_ A a' BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI ■ ■ ■ ■ TỐNG THỊ THANG VƯỢNG NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN ĐỂ ĐỊNH LƯỢNG CÁC VITAMIN: ■ ■ b b 2, b 6, p p t r o n g c h ê p h ẩ m t h u ố c t iê m BECOZYME (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ ĐẠI KHOÁ 1998-2003) Người hướng dẫn : GVC NGUYEN v ă n TUYỀN GVC TRẦN TÍCH Nơi thực : BỘ MƠN HỐ PHÂN TÍCH Thời gian thực : 3-5/2003 HÀ NỘI-05/ 2003 LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành bầy tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới GVC: NGUYỄN VĂN TUYỀN GVC: TRẦN TÍCH tận tình hướng dẫn em suốt thời gian học tập thực khoá luận Em xin bầy tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới thầy mơn HỐ PHÂN TÍCH - Trường đại học Dược Hà Nội tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em trình thực khố luận Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội ngày 1/6/2003 Sinh viên TỐNG THI THANH VƯƠNG MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN : TỔNG QUAN 1.1.Đại cương điện di mao quản .3 1.1.1.Lịch sử đời phát triển 1.1.2.Cơ sở lý thuyết điện di mao quản 1.1.3.CƠ sở lý thuyết điện di mao quản động học Micelle l.lA C ác ưu điểm CE 1.2.Phương pháp định lượng vitamin tan nước chế phẩm đa thành phần 11 1.2.1.Phương pháp dược điển Anh 2001 11 1.2.2.Phương pháp dược điển Mỹ 23 12 ì.2.3.Cắc phương pháp ngồi dược điển 13 1.2.4-Tác dụng chế phẩm multivitamin .13 1.2.5.Một số chế phẩm multivitamin 14 PHẦN : THỰC NGHIỆM VÀ KẾT q u ả 15 2.1.Nguyên yật liệu phương pháp thực nghiệm 15 2.1.1.Nguyên vật liệu hoá chất 15 A/Phương pháp điện di mao quản 16 2.1.2.Phương pháp thực nghiệm 16 2.2.Thực nghiệm kết .17 2.2.1.Lựa chọn điều kiện chạy điện di .17 2.2.2.Khảo sát độ tuyến tính 18 2.2.3.Xác định thời gian lưu vitamin chế phẩm 18 2.2.4.Xây dựng đường chuẩn định lượng vitamin phương pháp thêm chuẩn CE 20 2.2.5.Xác định tính phương pháp 24 2.2.6.Xác định độ lặp lại phương pháp 25 B/Phương pháp HPLC 26 2.2.7.Xây dựng đường chuẩn định lượng vitamin HPLC 26 C/Biện luận kết 31 PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 ĐẬT VẤN ĐỂ Hiện thị trường dược phẩm giới thị trường dược phẩm Việt Nam lưu hành nhiều chế phẩm vitamin đa thành phần, sản xuất nước nhập từ nước Các chế phẩm đa dạng mặt bào chế (thuốc tiêm, viên, bột, nước ) phong phú phối hợp vitamin thành phần dược chất khác Sự phối hợp vitamin thuốc sơ chia thành loại: - Các chế phẩm phối hợp vitamin tan nước: Bj, B2, B5, Bg, B1 , pp, c Nhóm chiếm số lượng nhiều - Các chế phẩm phối hợp nhóm vitamin tan nước, nhóm tan dầu (vitamin A,D,E), acid amin vi lượng khoáng Đây dạng thuốc phức tạp kỹ thuật bào chế lẫn kỹ thuật kiểm tra chất lượng đặc biệt khó việc định lượng riêng biệt thành phần vitamin cơng thức có chứa nhiều loại hoạt chất cộng thêm chất bảo quản tá dược Hiện đa số dược điển chưa đưa phương pháp định lượng riêng biệt vitamin chế phẩm đa thành phần mà có phương pháp áp dụng cho chế phẩm chứa thành phần Tuy nhiên có số dược điển cho phương pháp định lượng riêng biệt USP 21, 22 với chuyên luận Decavitamin BP 23 với chuyên luận B.c complex Song phương pháp định lượng phải qua công đoạn chiết tách phức tạp, tốn nhiều thời gian công sức dễ mắc sai số lớn Một phương pháp phân tích đại hữu hiệu nhiều phịng thí nghiệm nước áp dụng để định lượng vitamin chế phẩm multivitamin phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Phương pháp có độ lặp lại độ xác cao, có nhược điểm hố chất dung mơi cần dùng độc hại đắt tiền Khoảng vài năm gần phương pháp đại bắt đầu ứng dụng phân tích, phương pháp điện di mao quản (Capillary Electrophoresis (CE)) Đây phương pháp có khả cho kết phân tách tốt phân tích hỗn hợp đa thành phần tương tự phương pháp HPLC kinh phí cho hố chất, thuốc thử cần thiết nhỏ nhiều so với HPLC Ở trường, đến đầu năm 2003 môn hố phân tích mua máy nên kỹ thuật gần chưa triển khai trường nói riêng ngành nói chung Chính vậy, tiến hành nghiên cứu ứng dụng phương pháp điện di mao quản vào định lượng vitamin chế phẩm đa thành phần với đề tài: “Định lượng vitamin: Bị, B2, B6, p p chế phẩm thuốc tiêm Becozym phương pháp điện dì mao quản” nhằm mục tiêu : -Triển khai kỹ thuật điện di mao quản thiết bị có môn, trường ngành -Úng dụng phương pháp điện di mao quản kiểm tra chất lượng chế phẩm multivitamin sở tiếp tục nghiên cứu để áp dụng phổ biến đối tượng khác PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1 ĐẠI CƯƠNG VỂ ĐIỆN DI MAO QUẢN CAPILLARY ELECTRORESIS 1.1.1 Lịch sử đời phát triển:[3] Điện di mao quản kỹ thuật tách chất dựa sở di chuyển khác phần tử chất dung dịch chất điện ly có pH ổn định (bằng hệ đệm thích hợp ) tác dụng điện trường E xác định tạo áp đặt V vào hai đầu mao quản Kỹ thuật tách nghiên cứu phát triển Tiselius (1937) sở tách phân tích hỗn hợp protein, amin, amino acid kỹ thuật CE thấp (110-220 V) Kỹ thuật tách phân tích CE phát triển nhanh, cơng trình nghiên cứu kỹ thuật CE liên tục tăng không ngừng sau năm 1985 có ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực, đặc biệt lĩnh vực y sinh học Tại Việt Nam ta, vào năm 1996 bắt đầu có số cán khoa Hoá học, ĐHQG Hà Nội, nghiên cứu tìm hiểu kỹ thuật này, tham gia nghiên cứu Phịng thí nghiệm Hố Phân tích trường ĐHTH Amsterdam 1.1.2 Cơ sở lý thuyết điện di mao quản: Capillary Electrophoresis (CE).[3][9] Nguyên tắc kỹ thuật tách điện di mao quản CE dựa sở di chuyển phần tử chất tan ống mao quản dung dịch chất điện ly (có chất đệm pH thích hợp), tác dụng điện trường E xác định cung cấp nguồn điện cao chiều (10-50 KV) đặt vào hai đầu mao quản Cơ chế điện di di chuyển phần tử chất tan ống mao quản di chuyển khác chất tan tác dụng lực điện trường E định (Electric Field Force: EFF) tính chất dịng chảy điện thẩm (Electro-Osmotic Flow: EOF) Dòng EOF loại dòng chảy khối chất lỏng ống mao quản Nó có quan hệ mật thiết với lớp điện tích thành ống mao quản Dòng EOF định thời gian tồn chất tan ống mao quản Nó tồn bao trùm lên dịng di chuyển chất tan, nghĩa chất tan di chuyển dòng Trong CE người ta thường phân cực mao quản cho dòng hướng catốt Thế tạo điện trường E đặt vào hai đầu ống mao quản dùng kỹ thuật CE lớn, thơng thường từ 10 - 40 KV Chính lực điện trường E làm động lực cho phần tử chất tan di chuyển theo hướng định Các chất khác có điện tích độ lớn khác nhau, di chuyển theo tốc độ lớn nhỏ khác nhau, chất phân tích tách khỏi Cột tách CE thường có độ dài từ 25 đến 100 cm, đường kính (ID) 25 - 100 )Lim (loại đường kính 50 - 75 )L thích hợp im hiệu ứng nhiệt nhỏ, dễ khống chế nhiệt độ cho mao quản) Mao quản chế tạo từ thuỷ tinh silica, bên ngồi có phủ lớp polyme, để làm cho ống mao quản mềm mại, uốn khơng bị gẫy ♦ Các thơng số phân tích CE:[9] *Thời gian điện di (t) thời gian cần thiết chất tan di chuyển từ lúc nạp vào đầu ống mao quản vị trí trung tâm Rowcell detector, phát vị trí pic cực đại gọi thời gian điện di chất tan *Vận tốc điện trường: vep (The electrophoretic velocity) 6ĩ\r % r q v V =|i £ -= —-—X— ep p L Trong đó: r = Bán kính ion q = Điện tích ion r| = Độ nhớt dung dịch ống mao quản V = Điện đặt đầu ống mao quản L = Tổng độ dài ống mao quản |iep=Độ điện di chất tan *Vận tốc dòng điện thẩm: (The electro-osmotic velocity) v &, V C T L e=Hằng số điện môi dung môi Ve = m 0E = — X - C = Thế Zêta , *Vận tốc chất tan: Velocity of the solute (v) v=vep “ V eo T T ± T *Thời gian điện di (t) ỉ lxL ve ±ve ” (ne ±ne0)v p o p 1= Chiều dài hiệu dụng cột t= *SỐ đĩa lý thuyết cột mao quản: N =' kpi uJ x Vx l 2x DxL D = Hệ số khuyết tán phân tử chất tan đệm *Độ phân giải hai chất (Rs): u _ ^ ^ (^ e p b M-epa) 4(nep± n J |iep |uepb=Độ di động hiệu dụng hai chất a b a J.I = Trung bình cộng độ điện di hiệu dụng chất O ep=l/2(|uepa+|iepb)) ♦ Phân loại CE[3] Theo chế, chất đặc điểm tách mao quản mà người ta thường phân chia thành loại hay kiểu khác Cụ thể gồm kiểu tách CE sau: -Điện di mao quản thông thường (Capillary Electrophoresis) : CE -Điện di mao quản vùng (Capillary Zone Electrophoresis) : CZE -Điện di mao quản điện động học Micelle : MEKC (Micellary Capillary Electro-Kenetic) -Điện di mao quản loại Gel (Capillary Gel Electrophoresis) : CGE -Điện di mao quản hội tụ đẳng điện (Capillary Iso-electric Focusing): CIEF -Điên di mao quản đẳng tốc độ (Capillary Iso-Tacho-Phoresis) : CITP ♦ Các yếu tố ảnh hưởng:[9] *Điẽn thế: Thời gian phân tích tỷ lệ nghịch với điện đặt vào đầu ống mao quản Tuy nhiên tăng điện lên cao sinh hiệu ứng Joule tạo gradient nhiệt ống mao quản dẫn đến thay đổi độ nhớt vùng ống mao quản làm cho phân tử chất tan di chuyển không đồng dẫn đến khuếch tán khác làm mở rộng vùng mẫu *Nhiêt đỏ: có ảnh hưởng đến độ nhớt độ dẫn điện đệm ảnh hưởng tới tốc độ di chuyển Trong số trường hợp nhiệt độ ống mao quản tăng nguyên nhân làm thay đổi cấu tạo protein, làm thay đổi thời gian điện di hiệu phân tích *Cốt mao quản: Kích thước cột mao quản (chiều dài đường kính) góp phần vào thời gian tách hiệu phân tích Nếu tăng hai yếu tố chiều dài hiệu dụng chiều dài cột mao quản làm giảm điện trường tăng thời gian phân tích — Từ kết ta vẽ đường chuẩn vitamin có dạng: » y=ax+b Trong đồ thị cắt trục tung điểm b hệ số góc a=tga Từ phương trình đường chuẩn vitamin ta tính nồng độ vitamin mẫu thử pha lỗng theo cơng thức sau: s 450 y = 2.1488x + 207.16 R2 = 0.9995 AC “ -120CX-80 -40 40 80 120 •Nồng độ vitamin pp mẫu thử pha loãng: Đường chuẩn vitamin Bj s 600 I - 0— — -10 20 30 40 50 60 -30C*20 -10 I , 22 •Nồng độ vitamin Bj mẫu thử pha loãng: c = 183,27 =24,58(mcg/ml) x 7,4553 Đường chuẩn vitamin B2 ► Nồng độ vitamin B2 mẫu thử pha loãng: c = 43,884 =13,01(mcg/ml) 3,3724 Đường chuẩn vitamin B6 ► Nồng độ vitamin Bổ mẫu thử pha loãng: c = 62,513 6,4651 = 9,67(mcg/ml) 23 Dựa vào nồng độ vitamin tìm dung dịch thử pha lỗng nói trên, ta tính nồng độ chúng chế phẩm thuốc tiêm theo công thức sau: 1000 Trong đó: Cx=Nồng độ vitamin mẫu thử pha loãng n=Hệ số pha loãng (n=200) K=Hàm lượng chất đối chiếu — Từ cơng thức ta tính hàm lượng thuốc chế phẩm: > Bảng 2.5: Hàm lượng thuốc định lượng chế phẩm MEKC Vitamin ^ h oc -'T u (m cg/m l) K % so vói Yêu cầu DĐ (mg/ml) Cx nhãn BP pp 96,41 99,3% 19,147 95,74% Đạt B, 24,58 99,67% 4,899 98,0% Đạt b2 13,01 100,0% 2,602 95,14% Đạt b6 9,67 98,92% 1,913 95,65% Đạt 2.2.5.Xác đinh tính đúns phương pháp: Ta làm đại diện vitamin Bt Khảo sát dung dịch với tỷ lệ chuẩn vitamin Bj thêm vào 15 mcg/ml, 25 mcg/ml 35 mcg/ml, 45 mcg/ml Tiến hành chạy điện di theo điều kiện chọn để tìm lại lượng chuẩn Bj thêm vào Mỗi dung dịch chạy lần, lấy giá tiị trung bình Kết trình bày bảng sau: 24 Bảng 2.6: Khảo sát tính Nồng độ chất đối chiếu Diện tích pic Chất đối Chất chiếu Chất thử % tìm lại đối chiếu + thử vitamin Bj 15 mcg/ml 185,34 110,79 298,44 102,09 % 25 mcg/ml 189,28 187,95 376,60 99,91 % 35 mcg/ml 184,51 258,51 448,16 101,99% 45 mcg/ml 185,36 334,35 524.76 101,51% Như vậy: Lượng vitamin Bj trung bình tìm lại 101,38%, RSD=0,995% cho thấy phương pháp định lượng có tính đảm bảo cho phép định lượng vitamin chế phẩm 2.2.6.Xác đỉnh đô lăv lai phương pháp: Chúng chọn vitamin Bj làm đại diện để xác định độ lặp lại phương pháp Tiến hành mẫu thử với thí nghiệm song song, xác định diện tích pic vitamin Bj qua lần chạy Kết ghi bảng sau: Bảng 2.7: Khảo sát độ lặp lại phương pháp Vitamin Bj Diện tích pic 383,63 384,52 381,16 383,72 380,86 x=382,78 s2=2,741 RSD=0,433% Từ kết thu với RSD =0,433%, để đánh giá độ lặp lại phương pháp cho thấy phương pháp có tính xác cao 25 B/ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIÊU NĂNG CAO HPLC Chúng tiến hành so sánh phương pháp MEKC với phương pháp HPLC Phương pháp HPLC phương pháp đưa vào Dược điển Anh 2001, Dược điển Mỹ 2000 chuyên luận để định lượng chế phẩm multivitamin Trên sở thống kê kinh nghiệm phương pháp định lượng vitamin hỗn hợp HPLC nêu phần tổng quan Chúng tiến hành phân tích vitamin Bt, B2, B6,pp thuốc tiêm Becozym sau: *Điều kiện sắc ký: - Cột Waters RPg (4.6mmxl50mm;3.5)i) - Detector quang phổ tử ngoại: 280nm - Dung mơi pha động: Hồ tan 1,1 g natri heptansulphonat lít hỗn hợp gồm Acetonitril-Methanol-dd diethylamin 2%(tt/tt)-dd acid acetic 2%(kl/tt) tỷ lệ (2+3+4+28) - Tốc độ dòng: 0,8ml/phút - Thể tích tiêm: 50|il 2.2.7Xâv dưng đường chuẩn đinh lương vitamin HPLC *Chuẩn bị dung dịch chuẩn: Cân xác 100 mg chất đối chiếu cho vào bình định mức 100ml, hồ tan dung dịch acid acetic 1% cách lắc siêu âm 10 phút để thu dung dịch chuẩn nồng độ vitamin tương ứng mg/ml (Đây dung dịch chuẩn gốc) Lấy xác ml dung dịch thuốc tiêm cho vào bình định mức 100ml, hồ tan dung dịch acid acetic 1% dung dịch thử gốc Từ dung dịch chuẩn gốc dung dịch thử gốc, lọc qua màng lọc 0,45|j.m pha dẫy mẫu chuẩn mẫu phân tích bảng sau: 26 Bảng 2.8: Dẫy mẫu chuẩn mẫu thử phương pháp thêm Dẫy mẫu chuẩn Các chất cs 16 c4 20 Thêm chất B, cx chuẩn vitamin b2 12 16 20 (AC,mcg/ml) b6 12 16 20 pp 16 24 32 40 48 Mẫu số Lượng mẫu thử (ml) Dung dịch acid acetic c, c2 12 c3 1% 24 Niư vừa đủ 10 ml I Tiến hành chạy sắc ký, xác định thời gian lưu diện tích pic vitamin tương ứng Mỗi nồng độ chạy lần, đo diện tích pic vitamin lấy giá trị trung bình ta có bảng kết sau: Bảng 2.9: Kết chạy HPLC Dẫy mẫu chuẩn Các chất cx Mẫu số c, c2 c, c4 c5 Diện tích B, 57804 107682 125349 148019 171571 197548 pic trung b2 53059 95140 130204 165290 205385 248604 bình lần b6 77504 155749 231790 309684 390080 461665 chạy pp 97165 134547 155620 175478 195786 213569 So s, s, s, s4 $5 Từ kết bảng ta vẽ đường chuẩn vitamin có phương trình hồi quy sau: 27 Đường chuẩn vitamin pp • Nồng độ vitamin pp mẫu thử pha loãng: c =— * 2477,6 = 38,63(mcg / ml) Đường chuẩn vitamin Bj 300000 -s y = 5648.8x + 59652 R2 = 0.9955 200000 100000 - -20 Cx -10 r\ 10 () 20 • Nồng độ vitamin Bj mẫu thử pha loãng: 59652 , X = 10,56(mcg / mi) 5648,8 c = _ x 28 A 30 Đường chuẩn vitamin B2 s y = 9552.7X + 54292 • Nồng độ vitamin B2 mẫu thử pha loãng: _ 54292 9552,7 6g(mCg / ml) Đường chuẩn vitamin B6 Nồng độ vitamin B6 mẫu thử pha loãng : x = 787S7 19253 = 09(mcg/ml) 29 Dựa vào nồng độ vitamin tìm dung dịch thử pha lỗng nói trên, ta tính nồng độ chúng chế phẩm thuốc tiêm theo công thức sau: Cx x n x K Thuoc - 1000 Trong đó: Cx=Nồng độ vitamin mẫu thử pha loãng n=Hệ số pha loãng (n=500) K=Hàm lượng chất đối chiếu — Từ công thức ta tính hàm lượng thuốc chế phẩm: » Bảng 2.10: Hàm lượng thuốc định lượng chế phẩm HPLC Vitamin Cx ^Thuoc % so với Yêu cầu ( mg/ml) nhãn DĐ BP K (m cg/m l) pp 38,63 99,3% 19,179 95,90% Đạt B, 10,56 99,67% 5,263 105,26% Đạt Ba 5,68 100,0% 2,84 103,84% Đạt b6 4,09 98,92% 2,023 101,15% Đạt 30 C/BIỆN LUẬN KẾT QUẢ: Chúng xây dựng phương pháp điện di mao quản để định lượng vitamin pp, , B2 , B6 chế phẩm thuốc tiêm Becozyme.Để khẳng định kết định lượng vitamin thu đúng, tiến hành so sánh với phương pháp HPLC Kết thu phương pháp trình bầy bảng 2.11 Bảng2.11 : Hàm lượng thuốc định lượng phương pháp Vitamin MEKC HPLC Yêu cầu BP pp 95,74% 95,90% Đạt B, 98,0% 105,26% Đạt b2 95,14% 103,84% Đạt b6 95,65% 101,15% Đạt So sánh giá trị trung bình:Lấy đại diện vitamin pp Tính s=t.sd Dùng trị số t ứng với mức tin cậy 95% bậc tự N j+N2-2 sđ tính theo cơng thức: [2] ỵ N1 + N2- N2 Nếu I *1 - *2 |< s coi trung bình khác khơng có ý nghĩa thống kê I *1 - * |>£ trung hình khơng phù hợp (một giá trị trung bình sai sai) Sau tiến hành chạy máy với dẫy chất chuẩn chất phân tích bảng 2.2và bảng 2.8, xử lý kết phần xây dựng đường chuẩn, ta có kết định lượng vitamin pp bảng sau: 31 Bảng 2.12:So sánh phương pháp ■ %Hàm lượng vitamin pp so với nhãn MEKC 95,56 96,08 95,49 HPLC 95,89 96,14 96,07 Xj: 95,79 96,03 95,76 Si2: 0,0949 x2 : 95,97 s22 : 0,0298 Ta tính được: sd =• (4 -1)0,0949 + (4 -1)0,0298 4+4-2 1 V4 + sd=0,1766 Tra bảng có t005;6=2,45 8=2,45x0,1766=0,4327 xr x2| = | 95,79-95,971=0,18 £=0,4327 xr x2 Chương trình chạy điện di:Điện thế: 20kV Nhiệt độ cột: 30°c Áp suất bơm: 50mbar/50giây Chiều dài cột mao quản: 65 cm, đường kính 50 )L im Detector diod array (DAD): 252nm > Hệ đệm: đệm borat 20mM SDS 30mM điều chỉnh pH=9.0 b) Đã tiến hành định lượng vitamin chế phẩm Becozyme với sai số phương pháp 0,433%.Hàm lượng vitamin chế phẩm định lượng đạt theo yêu cầu dược điển Anh 2001 c) Đã tiến hành so sánh phương pháp CE xây dựng với phương pháp HPLC Hai phương pháp cho kết khác khơng có ý nghĩa thống kê d) Đề xuất: y Đưa phương pháp CE vào định lượng vitamin dạng bào chế đa thành phần > Có thể ứng dụng phưang pháp CE vào phân tích dạng bào chế đa thành phần khác 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế (2002), Dược điển Việt Nam 3, Nhà xuất Y học Hà Nội Phạm Gia Huệ, Trần Tử An, Trần Tích (1998), Hố phân tích tập ỉ, tập , Trường Đại học Dược Hà Nội Phạm Luận (1999), Cơ sở lý thuyết sắc kỷ điện di mao quản hiệu suất cao, Trường đại học Tổng hợp quốc gia Hà Nội Bộ mơn Hố Dược (1998), Hoá dược, Trường đại học Dược Hà Nội, Tr 53-60; 62-65 Vidal Việt Nam 2001 Viện kiểm nghiệm - Bộ y tế (1998), Báo cáo tổng kết đề tài khoa học công nghệ tháng 11 năm 1998 Viện kiểm nghiệm - Bộ y tế (2003), Thông báo kiểm nghiệm số 1-2003, Tr 18-20 A.s Cohen et al (1996), Capillary Electrophoretic separations of Drugs, Elsevier, p.3-27 BP 2001, p 2455- 2456 10 David N.Heiger (1992) , Hight Performamce Capillary Electrophoresis, Hewlett Packard, Germany 11 George Lunn and Norman R Schmuff , HPLC Methods for Pharmaceutical Analysis 12 Introduction to Capillary Electrophoresis (1991), Beckman Instruments Inc 13 Joseph J Villafraca (1990), Capillary Electrophoresis Analysis of Species Variations in the Trypic Maps of Cytochrome c, Academic Press, Inc 14 Manuel J.Gordonz et al (1988), "Capillary Electrophoresis", American Association for the Advancement of Science 34 15 Micellar Electrokinetc Chromatography (1991), Beckman Instruments Inc 16 Robert Weinberger (1999), Pratical Capillary Electrophoresis, Academic Press 11 The merck Index Twelfth Edition (1996) 18 Tom Large, Capillary Electrophoresis, Technical Support Manager 19 USP 23 (2000), p 2352; 2353 ; 2362 - 2456 35 ... hành nghiên cứu ứng dụng phương pháp điện di mao quản vào định lượng vitamin chế phẩm đa thành phần với đề tài: ? ?Định lượng vitamin: Bị, B2, B6, p p chế phẩm thuốc tiêm Becozym phương pháp điện. .. dựng phương pháp điện di mao quản để định lượng vitamin pp, , B2 , B6 chế phẩm thuốc tiêm Becozyme. Để khẳng định kết định lượng vitamin thu đúng, tiến hành so sánh với phương pháp HPLC Kết thu phương. .. phù hợp để ứng dụng phương pháp điện di mao quản vào định lượng chế phẩm Becozyme > Chương trình chạy điện di: Điện thế: 20kV Nhiệt độ cột: 30°c Áp suất bơm: 50mbar/50giây Chiều dài cột mao quản: