BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI TRẦN THỊ THUÝ ĐỊNH LƯỢNG PARACETAMOL VÀ QUININ SULFAT TRONG VIÊN NÉN ANTIGRIP F BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ HẤP THỤ TỬ NGOẠI (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP D ợ c s ĩ KHOÁ 1998-2003) Người hướng dẫn: TS. THÁI PHAN QUỲNH NHƯ TS. THÁI DUY THÌN Nơi thực hiện: Bộ môn hoá Dược Phòng hoá lý I - Viện kiểm nghiệm Thời gian thực hiện: 2/2003 đến 5/2003 Hà Nội 5-2003 LỜI CẢM ƠN Khoắ luận thực hoàn thành Bộ môn Hoắ DượcTrường Đại học Dược Hà Nội Phòng Hoắ L ý I- Viện kiểm nghiệm -Bộ y tế. Trước tiên em xin chân thành cảm ƠỈ1 hướng dẫn tận từih TS.Thái Phan Quỳnh Như - Trưởng phồng hoá lý I - Viện kiểm nghiệm Bộ y tế thầy giáo TS.Tháỉ Duy Thìn - Bộ môn Hoá Dược - Trường Đại học Dược Hà Nội giúp em có tài liệu k ỹ cẩn thiết thực nghiệm. Đồng thời em XỈĨ1 cảm ơn giúp đỡ cắc thầy cô, cắc cô k ỹ thuật viên Bộ môn Hoầ Dược cân phòng Hoá L ý I Viện Kiểm nghiệm - Bộ y tế giúp em hoàn thành đề tài củ,3 thời gian ngắn nhất. Em xin cảm ơn Thư viện trường Đại học Dược Hà Nội cung cấp tài liệu liên quan. Em xin cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Phòng đào tạo, thầy cô giắo Bộ môn truyền đạt kiến thức khoa học cho em năm năm học qua. Em xin chân thành cảm ơn. Hà nội, tháng năm 2003. sv Trần Thị Thuý MỤC LỤC Trang Đặt vấn đề .1 Phần 1: Tổng quan . 1.1. Paracetamol 1.2. Quinin sulfat 1.3. Phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại - khả kiến Phần 2: Thực nghiệm kết .11 2.1. Nội dung, đối tượng phương pháp nghiên cứu 11 2.2. Định lượng Paracetamol Quinin Sulfat hỗn hợp phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại . 13 2.2.1. Định lượng Paracetamol phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại 13 2.2.2. Định lượng Quinin sulfat phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại . 21 2.2.3. ứng dụng phương pháp để định lượng Paracetamol Quinin Sulfat viên nén bao đường Antigrip F, SKS: 050801 . 31. 2.3. So sánh phương pháp định lượng Paracetamol Quinin Sulfat thực khoá luận với phương pháp HPLC [8 ] . 33 Phần 3: Kết luân đề xuất 36 Tài liệu tham khảo MỘT SỐ CHỮ VIẾT TẮT g: Gam mg: Miligam ụ,g: Microgam ml: Mililit nm: Nanomet CTDP VTYT: Công ty Dược phẩm Vật tư y tế HD: Hạn dùng HPLC: Sắc ký lởng hiệu cao Ptl: Phân tử lượng SKD: Sinh khả dụng SKLM: Sắc ký lớp mỏng SKS: Số kiểm soát u v - VIS: Quang phổ hấp thụ tử ngoại - khả kiến ĐẶT VÂN ĐỂ Thuốc sản phẩm hàng hoá đặc biệt, có quan hệ trực tiếp đến sức khỏe quảng đại quần chúng, đến chất lượng hiệu việc phòng bệnh chữa bệnh nhiều quan hệ đến tính mạng người bệnh.Vì công tác đảm bảo chất lượng thuốc vấn đề hàng đầu ngành Dược. Nhóm thuốc hạ nhiệt, giảm đau nhóm thuốc sử dụng phổ biến rộng rãi nay.Với tác dụng hạ nhiệt nhanh, giảm đau an toàn cho người bệnh, Paracetamol hoạt chất có mặt nhiều biệt dược dạng phối hợp. Việc phối hợp thành phần công thức thuốc đa dạng phức tạp, thông thường phối hợp từ đến thành phần có Paracetamol. Một dạng phối hợp có mặt thị trường hỗn hợp Paracetamol Quinin sulfat (Ví dụ: Viên nén bao đường Antigrip F, viên nén Tiphagrip CTDP VTYT Tiền Giang, viên nén bao phim Anogin quinin CTDP VTYT Trà Vinh .). Tuy lưu hành sử dụng nay, Dược điển Việt Nam chưa có chuyên luận cho dạng bào chế này. Việc định lượng thành phần dạng phối hợp nêu tiến hành theo tiêu chuẩn sở, phương pháp đề cập đến chưa có thống nhiều nhược điểm. Dược điển Mỹ 24[18] có nhiều chuyên luận dạng bào chế phân liều phối hợp Paracetamol với số hoạt chất khác, với hỗn hợp chứa Paracetamol Quinin sulfat Dược điển Mỹ 24 chưa thấy đề cập tới. Mục tiêu khoá luận nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng Paracetamol Quinin sulfat hỗn hợp thuốc phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại với mục đích đưa phương pháp định lượng phù hợp với trang thiết bị sở sản xuất để sở áp dụng. Đồng thời mong muốn góp phần xây dựng tiêu chuẩn chất lượng ngành. PHẦN TỔNG QUAN 1.1. PARACETAMOL 1.1.1. Đại cương[l][9][ll][15] Là thuốc thiết yếu ghi Dược điển Việt Nam, Anh, Mỹ, Châu âu nhiều nước khác. Là thuốc sản xuất phương pháp tổng hợp. • Công thức phân tử: C8H9N 2. Ptl: 151,2 • Công thức cấu tạo: • Tên khoa học: N - Acetyl - p - aminophenol; p - Hydroxyacetanilid; Acetamidophenol. • Tên khác: Acetaminophen. • Tính chất: - Bột kết tinh trắng, không màu, dễ tan ethanol, khó tan nước, không tan Cloroform, tan kiềm tạo muối Phenolat. - Nhiệt độ nóng chảy từ 168°c -í- 172°c. - Cho phản ứng -OH phenol tự do: với Fe3+ cho màu lam tím. - Dễ bị thủy phân chức amid không bền. • Tạp chất cần ý là: p - Aminophenol, thường xác định giới hạn tạp chất phép đo nitrit phương pháp SKLM. • Dược động học: - Hấp thu nhanh qua ống tiêu hóa, SKD 80 -ỉ- 90%. - Thuốc liên kết với protein huyết tương thấp khoảng 25%, sau uống khoảng 30 phút xuất tác dụng đạt nồng độ tối đa sau l-ỉ-2 giờ. - Chuyển hóa phần lớn microsom gan phần nhỏ thận. - Thải trừ: Chủ yếu qua thận dạng liên hợp với acid glucuronic acid sulfonic. • Tác dụng: - Có tác dụng hạ nhiệt, giảm đau. Ngoài có tác dụng làm thư giãn cơ, không gây kích ứng dày, dung nạp tốt. Đây thuốc tương đối an toàn có tác dụng không mong muốn. - Thuốc tác dụng chống viêm chống kết dính tiểu cầu ức chế tổng hợp Prostaglandin yếu. • Cơ chế: - Giảm đau: thuốc làm giảm tổng hợp Prostaglandin E2 nên làm giảm tính cảm thụ dây thần kinh cảm giác với chất gây đau Bradikynin, Histamin, Serotonin. - Hạ sốt: thuốc ức chế tổng hợp Prostaglandin synthetase (là chất làm tăng tổng hợp Prostaglandin E1? E2 từ acid arachidonic vùng đồi, gây sốt làm tăng trình tạo nhiệt làm giảm trình nhiệt) làm giảm tổng hợp Prostaglandin Ej, E2, lập lại cân cho trung tâm điều nhiệt vùng đồi. • Chỉ định: Đau dây thần kinh, nhức đầu, đau cơ, đau răng, đau chấn thương, cảm sốt, cúm Trường hợp đau nội tạng thường phải phối hợp với thuốc nhóm Opiat. • Liều dùng: 0,5 -ỉ- lg/lần, g/24giờ. I • Chống định: Không phối hợp với thuốc gây độc tính với gan. Không uống rượu thời gian dùng thuốc. • Dạng bào chế: Viên đạn: Efferalgan ., Viên sủi: Panadol hoà tan ., Viên nén: Panadol . Dạng phối hợp Paracetamol với Cafein, Ibuprofen, Codein, Aspirin, Ephedrin, Quinin sulfat . Ví dụ: Viên nén Alaxan, Sedapa, Atingrip F . 1.1.2. Các phương pháp định lượng • Phương pháp chuẩn độ Nitrit[12]: Nguyên tác: Thủy phân Paracetamol môi trường acid (dung dịch HC1 10%) nhiệt độ tạo thành amin thơm bậc một, chuẩn độ dung dịch Natri nitrit môi trường acid tạo hợp chất diazoni (phản ứng diazo hóa). • Phương pháp đo quang [12]: Nguyên tắc: Dựa vào khả hấp thụ tử ngoại phân tử Paracetamol methanol có cực đại hấp thụ 245 nm môi trường kiềm có cực đại hấp thụ 257 nm. • Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)[4]: Dựa vào khả phân bố khác Paracetamol pha tĩnh pha động, trình sắc ký thực được. Kỹ thuật phát dựa vào tính chất hấp thụ u v nêu. • Định lượng Nitơ phương pháp Kendal [17]: Nguyên tác: Phương pháp dựa phân hủy phân tử hữu có chứa Nitơ đun với H2S04 đặc với có mặt Kali sulfat hay Natri sulfat. Khi Nitơ chuyển thành NH3 kết hợp với H2S04 tạo thành (NH4)2S04. Thêm NaOH vào hỗn hợp phản ứng cất kéo NH3 giải T phóng nước vào dung dịch chuẩn H2S04 0,1N dư, chuẩn độ acid dư dung dịch NaOH 0,1N. • Định lượng theo phương pháp đo Ceri[2][13][14]: Trong dung dịch acid có mặt Paracetamol chất khử, Ceri IV chất oxy hoá kết hợp với điện tử chuyển thành Ceri III. Phát điểm kết thúc thị feroin. Feroin phức chất sắt l,10-diazaphenantren (O-phenatrolin). Fe phức hợp Fe II Fe III. Phức chất Fe II có màu đỏ, phức chấtFe III có màu xanh, đến điểm tương đương, lượng Ceri IV thừa sẽoxy hóa Fell thành Felll thị chuyển màu. [(C12H8N2)3Fe ] 2+ - e' -► [(C12H8N2)3Fe)]3+ Màu đỏ 1.2. Màu xanh QUININ SULFAT 1.2.1. Đại cương[l][6][[ll][13][15] • Nguồn gốc: Là alcaloid phân lập từ vỏ canh ki na. • Công thức phân tử: • Công thức cấu tạo: (C2oH24N202)2. H2S04Ptl: 782,9 • Tên khoa học: - bis [(i?)-(6-methoxyquinolin-4-yl) - [(25,45,5i?) azabicyclo [2.2.2] oct-2-yl] methanol] sulfat. -5-ethenyl-l- • Tính chất: - Bột kết tinh trắng tinh thể hình kim không màu, mịn, vị đắng. - Không tan ether, tan Cloroform, tan ethanol 96%, tan nước,lg tan 810ml nước cất. • Dược động học: - Hấp thu nhanh hoàn toàn qua ruột. - Đạt nồng độ cao huyết tương sau uống l-ỉ-3 hết thứ 8. Nồng độ huyết tương thường gấp -7-7 lần hồng cầu. Gắn 70% vào protein huyết tương. Thuốc qua rau thai, sữa mẹ, 5% vào dịch não tủy. - Chuyển hóa gan. - Thải trừ qua thận 20% dạng chưa chuyển hoá (thải hết sau 24 giờ). Không tích lũy. • Tác dụng: - Là thuốc đặc hiệu dùng điều trị bệnh sốt rét. Tác dụng chủ yếu lên thể phân liệt, tác dụng lên thể tiền hồng cầu thoa trùng. Có tác dụng diệt thể giao tử Plasmodium vivax Plasmodium malariae, không diệt thể giao tử Plasmodium falciparum. Dùng kí sinh trùng kháng Cloroquin Cơ chế: Thuốc gắn vào ADN kí sinh trùng sốt rét ngăn chặn tách đôi ADN chép mã di truyền. - Còn dùng làm thuốc hạ sốt. • Chỉ định: - Thể vô tính kí sinh trùng sốt rét hồng cầu, với Plasmodium falciparum. Bảng 7: Sự phụ thuộc độ hấp thụ (E) nồng độ dung dịch Quinin sulfat (C) môi trường acid HC1 0,1N. Quinin sulfat STT Nồng độ (|ug/ml) E Phương trình hồi qui 0,307 0,442 0,597 y = 0,0732x + 0,0074 10 0,732 r = 0,9997 12 0,882 14 1,024 16 1,190 Report Date: 15:07:36, 04/17/2003 ^l3S Hình 6: Đồ Standard Calibration thị phụ thuộc E - c môi trường acid HC1 0,1N. 24 Nhận xét: Dựa vào đồ thị ta thấy, khoảng nồng độ biến thiên từ -j- 16|ig/ml độ hấp thụ tuyến tính vói nồng độ dung dịch. • Khảo sát khả chiết tách Quinin suựat khỏi hỗn hợp: Chúng tiến hành khảo sát khả chiết tách Quinin sulfat khỏi hỗn hợp chứa Paracetamol Quinin sulfat dựa nguyên tắc: Dùng dung dịch NaOH 0,1N để chuyển Quinin sulfat thành Quinin bazơ tan Cloroform, Paracetamol dung dịch NaOH 0,1N tạo muối Phenolat không tan Cloroform. Để khảo sát hệ số chiết tách, tiến hành chất đối chiếu Paracetamol Quinin sulfat Viện kiểm nghiệm cung cấp. Dung dịch thử dung dịch chuẩn Quinin sulfat pha theo qui trình sau: - Dung dich thử: Cân xác khoảng 75mg Paracetamol 15mg Quinin sulfat cho vào bình định mức 200ml, thêm 150ml nước cất, lắc kỹ khoảng 30 phút, thêm nước cất tới vạch, lắc đều. Lọc, bỏ 20ml dịch lọc đầu. Hút xác 20ml dịch lọc cho vào bình gạn, thêm 10ml dung dịch NaOH 0,1N, lắc kỹ. Chiết lần với Cloroform, lần 20ml. Để cho tách lớp, chuyển lớp Cloroform (có chứa Quinin bazơ) vào bình gạn khác chứa sấn lOml nước cất. Dịch chiết Cloroform lần rửa 10ml nước cất trên. Cho bay Cloroform đến cạn. Hoà tan cắn dung dịch HC1 0,1N chuyển vào bình định mức 50ml, thêm dung dịch HC1 0,1N cho vừa đủ lắc đều. Lấy xác 10ml dịch thu cho vào bình định mức 50ml làm vừa đủ đến vạch dung dịch HC10,1N, lắc đều. - Dung dịch chuẩn Quinin sulfat: Cân xác khoảng 15mg Quinin sulfat cho vào bình định mức 200ml, thêm 150ml nước cất, lắc kỹ khoảng 30 phút, thêm nước cất vừa đủ tới vạch, lắc đều. Lọc, bỏ 20ml dịch lọc đầu. Hút xác 20ml dịch lọc cho vào bình gạn, thêm 10ml dung dịch NaOH 0,1N, lắc kỹ. Chiết lần với Cloroform, 25 lần 20ml. Để cho tách lớp, chuyển lớp Cloroform (có chứa Quinin bazơ) vào bình gạn khác chứa sẵn 10ml nước cất. Dịch chiết Cloroform lần rửa lOml nước cất trên. Cho bay Cloroform đến cạn. Hoà tan cắn dung dịch HC1 0,1N chuyển vào bình định mức 50ml, thêm dung dịch HC1 0,1N vừa đủ tới vạch lắc đều. Lấy xác 10ml dịch vừa thu cho vào bình định mức 50ml làm vừa đủ đến vạch dung dịch HC1 0,1N, lắc đều. Tiến hành đo mật độ quang dung dịch thử dung dịch chuẩn Quinin sulfat bước sóng 250nm, cuvet lcm, mẫu trắng dung dịch HC1 0,1N. Tỉ lệ phần trăm Quinin sulfat chiết được tính theo công thức: %= Dt X Mc ---------------Dc X Mx Trong đó: . Mc, Mx khối lượng cân Quinin sulfat mẫu chuẩn mẫu thử (mg). . Dc, Dxlần lượt độ hấp thụ đo mẫu chuẩn mẫu thử. Kết khảo sát khả chiết tách ghi bảng 8: 26 Bảng 8: Kết khảo sát khả chiết tách Quinin sulfat. Quinin sulfat Thử Chuẩn % Chiết STT Mc (mg) Dc Mx (mg) Dx 14,9 0,435 15,0 0,449 102,53 14,9 0,436 15,7 0,452 98,39 15,8 0,470 15,5 0,463 100,42 15,8 0,470 15,7 0,470 100,64 15,3 0,454 15,5 0,460 100,01 15,3 0,453 15,8 0,476 101,75 Tính thống kê Giá trị trung bình X 100,62 Đô lêch chuẩn s - ì —----------- Sai số chuẩn s x = -Ẹ= . x II ^ s, Sai sô tương đối A C í/ A%= 1,44 /7-1 0,59 Sỵ'ta'100 ỷ 1,51 n = 6; p = 0,95; ta = 2,57 Nhận xét: Kết cho thấy, khả chiết tách Quinin sulfat khỏi hỗn hợp phương pháp tốt, tỷ lệ phần trăm chiết là: 100,62 ± 1,51%. 27 • Khảo sát độ lặp lại: Chúng sử dụng viên nén bao đường Antigrip F, SKS: 050801 để khảo sát độ lặp lại độ phương pháp. Dung dịch thử dung dịch chuẩn Quinin sulfat pha theo qui trình sau: - Dung dịch thử: Viên loại bỏ lớp bao màu. Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình viên, nghiền thành bột mịn. Cân xác lượng bột tương ứng với khoảng 15mg Quinin sulfat (khoảng 0,14g bột viên) cho vào bình định mức 200ml, thêm 150ml nước cất, lắc kỹ khoảng 30 phút, thêm nước cất tới vạch, lắc đều. Lọc, bỏ 20ml dịch lọc đầu. Hút xác 20ml dịch lọc cho vào bình gạn, thêm lOml dung dịch NaOH 0,1N, lắc kỹ. Chiết lần với Cloroform, lần 20ml. Để cho tách lớp, chuyển lớp Cloroform (có chứa Quinin bazơ) vào bình gạn khác chứa sẵn 10ml nước cất. Dịch chiết Cloroform lần rửa lOml nước cất trên. Cho bay Cloroform đến cạn. Hoà tan cắn dung dịch HC1 0,1N chuyển vào bình định mức 50ml, thêm dung dịch HC1 0,1N cho vừa đủ lắc đều. Lấy xác 10ml dịch thu cho vào bình định mức 50ml làm vừa đủ đến vạch dung dịch HC1 0,1N, lắc đều. - Dung dịch chuẩn Quinin sulfat: Tiến hành tương tự phần khảo sát khả chiết tách Quinin sulfat. Tiến hành đo tương tự trên. Hàm lượng Quinin sulfat viên tính theo công thức sau: X (mg/viên) = Dx X Mc -------------- X M X c Dc X Mx Trong đó: . Dc, Dt mật độ quang dung dịch chuẩn thử. . Mc, Mx khối lượng chất chuẩn thử đem định lượng (mg). . M khối lượng trung bình viên Antigrip F (M = 0,2938g). 28 . c hàm lượng phần trăm Quinin sulfat đối chiếu. Kết khảo sát ghi bảng 9. Bảng 9: Kết khảo sát độ lặp lại viên nén Antigrip F, SKS: 050801. Quinin sulfat Thử Chuẩn X(mg/viên) STT Mc (mg) Dc Mt (mg) Dx 15,3 0,454 146,3 0,450 28,93 15,3 0,454 146,9 0,463 29,65 15,3 0,454 145,7 0,446 28,79 15,9 0,470 150,0 0,473 29,77 15,9 0,469 146,5 0,454 29,32 15,9 0,470 145,4 0,445 28,89 Tính thống kê Giá trị trung bình X 29,23 Đô lêch chuẩn v Y s =] — Sai số chuẩn sx = -j= V ---------- n -\ 0,17 yjn Sai số tương đối Ả% - 0,42 1,49 ỵ n = 6; p = 0,95; ta=2,57 Nhận xét: Kết cho thấy phương pháp có độ lặp lại tốt. Hàm lượng Quinin sulfat viên là: 29,23 ± 0,44mg với độ tin cậy 95%. 29 • Khảo sát độ phương pháp: Khảo sát độ cách thêm chuẩn. Thêm vào lượng bột viên đấ biết rõ hàm lượng, lượng xác định chất đối chiếu Quinin sulfat khoảng 8mg cho nồng độ hoạt chất tương ứng không nằm khoảng nồng độ phần khảo sát khoảng tuyến tính E - c. Sau tiến hành tương tự phần khảo sát độ lặp lại Quinin sulfat. Kết khảo sát ghi bảng 10. Bảng 10: Kết khảo sát độ viên nén Antigrip F, SKS: 050801. Quinin sulfat STT Lượng thêm vào (mg) Lượng tìm thấy (mg) % Tìm lại 8,00 7,82 97,75 8,00 7,85 98,13 8,00 7,89 98,63 8,00 8,07 100,88 8,00 7,98 99,75 Độ 99,03 Nhận xét: Phương pháp có độ cao 99,03%. Như kết định lượng có độ xác cao. 30 • Khảo sát ảnh hưởng tá dược Paracetamol tới độ hấp thụ Quirtin sulfat: Chuẩn bị mẫu thử, mẫu: cân khoảng 15mg Quinin sulfat; mẫu trắng, mẫu: cân khoảng 75mg Paracetamol thêm vào toàn lượng tá dược (tính theo khối lượng Quinin sulfat để dập viên). Sau tiến hành tương tự trên. Kết khảo sát ghi bảng 11. B ảngll: Ảnh hưởng tá dược Paracetamol tới độ hấp thụ dung dịch Quinin sulfat. Độ hấp thụ Mẫu Thử 0,461 0,458 0,452 Trắng 0,003 0,002 0,002 Nhận xét. Tá dược Paracetamol ảnh hưởng không đáng kể tới độ hấp thụ dung dịch Quinin sulfat. Như phương pháp đặc hiệu. 2.2.3. ứng dụng phương pháp để định lượng Paracetamol Quinin sulfat viên nén bao đường Antigrip F, SKS: 050801, HD: 08/03. Chúng áp dụng qui trình khảo sát để tiến hành định lượng Paracetamol Quinin sulfat mẫu thuốc lưu hành thị trường viên nén bao đường Antigrip F, SKS: 050801. Chúng tiến hành định lượng lần. Kết thu được ghi bảng 12. 31 Bảng 12: Kết định lượng mẫu Antigrip F, SKS: 050801. Hàm lượng hoạt chất viên (mg) STT Paracetamol Quinỉn sulfat 149,98 28,93 148,06 29,65 151,46 28,79 148,84 29,77 149,79 29,32 150,05 28,89 Tính thống kê Giá trị trung bình X 149,69 29,23 1,16 0,42 0,47 0,17 0,81 1,49 149,69 ± l,21mg 29,23 ± 0,44mg Độ lệch chuẩn s =ì V — ------------n -1 Sai số chuẩn -A _ ỵ■ Sai số tương đối A% = X Khoảng tin Y ± ' yỊn vs' n = 6; p = 0,95; ta = 2,57 Nhận xét Độ lặp lại trình bày cho thấy sai số tương đối tuỳ theo trường hợp 0,81% Paracetamol 1,49% Quinin sulfat. Với kết cho phép áp dụng phương pháp để định lượng chế phẩm chứa thành phần tương tự trên. 32 2.3. SO SÁNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG PARACETAMOL VÀ QUININ SULFAT THựC HIỆN TRONG KHOÁ LUẬN NÀY VỚI PHƯƠNG PHÁP HPLC [8] Chúng so sánh kết định lượng Paraetamol Quinin sulfat phương pháp tiến hành với kết định lượng hai chất phương pháp HPLC [8] sinh viên Nguyễn Thị Hướng tiến hành nghiên cứu Viện kiểm nghiệm - Bộ y tế. 2.3.1. So sánh kết định lượng hai phương pháp • So sánh độ xấc hai phương pháp - test F. pr r—zL 02 Sị c = iz!__________ ù ~ n■ —11 ™ ~ So sánh Ftn với giá trị tới hạn F với mức tin cậy 95%. Bảng 13: So sánh độ xác phương pháp. Quinin sulfat Paracetamol Các UV(1) HPLC(2) UV(1) HPLC(2) X 149,69 150,60 29,23 28,66 n 52 1,35 2,76 0,18 0,27 phương pháp Fm =2,04 < ^0,95;«) = 5,05 Ftn = 1,50 < F{ữ:95;5;5) = 5,05 Nhận xét: Hai phương sai phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại phương pháp HPLC định lượng Paracetamol Quinin sulfat 33 khác ý nghĩa thống kê với mức ý nghĩa a=0,05. Như độ xác hai phương pháp tương tự nhau. So sánh giá trị trung bình - test T. Công thức tính: X x- X = (b ị-o -S ị2+ (« ,-!)■ $ ; + n2- ■fĩ2 Ị fỈỊ tTN — nx+ n2 } \-,2 Bảng 14: So sánh giá trị trung bình phương pháp Quinin sulfat Paracetamol Các phương UV(1) HPLC(2) UV(1) HPLC(2) X 149,69 150,60 29,23 28,66 n s2 1,35 2,76 0,18 0,27 pháp 0,47 1,43 s,;2 tm = U < t005;10 = 2,23 tTN —2,10 < t005;10 = 2,23 Nhận xét: Hai giá trị trung bình phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại phương pháp HPLC định lượng Paracetamol Quinin sulfat khác ý nghĩa thống kê với mức ý nghĩa a = 0,05. Hay nói cách khác, ảnh hưởng thành phần khác tới trình định lượng không đáng kể. 2.3.2. Đánh giá ưu nhược điểm hai phương pháp. • Phương phắp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại: Ưu điểm: - Kỹ thuật đơn giản, thao tác dễ dàng. - Dung môi kiềm, acid sẩn có; giá thành thấp. 34 - Kết định lượng đáng tin cậy. Nhược điểm: - Phải qua trình chiết tách riêng chất, tốn thời gian, dung môi hoá chất. - Dễ xảy sai số trình chiết tách, cần có tay nghề ổn định. • Phương phầp sắc k í lỏng hiệu cao (HPLC): Ưu điểm: - Tiến hành nhanh. - Kết định lượng xác. - Định lượng đồng thời thành phần hỗn hợp mà qua giai đoạn chiết tách. Nhược điểm: - Phải có máy HPLC giá thành cao. - Các dung môi sử dụng phải tinh khiết đắt tiền. 35 PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 4.1. Kết luận Sau hoàn thành khoá luận em thu kết quả: • Về kỹ năng: Vận dụng kiến thức học để tiến hành nghiên cứu đề tài, nâng cao kỹ thực hành đảm bảo cho kết xác khả tra cứu tài liệu. • Về phương pháp: - Đã tiến hành khảo sát xây dựng qui trình định lượng Paracetamol Quinin sulfat hỗn hợp phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại. Đã áp dụng phương pháp để định lượng chế phẩm lun hành thị trường là: Viên nén bao đường Antigrip F, SKS: 050801 CTDP VTYT Tiền Giang sản xuất, có hai thành phần Paracetamol Quinin sulfat. Kết cho thấy: xác định hàm lượng Paracetamol viên Antigrip F 14Ọ,69 ± l,21mg. Hàm lượng Quinin sulfat viên 29,23 ± 0,44mg với độ tin cậy 95%. - So sánh kết phương pháp xây dựng với phương pháp HPLC [8], qua xử lý thống kê cho thấy: hai phương pháp có độ xác với độ tin cậy 95%. 4.2. Đề xuất • Với sở sản xuất: Nếu sở máy HPLC áp dụng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại để kiểm tra sản phẩm có thành phần tương tự. • Với Hội đồng Dược điển: Hiện nay, thuốc hạ nhiệt giảm đau đa thành phần có chứa Paracetamol lưu hành rộng rãi thị trường. Việc đưa số chuyên luận dạng bào chế tương tự 36 vào Dược điển Việt Nam (như số Dược điển khác) cần thiết. Hy vọng kết nghiên cứu tham khảo góp phần xây dựng cho chuyên luận Dược điển Việt Nam lần xuất tới. 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. / Dược lý học (2000), Trường Đại học Y Hà Nội, trang 184, 293 - 294. ./ Bộ Y tế (2002), Dược điển Việt Nam III, NXB Y học Hà Nội, trang 245, 207. 3. / Các phương pháp phân tích vật lý hoá học (2001), NXB khoa học kỹ thuật, trang 169 - 245. 4. / ' Nguyễn Thành Đạt (2002), Nghiên cứu định lượng Paracetamol Ibuprofen thuốc đa thành phần, Khoá luận tốt nghiệp Dược sĩ. 5. Phạm Gia Huệ - Trần Tử An (1998), Trường Đại học Dược Hà Nội, Hóa phân tích, Tập 1, 2, trang 27- 42, - . .ỵ Trần Đức Hậu (2002), Trường Đại học Dược Hà Nội, Hoá Dược, Tập 2, trang 302. 7. / Trần Đức Hậu (2000), Trường Đại học Dược Hà Nội, Thực tập Hoá Dược, trang 47. 8. ỵ Nguyễn Thị Hướng (2003), Định lượng Paracetamol Quinin sulfat viên nén Antigrip F phương pháp HPLC, Khoá luận tốt nghiệp Dược sĩ. 9. / Thái Duy Thìn - Nguyễn Văn Thục (2002), Trường Đại học Dược Hà Nội, Hóa Dược, Tập 1, trang 90. 10. CTDP VTYT Tiền Giang (2000), "Tiêu chuẩn sở viên nén bao đường Antigrip F". 11. / Từ điển Bách khoa dược học (1999), NXB từ điển bách khoa, trang 473, 526. 12. Hoàng Tùng (2000), Góp phần xây dựng tiêu chuẩn định lượng Paracetamol, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ. /7 British Pharmacopoeia (1998), trang 994, 1129. / European Pharmacopoeia II (1997), trang 1288, 1416. 15ý Martindale The Extra Pharmacopoeia (1999), trang 12-1A, 439-442. 16./ Pharmacopoeia of The People’s Republic of China (1997), trang 520, 443. ỵìl. The Pharmacopoeia of Japanese (1991), trang 141, 487. 18.y'T h e United States Pharmacopoeia 24 (2000), trang 1458-1460. f [...]... ĐỊNH LƯỢNG PARACETAMOL VÀ QUININ SULFAT TRONG HỖN HỢP BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG P H ổ HÂP THỤ TỬ NGOẠI 2.2.1 Định lượng Paracetamol bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại • Xác định bước sóng định lượng Paracetamol: Chúng tôi tiến hành xác định bước sóng định lượng Paracetamol trên Paracetamol chất đối chiếu do Viện kiểm nghiệm cung cấp Cân chính xác khoảng 75mg Paracetamol cho vào bình định mức... nhất khi đo ở bước sóng hấp thụ cực đại Định luật Lambert - Beer cho phép xác định nồng độ của dung dịch hấp thụ bức xạ điện tử bằng cách đo độ hấp thụ: 8 Phương pháp đo quang phổ hấp thụ UV-VIS được ứng dụng để định tính, thử tinh khiết, định lượng các chất có cấu tạo đăc biệt (Ví dụ: hợp chất thơm, hợp chất có liên kết chưa bão hòa, các chất màu ) Định lượng một chất bằng cách đo độ hấp thụ của dung... Như vậy, phương pháp trên là đặc hiệu 2.2.2 Định lượng Quinin sulfat bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại • Khảo sát bước sóng định lượng Quinin suựat: Chúng tôi tiến hành khảo sát bước sóng định lượng Quinin sulfat trên Quinin sulfat chất đối chiếu do Viện kiểm nghiệm cung cấp Cân chính xác khoảng 15mg Quinin sulfat cho vào bình định mức 200ml, thêm 150ml dung dịch HC1 0,1N, lắc kỹ khoảng... hấp thụ Mẫu 1 2 3 Thử 0,461 0,458 0,452 Trắng 0,003 0,002 0,002 Nhận xét Tá dược và Paracetamol ảnh hưởng không đáng kể tới độ hấp thụ của dung dịch Quinin sulfat Như vậy phương pháp trên là đặc hiệu 2.2.3 ứng dụng phương pháp trên để định lượng Paracetamol và Quinin sulfat trong viên nén bao đường Antigrip F, SKS: 050801, HD: 08/03 Chúng tôi đã áp dụng qui trình khảo sát ở trên để tiến hành định lượng. .. Hòa tan Quinin sulfat trong hỗn hợp gồm Cloroform và Anhydrid acetic Chuẩn độ bằng dung dịch Acid percloric với chỉ thị tím tinh thể • Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)[8]: Dựa vào khả năng phân bố khác nhau của Quinin sulfat trên pha tĩnh và pha động, quá trình sắc ký sẽ thực hiện được Kỹ thuật phát hiện dựa vào tính chất hấp thụ u v đã nêu 1.3 PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG PHỔ HẤP THỤ TỬ NGOẠI -... Cloroform - Paracetamol và Quinin sulfat chất đối chiếu do Viện kiểm nghiệm - Bộ y tế cung cấp - Viên nén bao đường Antigrip F cửa Tipharco, SKS: 050801, HD: 08/03 Công thức: Quinin sulfat : 30 mg Paracetamol : Tá dược vừa đủ : 150 mg 1 viên 2.1.3 Phương pháp nghiên cứu - Bằng thực nghiệm, dựa vào kết quả nghiên cứu thu được, xử lý thống kê và rút ra nhận xét - Phương pháp dùng trong thực nghiệm: Đo quang. .. Nhận xét: Quinin sulfat trong môi trường acid HC1 0,1N có cực đại hấp thụ tại bước sóng 250nm Vì vậy phép định lượng được tiến hành tại bước sóng này • Khảo sát thòi gian đo ảnh hưởng tới độ hấp thụ của Quinin suựat: Qui trình tiến hành tương tự như phần khảo sát độ lặp lại của Quinin sulfat trên viên nén bao đường Antigrip F, SKS: 050801 Sau đó tiến hành đo độ hấp thụ của dung dịch Quinin sulfat ở các... dược và Paracetamol tới độ hấp thụ của Quirtin sulfat: Chuẩn bị 3 mẫu thử, mỗi mẫu: cân khoảng 15mg Quinin sulfat; 3 mẫu trắng, mỗi mẫu: cân khoảng 75mg Paracetamol và thêm vào toàn bộ lượng tá dược (tính theo khối lượng Quinin sulfat để dập viên) Sau đó tiến hành tương tự như trên Kết quả khảo sát được ghi ở bảng 11 B ảngll: Ảnh hưởng của tá dược và Paracetamol tới độ hấp thụ của dung dịch Quinin sulfat. .. trên viên nén Antigrip F, SKS: 050801 Paracetamol Lượng thêm vào Lượng tìm lại STT (mg) (mg) 1 40,0 40,6 101,5 2 40,0 39,7 99,3 3 40,0 39,3 98,3 4 40,0 39,4 98,5 5 40,0 39,0 97,5 % Tìm lại 99,0 Độ đúng Nhận xét: Phương pháp có độ đúng cao 99,0% Như vậy các kết quả định lượng chấp nhận được • Khảo sát ảnh hưởng của tá dược và Quinin sulfat tới độ hấp thụ của Paracetamol: Trong viên nén Antigrip F, ngoài... phối hợp Quinin sulfat với Paracetamol Ví dụ: Antigrip F 1.2.2 Các phương pháp định lượng: • Phương pháp chuẩn độ acid - bazơ [7]: Nguyên tác: Cân chính xác khoảng một lượng chế phẩm, hoà tan vào hỗn hợp gồm cồn và Cloroform, hỗn hợp cần trung tính hoá trước bằng 7 dung dịch NaOH 0,1N với chỉ thị màu Phenolphtalein Lắc và chuẩn độ bằng dung dịch NaOH 0,1N tới màu hồng • Phương pháp định lượng trong . hợp bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại 13 2.2.1. Định lượng Paracetamol bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại 13 2.2.2. Định lượng Quinin sulfat bằng phương pháp đo quang phổ. PHổ HÂP THỤ TỬ NGOẠI 2.2.1. Định lượng Paracetamol bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại. • Xác định bước sóng định lượng Paracetamol: Chúng tôi tiến hành xác định bước sóng định lượng. cứu xây dựng phương pháp định lượng Paracetamol và Quinin sulfat trong hỗn hợp thuốc bằng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại với mục đích đưa ra một phương pháp định lượng phù hợp với