 1,19 RSD(%) = 0,98 Vậy theo phưoỉng pháp định lượng chúng tơi xây dựng, hàm lượng Metronidazol viên nén Metronidazol xí nghiệp Dược phẩm Hà Nội là: 98,11% ±1,19 2.3.7. Đánh giá phương pháp: • Xác định tính xác phương pháp: Giá trị trung bình: X =98,11% - Độ lệch chuẩn : s = 0,96 - Khoảng tin cậy giá trị trung bình : X (%) = , ỉ ỉ %± 1,19 - Độ lệch chuẩn tương đ ố i: RSD(%) = 0,98% < 2% Vậy phương pháp xác. • Xác định tính phương pháp: Để xác định tính phương pháp, chúng tơi tiến hành sau: trộn hỗn hợp tá dược có thành phần số lượng hoạt chất cơng thức dập viên. Cân xác lượng hỗn hợp tá dược ứng với lượng hoạt chất 0,1000g theo cơng thức. Cân mẫu tá dược, thêm vào lượng Metronidazol đối chiếu ( nồng độ 99,3% ) Viện kiểm nghiệm sản xuất với khối lượng từ 0,0800 đến 0,1200g ( khoảng 80% đến % so với lượng cân xây dựng phương pháp ). Tiến hành mục 2.3.6. Kết ghi bảng . Bảng 8: kết xác định tính phương pháp. Khối lượng hoạt Khối lượng hoạt Khối lượng tìm chất cho thêm (g) chất có thực (g) 0,0804 0,0798 lại (g) 0,0795 99,62 0,0912 0,0906 0,0910 100,44 0,1005 0,0998 0,0992 99,39 0,1101 0,1093 0,1099 100,55 0,1203 0,1194 0,1192 99,83 Chuẩn 0,1003 0,0996 0,0996 100,00 sri % tìm lại Từ kết bảng ta có: - Trung bình % tìm lại: x= 99,97% - Phưcfng trình hồi quy mối tương quan lượng hoạt chất ban đầu lượng hoạt chất tìm lại là: y = l,004x - 0,0004 - Hệ số tương quan: r = 0,999 - Độ lệch chuẩn y_intercept: Sß = 0,18 - Khoảng tin cậy y_intercept: = 0,572 -0 ,5724 < B < 0,5716 - Độ lệch chuẩn độ dốc: = 0,002 - Khoảng tin cậy độ dốc: = 0,0064 -> 0,9976 < A < 1,0104 Nhận xét: - Khơng có sai số hệ thống định khoảng tin cậy y_intercept chứa . - Khơng có sai số hệ thống tỷ lệ khoảng tin cậy độ dốc chứa 1. - Giá trị trung bình tỷ lệ thu lại là: 99,97% nghĩa nằm khoảng từ 98,0% đến 10 ,0 %. Như phương pháp khoảng khảo sát. • Xác định tính tuyến tính phương pháp: Từ kết ghi bảng , chúng tơi thiết lập phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ dung dịch để xác định tính tuyến tính phưcrng pháp. Kết ghi bảng 9. Bảng 9: Sự phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ dung dịch. C(gA) 0,00798 0,00906 0,00998 0,01093 0,01194 A 0,423 0,484 0,534 0,585 0,639 - Phương trình hồi quy phụ thuộc mật độ vào nồng độ dung dịch: y = ,4 x -0,010 - Hệ số tương quan: r = 0,999 - Độ lệch chuẩn y_intercept: Sß = 0,37 - Khoảng tin cậy y_intercept: = 1,17 ^ -1,18 < B[...]... hiện nay đang được sử dụng làm tiêu chuẩn để định lượng Metronidazol ở các cơ sở Song để góp phần làm phong phú thêm các phương pháp định lượng Metronidazol, dựa vào cấu trúc hoá học của Metronidazol chúng tôi nghiên cứu định lượng Metronidazol bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại trong môi trường kiềm PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN c ứ u 2.1.1 Dụng cụ: - Cân phân tích... y_intercept chứa 0 - Vậy phương pháp là tuyến tính trong khoảng nồng độ từ 80,0% đến 1 2 0 ,0 % nồng độ làm việc PHẦN 3: KẾT LUẬN Trong quá trình nghiên cứu, bằng thực nghiệm chúng tôi đã thu được một số kết quả sau: - Đã xây dựng được phương pháp định lượng Metronidazol (nguyên liệu và viên nén) trong môi trường kiềm bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại - Đã đánh giá phương pháp xây dựng và các... HC10,1N 2.2 • PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứ u Khảo sát các điều kiện để xây dựng phương pháp định lượng Metronidazol • Áp dụng phương pháp xây dựng để định lượng Metronidazol trong nguyên liệu và trong viên nén • Đánh giá phương pháp định lượng mới gồm : Xác định tính chính xác, tính đúng, tính tuyến tính KẾT QUẢ NGHIÊN c ứ u 2.3 2.3.1 Khảo sát các điều kiện định lượng: Để khảo sát các điều kiện định lượng, chúng... thấy phương pháp là chính xác, đúng, tuyến tính trong khoảng nồng độ khảo sát Phương pháp mới xây dựng có một số ưu nhược điểm sau: - Cực đại hấp thụ của muối natri pseudonitro metronidazol là 319nm (trong môi trường acid clohydric là 277nm) Vì vậy, khi định lượng Metronidazol trong môi trường kiềm, tính đặc hiệu của phương pháp sẽ tăng lên so với môi trường acid - Cùng một nồng độ (0,00 lg/1), độ hấp thụ. .. tin cậy của y_intercept chứa 0 Vậy phương pháp này tuyến tính trong khoảng nồng độ từ 80% đến 120% nồng độ làm việc 2.3.6 Xây dựng phương pháp định lượng Metronidazol trong viên nén bằng đo quang phổ tử ngoại ở bước sóng 319nm: Dựa vào những khảo sát định lượng Metronidazol trên nguyên liệu, chúng tôi xây dựng cách tiến hành định lượng viên nén Metronidazol Việc nghiên cứu được tiến hành trên viên nén... Cân một lượng Metronidazol nguyên liệu, hoà tan trong dung dịch NaOH và đo phổ hấp thụ của dung dịch tạo thành từ bước sóng 220nm đến 500nm Kết quả cho thấy trong môi trưòỉng kiềm, Metronidazol có cực đại hấp thụ ở 319nm, ở bước sóng này trong môi trường acid, Metronidazol không có cực đại hấp thụ Từ đó, chúng tôi tiến hành các khảo sát sau: * Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ NaOH đến độ hấp thụ của... tính chất này để định lượng Metronidazol bằng phương pháp đo phổ tử ngoại Trong môi trường acid HCl, Metronidazol phản ứng với HCl thành muối và đồng thời có độ hấp thụ cực đại ở bước sóng 277nm Cân 10 viên nén Tính khối lượng trung bình của một viên Nghiền 10 viên thành bột mịn trong cối sứ, trộn đều Cân chính xác một lượng bột viên tương ứng với khoảng 50mg Metronidazol, cho vào bình định mức lOOml... NHẬN X É T : • Phương pháp sắc ký lỏng cao áp pha đảo có khả năng phân tích tốt, tính đặc hiệu cao Song hiện nay có rất nhiều cơ sở vẫn chưa có đủ trang thiết bị để áp dụng thực hiện được • Phương pháp định lượng trong môi trường khan có độ nhạy và độ chính xác cao, không cần chất chuẩn • Phương pháp đo phổ tử ngoại trong môi trường acid dễ thực hiện, có thể áp dụng ở mọi cơ sở A Ba phương pháp trên hiện... hấp thụ của Metronidazol trong dung dịch NaOH 0,1N là 0,531 và trong dung dịch HCl 0,1N là 0,356.Như vậy trong môi trường kiềm, độ hấp thụ của dung dịch cao hơn trong môi trường acid ,do vậy độ nhậy của phưcmg pháp tăng lên - Tuy nhiên khi sử phương pháp này phải dùng đến chất chuẩn mà hiện nay nước ta chưa sản xuất được Ngoài ra, bằng thực nghiệm chúng tôi thấy rằng: Metronidazol khó tan trong nước,... base/ lOOml Biệt dược: Flagyl I.v 1.2 ĐIỂM QUA MỘT s ố PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG METRONIDAZOL 1.2.1 Phương pháp định lượng Metronidazol nguyên liệu: • Phươns pháp đinh lươns trone môi trườns khan: [7,12,14] Trong phân tử Metronidazol có chứa dị vòng imidazol, dị vòng này có 2 nitơ nên mang lại tính base ( do còn cặp điện tử tự do có thể hút nguyên tử hydưo của nước về phía dị tố và ion -OH được phân ly . học của Metronidazol chúng tôi nghiên cứu định lượng Metronidazol bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại trong môi trường kiềm. PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN cứ. Bộ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI TRẦN THỊ ĐẢM NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG METRONIDAZOL BANG PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ HÂP THỤ TỬ NGOẠI TRONG MÔI TRƯỜNG KIỂM KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP. trong khuôn khổ khoá luận tôì nghiệp này chúng tôi dự định và tiến hành nghiên cứu nội dung sau: Nghiên cứu định lượng Metronidazol (nguyên liệu và viên nén) bằng phương pháp đo quang phổ hấp