m BỘ Y TẾ TRUỒNG ĐAI HOC D c HÀ NÔI VŨ BÍCH HẠNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA MỘT SỐ NHÓM CHẤT CỦA TÁO MÈO ( KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1999-2004) Người hướng dẫn TS. Nguyễn Văn Đổng Nơi thực Bộ môn Hoá sinh Thời gian thực Tháng 2-5/2004 HÀ NỘI, THÁNG 5-2004 & LỜI CẢM ƠN Trước tiên, em xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến TS. Nguyễn Văn Đồng người thầy hướng dẫn, bảo tận tình giúp em hoàn thành khoá luận này. Em xin bày tỏ lòng biết ơn tới toàn thể thầy cô giáo, cô kỹ thuật viên Bộ môn Hoá Sinh ủng hộ tạo điều kiện tốt để em thực khoá luận. Cám ơn khoa Hoá Sinh - BV 19-8 giúp đỡ suốt thời gian thực đề tài. Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn phòng Đào tạo, phòng Quản lý Khoa học, thư viện Quốc gia, thư viện trường Đại học Dược Hà Nội .đã giúp em hoàn thành khoá luận thời hạn. Hà Nội 20.5.2004 Sinh viên Vũ Bích Hạnh MỤC LỤC Đặt vấn đề . Phần 1. Tổng quan . 1.1.Tổng quan lipid . 1.1.1 .Đại cương lipid 1.1.2.Lipoprotein vận chuyển lipid .4 1.1.3.Bệnh tăng lipid máu 1.1.4.Một số công trình nghiên cứu thuốc hạ lipiđ từ thảo dược VN 1.1.5.Một số mô hình gây tăng cholesterol ngoại sinh chuột 10 1.2.Tổng quan dược liệu . 11 1.2.1.Sơn tra 11 1.2.2.Táo mèo .13 Phần 2. Nguyên vật liệu phương pháp thực nghiệm . 15 2.1.Đối tượng nghiên cứu 15 2.2.Phương pháp thực nghiệm .15 2.2.1.Xử lý chế biến dược liệu 15 2.2.2.MÔ hình gây tăng cholesterol ngoại sinh 16 2.2.3.Thử tác dụng thuốc chuột nhắt gây tăng cholesterol ngoại sinh 17 2.2.4.Phương pháp định lượng số lipid máu 17 2.2.5.Phương pháp xử lý số liệu 20 Phần 3. Kết thực nghiệm nhận x é t 21 3.1.Mô hình gây tăng CH chuột nhắt trắng 21 3.2.Ảnh hưởng thuốc tới số lipid chuột gây tăng CH máu 22 3.2.1.Ảnh hưởng thuốc tới số lipid ngày thứ 23 3.2.2.Ảnh hưởng thuốc tới số lipid ngày thứ 10 27 3.2.3.Ảnh hưởng thuốc tới số lipid ngày thứ 20 31 3.2.4.Nhận xét chung bàn luận 38 Phần 4. Kết luận đề xuất .40 KÝ HIỆU VIẾT TẮT ■ Apo Apoprotein ■ CH Cholesterol ■ CHE Cholesterol esterase ■ CHO Cholesterol oxidase ■ CM Chylomicron ■ GPO Glycerol-3- phosphat oxidase ■ HDL Lipoprotein tỷ trọng cao ■ HDL-C Cholesterol HDL - HMGCoA Hydroxy methyl glutaryl CoA ■ IDL Lipoprotein tỷ trọng trung gian ■ LCAT Lecithin- cholesterol- acyl-tranferase ■ LDL Lipoprotein tỷ trọng thấp ■ LDL-C Cholesterol LDL ■ Lp Lipoprotein ■ LPL Lipoprotein lipase ■ POD Peroxidase ■ TG Triglycerid ■ VLDL Lipoprotein tỷ trọng thấp ■ VXĐM Vữa xơ động mạch ĐẶT VẤN ĐỂ Trong năm gần đây, tỉ lệ mắc bệnh tỉ lệ tử vong bệnh tim mạch ngày gia tăng, đặc biệt nước phát triển, nước có đòi sống cao. Tai biến tim mạch gây thường dẫn đến tử vong để lại di chứng nặng nề. Một nguyên nhân gây bệnh hàng đầu hội chứng tăng lipid máu. Tăng lipid máu có liên quan mật thiết tới bệnh VXĐM, bệnh gây nhiều tai biến nguy hiểm nhồi máu tim, xuất huyết não, nghẽn mạch ngoại vi .Hội chứng tăng lipid máu liên quan đến nhiều bệnh đái tháo đường, hội chứng thận hư, tăng huyết áp, thiểu tuyến giáp thói quen sinh hoạt khác ăn nhiều thức ăn giàu Cholesterol, mỡ bão hoà, uống nhiều rượu lối sống tĩnh . Hầu hết thuốc hạ lipid máu Hóa dược thường phải dùng lâu dài, có nhiều tác dụng phụ rối loạn tiêu hoá, buồn nôn, đau đầu, sỏi mật . Vì vậy, xu hướng dùng hợp chất tự nhiên , dược liệu thảo mộc để khắc phục nhược điểm đó. Ở Việt Nam, thuốc hạ lipid máu chủ yếu thuốc ngoại nhập, thường có giá thành đắt. Các công trình nghiên cứu sản xuất thuốc chưa nhiều, phạm vi sử dụng hạn chế. Từ thực tế đó, mục đích luận văn phát hiện, nghiên cứu so sánh tác dụng hạ lipid máu Táo mèo với Sơn tra-một dược liệu Trung Quốc nhiều tài liệu chứng minh có tác dụng hạ Cholesterol máu. Sơn tra từ lâu biết đến nhiều thuốc phòng điều trị hội chứng tăng lipid máu, nhiên Việt Nam vị thuốc Sơn tra thay Táo mèo- khác chi loài sơn tra Trung Quốc. Tác dụng táo mèo chưa nghiên cứu cụ thể, vấn đề đưa "liệu táo mèo có thực thay sơn tra việc hạ lipid máu hay không?". Nội dung mục tiêu cụ thể: + Xây dựng mô hình gây tăng Cholesterol ngoại sinh chuột nhắt trắng thức ăn giàu cholesterol óc lợn. + Nghiên cứu ảnh hưởng sơn tra táo mèo tới số số lipid mô hình gây tăng Cholesterol ngoại sinh. + Các số lipid thực để khảo sát là: • Cholesterol toàn phần (CH) • Cholesterol HDL (HDL-C) • Triglycerid (TG) • Tỷ số HDL-C/ CH PHẦN TỔNG QUAN 1.1. TỔNG QUAN VỂ LIPID : 1.1.1. Đại cương Lipid [1], [9], [11] : *Lipid sản phẩm ngưng tụ acid béo alcol, hầu hết ester amid acid béo với alcol. * Lipid thể có nguồn gốc: - Nguồn gốc ngoại sinh: từ thức ăn đưa vào (các mỡ động vật dầu thực vật). - Nguồn gốc nội sinh: thể tự tổng hợp mà nguyên liệu chủ yếu từ sản phẩm thoái hoá glucid lipid. * Lipid có chức sau: - Là nguồn dự trữ cung cấp lượng quan trọng thể, đặc biệt có nhu cầu cao, kéo dài chịu lạnh, đói lâu ngày bệnh lý đái tháo đường, thể không sử dụng nguồn glucid .lg lipid cho ta 9,3 Kcal, gấp đôi so với glucid protid. - Là thành phần tham gia cấu tạo tế bào : màng tế bào, ty thể, bào tương, tế bào tổ chức thần kinh .hoặc tập trung tổ chức mỡ lớp mỡ da, mỡ mạc treo, mỡ bao quanh thận dạng dự trữ, bảo vệ có va đập, dễ dàng di động - Là dung môi hoà tan vitamin tan dầu A, D, E, K, caroten cung cấp cho thể acid béo không no cần thiết vitamin F (hỗn hợp acid linoleic, linolenic, arachidonic) - Tạo nên hợp chất hoạt động sinh học (vitamin D3, hormon steroid, chất vận chuyển Prostaglandin .) * Lipid thể người gồm nhóm chính: - Triglycerid (hay mỡ trung tính): cấu trúc gồm phân tử glycerol ester hoá với acid béo. - Phospholipid: cấu trúc có phospho, kết hợp với acid béo phản ứng ester hoá. - Cholesterol: tên gọi, đầu phát có dịch mật(cho-), có nhân sterol cấu thành từ sản phẩm thoái hoá acid béo (các mẩu C). 1.1.2. Lipoprotein vận chuyển lipid: 1.1.2.1. Cấu trúc, phân loại lipoprotein [1], [14] Lipid không tan nước, để vận chuyển thể lipid phải liên kết với protein thành lipoprotein (Lp). Phần protein liên kết với lipid gọi apoprotein (Apo).Theo T.KOVANE-1985, cấu trúc phân tử Lp sau: Phân tử Lp có dạng hình cầu, đường kính từ 100-800 A°. Trong phân tử, phân tử lipid liên kết với phần protein lực liên kết Vander-Wal. Phần lõi phân tử Lp chủ yếu phân tử lipid không phân cực (cholesterol ester, triglycerid .)Phần vỏ Lp cấu tạo Apo phân tử lipid phân cực (phospholipid, cholesterol tự .). Chính nhờ có lớp vỏ nên Lp có khả hoà tan nước, vận chuyển tới tổ chức, mô thể. Các Apo, cấu trúc peptid mình, định chất lượng lipid kết hợp. Kích thước tỷ trọng loại Lp chủ yếu phụ thuộc vào lượng lipid lớp lõi trung tâm. Dựa vào tỷ trọng, phân loại Lp sau: - Hạt vi thể dưỡng chất( Chylomicron) : d < 0,94 - Lipoprotein có tỷ trọng thấp ( VLDL): 0,94 [...]... cậy 99.9% - Sơn tra và táo mèo cùng làm giảm hàm lượng TG máu hơn 60% Thịt quả táo mèo và hạt táo mèo đều có tác dụng hạ TG máu, nhưng thịt quả vẫn có tác dụng mạnh hơn 30 3.2.3 Ảnh hưởng của thuốc tói các chỉ số lipid ở ngày thứ 20 : Bảng 10 Ảnh hưởng của thuốc tới nồng độ CH toàn phần (mmoỉ/ỉ) tại thời điểm T20 \L ô Lopid Sơn tra Mẫu x\ Táo mèo Thịt quả Hạt tp Chứng Táo mèo táo mèo 1 3.78 2.68 1.76... đều có tác dụng hạ triglycerid máu một cách rõ rệt - Sơn tra, táo mèo, lopid đều làm giảm TG hơn 60% so với lô chứng - Thịt quả táo mèo có tác dụng hạ TG mạnh hơn hạt táo mèo (56.6% so với 40.3%) Kết quả này có độ tin cậy >99.9% 26 3.2.2 Ảnh hưởng của thuốc tới các chỉ số lipid ở ngày thứ 10 : Bảng 6 Ảnh hưởng của thuốc tới nồng độ CH toàn phần(mmol/ỉ) tại thời điểm T10 Lô Chứng Lopid Sơn tra Táo mèo. .. □ Lô uống cao Táo mèo (n = 15): Chế độ ăn giống lô chứng, bổ sung thêm 0,016 ml cao Táo mèo/ con/ngày (tương đương 48mg Táo mèo/ con/ngày) □ Lô uống cao Thịt quả Táo mèo (n = 15): Chế độ ăn giống lô chứng, bổ sung thêm 0,016 ml cao thịt quả Táo mèo/ con/ngày (tương đương 48mg thịt quả Táo mèo/ con/ngày) □ Lô ăn hạt Táo mèo (n = 15): Chế độ ăn giống lô chứng, bổ sung thêm 48mg bột hạt táo mèo/ con/ngày Sau... tác dụng của nó là ngăn cản quá trình oxi hoá của LDL Tác dụng phụ: ỉa chảy, đau bụng, buồn nôn 1.1.4 Một số công trình nghiên cứu thuốc hạ lipid từ thảo dược ở Việt Nam [6] : ❖ Ngưu tất: cao lỏng ngưu tất có tác dụng hạ cholesterol huyết trên thỏ gây tăng cholesterol ngoại sinh hay nội sinh (Đoàn Thị Nhu, Phạm Khuê) Chế phẩm: Bidentin ( Viện Dược liệu & XNDPTW 25) ❖ Tỏi: Vũ Hiền Hạnh dùng Alisa- một. .. dụng hạ CH toàn phần mạnh nhất (hạ 33.5% với độ tin cậy 99.9%) - Táo mèo và thịt quả có tác dụng tương đương (đều làm giảm ~10% CH máu) với độ tin cậy 99% - Lopid và hạt táo mèo không có tác dụng 27 Bảng 7 Ảnh hưởng của thuốc tới nồng độ HDL-Cmáu (mmol/l) ở thời điểmTlO X Chứng Lopid Sơn tra Mẫu \ Táo mèo Thịt quả Hạt tp Lô Táo mèo táo mèo 1 2.8 3.0 2.4 2.6 2.6 2.8 2 3.1 2.5 2.1 3.3 2.3 1.9 3 2.4 3.1... - Táo mèo toàn phần chỉ làm giảm 10% CH máu với độ tin cậy 99.9% - Thịt quả táo mèo có tác dụng hạ CH tương đương táo mèo toàn phẩn - Lopid làm giảm 8.9% CH máu với độ tin cậy 95% - Hạt táo mèo hầu như không có tác dụng, chỉ giảm được 2.3% so vói chứng (sự giảm này không có ý nghĩa thống kê) 23 Bảng 3 Ảnh hưởng của thuốc tới nồng độ HDL-C máu (mmol/ỉ) ở thời điểm T7 Chứng Lô Mẫu Lopid Sơn tra Táo mèo. .. để trong tủ lạnh ♦♦ Một phần táo mèo được chế biến theo cách sau : tách riêng hạt và thịt quả ♦ để nghiên cứu tác dụng của từng bộ phận - Ngâm nước trong vòng 30 phút cho dược liệu trương nở - Tách bỏ hạt - Phần cùi nấu thành cao lỏng 3:1 như trên - Hạt Táo mèo (tách được 80g hạt từ 2 kg dược liệu): Đem xay nhỏ Rây qua rây 710/250 (bột thô) 2.2.2 Mô hình gây tăng cholesterol ngoại sinh : * Nguyên tắc:... Hình 2 VỊ thuốc Táo mèo 13 Hiện nay, trên thị trường, táo mèo vẫn được thu mua với tên gọi sơn tra, điều này có thể gây nên sự nhầm lẫn Thực tế 2 vị thuốc này có một số điểm khác biệt, có thể sơ bộ phân biệt như sau : - Táo mèo có đường kính lớn hơn sơn tra Trung Quốc ( khoảng gấp rưỡi) - Vỏ ngoài táo mèo nâu bóng, trong khi vỏ ngoài sơn tra đỏ thẫm, có những nốt chấm trắng đều đặn - Táo mèo có nhiều... chứng - Sơn tra làm giảm HDL-C tới 24%, kết quả này có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 99% - Lopid và hạt táo mèo không có tác dụng (sự tăng giảm không có ý nghĩa thống kê) 24 Bảng 4 Ảnh hưởng của thuốc đến tỷ SỐHDL-CICH ở thời điểm T7 \ Lô Chứng Lopid Sơn tra Táo mèo Thịt quả Hạt Táo mèo táo mèo 0.63 0.45 Mẫu 1 0.49 0.68 0.65 tp 0.62 2 0.50 0.67 0.59 0.74 0.63 0.46 3 0.47 0.54 0.60 0.65 0.65 0.51... chứng, táo mèo toàn phần làm tăng 21.9% tỷ số HDL-C/CH Kết quả này có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% - Sơn tra, Lopid, thịt quả táo mèo lần lượt làm tăng 18.9%, 14.4%, 8.7% HDL-C/CH so với lô chứng, tuy nhiên các kết quả này không có ý nghĩa thống kê - Hạt táo mèo không có tác dụng 29 Bảng 9 Ảnh hưởng của thuốc tới nồng độ Triglycerid máu (mmol/l) ở thời điểm T10 Lô Chứng Lopid Sơn tra Táo mèo Thịt . m BỘ Y TẾ TRUỒNG ĐAI HOC D ươc HÀ NÔI VŨ BÍCH HẠNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA MỘT SỐ NHÓM CHẤT CỦA TÁO MÈO ( KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ KHOÁ 1999-2004) Người hướng dẫn . được thay thế bằng Táo mèo- một cây khác cả chi và loài đối với sơn tra Trung Quốc. Tác dụng của táo mèo chưa được nghiên cứu cụ thể, do đó vấn đề được đưa ra là "liệu táo mèo có thực sự thay. trình nghiên cứu và sản xuất thuốc trên chưa nhiều, phạm vi sử dụng còn hạn chế. Từ thực tế đó, mục đích của luận văn là phát hiện, nghiên cứu và so sánh tác dụng hạ lipid máu của Táo mèo với