BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI • • • • - o & o HỒNG THỊ HOA ■ NGHIÊN cúu PHÁT HIỆN DEXAMETHASON CĨ THÊ TRỘN TRÁI PHÉP TRONG THLấC ĐÔNG Dược BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẢC KÝ (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ KHOÁ 2003 - 2007) ỆSệ, £ ự m p :ĩllỊ^V í]ỆN!Ị ỉ ịìi) f ĩv il Người hướng dẩn Noi thực : PGS TS Thái Duy Thìn V ' iln TS Trần Việt Hùng : Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương Bộ mơn hố dược - ĐH Dược Hà Nội Thời gian thực : Từ tháng 01 đến tháng 05- 2007 HÀ NỘI, 05 - 2007 LỜ I CÂM Ơ N Để hồn thành khố luận tốt nghiệp này, trước hết tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS Tổ THAIDUY THÌN- Tổ TQẦN VỆTHÙNG, người trực tiếp hướng dẫn, bảo cho tơi suốt thịi gian qua Tơi xin chân thành cảm ơn 7ĨỈS MAIANH TUẨN ngưịi giúp đỡ tơi nhiệt tình thời làm khố luận tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn cán Khoa Vật lý Đo Lường - Viện Kiểm Nghiệm Thuốc Trung Ương thầy giáo Bộ mơn Hố Dược tạo điều kiện thuận lọi giúp đỡ thời gian làm thực nghiệm khoa Tôi xin gửi tới toàn thể giảng viên, cán Trường Đại Học Dược Hà Nội lời cảm ơn chân thành Trong trình học tâp nghiên cứu thực khố luận, tơi nhận sư giúp đỡ q báu Ban giám đốc Bệnh viện huyện Mai SơnTỉnh Sơn La Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu Cuối vô biết ơn gia đình, bạn bè hết lịng động viên giúp đỡ thời gian học tập trường hồn tốt khố luận Hà Nội, ngày 20 tháng 05 năm 2007 HOÀNG THỊ HOA MỤC LỤC Lịi cảm ơn Muc luc • • Danh muc chữ viết tắt Trang ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN I: TỔNG QUAN 1.1 Các thuốc tân dược trộn trái phép vào thuốc đông dược 1.1.1 Các nhóm thuốc tân dược bị trộn trái phép vào thuốc đông dược 1.1.2 Đại cương dexamethason 1.2 Phương pháp phân tích chất trộn trái phép thuốc đơng dược 1.2.1 Xử lý mẫu 1.2.2 Sắc ký lớp mỏng 1.2.3 Sắc ký lỏng hiệu cao sắc ký lỏng khối phổ 10 PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 14 2.1 Nguyên vật liệu phương pháp nghiên cứu 14 2.1.1 Hóa chất thuốc thử 14 2.1.2 Thiết bị Dụng cụ 14 2.1.3 Nguyên liệu 15 2.1.4 Phương pháp nghiên cứu 16 2.2 Kết bàn luận 19 2.2.1 Xác định nhanh dexamethason trộn lẫn thuốc đông dược sắc ký lớp mỏng 19 2.2.2 Định tính định lượng dexamethason bị trộn lẫn thuốc đông dược LC- MS 21 2.2.3 Kết khảo sát số mẫu thuốc đông dược 31 2.2.4 Bàn luận 33 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIÉT TẮT BP 2001 : British Pharmacopoeia 2001 (Dược điển Anh 2001) cox : Cyclooxygenase CE : Collion Enengy (Năng lượng va chạm) DĐVN m : Dược điển Việt Nam xuất lần thứ ba DM : Dung môi ESI : Electrospray Ionization (Kỹ thuật phun ion) HPLC : High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) LC-MS : Liquid Chromatography - Mass Spectrometry (Sắc ký lỏng ghép khối phổ) LOD : Giói hạn phát LOQ : Giới hạn định lượng NSAID : Nonsteroidal Anti - Inflammatory Drugs (Thuốc hạ nhiệt giảm đau - chống viêm phi steroid) QIT : Quadrupole Ion Trap (Bộ phân tích khối bẫy ion) RSD : Relative Standard Deviation (Độ lệch chuẩn tương đối) SD : Standard Deviation (Độ lệch chuẩn) SIM : SKLM : Sắc ký lớp mỏng SKĐ : Sắc ký đồ S/N : Signal to noise Ratio Selected Ion Monitoring (Tỷ số tín hiệu nhiễu) USP 27 : United States Pharmacopoeia 27 (Dược điển Mỹ 27) UV- VIS : Ultraviolet (Tia tử ngoại) ĐẶT VÂN ĐỂ - Nền y học cổ truyền nước ta bắt nguồn từ y học dân gian phong phú thông qua thực tiễn kinh nghiệm đúc kết qua nhiều đcd Từ xa xưa, cha ông ta biết sử dụng nguồn dược liệu q giá đất nước vói phương pháp chế biến khác dạng bào chế thích hợp để phịng chữa bệnh cho người Đó thuốc đơng dược, vị thuốc dùng riêng lẻ phối hợp để trở thành phương thuốc dựa tính vị qui kinh chúng Cho tới nay, nhờ phát triển khoa học kỹ thuật, nhiều vị thuốc phương thuốc chứng minh tác dụng dược lý tác dụng lâm sàng dựa sở phân tích thành phần hóa học chúng - Như biết, thuốc đơng dược thuốc có nguồn gốc thực vật, động vật hay khống vật thường có thành phần phức tạp Chúng thường thuốc không độc độc dùng điều trị dài ngày, sử dụng với số lượng lớn nhằm mục đích điều trị tận gốc nguyên nhân bệnh Tác dụng thuốc thường diễn chậm, không nhanh thuốc tân dược, có hiệu thường chắn lâu dài Do vậy, thuốc đông dược thường nhiều người ưa chuộng Tuy nhiên để làm giảm nhanh triệu chứng bệnh nhằm đánh lừa, hấp dẫn người bệnh làm tăng cân giả i giữ nước, kích thích ăn ngon, số nhà sản xuất sở chữa bệnh tư nhân trộn trái phép vào thuốc đông dược số loại thuốc tân dược người bệnh dùng với liều lớn kéo dài với thuốc đông dược thông thường nên gây nhiều biến chứng tác dụng phụ nguy hiểm đến tính mạng Hiện nước ta có qui định cụ thể nghiêm cấm việc trộn trái phép thuốc tân dược đơng dược, nhiên việc thực cịn gặp nhiều khó khăn Trên giới có số nước Mỹ tuyệt đối nghiêm cấm việc trộn tân dược thuốc đơng dược - Một số nhóm thuốc tân dược như: nhóm thuốc chống viêm steroid (dexamethason, betamethason, prednisolon ), nhóm thuốc hạ nhiệt-giảm đau -chống viêm phi steroid (NSAID), (aspirin, ibuprofen, diclofenac, paracetamol, indomethacin ), nhóm thuốc kháng histamin (cyproheptadin) thường trộn lẫn vào thuốc đông dược vói mục đích làm giảm nhanh triệu chứng viêm, sốt, ho , đồng thời kích thích ăn ngon hay giữ nước tạo tình trạng béo giả tạo - Dexamethason glucocorticoid bán tổng hợp, có tác dụng (chống viêm, chống dị ứng) mạnh, kéo dài, khơng giữ muối, nước Do dùng rộng rãi dễ bị trộn trái phép vào thuốc đơng dược - Nhằm góp phần nhỏ vào việc phân tích, kiểm nghiệm thuốc đơng dược, đảm bảo an tồn cho người bệnh, chúng tơi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu phát Dexamethason trộn trái phép thuốc đông dược phương pháp sắc ký” Đề tài có mục tiêu cụ thể sau đây: Xây dựng quy trình sắc ký lớp mỏng để phát nhanh thuốc Dexamethason trộn trái phép thuốc đơng dược Xây dựng chương trình sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS) để định tính định lượng Dexamethason bị trộn lẫn thuốc đông dược PHẦN -TỔNG QUAN 1.1 CÁC TÂN DƯỢC CÓ THỂ TRỘN TRÁI PHÉP VÀO THUỐC ĐƠNG DƯỢC 1.1.1 CÁC NHĨM THUỐC TÂN Dược CÓ THỂ BỊ TRỘN TRÁI PHÉP VÀO CÁC THUỐC ĐƠNG Dược 1.1.1.1 Nhóm thuốc chống viêm steroid [3],[5],[10], [15] - Thuốc chống viêm steroid glucocorticoid tự nhiên hay bán tổng hợp có tác dụng chống viêm mạnh, chống dị ứng ức chế miễn dịch có nhiều tác dụng khơng mong muốn nặng nề nguy hiểm như: lt đường tiêu hố, lỗng xương, chậm lớn trẻ em, giữ nước Khi sử dụng cần phải chọn thuốc, liều dùng thòi gian điều trị thích hợp Chỉ dùng liều tối thiểu đủ tác dụng, điều chỉnh liều điều trị giảm dần liều trước ngừng thuốc - Các thuốc như: Betamethason, prednisolon, dexamethason hay bị trộn trái phép vào thuốc đông dược để chữa thấp khớp, thuốc làm tăng cân, kích thích ăn ngon với mục đích giảm nhanh triệu chứng viêm, đồng thời giữ nước tạo nên tình trạng béo giả tạo , sử dụng liều cao kéo dài nguy hiểm cho người bệnh 1.1.1.2 Nhóm thuốc kháng Histamỉn Hj [3], [4], [10] - Các thuốc kháng Hj đối kháng cạnh tranh với Histamin receptor Hị tế bào đích, ngăn tác dụng histamin lên tế bào đích Các thuốc sử dụng điều trị dị ứng, chữa ho hen, ngồi cịn có tác dụng ức chế thần kinh trung ương, chống nôn, chống say tàu xe, số tác dụng kháng serotonin, kích thích ăn ngon - Một số chất như: cyproheptadin, doxylamin hay trộn trái phép thuốc đông dược để kích thích ăn ngon, tạo tình trạng béo giả tạo nước I.I.I.3 Nhóm thuốc giảm đau -hạ sốt - chống viêm phi steroid (NSAID) [2], [3], [4], [10] - Là chất có tác dụng hạ nhiệt- giảm đau- chống viêm mức độ khác nhau, không thuộc nhóm opiat cấu tạo chúng khơng có cấu trúc steroid Vì chúng gọi chung thuốc chống viêm phi steroid (NSAID) Các thuốc có tác dụng ức chế tiết trung gian hố học gây đau ngoại vi nên cịn gọi thuốc giảm đau ngoại vi Một số chất đồng thời có ba tác dụng trên, có một, hai tác dụng trội khơng có tác dụng có chế tác dụng ức chế enzym cyclooxygenase (COX) enzym xúc tác việc sản xuất số chất trung gian hoá học, đặc biệt chất prostaglandin chất gây phản ứng viêm, đau, sốt - Ngồi tác dụng hạ nhiệt cịn ức chế trung tâm điều hoà nhiệt độ vùng đồi gây giãn mạch ngoại biên, tăng toả nhiệt tăng tiết mồ hôi Như thuốc hạ nhiệt có tác dụng chữa triệu chứng - Tác dụng giảm đau nhóm thuốc với triệu chứng đau nhẹ viêm đau đầu, đau răng, đau dây thần kinh, đau khớp, đau cơ, khơng có tác dụng giảm đau nội tạng, khơng kích thích, khơng gây nghiện, nhiên chúng có số tác dụng khơng mong muốn gây loét dày- ruột, có gây xuất huyết, hoại tử gan, viêm thận kẽ dùng liều cao kéo dài - Một số thuốc như: Aspirin, diclofenac, paracetamol, ibuprofen, indomethacin thuốc không đắt tiền, thông dụng dễ kiếm, hay trộn trái phép vào thuốc đông dược trị cảm cúm, đau xương khớp với mục đích làm tăng hiệu điều trị dễ gây hiệu nghiêm trọng người bị bệnh gan, thận, trẻ em dùng liều cao, kéo dài 1.1.2 ĐẠI CƯƠNG VỀ DEXAMETHASON [3], [5], [9], [10], [19], Công thức cấu tạo: C22 H1 F05 Ptl: 392,5 Tên khoa học: - Fluoro - 1lß , 17,21 - trihydroxy - 16ot - methyl pregna - 1,4 - dien - 3,20 dion Tính chất vật lý : - Bột kết tinh trắng tinh thể không màu, không mùi Chảy 253 - 255°c (kèm phân huỷ) Thực tế không tan nước, tan ethanol 96% khó tan cloroform, tan aceton Định tính : - Đo phổ hấp thụ dẫn chất hydrazon: cho phản ứng với Phenylhydrazin môi trường acid cho dẫn chất pheninhydrazon có màu vàng (hấp thụ cực đại Ở419nm) - Phổ hồng ngoại chế phẩm phải phù hợp vói phổ hồng ngoại dexamethason chuẩn - Dùng phương pháp sắc ký lớp mỏng (SKLM): Dùng mỏng Silicagel GF2 hệ dung môi triển khai butanol bão hoà nước - toluen - ether (5: 10: 85) - Phản ứng màu: Oxy hoá với tác nhân H2S04 đặc, có màu đỏ nhạt (thường kèm huỳnh quang) Pha loãng với nước, màu biến Ở chế độ MS lần, với CE = 20 V xuất phổ khối mảnh 373 355 tăng lên (hình 2.9) Dexa base lOppm MS2 CE20#17 RT: 0.36 AV: NL: 3.49E4 T: + p ESI Full ms2 393.50@20.00 [ 105.00-450.00] 100^ 7* 90£ 80 70d 60 5040-; 30- 355.1 20~z 10 337.2 309.0 274.6 201.0 237.3 149.0 J L ị , ,J , il, 1—I —I ]—I —I — —r “ I I 150 200 250 300 m/z 393.0 ĩ " I r~ I r——I I I I r — — \ ————I 350 400 450 Hình 2.9 Phổ khối MS2, dung dịch dexamethason 10 ppm, CE = 20 V Nhận xét: Kết khảo sát MS cho thấy dexamethason có mảnh đặc trưng: - Mảnh mẹ (ion phân tử) m/z 393,5 ± amu ; mảnh có tín hiệu cao ổn định, sử dụng để định lượng - mảnh m/z 393,5 -> ( 373; 335) amu lượng E= 30V; mảnh kết hợp vói mảnh mẹ sử dụng để định tính c Tối ưu hố bắt ion điều kiện sắc ký Do trình khảo sát trên, sử dụng tốc độ dòng thấp (5|j.L/phút) kết nối LC- MS, tốc độ dòng thường vào khoảng 0,5 - mL/phút Do đó, cần thiết phải sử dụng khí làm bay dung mơi phải tối ưu hoá bắt ion điều kiện sắc ký Bơm mẫu từ syringe chuẩn trộn với dòng sắc ký qua trộn chữ T (Tunion), tốc độ dòng = 0,2 mL/phút 26 Để làm bay hoi dung môi, sử dụng khí nitơ có tốc độ 30 đơn vị (SG = 30), tiến hành chạy chương trình Tune Plus Lưu file với tên Dexamethason Flow 0,2 mLph.LCQTune File sử dụng trình phân tích LC-MS d Phân tích mẫu LC-MS ❖ Chương trình sắc ký: Như mục 2.1.4.3 Điều khối phổ: mẴL j + Chế độ phun scan (MS llần, MS lần) với ion đặc trương 393; 373; 355 để định tính + Chế độ SIM, sử dụng tín hiệu ion phân tử 393 để định lượng + File lưu điều kiện khối phổ tối ưu: Dexamethason Flow ớ,2 mLph.LCQTune Vói chương trình sắc ký trên, sắc ký đồ dexamethason ghi hình 2.10 Dexa 10 ppm LC - PDA_07041 01 72405 NL: 1.93E7 TIC MS R T : 1.39 AA: 317102138 O enesis De xa o ppm LO PDA_0704101 72405 393.1 1008Ch 6040_3R4.1 203 -3 — 300 3 V I'Vi , 367^2 V ,'ỊTVVI 350 39QJ3 395.1 3 I' ' í " 1' 1' '' ' l ' -| 1 v r I ' I 'I' 'I I ' ' i r n - v r ị - r T r T ĩ - 400 5 | V I " ' 1i " | ' 493.1 V ị ' i'- r r V | ' i " i T 450 m/z Hình 2.10 SKĐ dung dịch dexamethason 10 ppm phân tích LC-MS 27 I fĩ ĩĩT i ' I 500 ❖Chuẩn bị mẫu: - Dãy dung dịch chuẩn: Pha dung dịch chuẩn pha động có nồng độ từ 0,1 - |ng/mL - Dung dịch thử ị chiết từ mẫu MI M3): + Cách 1: Hút 50 |iL dung dịch thử phần chấm sắc ký vào bình định mức 25 mL, thêm pha động vừa đủ Nếu mẫu thử có trộn dexamethason (M3), nồng độ dexamethason \xg/mL + Cách 2: Cân lượng mẫu thuốc đông dược có chứa khoảng 0,1 mg dexamethason vào bình định mức 50 mL, thêm khoảng 30 mL pha động,lắc siêu âm khoảng 10 phút Thêm pha động vừa đủ, mẫu thử có nồng độ dexamrethason 1-ig/mL Mẫu thử chuẩn lọc qua màng lọc Millipore 0,45 |_im tiêm vào hệ , thống LC-MS điều kiện 2.2.3.3 Khảo sát đánh giá phương pháp sắc ký lỏng khối phổ - Khảo sát độ tuyến tính' Tiến hành chạy sắc ký LC- MS theo chương trình khảo sát với dung dịch có nồng độ từ 0,1 - ppm Kết khảo sát độ tuyến tính trình bày bảng 2.2 Bảng 2.2 Độ tuyến tính dexamethason (0,1 ppm - 5,0ppm), LC-MS Nồng độ 0,1 0,5 DT pic lần 477782 1646153 3162717 6165476 8962374 12256974 14910575 DT pic lần 485482 1513194 3103064 6085565 9003428 12200203 15003085 DT pic lần 492152 1520940 3133766 6116806 9027565 12111935 15033641 Diện tích pic TB 485138 1514369 3133182 6112616 8998090 12189704 14982433 (Hg/mL; ppm) Ph.trình hồi quy Y = 2984269 X + 122990,6, hệ số tương quan r = 0,9998 28 Đường hồi qui tuyến tính nồng độ dexamethasone diện tích pic 16000000 14000000 12000000 10000000 8000000 6000000 4000000 2000000 c ppm Hình2.11 Đường hồi qui tuyến tính dexamethason (0,lppm -5ppm) phân tích LC-MS Kết bảng 2.2 hình 2.11 cho thấy tương quan chặt chẽ nồng độ dexamethason diện tích píc khoảng nồng độ ,1 -5 ppm với hệ số r =0,9998 29 Khảo sát độ đúng: Kết khảo sát tiến hành mẫu M3 (chiết mẫu theo cách 2) trình bày bảng 2.3 Bảng 2.3 Khảo sát độ phương pháp phân tích dexamathason LC-MS Tên mẫu Lượng cho vào (M3) Lượng tìm lại % tìm lại (mg/g) (mg/g) TI 0,8929 0,8705 97,5 T2 0,8929 0,8768 98,2 T3 0,8929 0,8732 97,8 Trung bình % tìm lại 97,8 SD 0,35 RSD % 0,36 % Kết bảng 2.3 cho thấy phương pháp có độ tốt -Khảo sát độ lặp lại: +ĐỘ lặp lại hệ thống : Kết phân tích mẫu chuẩn dexamethason 2ppm tiêm lần trình bày bảng 2.4 30 Bảng 2.4 Khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng dexamathason LC-MS Diện tích pic - Dexamethason ppm Lần 6165475 Lần 6085565 Lần 6116806 Lần 6122616 Lần 6132096 Lần 6126098 Trung Bình 6124776 SD 25758,506 RSD% 0,421 Kết cho thấy hệ thống có độ lặp lại tốt, độ lệch chuẩn tương đối diện tích pic 0,421 nhỏ + Độ lặp lại kết phân tích: Phân tích độ mẫu M3 cho kết lặp lại tốt, chứng tỏ phương pháp phân tích dexamethason thuốc đơng dược LC-MS có độ lặp lại tốt - Khảo sát giói hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ): Khi pha loãng mẫu thử M3 đến nồng độ dexamethason khoảng 10 ppb cho tín hiệu có đáp ứng với tỷ số S/N =13, chứng tỏ LOQ phương pháp định lượng nhỏ 10 ppb, phương pháp phân tích có độ nhạy cao Điểm cuối đường chuẩn có nồng độ cao gấp khoảng 10 lần nồng độ LOQ 2.2.3 KẾT QUẢ KHẢO SÁT MỘT số MAU thuốc đông dược - Chúng áp dụng phương pháp để phân tích tìm dexamethason số mẫu thuốc đông dược Phong thấp cốt thống hồn (M2), viên nang cứng Tăng phì hồn (M4) nhập vào Việt Nam từ Malaysia, Cotaxoang (M5) 31 Công ty TNHH dược phẩm Công tâm thuốc cảm gia truyền 17 Trần Xuân Soạn (M6) Kết quả: Khơng thấy có mặt dexamethason mẫu - Tuy nhiên, năm 2005, Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương lấy mẫu viên nang cứng Tăng Phì Hồn thị trường, Khoa Đông dược Viện Kiểm nghiệm Trung ương sử dụng SKLM phân tích xác định dexamethason trộn trái phép tinh vi vỏ nang Áp dụng phương pháp LC-MS, phân tích mang tính khẳng định dexamethason trộn trái phép vỏ nang định lượng xác hàm lượng chất trộn lẫn (hình 2.12; 2.13; 2.14) c c C+T T T • m + * * ế ' Hình 2.12 SKĐ mẫu Tăng Phì Hình 2.13 SKĐ vỏ nang Tăng Phì Hồn, Hồn (M4): C: Chuẩn, (C+T): C: Chuẩn, T: Mâu thử vỏ nang Thử thêm chuẩn, (T): mẫu thử 32 NL: 1.71Ẹ6 TỊC MS Genesis Dexa 100-1 393.0 394.1 303.2 323.3 365,3 391,2 * f * p - r t - r p - t - r r p T r-» r ^ -r ' p -t-11- p ^ r r p T T r p ■ I * f ■ 300 350 365.1 ^nrn-p 400 m/2 432-6 455.7 473.4 4Sjp.8 '» *’ “ |V 450 *1 500 Hình 2.14 SKĐ mẫu vỏ nang viên nang cứng Tăng Phì Hồn Kết góp phần giúp nhà quản lý thuốc có biện pháp xử lý góp phần bảo vệ sức khỏe người bệnh 2.2.4- BÀN LUẬN Chuẩn bị mẫu thử Do đối tượng khảo sát thuốc đông dược chữa thấp khớp, đau nhức xương, thuốc làm tăng cân, kích thích ăn ngon, nên thu thập số mẫu thuốc đông dược lưu hành thị trường Thử trực tiếp mẫu chuẩn bị dược liệu làm mẫu thử có thành phần tương tự số chế phẩm Dexamethason dược chất trộn trái phép vào thuốc đông dược với mục đích làm giảm nhanh triệu chứng bệnh Liều gây tác dụng dexamethason khoảng lmg/lần, liều mà người ta trộn vào thuốc đơng dược (nếu có) thường phải tương đương Liều thường dùng thuốc đông dược lưu hành thị trường đến 5g/lần 33 Liều mẫu MI 1,4g/lần, chúng tơi chuẩn bị mẫu thử theo tỷ lệ khoảng mg dexamethason l,4g bột thuốc Về phương pháp phân tích • Phương pháp sắc ký lớp mỏng - Từ kết ta thấy để phân tích chất phương pháp sắc ký lớp mỏng thông dụng để định tính chất Đây phương pháp đơn giản, rẻ tiền, dễ thực hiện, dùng để thăm dị sơ phân tích chất trước sử dụng sắc ký lỏng để phân tích chúng Phương pháp định tính chất thơng qua việc so sánh với chất chuẩn điều kiện thử nghiệm hệ dung môi khác - Trong luận văn để định tính sơ dexamethason tiến hành sắc ký lớp mỏng để so sánh với chuẩn chúng hệ dung mơi khác nhau: Butanol bão hồ nước- tuluen- ether ( : 10 : 85 ) Nước - methanol - ether - methylenclorid (1,2 : : 15 :77) Ahydrid acetic- nước - butanol ( : : ) Qua khảo sát, thấy ba hệ dung mơi có khả tách dexamethason Nhưng qua tình hình thực tế, chúng tơi thấy hệ dung môi Nước -methanol-ether- methylenclorid (1,2 : : 15 :77) tách tốt với vết thuốc đơng dược có hệ số Rf phù hợp nên chọn hệ dung môi để chạy sắc ký lớp mỏng -Xét mặt định tính sắc ký lớp mỏng không thật đặc hiệu, nhiên trường hợp này, thấy vết dexamethason tách hẳn với vết khác mẫu thử với vết dexamethason acetat Vì sử dụng phương pháp để phát có mặt dexamethason mẫu thuốc đơng dược • Phương pháp LC-MS: 34 Phương pháp LC-MS phương pháp sử dụng để định tính định lượng chất cách xác Phương pháp định tính chất vừa dựa vào thời gian lưu chất vừa dựa vào khối lượng phân tử chúng, có tính đặc hiệu cao Mặt khác phương pháp sử dụng để xác định cách xác cấu trúc hợp chất dựa việc bắn phá phân tử để tạo mảnh ion việc phân tích khối phổ ghi lại bắn phá chúng Do phương pháp cho kết hồn tồn tin cậy không sử dụng phương pháp sắc ký thông thường Kết khảo sát số mẫu thuốc đông dược Các kết khảo sát cho thấy khơng có mặt dexamethason hồn cứng Phong thấp cốt thống hoàn, (do Lương y Tăng Phàm Ngọc, 33/7 ấp Mỹ Thiện, xã Mỹ Đức, Huyện Châu Phú, tỉnh An Giang sản xuất), viên hồn cứng cotaxoang cơng ty TNHH dược phẩm Công tâm, thuốc cảm gia truyền 17 TRần Xuân Soạn Tuy nhiên thuốc bán nhà thuốc tân dược, thuốc kê đơn phòng khám nhà thuốc đơng y gia truyền chúng tơi chưa có điều kiện để lấy mẫu kiểm tra 35 KẾT LUẬN VÀ ĐỂ NGHỊ KẾT LUẬN Sau hoàn thành đề tài thu kết sau đây: Đã xây dựng quy trình sắc ký lớp mỏng để xác định nhanh dexamethason bị lẫn thuốc đông dược, cách chiết hoạt chất từ mẫu với dung môi aceton, chất hấp phụ silicagel GF254, hệ dung môi triển khai hỗn hợp Nước-methanol- ether - methylenclorid (1,2 : : 15 :77), phát vết cách soi UV- VIS 254nm, phun thuốc thử màu hỗn hợp acid sulfuric - ethanol 96% (20 :60) Kỹ thuật xử lý mẫu đơn giản, dễ thực hiện, dung môi không đắt tiền, dễ kiếm, độc hại Đã xây dựng chương trình sắc ký lỏng khối phổ để định tính định lượng dexamethasson bị trộn lẫn thuốc đơng dược +Chương trình sắc ký sau: - Cột BetaBasic C18 (5 cm x2,l mm; jum) - Pha động: Acetonỉtrỉl: nước (50 :50) - Detector UV bước sống 240 nm - Tốc độ dòng: 0,5 mLỉphút - Thể tích bơm mẫu: 20 ịlL ấ - Thời gian phân tích phút + Điều kiện khối phổ - Kỹ thuật MSI lần, phân tích tồn thang xác định mảnh mẹ (ion phân tử) - Kỹ thuật MS lần, phân tích tồn thang tìm ion đặc trưng (mảnh mẹ mảnh con) để định tính - Kỹ thuật chọn ion (SIM) để định lượng + Đã tiến hành đánh giá phương pháp với số tiêu như: tính tuyến tính, độ lặp lại, độ đúng, giới hạn phát giới hạn định lượng Kết cho 36 thấy có liên quan tuyến tính khoảng nồng độ từ 0,1 đến 5ppm với hệ số r = 0,9998; độ độ lặp lại tốt; độ nhạy cao Đã áp dụng quy trình sắc ký xây dựng để tiến hành kiểm tra số mẫu thuốc đông dược lưu hành thị trường Trong thời gian làm khố luận, tơi học tập nhiều kiến thức chuyên môn, trau dồi thêm kỹ thực hành; biết cách thực trình bày đề tài khoa học ĐỂ NGHỊ: Tiếp tục nghiên cứu phương pháp phát định lượng thuốc chống viêm Steroid khác dexamethason acetat, dexamethason natri photphat Prednisolon ứig dụng phương pháp để kiểm tra nhiều nhà thuốc đông y gia truyền sở khám chữa bệnh thuốc đơng y Để kịp thịi phát dexamethason trộn trái phép thuốc đơng dược, để đảm bảo an tồn cho ngưịi sử dụng 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bộ môn Dược học cổ truyền (2005) — Dược học cổ truyền —Trường Đại học Dược Hà Nội Bộ môn Dược lâm sàng (2005) - Bài giảng bệnh học - Trường Đại học Dược Hà Nội Bộ môn Dược lý (2004) - Dược lý học tập 2- Trường Đại học Dược Hà Nội tr 258-260 Bộ mơn Hố dược (2006) - Hoá dược tập 1- Trường Đại học Dược Hà Nội Tr 77-96, tr 244-246 Bộ môn Hoá dược (2006) - Hoá dược tập 2- Trường Đại học Dược Hà Nội Tr 44-46 Bộ mơn Hố phân tích (2005) - Hố phân tích tập - Trường Đại học Dược Hà Nội tr 29- 46 Bộ mơn Hố phân tích (2006) - Hố phân tích tập - Trường Đại học Dược Hà Nội tr 107-147 Bộ mơn Hố phân tích (2004) - Kiểm nghiệm thuốc- Trường Đại học Dược Hà Nội Tr 68-78 Bộ Y tế (2002)- Dược điển Việt Nam m - Nhà xuất Y học tr 87 -91 10 Bộ Y tế (2002)- Dược thư quốc gia Việt Nam - Nhà xuất Y học tr 356 -359 11 Nguyễn Duy Chí (2006)- ứng dụng phương pháp sắc ký để phân tích số thuốc tân dược nhóm chống viêm phi steroid trộn lẫn thuốc đơng dược- Luận văn thạc sỹ dược học 12 Đào Hùng Phi (1997) - sắc ký lỏng hiệu cao -Tài liệu tập huấn kỹ thuật kiểm nghiệm thuốc nhiều thành phần - Viện kiểm nghiệm thuốc Bộ Y tế 38 13 Nguyễn Thị Lâm cộng (1999) - Một số kinh nghiêm việc phát thuốc tân dược trộn trái phép vào thuốc đông dược - Thông báo kiểm nghiệm số 2-1999 14 Nguyễn Văn Thị, Cao Minh Quang, Nguyễn Thị Kim Danh, Trần Thị Dung (1997) —đường lối phân tích tân dược trộn vào số thuốc y học dân tộc, Tài liệu tập huấn kiểm nghiệm thuốc nhiều thành phần - Viện kiểm nghiệm thuốc - Bộ Y tế 15 Phạm Thiệp — Ngọc Thuý (2000)— Vũ Thuốc biệt dược cách sử dụng — Nhà xuất y học tr 254 -256 TÀI LIỆU TIỂNG ANH 16 Anna Przyborowska (1/2002) - Introduction to Liquid Chromatography Mass SpectrometryIMass Spectrometry ịLC-MSIMS) - School MS Facility H&LS 17 Anwar, J., Nagra, s A., Nagi, M - Thin-Layer Chromatography: Four Simple Activities for Undergraduate Students - J Chem Educ 1996, 73, 977 18 Pharmacopoeia of the people’ republic of China (2000) vol n s 19 The British Pharmacopoeia (2001; 2003) 20 The European Pharmacopoeia (1997) 21 The Japaneses Pharmacopoeia (1996) 22 The United State Pharmacopoeia 27 (2005) 39 Phụ lục: hình ảnh số mẫu thuốc nghiên cứu khố luận C sơ K HD A HT U C H T IM O N H Ô V C ĐỨC THÀNH Ị PO TÁC TÓ H N HQH ĨH QO N PT N A Hình PL3: phong thấp cốt thống hoàn 40 ... Dexamethason bị trộn lẫn thuốc đông dược PHẦN -TỔNG QUAN 1.1 CÁC TÂN DƯỢC CÓ THỂ TRỘN TRÁI PHÉP VÀO THUỐC ĐÔNG DƯỢC 1.1.1 CÁC NHÓM THUỐC TÂN Dược CÓ THỂ BỊ TRỘN TRÁI PHÉP VÀO CÁC THUỐC ĐƠNG Dược 1.1.1.1... Các thuốc tân dược trộn trái phép vào thuốc đơng dược 1.1.1 Các nhóm thuốc tân dược bị trộn trái phép vào thuốc đông dược 1.1.2 Đại cương dexamethason 1.2 Phương pháp phân tích chất trộn trái phép. .. thuốc đơng dược, đảm bảo an tồn cho người bệnh, chúng tơi tiến hành đề tài: ? ?Nghiên cứu phát Dexamethason trộn trái phép thuốc đông dược phương pháp sắc ký? ?? Đề tài có mục tiêu cụ thể sau đây: