BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG THAY THẾ Bà MÍA CHO MẠT CƯA CÂY CAO SU ðỂ TRỒNG NẤM LINH CHI GIỐNG NHẬT (Ganoderma lucidum) CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TS. BÙI THỊ MINH DIỆU SINH VIÊN THỰC HIỆN VÕ HỮU TIẾN MSSV: 3102788 LỚP: CNSH K36 Cần Thơ, 08/2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG THAY THẾ Bà MÍA CHO MẠT CƯA CÂY CAO SU ðỂ TRỒNG NẤM LINH CHI GIỐNG NHẬT (Ganoderma lucidum) CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TS. BÙI THỊ MINH DIỆU SINH VIÊN THỰC HIỆN VÕ HỮU TIẾN MSSV: 3102788 LỚP: CNSH K36 Cần Thơ, 08/2013 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS. Bùi Thị Minh Diệu Võ Hữu Tiến DUYỆT CỦA HỘI ðỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ðỒNG LỜI CẢM TẠ ðể hoàn thành luận văn tốt nghiệp ðại học, cố gắng thân, nhận ñược hướng dẫn, ủng hộ, giúp ñỡ nhiều người. Xin cảm ơn ba mẹ, anh chị tất bạn ñã ñộng viên, khuyến khích, hỗ trợ suốt trình học tập thực ñề tài . Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu trường ðại Học Cần Thơ, Ban Giám ðốc Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học - Trường ðại Học Cần Thơ ñã tạo ñiều kiện thuận lợi cho học tập, nghiên cứu thực thành công ñề tài luận văn này. Xin chân thành cảm ơn tất quý thầy cô trường ðại Học Cần Thơ ñã nhiệt tình giảng dạy truyền ñạt kiến thức chuyên môn cho suốt trình học tập trường. Tôi xin chân thành cảm ơn cô Bùi Thị Minh Diệu, anh Trần Văn Ngoan, Thầy Võ Văn Song Toàn ñã tận tình hướng dẫn, bổ sung kiến thức tạo ñiều kiện cho thời gian thực ñề tài. ðặc biệt cô Bùi Thị Minh Diệu cố vấn học tập lớp Công nghệ Sinh học khóa 36, ñã quan tâm, ñộng viên tạo ñiều kiện tốt cho suốt trình học thực ñề tài. Xin gửi lời cảm ơn ñến Thầy cô, cán Viện anh chị cán PTN Sinh học Phân tử, PTN Phân tích vô ñã giúp ñỡ tạo ñiều kiện thuận lợi cho thực tốt ñề tài. Tôi xin kính chúc quý thầy cô bạn sinh viên - người tận tình giúp ñỡ dồi sức khoẻ công tác tốt. Cần Thơ, ngày tháng Võ Hữu Tiến năm 2013 Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 Trường ðHCT TÓM LƯỢC ðề tài “Nghiên cứu thử nghiệm sản xuất nấm linh chi giống Nhật (Garnoderma lucidum) bã mía” ñược tiến hành nhằm mục ñích tận dụng nguồn chất bã mía ñịa phương ñể trồng nấm linh chi nhằm thay phần chất mạt cưa cao su. Thí nghiệm ñược bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với nghiệm thức tỉ lệ thay bã mía cho mạt cưa cao su tăng dần (20%, 30% 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 100%) với nguồn dưỡng chất ñược bổ sung cám gạo (5% tính tổng khối lượng chất) bột bắp (5% tính tổng khối lượng chất). Kết cho thấy nghiệm thức sử dụng 30% bã mía 70% mạt cưa cho thời gian tơ nấm lan khắp khối chất nhanh (22 ngày). Tuy nhiên, nghiệm thức ñược chọn có suất cao ñạt hiệu kinh tế nghiệm thức sử dụng 80% bã mía 20% mạt cưa (thời gian tơ lan khắp khối chất theo thời gian 29 ngày; hiệu suất sinh học ñạt 21,343%; hàm lượng ñạm ñạt 2,2071% tro tổng số ñạt 2,820%.) Từ khóa: bột bắp, bã mía, cám gạo, mạt cưa, nấm linh chi giống Nhật (Ganoderma lucidum). Chuyên ngành Công nghệ Sinh học i Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 Trường ðHCT TỪ VIẾT TẮT BM: Bã mía CG: Cám gạo NT: Nghiệm thức Chuyên ngành Công nghệ Sinh học ii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 Trường ðHCT MỤC LỤC Trang PHẦN KÝ DUYỆT LỜI CẢM TẠ . TÓM LƯỢC i TỪ VIẾT TẮT .ii MỤC LỤC iii DANH SÁCH BẢNG iv DANH SÁCH HÌNH CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU 1.1 ðặt vấn ñề .1 1.2 Mục tiêu ñề tài .1 CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU .2 2.1 Sơ lược nấm .2 2.2 Tổng quan nấm linh chi .3 2.2.1 Phân loại .3 2.2.2 ðặc ñiểm hình thái 2.2.3 ðặc ñiểm sinh thái 2.2.4 Các nhân tố ảnh hưởng ñến sinh trưởng phát triển nấm .4 2.2.5 Giá trị dược tính .5 2.3 Thành phần hóa học chất 2.3.1 Mạt cưa cao su .6 2.3.2 Bã mía .6 2.4 Thành phần hóa học dưỡng chất .7 2.4.1 Cám gạo 2.4.2 Bột bắp 2.5 Tình hình sản xuất nấm linh chi nước quốc tế CHƯƠNG 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học iii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 Trường ðHCT 3.1 Phương tiện 11 3.1.1 ðịa ñiểm – thời gian nghiên cứu 11 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 11 3.1.3 Thiết bị - dụng cụ - hóa chất .11 3.2 Phương pháp nghiên cứu 12 3.2.1 Phân lập giống linh chi .12 3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng loại chất ñến suất chất lượng nấm 12 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 18 4.1 Kết phân lập nấm .18 4.2 Ảnh hưởng loại chất ñến tăng trưởng nấm linh chi .18 4.2.1 Tơ lan kín khối chất theo thời gian 18 4.2.2 Ảnh hưởng chất ñến suất nấm 19 4.2.3 Ảnh hưởng chất ñến hiệu kinh tế .20 4.2.4 Hiệu suất sinh học 21 4.2.5 Ảnh hưởng chất ñến lượng tro nấm linh chi 22 4.2.6 Ảnh hưởng chất ñến ñạm tổng số nấm linh chi .23 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ 25 5.1 Kết luận 25 5.2 Kiến nghị 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO .26 PHỤ LỤC .29 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học iv Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 Trường ðHCT DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng 1. Thành phần nấm linh chi Bảng 2. Thành phần hóa học mạt cưa cao su Bảng 3. Một số thành phần bã mía .7 Bảng 4. Thành phần hóa học loại cám gạo .8 Bảng 5. Thành phần hóa học loại bột bắp .9 Bảng 6. Phần trăm số bịch phôi có tơ nấm phát triến lan khắp khối chất theo thời gian (ñơn vị tính: %) 18 Bảng 7. Hiệu kinh tế .21 Bảng 8. Hiệu suất sinh học sau hai ñợt thu .21 Bảng 9. Tro tổng số nghiệm thức .33 Bảng 10. ðạm tổng số nghiệm thức .34 Bảng 11. Khối lượng nấm thu ñược sau hai ñợt 34 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học v Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 Trường ðHCT DANH SÁCH HÌNH Trang Hình 1. Nấm linh chi .3 Hình 2. Quy trình sản xuất nấm .13 Hình 3. Chuẩn bị bịch phôi 15 Hình 4. Trồng chăm sóc nấm 16 Hình 5. Hệ sợi nấm linh chi sau phân lập .18 Hình 6. Trọng lượng trung bình sau hai ñợt thu hoạch .20 Hình 7. Ảnh hưởng chất ñến lượng tro tổng số .22 Hình 8. Ảnh hưởng chất ñến lượng ñạm tổng số .23 Hình 9. Một số thiết bị sử dụng phân tích trồng nấm .29 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học vi Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 – 2013 Trường ðHCT sung 100% BM Nếu ký tự theo sau giống khác biệt ý nghĩa; ký tự theo sau khác khác biệt có ý nghĩa với ñộ tin cậy 95%. Hiệu suất sinh học nghiệm thức cao nghiệm thức nấm tận dụng nguồn lượng từ chất cao nhất. Nghiệm thức có hiệu suất sinh học nhỏ suất không cao mà trọng lượng chất khô nghiệm thức nên hiệu suất nhỏ. Nguyên nhân suất không cao ñã ñược phân tích phần trên. 4.2.5 Ảnh hưởng chất ñến lượng tro nấm linh chi Hình 7: Ảnh hưởng chất ñến lượng tro tổng số Ghi chú: = NT bổ sung 100% MC; = NT bổ sung 20% BM + 80% ; = NT bổ sung 30% BM + 70%; = NT bổ sung 40% BM + 60% MC; = NT bổ sung 50% BM + 50%; = NT bổ sung 60% BM + 40% MC; = NT bổ sung 70% BM + 30%; = NT bổ sung 80% BM + 20% MC; = NT bổ sung 100% BM Nếu ký tự theo sau giống khác biệt ý nghĩa; ký tự theo sau khác khác biệt có ý nghĩa với ñộ tin cậy 95%. Qua phân tích thống kê biểu ñồ (hình 7) cho thấy nghiệm thức 2, 3, 5, 6, 7, 8, khác biệt ý nghĩa mặt thống kê nghiệm thức có hàm lượng tro cao nhất. Nghiệm thức khác biệt ý nghĩa với nghiệm thức lại có hàm lượng tro cao chứng tỏ bã mía có hàm lượng tro (khoáng chất Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 22 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 Trường ðHCT ñịnh) nhiều mạt cưa. ðiều dễ hiểu nghiệm thức có tỷ lệ bã mía cao có xu hướng cao tro tổng số. Tóm lại, nghiệm thức bổ sung 60% bã mía + 40% mạt cưa có hàm lượng tro tổng số cao nhất. Vì khả tích lũy khoáng chất vào tay nấm cao thành phần khoáng chất chất cao. 4.2.6 Ảnh hưởng chất ñến ñạm tổng số nấm linh chi Hình 8: Ảnh hưởng chất ñến lượng ñạm tổng số Ghi chú: = NT bổ sung 100% MC; = NT bổ sung 20% BM + 80% ; = NT bổ sung 30% BM + 70%; = NT bổ sung 40% BM + 60% MC; = NT bổ sung 50% BM + 50%; = NT bổ sung 60% BM + 40% MC; = NT bổ sung 70% BM + 30%; = NT bổ sung 80% BM + 20% MC; = NT bổ sung 100% BM Nếu ký tự theo sau giống khác biệt ý nghĩa; ký tự theo sau khác khác biệt có ý nghĩa với ñộ tin cậy 95%. Qua phân tích thống kê biểu ñồ (hình 8) cho thấy nghiệm thức 8, khác biệt ý nghĩa mặt thống kê (với ñộ tin cậy 95%). Nghiệm thức khác biệt ý nghĩa mặt thống kê. Nhìn chung lượng ñạm tổng số ñược chuyển hóa chủ yếu từ nguồn dinh dưỡng ban ñầu (5% cám gạo + 5% bột bắp) nên nghiệm thức khác biệt không nhiều. Nghiệm thức khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức nghiệm thức có lượng ñạm tổng số cao hơn. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 23 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 – 2013 Trường ðHCT Nhìn chung kết ñạm tổng số ño ñược nhỏ so với kết nghiên cứu Lê Xuân Thám (1988) khoảng 3,2-4,0%. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 24 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 Trường ðHCT CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Nghiệm thức bổ sung 30%BM + 70%MC có ñộ lan tơ khắp khối chất nhanh nhất. Nhưng xét suất lại nhỏ so với nghiệm thức bổ sung 70%BM + 30%CG nghiệm thức bổ sung 80%BM + 20%CG. Tro tổng số cao nghiệm thức bổ sung 60%BM + 40%MC. ðạm tổng số cao nghiệm thức 70%BM + 30%MC. Tuy nhiên nghiệm thức bổ sung 80%BM + 20%MC ưu tiên ñược chọn có suất hiệu kinh tế cao. 5.2 Kiến nghị Cần nghiên cứu nguồn dưỡng chất bổ sung ñể hoàn thiện quy trình sản xuất. Tiến hành thêm thí nghiệm khảo sát dược tính nghiên cứu ly trích polysaccharite có nấm linh chi. Nhằm tạo nấm có dược tính cao. . Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 25 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 – 2013 Trường ðHCT TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Cao Ngọc ðiệp Nguyễn Văn Thành. 2010. Giáo trình môn Nấm học, Trường ðại học Cần Thơ, tr.16-38. Châu Thị Chấp Ngãnh. 2010. Khảo sát số chất trồng nấm bào ngư trắng (pleurotus florida). Luận văn tốt nghiệp ðại học ngành Công nghệ Sinh học, Trường ðại học Cần Thơ, tr.25-46 Chu Thị Thơm, Phan Thị Lài Nguyễn Văn Tố. 2006. Cải tạo môi trường chế phẩm sinh học. Nhà xuất Lao ñộng. Dương Thị Hương Giang. 2008. Giáo trình thực tập Protein Enzyme học. Viện NC & PT Công Nghệ Sinh Học, Trường ðại Học Cần Thơ, tr. 11 – 14. ðặng Văn Quân. 2008. Giáo trình Phân loại học thực vật A, Trường ðại học Cần Thơ. Lê Duy Thắng. 2006. Kỹ thuật trồng nấm. Nhà xuất Nông Nghiệp, Hà Nội, tr. 142-143 Lương Bảo Uyên Phạm Thị Ánh Hồng. 2008. Tạp chí Khoa học Công nghệ. Tập 11, số 1. Nguyễn ðức Lượng. 2002. Công nghệ vi sinh tập 2: Vi khuẩn học công nghiệp. Nhà xuất ðại Học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh Nguyễn Hữu ðống ðinh Xuân Linh. 1999. Luận văn nghiên cứu sản xuất nấm linh chi ñóng hộ. Nguyễn Lân Dũng (2005), Công nghệ nuôi trồng nấm, NXB Nông nghiệp, Hà Nội. Trần Thị Mỹ Nhung. 2012. So sánh suất, chất lượng nấm linh chi (ganoderma lucidum) hai loại chất. Luận văn Thạc sĩ chuyên ngành Công nghệ Sinh học. Trường ðại học Cần thơ. Tiếng Anh Chang, S. T T. H. Quimio, 1989. Tropical mushrooms biological nature and cultivation method. The Chinese university press, p.329-330. Copeland, E.B. 1911. Philippine Agriculture Forester p.44-50. Gonzales, B.P. 1970. Analysis Pulping of Coir Dust. Emata, R. (Ed.) 1970. Coconut Research and Development p.163-173. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 26 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 Trường ðHCT Heltay, I I. Zavodi. 1960. Rice straw compost. Mushroom Science p.393-399 Hong, B.S., S.J.Kim, C.H Song, S.Y.Hwang H.C.Yang, 1992. Development of substrate and cultural method for the cultivation of Pleutotus sajor-caju, Korean Jounal Mycology 20(4) p.354-359. Joachim, A.W.R. 1930. The Fertilizer Value and Decompositability of Coconut Fiber Dust. Chemical Abstracts 24:1796. Kaul, T., M.Khurana J.Kachroo, 1981. Chemical composition of cereal straw of the Kashmir valley. Mushroom Science p.19-25. Leong, P. C. 1980. Utilisation of cotton waste substrate with temperature treatment for the cultivation of oyster mushroom (Pleurotus) in Singapore. Singapore J. Pri. Ind p.2127. Ponmurugan, P., Y .Nataraja Sekhar T. R. Sreesakthi, 2007. Effects of various substrates on the growth and quality of mushrooms. Pakistan Journal of Biological Sciences p.171-173. Sharma, O.P., 1998. Textbook of Fungi, 5th edition. Tata McGraw-Hill Publishing Company Limited, New Delhi, p.16 – 21, 208 – 19. Shukla, K., K.S.Shetty, V.Krishnamoorthy, 2005. Possibility of protein enrichment of paddy straw by mushroom Pleurotus species. PAU, Ludhiana India, p.363367. Singer, R. 1975. The Agaricales in Modern Taxonomy. Vaduz: J. Cramer. Trang Web http://123doc.vn/document/213834-tong-quan-ve-thanh-phan-hoa-hoc-cua-nam-linhchi.htm (ngày 13.07.2013) http://tailieu.vn/xem-tai-lieu/de-tai-nghien-cuu-mot-so-che-pham-duoc-lieu-co-nguongoc-tu-nam-linh-chi-o-viet-nam-.487253.html (ngày 10.07.2013) http://www.hoinongdanhungyen.org.vn/index.php?option=com_content&view=article &id=719:nm-n-va-nm-dc-liu&catid=66:sc-khe-i-sng&Itemid=91(ngày 11.07.2013) http://www.ecofriend.com/mushroom-to-increase-prostate-cancer-drug-power.html (ngày 10.07.2013) http://linhchi.com.vn/bai-viet/dac-tinh-sinh-hoc-cua-nam-linh-chi.html(ngày 10.07.2013) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 27 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 – 2013 Trường ðHCT http://vi.wikipedia.org/wiki/%C4%90%C3%B4ng_tr%C3%B9ng_h%E1%BA%A1_th %E1%BA%A3o(13.07.2013) http://thuvien247.net/Nam-an-Nam-duoc-lieu-Cong-dung-va-cong-nghe-nuoi-trongt5458.html#.UHvXGf81v5(11.07.2013) http://agriviet.com/nd/142-trong-nam-linh-chi-tren-ba-mia/ (11.07.2013) http://thegioinam.wordpress.com/2012/05/30/duoc-tinh-cua-nam-an-nam-duoc-lieutiep-theo/ (15.07.2013) http://www.baomoi.com/San-xuat-nam-linh-chi-tu-mun-cua-cua-cay-caosu/79/4367838.epi ngày 10/08/2013. http://www.baomoi.com/Binh-Duong-San-xuat-nam-linh-chi-tu-mun-cua-caosu/84/5362959.epi ngày 10/08/2013. http://skhcn.hue.gov.vn/Portal/?GiaoDien=12&ChucNang=405&NewsID=201108051 42900 ngày 10/08/2013. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 28 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 Trường ðHCT PHỤ LỤC Phụ lục 1: Các hình ảnh thí nghiệm Hình 9: Một số thiết bị sử dụng phân tích trồng nấm Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 29 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 – 2013 Trường ðHCT Phụ lục 2: Các phương pháp phân tích 1. ðịnh lượng nitơ tổng số phương pháp Kjeldalh (Nguyễn Thị Thu Thủy Nguyễn Công Hà, 2009) a. Nguyên tắc Tất dạng nitơ có thể hay mô ñược gọi nitơ tổng số. Nitơ có thành phần acid amin protein nitơ protein. Nitơ thành phần protein muối vô cơ, acid nitric, acid amin tự do, peptid, urê dẫn xuất urê, alkaloid, base purine pyrimidine nitơ phi protein (NH3, Acid uric, Creatinin,…) Nitơ tổng số = Nitơ protein + Nitơ phi protein Trước tiên mẫu ñược vô hóa H2SO4 ñặc nhiệt ñộ cao có chất xúc tác. Các phản ứng trình vô hóa xảy sau: 2H2SO4 → 2H2O + 2SO2↑ + O2 Oxy tạo thành phản ứng lại oxy hóa nguyên tố khác. Các phân tử chứa nitơ tác dụng H2SO4 tạo thành NH3. NH3 kết hợp với H2SO4 dư tạo thành (NH4)2SO4 tan dung dịch. 2NH3 + H2SO4 → (NH4)2SO4 ðẩy NH3 khỏi dung dịch NaOH, hấp thụ NH3 dung dịch H3BO3 có chứa chất thị, sau ñó ñem chuẩn ñộ dung dịch H2SO4 0,1N. (NH4)2SO4 + 2NaOH → Na2SO4 + H2O + NH3↑ 2NH4OH + H3BO3 → (NH4)2B4O7+ 7H2O (NH4)2B4O7 + H2SO4 → (NH4)2SO4 + H3BO3 b. Tiến hành Vô hóa mẫu: Cân khoảng 1g mẫu cho vào ống Kjeldahl, thêm vào 5ml H2SO4 ñậm ñặc bột xúc tác ñun bếp. Nhiệt ñộ thời gian gia nhiệt ñược chọn tuỳ thuộc vào mẫu phân tích (nhiệt ñộ sử dụng 420oC). Vô hóa mẫu ñến thu ñược dung dịch suốt không màu có màu xanh lơ CuSO4, ñể nguội ñến nhiệt ñộ phòng. Chuẩn bị chưng cất ñạm: Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 30 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 Trường ðHCT - Chuẩn bị dung dịch bình hứng NH3, dùng pipet cho vào bình hứng 20ml acid boric, có thêm giọt chất thị (Bromocresolgreen metyl ñỏ) ñặt bình vào hệ thống cho ñầu ống sinh hàn ngập dung dịch . - Sau vô hóa mẫu hoàn toàn, lắp ống Kjeldahl vào hệ thống cất ñạm. - Sau ñó thêm vào khoảng 10ml NaOH 30%. Quan sát dung dịch bình chuyển sang màu xanh ñen, chứng tỏ dung dịch bình cất ñã ñủ kiềm ñể ñẩy NH3 khỏi (NH4)2SO4. Bắt ñầu chưng cất ñạm cho ñến dung dịch bình hứng ñạt 80-100ml (thời gian khoảng phút). Dùng nước cất ñể rửa ñầu ống sinh hàn, lấy bình hứng ñem ñi chuẩn ñộ H2SO4 0,1N. c. Tính kết Hàm lượng % nitơ tổng số ñược tính theo công thức: N (%) = ( 0,0014 x V x 100 )/m Protein tổng số = N x 5,25 Trong ñó: V: thể tích H2SO4 0,1N dùng ñể chuẩn ñộ (ml) m: khối lượng nguyên liệu vô hóa (g) 0,0014: số gam nitơ tương ñương với ml H2SO4 0,1N 2. Phương pháp xác ñịnh hàm lượng tro tổng số (Nguyễn Thị Thu Thủy Nguyễn Công Hà, 2009) Tro thành phần lại thực phẩm sau ñã ñốt cháy hết hợp chất hữu cơ. Tro thật gồm loại muối khoáng có thực phẩm (do ñó tro ñược gọi tổng số muối khoáng). Trong trường hợp thực phẩm có lẫn tạp chất (ñất, cát) muốn có ñộ tro thật phải loại trừ ñất cát chất muối khoáng không bị nung chảy nhiệt ñộ quy ñịnh. a. Nguyên tắc Dùng nhiệt ñộ cao (550 – 600oC) nung cháy hoàn toàn chất hữu cơ. Phần lại ñem cân tính phần trăm tro có thực phẩm. b. Tiến hành - Nung chén sứ ñã rửa lò nung tới 550 oC - 600 oC ñến trọng lượng không ñổi. ðể nguội bình hút ẩm cân xác ñến 0,0001g. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 31 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 – 2013 Trường ðHCT - Cho khoảng 2g mẫu nấm vào chén sứ cân tất với ñộ xác trên. Cho tất vào lò nung sấy ñến 600 oC. Nung cho ñến tro trắng, nghĩa ñã hết chất hữu cơ, thông thường khoảng - tùy loại mẫu. Trường hợp tro ñen, lấy ñể nguội cho thêm vài giọt H2O2 30% HNO3 ñậm ñặc nung lại cho ñến tro trắng. - ðể nguội bình hút ẩm cân ñến ñộ xác trên. Tiếp tục nung thêm nhiệt ñộ 30 phút ñể nguội bình hút ẩm cân trọng lượng không ñổi. Kết lần nung liên tiếp không ñược cách 0,5mg cho gam chất thử. c. Tính kết quả: Hàm lượng tro toàn phần ñược tính theo công thức sau: X =[(G2 – G1)/m] x100 Trong ñó: X: hàm lượng tro toàn phần (%) G2: Trọng lượng chén sứ trọng lượng mẫu sau nung 600 oC (g) G1: Trọng lượng chén sứ (g) m: khối lượng mẫu nấm ñem nung (g) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 32 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 Trường ðHCT Phụ lục 3: Kết thí nghiệm Bảng 9: Tro tổng số nghiệm thức NT LẶP LẠI CHÉN MẪU I II III I II III I II III I II III I II III I II III I II III I II III I II III 33,7107 30,9405 20,5433 30,3403 28,1304 29,6780 29,2846 30,6972 29,9450 29,2948 25,6556 29,2541 29,4744 28,9540 33,7107 30,9405 20,5433 30,3403 28,1304 29,6780 29,2846 30,6972 29,9450 29,2948 25,6556 29,2541 29,4744 1,0022 1,0002 1,0022 1,0015 1,0008 1,0007 1,0035 1,0000 1,0002 1,0043 1,0002 1,0034 1,0005 1,0025 1,0280 1,0150 1,0240 1,0270 0,9990 1,0130 0,9950 1,0060 1,0010 1,0140 0,9920 0,9830 1,0240 CHÉN + MẪU SAU NUNG 33,7190 30,9442 20,5475 30,3610 28,1478 29,6931 29,3035 30,7165 29,9614 29,3112 25,6730 29,2703 29,4956 28,9724 33,7180 30,9434 20,5452 30,3558 28,1428 29,7039 29,2985 30,7265 29,9549 29,3048 25,6733 29,2749 29,4931 TRO TỔNG SỐ 0,83 0,37 0,42 2,07 1,74 1,51 1,88 1,93 1,64 1,63 1,74 1,61 2,12 1,84 0,71 0,29 0,19 1,51 1,24 2,56 1,40 2,91 0,99 0,99 1,78 2,12 1,83 Ghi chú: = NT bổ sung 100% MC; = NT bổ sung 20% BM + 80% ; = NT bổ sung 30% BM + 70%; = NT bổ sung 40% BM + 60% MC; = NT bổ sung 50% BM + 50%; = NT bổ sung 60% BM + 40% MC; = NT bổ sung 70% BM + 30%; = NT bổ sung 80% BM + 20% MC; = NT bổ sung 100% BM Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 33 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 – 2013 Trường ðHCT Bảng 10: ðạm tổng số nghiệm thức LẦN I II III 1,9904 2,3061 2,1255 2,4313 2,6399 2,6454 2,6652 2,2968 2,1260 2,2139 2,2034 2,3138 2,4093 2,3819 2,4121 2,7470 2,1205 2,2161 2,2320 2,4110 2,4911 2,4730 2,5065 2,6559 2,5543 2,2040 2,1502 Ghi chú: = NT bổ sung 100% MC; = NT bổ sung 20% BM + 80% ; = NT bổ sung 30% BM + 70%; = NT bổ sung 40% BM + 60% MC; = NT bổ sung 50% BM + 50%; = NT bổ sung 60% BM + 40% MC; = NT bổ sung 70% BM + 30%; = NT bổ sung 80% BM + 20% MC; = NT bổ sung 100% BM. Bảng 11: Khối lượng nấm thu ñược sau hai ñợt ðỢT ðỢT Trung bình LẦN I II III LẦN I II III 33,8 27,4 44,0 27,1 23,3 28,3 27,7 27,3 31,6 22,5 23,3 24,1 27,7 25,9 26,7 21,8 23,4 22,8 34,6 34,5 33,6 26,6 31,5 28,3 32,2 32,1 28,0 26,8 26,7 24,3 31,1 38,4 38,5 24,6 27,9 23,0 34,1 34,6 32,7 24,4 28,8 23,2 36,4 38,1 41,3 28,3 28,8 28,4 35,5 33,9 32,8 25,3 28,7 24,1 LẦN I II III 30,5 25,3 36,2 25,1 25,3 27,8 24,8 24,6 24,7 30,6 330 31,0 29,5 29,4 26,2 27,9 33,2 30,8 29,3 31,7 27,9 32,3 33,4 34,8 30,4 31,3 28,5 Ghi chú: = NT bổ sung 100% MC; = NT bổ sung 20% BM + 80% ; = NT bổ sung 30% BM + 70%; = NT bổ sung 40% BM + 60% MC; = NT bổ sung 50% BM + 50%; = NT bổ sung 60% BM + 40% MC; = NT bổ sung 70% BM + 30%; = NT bổ sung 80% BM + 20% MC; = NT bổ sung 100% BM. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 34 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 Trường ðHCT Phụ lục 4: Kết thống kê 1. Kết thống kê khối lượng nấm thu sau hai ñợt trung bình hai ñợt One-way ANOVA: TLTB versus NT Source NT Error Total DF 18 26 S = 2.385 Level NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 NT6 NT7 NT8 NT9 N 3 3 3 3 SS 177.73 102.35 280.08 MS 22.22 5.69 F 3.91 R-Sq = 63.46% Mean 30.655 26.070 24.707 31.507 28.343 30.601 29.623 33.537 30.048 StDev 5.415 1.532 0.063 1.299 1.900 2.636 1.895 1.243 1.458 P 0.008 R-Sq(adj) = 47.21% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -----+---------+---------+---------+---(-------*------) (------*------) (------*------) (------*------) (------*------) (-------*------) (------*------) (------*------) (------*------) -----+---------+---------+---------+---24.0 28.0 32.0 36.0 Pooled StDev = 2.385 Grouping Information Using Fisher Method NT NT8 NT4 NT1 NT6 NT9 NT7 NT5 NT2 NT3 N 3 3 3 3 Mean 33.537 31.507 30.655 30.601 30.048 29.623 28.343 26.070 24.707 Grouping A A B A B A B A B C A B C B C D C D D Means that not share a letter are significantly different. Fisher 95% Individual Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of NT 2. Kết phân tích ñạm tổng số: One-way ANOVA: DAM versus NT Source NT Error Total DF 18 26 S = 0.1147 Level NT1 NT2 N 3 SS 0.8187 0.2366 1.0553 MS 0.1023 0.0131 R-Sq = 77.58% Mean 2.1454 2.3068 StDev 0.1346 0.1038 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học F 7.79 P 0.000 R-Sq(adj) = 67.61% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev +---------+---------+---------+--------(------*------) (------*------) 35 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 – 2013 NT3 NT4 NT5 NT6 NT7 NT8 NT9 3 3 3 2.3101 2.4379 2.5094 2.5711 2.6555 2.2071 2.1641 0.1828 0.0324 0.1290 0.1378 0.0967 0.0882 0.0466 Trường ðHCT (------*-----) (------*------) (-----*------) (------*------) (------*------) (------*------) (------*------) +---------+---------+---------+--------2.00 2.20 2.40 2.60 Pooled StDev = 0.1147 Grouping Information Using Fisher Method NT NT7 NT6 NT5 NT4 NT3 NT2 NT8 NT9 NT1 N 3 3 3 3 Mean 2.6555 2.5711 2.5094 2.4379 2.3101 2.3068 2.2071 2.1641 2.1454 Grouping A A B A B B C C D C D D D D Means that not share a letter are significantly different. Fisher 95% Individual Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of NT 3. Kết phân tích tro tổng số: One-way ANOVA: Tro tổng số versus Nghiệm thức Source Nghiệm thức Error Total S = 1.616 Level NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 NT6 NT7 NT8 NT9 N 3 3 3 3 DF 18 26 SS 24.96 46.99 71.96 MS 3.12 2.61 R-Sq = 34.69% Mean 0.773 1.773 1.817 1.660 1.977 4.440 1.733 2.820 1.910 StDev 0.055 0.281 0.155 0.070 0.140 4.775 0.720 0.115 0.184 F 1.20 P 0.355 R-Sq(adj) = 5.66% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev ------+---------+---------+---------+--(---------*---------) (---------*---------) (---------*---------) (--------*---------) (---------*---------) (---------*---------) (---------*--------) (---------*---------) (---------*--------) ------+---------+---------+---------+--0.0 2.0 4.0 6.0 Pooled StDev = 1.616 Grouping Information Using Fisher Method Nghiệm thức NT6 NT8 NT5 NT9 N 3 3 Mean 4.440 2.820 1.977 1.910 Grouping A A B A B A B Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 36 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp ðại Học khóa 36 - 2013 NT3 NT2 NT7 NT4 NT1 3 3 1.817 1.773 1.733 1.660 0.773 Trường ðHCT A B A B A B B B Means that not share a letter are significantly different. Fisher 95% Individual Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Nghiệm thức Simultaneous confidence level = 49.83% Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 37 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học [...]... Trư ng ðHCT 2.3 Thành ph n hóa h c trong cơ ch t 2.3.1 M t cưa cây cao su M t cưa cây cao su thư ng ñư c ch n là cơ ch t tr ng n m vì nó có nhi u ñi u ki n thu n l i cho s phát tri n c a linh chi, ñ c bi t là nó không có ch t d u hay ñ c t Thành ph n m t cưa cây cao su ñư c tóm t t qua b ng sau: B ng 2: Thành ph n hóa h c trong m t cưa cây cao su Thành Ph n trăm tr ng lư ng khô ph n N 1,68 – 0,2 P 0,48... t cưa + 5% cám g o + 5% b t b p Nghi m th c 2: 20% bã mía + 80% m t cưa + 5% cám g o + 5% b t b p Nghi m th c 3: 30% bã mía + 70% m t cưa + 5% cám g o + 5% b t b p Nghi m th c 4: 40% bã mía + 60% m t cưa + 5% cám g o + 5% b t b p Nghi m th c 5: 50% bã mía + 50% m t cưa + 5% cám g o + 5% b t b p Nghi m th c 6: 60% bã mía + 40% m t cưa + 5% cám g o + 5% b t b p Nghi m th c 7: 70% bã mía + 30% m t cưa. .. Tóm l i nghi m th c s d ng 80% bã mía và 20% m t cưa cây cao su cho hi u qu kinh t l n nh t ði u này cho th y s d ng bã mía r ti n hơn ñ d n thay th m t cưa cho ra l i t c cao hơn (m c dù năng su t khác nhau không có ý ñ tin c y 95%) nghĩa v m t th ng kê 4.2.4 Hi u su t sinh h c B ng 8: Hi u su t sinh h c sau hai ñ t thu Nghi m th c N m tươi (Kg) Cơ ch t khô (Kg) Hi u su t (%) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1.839... ) nhưng v n còn h n ch vì ngu n cơ ch t là m t cưa cây cao su thu mua khó và giá thành cao do chi phí v n chuy n Trong khi ñó, ngu n bã mía các t nh ñ ng b ng sông C u Long l i khá ph bi n và giá r Do ñó, ñ tài Nghiên c u th nghi m s n xu t n m linh chi gi ng Nh t (Ganoderma lucidum) trên bã mía nh m nghiên c u quy trình thích h p ñ tr ng n m linh chi trên ngu n cơ ch t này ñ s n xu t n m dư c li... n và m nh ñ chu n b cho thí nghi m ti p theo - Theo dõi ñánh giá: Quan sát ñ thu n nh t c a khu n ty (s i tơ tr ng thu n nh t, kích thư c hi n vi là s i n m trong su t có vách ngăn ) 3.2.2 Kh o sát nh hư ng c a lo i cơ ch t ñ n năng su t và ch t lư ng c a n m linh chi: - M c ñích thí nghi m: Xác ñ nh t l cơ ch t (m t cưa cây cao su + bã mía) t i ưu nh t cho năng su t, ch t lư ng cao v i lư ng dinh dư... ðHCT ñ nh) nhi u hơn trong m t cưa ði u này cũng d hi u khi nh ng nghi m th c có t l bã mía cao hơn có xu hư ng cao hơn v tro t ng s Tóm l i, nghi m th c b sung 60% bã mía + 40% m t cưa có hàm lư ng tro t ng s cao nh t Vì kh năng tích lũy khoáng ch t vào tay n m cao cũng như thành ph n khoáng ch t trong cơ ch t cao 4.2.6 nh hư ng c a cơ ch t ñ n ñ m t ng s trong n m linh chi Hình 8: nh hư ng c a cơ ch... ñ tin c y 95% Hi u su t sinh h c c a nghi m th c 8 cao nh t vì nghi m th c này n m t n d ng ngu n năng lư ng t cơ ch t cao nh t Nghi m th c 3 có hi u su t sinh h c nh nh t do năng su t không cao mà tr ng lư ng cơ ch t khô b ng nhau trên t ng nghi m th c nên hi u su t nh Nguyên nhân năng su t không cao ñã ñư c phân tích ph n trên 4.2.5 nh hư ng cơ ch t ñ n lư ng tro trong n m linh chi Hình 7: nh hư... chi trên ngu n cơ ch t này ñ s n xu t n m dư c li u quí, ñ ng th i gi i quy t ñư c m t ph n ph ph m bã mía t các nhà máy ñư ng ñ a phương, gi m nguy cơ ô nhi m môi trư ng 1.2 M c tiêu ñ tài: Xác ñ nh t l thay th h p lý c a bã mía cho m t cưa cây cao su ñ thi t k quy trình s n xu t n m linh chi (Ganoderma lucidum) hoàn thi n hơn Chuyên ngành Công ngh Sinh h c 1 Vi n NC & PT Công ngh Sinh h c Lu n văn t... trên cho th y nghi m th c 8 cho l i nhu n cao nh t cũng như ph n trăm l i nhu n (355,82%) Nghi m th c 9 tuy có m c thu g n b ng v i nghi m th c 1 tuy nhiên so v l i nhu n và ph n trăm l i nhu n l i l n hơn Nguyên nhân do năng su t c a hai nghi m th c khác bi t không có ý nghĩa v m t th ng kê tuy nhiên ngu n chi phí b ra th p nên l i nhu n cao hơn (vì bã mía có giá r hơn so v i m t cưa cây cao su) Tóm... các ñ m bào t và chu trình l i ti p t c 2.2 T ng quan v n m linh chi 2.2.1 Phân lo i Trên th c t ngư i ta phân lo i n m linh chi d a vào màu s c qu th như: xích chi (có màu ñ ), hoàng chi (có màu vàng), t chi (màu tím), h c chi (màu ñen), b ch chi (màu tr ng), thanh chi (màu hơi xanh) Theo (ðinh Xuân Linh, 2006) h th ng phân lo i n m linh chi: Gi i N m: Mycota Ngành N m ñ m: Basidiomycota L p: Agaricomycetes . (%) 70,00 69,90 70,08 70 ,40 65,10 48 ,60 Khoáng (Ash) (%) 1,31 1 ,40 1,50 1,60 2 ,40 1 ,40 Ca (%) 0, 14 0,22 0,09 0,22 0,06 0,10 Phospho (%) 0,30 0,30 0,15 0,33 0 ,44 0,62 (*Nguồn: Viện chăn. bắp Vật chất khô (%) 86,71 87,30 88,11 88,30 84, 60 87,50 Protein thô (%) 8,88 8,90 9,27 8,60 9,80 2,60 Lipid thô (%) 4, 20 4, 40 4, 21 4, 70 5,10 1 ,40 Xơ (%) 2,32 2,70 3,05 3,00 2,20 33,50 Dẫn. 90,27 90,00 87 ,40 Protein thô (%) 13,00 9,76 12,15 11,20 Lipid thô (%) 12,03 6,76 11 ,43 12,80 Xơ (%) 7,77 18,56 6,85 7,10 Dẫn xuất không ñạm (NFE) (%) 46 ,40 40 ,10 52, 64 47,00 Khoáng (Ash)