BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM MEN CHỊU NHIỆT TỪ MEN CƠM RƯỢU CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN PGS.TS. NGÔ THỊ PHƯƠNG DUNG HUỲNH QUỐC KHÁNH MSSV: 3102818 LỚP: CNSH TT K36 Cần Thơ, tháng 12/2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM MEN CHỊU NHIỆT TỪ MEN CƠM RƯỢU CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGS.TS. NGÔ THỊ PHƯƠNG DUNG SINH VIÊN THỰC HIỆN HUỲNH QUỐC KHÁNH MSSV: 3102818 LỚP: CNSH TT K36 Cần Thơ, Tháng 12/2014 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN PGS. TS. Ngô Thị Phương Dung Huỳnh Quốc Khánh DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG Chuyên ngành Công nghệ Sinh học i Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT LỜI CẢM TẠ Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám hiệu Trường Đại học Cần Thơ, Ban Lãnh đạo Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, quý thầy cô tận tình giảng dạy em thời gian học tập vừa qua. Xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc em đến cô Ngô Thị Phương Dung, người tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt để em thực đề tài nghiên cứu. Xin gửi lời cảm ơn đến cô cố vấn học tập lớp Công nghệ Sinh học tiên tiến khóa 36, cô Trần Thị Xuân Mai.Sự hỗ trợ nhiệt tình lời khuyên cô giúp em hoàn thành tốt trình học tập nghiên cứu. Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến anh Huỳnh Xuân Phong, anh Phạm Hồng Quang, anh Nguyễn Ngọc Thạnh, anh Bùi Hoàng Đăng Long thầy Trần Vũ Phương – Cán phụ trách phòng thí nghiệm Công nghệ Sinh học Thực phẩm, đóng góp ý kiến hỗ trợ điều kiện thuận lợi để em hoàn thành tốt đề tài nghiên cứu này. Xin cảm ơn gia đình, anh chị cán phòng thí nghiệm Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học tất bạn bè động viên, giúp đỡ em suốt thời gian qua. Kính chúc quý thầy cô nhiều sức khỏe, thành công công tác nghiên cứu có cống hiến quý báu cho nghiệp giáo dục đào tạo. Xin chân thành cảm ơn! Chuyên ngành Công nghệ Sinh học ii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT TÓM LƯỢC Trong nghiên cứu này, 40 chủng nấm men sau phân lập tiếp tục phân tích đánh giá đặc tính sinh lý, sinh hóa hình thái, thử khả chịu nhiệt mức nhiệt độ khác (30, 35, 37, 40 43oC) khảo sát khả chịu ethanol nồng độ 3, 6, 12% v/v. Các chủng nấm men có khả chịu nhiệt ethanol tốt tiếp tục khảo sát khả lên men đường glucose 2% khả sinh ethanol nhiệt độ cao (30, 35, 37, 40 42oC) . Kết cho thấy hầu hết tế bào nấm men có hình cầu, ovan hình ellipse, kích thước dao động từ (515)µm x (2-10)µm. Dựa vào đặc tính hình thái, sinh lý, sinh hóa phân loại chủng nấm men bao gồm chi Saccharomyces, Kluyveromyces Hansenspora. Có 27 chủng nấm men phát triển mức nhiệt độ 43oC, 29 chủng nấm men phát triển nồng độ ethanol 12%. Ba chủng nấm men CT1, HG2 TO1 nấm men có khả lên men mạnh hẳn chủng lại thí nghiệm lên men đường glucose 2%. Ba chủng nấm men CT1, HG2 TO1 có khả tạo ethanol nhiệt độ lên đến 42oC với nồng độ ethanol 3,03% v/v, 2,69% v/v 2,77% v/v. So sánh mức độ tương đồng chuỗi nucleotide vùng ITS1, 5.8S rDNA ITS2 với sở liệu ngân hàng gene, chủng nấm men TO1 xác định loài Saccharomyces cerevisiae với độ tương đồng 93%. Từ khóa: chịu ethanol, chịu nhiệt, lên men ethanol, nấm men chịu nhiệt, Saccharomyces cerevisiae Chuyên ngành Công nghệ Sinh học iii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT MỤC LỤC PHẦN KÝ DUYỆT .i LỜI CẢM TẠ ii TÓM LƯỢC . iii MỤC LỤC .iv DANH SÁCH HÌNH . vii DANH SÁCH BẢNG ix CHƯƠNG I: GIỚI THIỆU . 1.1. Đặt vấn đề .1 1.2. Mục tiêu đề tài CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU .3 2.1. Giới thiệu chung bánh men rượu 2.2. Giới thiệu chung nấm men .4 2.2.1. Hình thái tế bào nấm men .5 2.2.2. Cấu tạo nấm men 2.2.3. Phân loại nấm men 2.2.4. Đặc điểm sinh lý, sinh hóa nấm men. .7 2.2.5. Sự sinh trưởng phát triển nấm men 2.2.6. Các yêu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển nấm men điều kiện nuôi cấy thu sinh khối tế bào 11 2.2.7. Vai trò ứng dụng nấm men 12 2.3. Nấm men chịu nhiệt . 13 2.4. Một số chi nấm men chịu nhiệt quan trọng .14 2.4.1. Chi Kluyveromyces 14 2.4.2. Chi Saccharomyces .14 2.4.3. Chi Candida 15 2.5. Sự lên men ethanol . 16 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học iv Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT 2.5.1. Các yếu tố ảnh hưởng đến trình lên men 16 2.5.2. Cơ sở lý thuyết 18 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1. Phương tiện thí nghiệm .21 3.1.1. Địa điểm nghiên cứu .21 3.1.2. Thời gian thực .21 3.1.3. Nguyên liệu . 21 3.1.4. Dụng cụ, thiết bị 21 3.1.5. Hóa Chất 21 3.2. Phương pháp nghiên cứu 22 3.2.1. Phân lập nấm men .22 3.2.3. Thử nghiệm khả chịu nhiệt chủng nấm men . 24 3.2.4. Thử nghiệm khả chịu ethanol chủng nấm men .24 3.2.5. Sơ tuyển nấm men có hoạt tính lên men tốt 25 3.2.6. Khảo sát khả sinh ethanol nhiệt độ cao chủng nấm men tuyển chọn 25 3.2.7. Định danh chủng nấm men có đặc tính tốt .26 3.2.8. Xử lý số liệu, phân tích thống kê 26 CHƯƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 4.1. Phân lập nấm men . 27 4.3. Thử nghiệm khả chịu nhiệt chủng nấm men 44 4.4. Thử nghiệm khả chịu ethanol chủng nấm men 46 4.5. Sơ tuyển nấm men có hoạt tính lên men tốt 49 4.6. Khảo sát khả sinh ethanol nhiệt độ cao chủng nấm men tuyển chọn .50 4.7. Định danh chủng nấm men có đặc tính tốt .52 CHƯƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 54 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học v Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT 5.1. Kết luận .54 5.2. Đề nghị 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO . 55 PHỤ LỤC Chuyên ngành Công nghệ Sinh học vi Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT DANH SÁCH HÌNH Hình 1: Bánh men cổ truyền Hình 2: Quy trình sản xuất bánh men cổ truyền Hình 3: Tế bào nấm men kính hiển vi . Hình 4: Quá trình sinh trưởng nấm men . 10 Hình 5: Nấm men Kluyveromyces lactis . 14 Hình 6: Nấm men Saccharomyces cerevisiae 15 Hình 7: Nấm men Candida spp. 15 Hình 8: Cơ chế phân hủy đường tế bào nấm men . 20 Hình 9: Các chủng nấm men phân lập từ men Châu Phú, An Giang 27 Hình 10: Các chủng nấm men phân lập từ men Thành phố Long Xuyên, An Giang 28 Hình 11: Các chủng nấm men phân lập từ men Thành phố Bạc Liêu . 28 Hình 12: Các chủng nấm men phân lập từ men Phường 2, Thành phố Cà Mau 29 Hình 13: Các chủng nấm men phân lập từ men Ninh Kiều, Thành phố Cần Thơ . 29 Hình 14: Các chủng nấm men phân lập từ men Ô Môn, Thành phố Cần Thơ 30 Hình 15: Các chủng nấm men phân lập từ men Thốt Nốt, Thành phố Cần Thơ . 31 Hình 16: Các chủng nấm men phân lập từ men Lấp Vò, Đồng Tháp 31 Hình 17: Các chủng nấm men phân lập từ men Phụng Hiệp, Hậu Giang 32 Hình 18: Các chủng nấm men phân lập từ men Vĩnh Châu, Sóc Trăng 33 Hình 19: Các chủng nấm men phân lập từ men Trà Ôn, Vĩnh Long . 33 Hình 20: Các chủng nấm men phân lập từ men Trà Cú, Trà Vinh . 34 Hình 21: Hình dạng số khuẩn lạc điển hình 35 Hình 22: Hình dạng điển hình nhóm nấm men vật kính X100 . 36 Hình 23: Các ống nghiệm sau chủng nấm men ủ 48 41 Hình 24: Các chủng nấm men chịu nhiệt 43oC . 46 Hình 25: Các chủng nấm men chiu cồn 12% 48 Hình 26: Biểu đồ thể nồng độ ethanol sinh chủng nấm men CT1, HG2 TO1 mức nhiệt độ 30, 35, 37, 40 42oC . 51 Hình 28: Khuẩn lạc nấm men TO1 . 52 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học vii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT Hình 29: Tế bào nấm men TO1 53 Hình 30: Kết định danh chủng nấm men TO1 . 53 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học viii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 ST2 ST2 TB1 TB1 TB1 TG1 TG1 TG1 TNN3 TNN3 TNN3 TNN4 TNN4 TNN4 TO1 TO1 TO1 TO2 TO2 TO2 TV1 TV1 TV1 TV2 TV2 TV2 TV3 TV3 TV3 TV4 TV4 TV4 3 3 3 3 3 0 0 3 0 0 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 4 12 13 10 3 7 10 13 3 4 1 0 2 18 20 18 22 22 22 16 14 16 24 24 18 30 30 30 14 13 13 13 10 1 Trường ĐHCT 30 30 30 22 23 23 26 26 14 30 30 30 30 30 30 11 15 16 17 25 12 13 15 10 2 7 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 15 10 17 24 26 30 16 15 17 12 10 14 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 16 11 20 30 30 30 18 20 21 15 15 17 10 10 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 18 14 21 30 30 30 23 25 26 20 17 23 16 8 12 13 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 23 20 26 30 30 30 30 30 30 25 23 26 20 11 15 14 17 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 24 19 20 20 20 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 24 25 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Bảng 10: Chiều cao cột khí 40 chủng nấm men lên men dung dịch maltose Tên Lần lặp AA1 AA1 AA1 AG5 AG5 AG5 AG1 AG1 AG1 AG1.1 3 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Chiều cao cột khí CO2 (mm) thời điểm lên men (giờ) giờ 12 16 20 24 10 30 30 30 30 30 30 30 30 12 30 30 30 30 0 10 0 11 0 10 15 30 30 30 16 30 30 30 15 30 30 30 0 26 30 30 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 AG1.1 AG1.1 AG2 AG2 AG2 AG3.3 AG3.3 AG3.3 BD1 BD1 BD1 BD2 BD2 BD2 BL1 BL1 BL1 BL2 BL2 BL2 BL3 BL3 BL3 BL4 BL4 BL4 CM2 CM2 CM2 CM2.2 CM2.2 CM2.2 CM3 CM3 CM3 CM4.4 CM4.4 CM4.4 CT1 CT1 CT1 CT2 CT2 CT2 DT1 DT1 DT1 DT2 DT2 3 3 3 3 3 3 3 3 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 0 0 0 0 0 0 0 6 0,5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 0 0 2 Trường ĐHCT 0 0 1 3 10 17 15 18 11 10 11 0 13 14 13 0 0 7 18 15 16 0 10 11 5 20 19 22 15 16 13 30 28 26 30 26 28 30 30 30 2 30 30 30 0 30 30 30 10 30 30 30 30 30 30 7 30 30 30 30 30 25 26 20 21 18 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 DT2 HG1 HG1 HG1 HG2 HG2 HG2 NK2 NK2 NK2 NK4 NK4 NK4 OM1 OM1 OM1 OM2 OM2 OM2 OM3 OM3 OM3 OM4 OM4 OM4 ST1 ST1 ST1 ST2 ST2 ST2 TB1 TB1 TB1 TG1 TG1 TG1 TNN3 TNN3 TNN3 TNN4 TNN4 TNN4 TO1 TO1 TO1 TO2 TO2 TO2 3 3 3 3 3 3 3 3 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 0 0,5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 0,5 1 1 4 0 Trường ĐHCT 1 11 0 0 0 20 18 15 14 13 11 0 0 11 10 12 10 10 11 13 15 10 30 10 11 30 30 30 0 30 30 30 30 30 30 14 13 16 22 23 25 30 30 30 30 30 30 18 20 23 30 30 30 25 26 28 30 30 30 10 14 16 30 16 17 20 30 30 30 26 24 19 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 16 14 17 30 30 30 25 25 27 30 30 30 30 30 30 30 30 30 20 24 22 30 25 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 26 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 TV1 TV1 TV1 TV2 TV2 TV2 TV3 TV3 TV3 TV4 TV4 TV4 3 3 0 0 0 0 0 Trường ĐHCT 0 0 0 0 3 0 10 10 13 30 30 30 30 30 30 20 19 20 6 30 30 30 30 30 30 30 30 30 13 12 15 30 30 30 30 30 30 30 30 30 Bảng 11: Chiều cao cột khí 40 chủng nấm men lên men dung dịch saccharose Tên Lần lặp AA1 AA1 AA1 AG5 AG5 AG5 AG1 AG1 AG1 AG1.1 AG1.1 AG1.1 AG2 AG2 AG2 AG3.3 AG3.3 AG3.3 BD1 BD1 BD1 BD2 BD2 BD2 BL1 BL1 BL1 BL2 BL2 BL2 3 3 3 3 3 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Chiều cao cột khí CO2 (mm) thời điểm lên men (giờ) giờ 12 16 20 24 30 30 30 30 30 27 30 30 30 30 10 30 30 30 30 30 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 10 0 0 10 0 0 13 0 0 0 10 0 19 19 0 11 12 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 12 29 30 30 30 30 12 28 30 30 30 30 17 29 30 30 30 30 9,5 30 30 30 30 30 16 30 30 30 30 30 6,5 28 30 30 30 30 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 BL3 BL3 BL3 BL4 BL4 BL4 CM2 CM2 CM2 CM2.2 CM2.2 CM2.2 CM3 CM3 CM3 CM4.4 CM4.4 CM4.4 CT1 CT1 CT1 CT2 CT2 CT2 DT1 DT1 DT1 DT2 DT2 DT2 HG1 HG1 HG1 HG2 HG2 HG2 NK2 NK2 NK2 NK4 NK4 NK4 OM1 OM1 OM1 OM2 OM2 OM2 OM3 3 3 3 3 3 3 3 3 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 0 0 0 0 0 0 0 4,5 13 21 12 0 3 0 10 16 0 0 0 0 0 0 Trường ĐHCT 0 0 0 0 0 24 20 19 22 30 20 0 13 18 15 25 24 20 0 29 28 28 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 20 21 21 0 27 22 23 30 30 30 0 30 30 30 30 30 30 0 30 30 30 0 0 0 0 0 10 18 0 0 0 30 30 30 0 30 30 30 30 30 30 0 30 30 30 30 30 30 0 30 30 30 18 18 17 0 0 0 0 0 14 16 10 0 0 0 30 30 30 0 30 30 30 30 30 30 0 30 30 30 30 30 30 10 30 30 30 30 26 28 0 0 0 0 0 21 21 11 0 2 30 30 30 0 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 15 12 10 30 30 30 30 30 30 1 0 0 1 12 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 OM3 OM3 OM4 OM4 OM4 ST1 ST1 ST1 ST2 ST2 ST2 TB1 TB1 TB1 TG1 TG1 TG1 TNN3 TNN3 TNN3 TNN4 TNN4 TNN4 TO1 TO1 TO1 TO2 TO2 TO2 TV1 TV1 TV1 TV2 TV2 TV2 TV3 TV3 TV3 TV4 TV4 TV4 3 3 3 3 3 3 3 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 0 0 0 0 0 0 0 1 0 19 19 18 0 0 0 0 0 0 0 Trường ĐHCT 0 0 6 0 12 17 15 8 12 24 24 20 0 0 0 0 0 0 0 0 0 14 14 16 0 12 10 30 30 30 20 20 21 15 20 13 28 28 24 0 0 0 0 0 0 0 0 0 30 30 30 12 25 21 21 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 0 0 0 0 0 0 0 30 30 30 23 20 22 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 0 12 11 10 0 0 0 18 16 12 30 30 30 27 25 28 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 0 15 17 14 10 14 10 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT Bảng 12: Nồng độ ethanol sinh 30oC chủng nấm men Nồng độ ethanol Chủng nấm men Brix pH CT1 13,5 4,71 8,05 HG2 13 4,75 7,89 TO1 14 4,78 7,47 (% v/v) Bảng 13: Nồng độ ethanol sinh 35oC chủng nấm men Nồng độ ethanol Chủng nấm men Brix pH CT1 14 4,76 8,18 HG2 13 4,72 7,97 TO1 13 4,76 7,49 (% v/v) Bảng 14: Nồng độ ethanol sinh 37oC chủng nấm men Nồng độ ethanol (% Chủng nấm men Brix pH CT1 13,5 4,37 8,12 HG2 14 4,85 7,85 TO1 14 4,17 7,6 v/v) Bảng 15: Nồng độ ethanol sinh 40oC chủng nấm men Nồng độ ethanol Chủng nấm men Brix pH CT1 19 4,26 3,31 HG2 18 4,27 2,77 TO1 18 4,23 2,84 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học (% v/v) Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT Bảng 16: Nồng độ ethanol sinh 42oC chủng nấm men Nồng độ ethanol Chủng nấm men Brix pH CT1 18 4,45 3,03 HG2 18 4,35 2,69 TO1 17 4,53 2,77 (% v/v) II. Số liệu thống kê Bảng 17: Bảng phân tích ANOVA khả lên men glucose sau ANOVA Table for chieu cao o cot o gio by Nam men Source Between groups Witgiờin groups Total (Corr.) Sum of Squares 569.333 46.6667 616.0 Df 26 54 80 Mean Square 21.8974 0.864198 F-Ratio 25.34 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for chieu cao o cot o gio by Nam men Method: 95.0 percent LSD Nam men Count Mean TNN3 CM4.4 TO1 TV4 AG5 TNN4 BL3 TV2 AG1 BD2 AG1.1 NK2 BL4 OM2 OM3 TV3 ST1 TB1 NK4 1.0 AG2 1.0 TV1 2.0 CM3 2.0 CM2.2 2.0 OM4 2.33333 TG1 2.66667 CT1 8.66667 HG2 11.3333 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Homogeneous Groups X X X X X X X X X X X X X X X X X X XX XX XX XX XX XX X X X Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT Bảng 18: Bảng phân tích ANOVA khả lên men glucose sau ANOVA Table for chieu cao o cot o gio by Nam men Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 1952.0 26 75.0769 Within groups 114.0 54 2.11111 Total (Corr.) 2066.0 80 F-Ratio 35.56 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for chieu cao o cot o gio by Nam men Method: 95.0 percent LSD Nam men Count Mean OM3 BL3 TV4 OM2 TV3 1.0 ST1 1.33333 AG1.1 2.0 NK2 2.33333 TNN3 2.66667 AG5 3.0 AG1 3.0 NK4 3.66667 TV2 3.66667 BD2 3.66667 TB1 4.0 CM3 4.33333 AG2 4.33333 BL4 4.66667 CM4.4 4.66667 TV1 5.0 OM4 5.0 CM2.2 6.33333 TNN4 7.0 TO1 10.3333 TG1 11.6667 CT1 17.6667 HG2 20.6667 Homogeneous Groups X X X X XX XXX XXXX XXXXX XXXXX XXXXX XXXXX XXXX XXXX XXXX XXXX XXXX XXXX XXXX XXXX XXX XXX XX X X X X X Bảng 19: Bảng phân tích ANOVA khả lên men glucose sau 6giờ ANOVA Table for chieu cao o cot o gio by Nam men Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 5433.43 26 208.978 Within groups 104.667 54 1.93827 Total (Corr.) 5538.1 80 F-Ratio 107.82 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for chieu cao o cot o gio by Nam men Method: 95.0 percent LSD Nam men Count Mean TV4 1.0 TV3 2.0 BL3 3.0 OM2 3.33333 OM3 3.33333 BL4 6.66667 ST1 7.33333 AG5 7.66667 AG2 8.33333 AG1.1 8.66667 TV2 9.0 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Homogeneous Groups X XX XX X X X XX XX XXX XXX XXX Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 AG1 CM4.4 NK4 NK2 OM4 TV1 CM3 CM2.2 TNN3 BD2 TB1 TNN4 TG1 HG2 TO1 CT1 3 3 3 3 3 3 3 3 9.0 10.3333 11.0 11.0 12.6667 13.0 13.0 14.6667 15.3333 15.6667 18.6667 22.0 22.0 30.0 30.0 30.0 Trường ĐHCT XXX XX XX XX XX XX XX XX X X X X X X X X Bảng 20: Bảng phân tích ANOVA khả lên men glucose sau ANOVA Table for chieu cao o cot o gio by Nam men Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 5438.89 26 209.188 Within groups 324.667 54 6.01235 Total (Corr.) 5763.56 80 F-Ratio 34.79 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for chieu cao o cot o gio by Nam men Method: 95.0 percent LSD Nam men Count Mean TV4 2.0 BL3 5.33333 OM3 5.66667 OM2 7.33333 TV3 8.0 AG2 10.3333 AG5 10.3333 BL4 11.6667 AG1.1 12.0 TV2 13.3333 AG1 13.3333 NK2 15.6667 NK4 16.0 ST1 18.3333 OM4 18.6667 TV1 19.3333 BD2 20.3333 CM2.2 20.3333 CM4.4 21.0 TNN3 22.0 CM3 22.3333 TG1 22.6667 HG2 30.0 TO1 30.0 TNN4 30.0 CT1 30.0 TB1 30.0 Homogeneous Groups X XX XX XX XXX XXX XXX XXX XXXX XXX XXX XXX XX XX XXX XXX XX XX XX XX XX X X X X X X Bảng 21: Bảng phân tích ANOVA khả lên men glucose sau 10 ANOVA Table for chieu cao o cot o 10 gio by Nam men Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 4645.56 26 178.675 Within groups 267.333 54 4.95062 Total (Corr.) 4912.89 80 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học F-Ratio 36.09 P-Value 0.0000 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT Multiple Range Tests for chieu cao o cot o 10 gio by Nam men Method: 95.0 percent LSD Nam men Count Mean TV4 4.0 OM3 10.3333 TV3 12.0 BL3 13.6667 AG2 15.0 OM2 15.0 BL4 16.0 TV2 16.0 AG5 17.0 AG1 17.6667 AG1.1 18.0 NK4 22.0 OM4 23.6667 NK2 25.0 CM4.4 25.0 CM2.2 25.0 TV1 26.6667 HG2 30.0 TNN4 30.0 CT1 30.0 TNN3 30.0 TO1 30.0 TG1 30.0 BD2 30.0 TB1 30.0 ST1 30.0 CM3 30.0 Homogeneous Groups X X XX XXX XXX XXX XX XX XX X X X XX XX XX XX XX X X X X X X X X X X Bảng 22: Bảng phân tích ANOVA khả lên men glucose sau 12 ANOVA Table for chieu cao o cot o 12 gio by Nam men Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 3946.67 26 151.795 Within groups 219.333 54 4.06173 Total (Corr.) 4166.0 80 F-Ratio 37.37 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for chieu cao o cot o 12 gio by Nam men Method: 95.0 percent LSD Nam men Count Mean TV4 5.66667 OM3 13.0 TV3 15.6667 AG2 17.0 OM2 17.6667 BL4 17.6667 AG5 18.6667 AG1.1 19.0 BL3 19.3333 TV2 19.6667 AG1 22.6667 NK4 30.0 NK2 30.0 TV1 30.0 HG2 30.0 CT1 30.0 TG1 30.0 CM4.4 30.0 BD2 30.0 TNN3 30.0 TNN4 30.0 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Homogeneous Groups X X XX XX XX XX XX X X XX X X X X X X X X X X X Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 TO1 TB1 ST1 CM3 OM4 CM2.2 3 3 3 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 Trường ĐHCT X X X X X X Bảng 23: Bảng phân tích ANOVA khả lên men glucose sau 14 ANOVA Table for chieu cao o cot o 14 gio by Nam men Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 1818.22 26 69.9316 Within groups 240.667 54 4.45679 Total (Corr.) 2058.89 80 F-Ratio 15.69 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for chieu cao o cot o 14 gio by Nam men Method: 95.0 percent LSD Nam men Count Mean TV4 10.6667 TV3 20.0 OM3 20.0 AG1.1 21.0 AG2 22.0 AG5 23.3333 TV2 24.6667 OM2 25.0 AG1 25.0 BL4 26.3333 NK4 30.0 NK2 30.0 TV1 30.0 HG2 30.0 BL3 30.0 CT1 30.0 TG1 30.0 CM4.4 30.0 BD2 30.0 TNN3 30.0 TNN4 30.0 TO1 30.0 TB1 30.0 ST1 30.0 CM3 30.0 OM4 30.0 CM2.2 30.0 Homogeneous Groups X X X X XX XXX XX XX XX X X X X X X X X X X X X X X X X X X Bảng 24: Bảng phân tích ANOVA khả lên men glucose sau 16 ANOVA Table for chieu cao o cot o 16 gio by Nam men Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 781.333 26 30.0513 Within groups 50.6667 54 0.938272 Total (Corr.) 832.0 80 F-Ratio 32.03 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for chieu cao o cot o 16 gio by Nam men Method: 95.0 percent LSD Nam men Count Mean TV4 15.3333 TV3 24.6667 AG1.1 24.6667 OM3 25.3333 HG2 30.0 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Homogeneous Groups X X X X X Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 BL4 BL3 CM4.4 BD2 CT1 TV1 NK2 NK4 OM2 ST1 CM3 OM4 TB1 TG1 TNN3 TNN4 TO1 CM2.2 TV2 AG2 AG1 AG5 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Trường ĐHCT X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 Bảng 25: Bảng phân tích ANOVA khả lên men glucose sau 18 ANOVA Table for chieu cao o cot o 18 gio by Nam men Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 234.0 26 9.0 Within groups 14.0 54 0.259259 Total (Corr.) 248.0 80 Method: 95.0 percent LSD Nam men Count Mean TV4 21.0 AG1.1 30.0 OM3 30.0 BD2 30.0 BL3 30.0 BL4 30.0 CM2.2 30.0 CM3 30.0 CM4.4 30.0 CT1 30.0 HG2 30.0 NK2 30.0 NK4 30.0 OM2 30.0 AG2 30.0 OM4 30.0 ST1 30.0 TB1 30.0 TG1 30.0 TNN3 30.0 TNN4 30.0 TO1 30.0 TV1 30.0 TV2 30.0 TV3 30.0 AG1 30.0 AG5 30.0 F-Ratio 34.71 P-Value 0.0000 Homogeneous Groups X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT Bảng 26: Phân tích ANOVA nồng độ ethanol sinh mức 30, 35, 37, 40 42oC ANOVA Table for by ten Source Sum of Squares Between groups 266.597 Within groups 1.21213 Total (Corr.) 267.809 Df 14 30 44 Mean Square 19.0426 0.0404044 F-Ratio 471.30 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for by ten Method: 95.0 percent LSD ten Count HG2 42 Do TO1 - 42 Do HG2 40 Do TO1 - 40 Do CT1 - 42 Do CT1 - 40 Do TO1 - 30 Do TO1 - 35 Do TO1 - 37 Do HG2 37 Do HG2 30 Do HG2 35 Do CT1 - 30 Do CT1 - 37 Do CT1 - 35 Do Mean 2,69333 2,77333 2,77333 2.835 3,03333 3,31 7,47 7.48667 7.60333 7.84667 7.89333 7.97333 8,05333 8,12 8,18333 Homogeneous Groups X XX XX XX XX X X X XX XX XXX XX XX XX X Trình tự chuỗi polypeptides chủng nấm men TO1 (5’)GCCGTAAGGTGTGGTATCGTGTCTGACATGGATATTTTTTTGTTTTGGC AAGAGCATGAGAGCTTTTACTGGGCAAGAAGACAAGACCATGGAGAGTCC AGCCGGGCCTGCGCTTAAGTGCGCGGTCTTGCTAGGCTTGAAAGTTTCTTT CTTGCTATTCCAAACGGTGAGAGATTTCTGTGCTTTTGTTATAGGACAATTA AAACCGTTACAAAACAACACACTGTGGAGTTTTCATATCTTTGCAACTTTT TCTTTGGGCATTCGAGCAATCGGGGCCCAGAGGTAACAAACACAAACAAT TTTATTTATTCATTAAATTTTTGTCAAAAACAAGAATTTTCGTAACTGGAAA TTTTAAAATATTAAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGAT GAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCCGTGA ATCATCGAATCTTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCAGGGGGCA TGCCTGTTTGAGCGTCATTTCCTTTTCTATCATTCTGTTTGGTAGTGAGTGA TACTCCTTTGGAAGTTAACTTTGAAAATTGGCTGGCCTTTATAATTGGGAT GGTGTTTTTTTTTCCAAAAAAAAAGGTTTTCTCCTGGCGTTGCTTGGAGGGT ATAAATGCCAAGGTACCGGTCCGTTTTTAGGTTTTACCCAAACCGTGCGGG CTTAATCCTTTTTTTTATACCGGAGCGGAATTGGGAACCGTTATTCGGATTA AAAAGAAGAGCCGCCCTAAGGCCAAAACCAAAGGGTTTCTTAAAAAGGTT TGGACCCTCCAAAAATCTCGTGGTTGGGGAATGTACCCCGCGTCTGTAAAC TTTTATAA(3’) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 III. Trường ĐHCT Phụ lục hình Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT Tủ cấy Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học [...]... tài là phân lập và tuyển chọn được giống nấm men từ cơm rượu có khả năng chịu nhiệt và chịu ethanol cao đồng thời có khả năng lên men ethanol ở nhiệt cao trong môi trường rỉ đường Nội dung:  Phân lập các chủng nấm men từ men cơm rượu  Phân tích và đánh giá các đặc tính sinh lý, sinh hóa và hình thái của các chủng nấm men đã phân lập  Khảo sát khả năng chịu nhiệt của các chủng nấm men ở các mức nhiệt. .. nghiệp và các nghiên cứu về khả năng lên men ethanol trong điều kiện nhiệt độ cao là hoàn toàn có tính khả thi Hiện tại, trong nước còn ít công trình nghiên cứu về nấm men chịu nhiệt trong men cơm rượu, nên rất cần những nghiên cứu tìm hiểu, phân lập và đưa các chủng nấm men có triển vọng cao ứng dụng vào quá trình sản xuất ethanol Do đó đề tài Phân lập và tuyển chọn nấm men chịu nhiệt từ men cơm rượu ... chủng nấm men trong sản xuất bia vào khoảng 5-10 % v/v (Casey và Ingledew, 1986) 2.3 Nấm men chịu nhiệt Nhiệt độ là yếu tố quan trọng nhất ảnh hưởng đến hoạt động của nấm men Arthur và Watson (1976) đã xác định nhiệt độ phát triển của nấm men ưa lạnh (psychrophilic) trong khoảng 2-20ºC; nấm men ưa nhiệt độ trung bình (mesophilic) là 5-35ºC; nấm men chịu nhiệt (thermotolerant) là 8-42ºC; nấm men ưa nhiệt. .. lên men phụ thuộc vào nhiều yếu tố như nhiệt độ lên men, nồng độ đường, chủng nấm men, … Thời gian lên men được tính bắt đầu từ khi cấy chủng nấm men vào môi trường lên men, nhưng thời gian kết thúc thì tùy thuộc vào từng môi trường lên men cụ thể và tùy thuộc vào mục đích lên men mà ta dừng quá trình lên men Trong giai đoạn đầu của quá trình lên men phải cho dịch đường tiếp xúc với oxy Lúc này nấm men. .. Các dạng nấm men đã phân lập 36 Bảng 2: Đặc điểm hình thái của các chủng nấm men đã phân lập 37 Bảng 3: Khả năng lên men 3 loại đường của các chủng nấm men 39 Bảng 4: Khả năng phân giải urea của các chủng nấm men sau 48 giờ 41 Bảng 5: Kết quả định danh sơ bộ đến cấp độ CHI của 40 chủng nấm men dựa vào đặc điểm hình thái và đặc tính sinh lý 43 Bảng 6: Khả năng chịu nhiệt. .. imporfecti) Lớp nấm men thật (Lớp Ascomyces – lớp nấm túi): phần lớn nấm men dùng trong công nghiệp thuộc lớp Ascomyces, đa số giống Saccharomyces bao gồm Endomyces và Schizosaccharomyces Lớp nấm men giả (Fungi imporfecti – nấm men bất hoàn): Crytococus (toscula, tornlopsis) Mycoderma, Eandida, Geotrichum (đã xếp vào lớp nấm mốc) và Rhodotorula * Khóa phân loại nấm men (Kurtzman và Fell, 1998) Phân loại... tăng sinh khối và sự sản sinh ethanol (Helena de Cruz et al., 2003) l Hàm lượng giống nấm men Nấm men là nhân tố tạo ra quá trình lên men, chuyển hóa đường thành ethanol và khí carbonic Mỗi loài nấm men có khả năng lên men khác nhau Cùng loài nấm men, nhưng ở những điều kiện lên men khác nhau thì khả năng lên men khác nhau và sản phẩm của quá trình lên men cũng khác nhau Trong quá trình lên men, mật số... động của tế bào nấm men Vào khoảng năm 1871-1872, Manaxemi đem nghiền tế bào nấm men với cát thạch anh rồi mới cho vào lên men dịch đường thì hiện tượng lên men vẫn xảy ra Năm 1879, Buchuer tiến hành nghiền nát tế bào nấm men rồi chiết lấy dịch trong không chứa xác nấm men rồi cho vào dịch đường thì thấy dịch chiết vẫn có khả năng lên men Từ đó người ta gọi các chất trong dịch tế bào nấm men là zymase... chủng nấm men đã phân lập được lên đĩa petri chứa môi trường phân lập (yeast extract, peptone, D-glucose, tetracyline, agar) Ủ các đĩa Petri ở nhiệt độ 30oC trong 48 giờ Ghi nhận hình dạng và kích thước khuẩn lạc các chủng nấm men Làm tiêu bản các chủng nấm men quan sát dưới kính hiển vi để xác định hình dạng của tế bào và sử dụng trắc vi thị kính để đo kích thước tế bào nấm men - Quan sát hình thái nấm. .. Khóa 36 - 2014 Trường ĐHCT 3.2.3 Thử nghiệm khả năng chịu nhiệt của các chủng nấm men Mục đích: tuyển chọn những chủng nấm men có khả năng sinh trưởng và phát triển ở nhiệt độ cao Phương pháp tiến hành Thí nghiệm 2 nhân tố (chủng nấm và nhiệt độ) với 3 lần lặp lại Cấy ria các chủng nấm men trên đĩa petri có chứa môi trường nuôi cấy Ủ các đĩa petri ở các nhiệt độ khác nhau: 35, 37, 40, 43, 45oC trong 48 . cứu tìm hiểu, phân lập và đưa các chủng nấm men có triển vọng cao ứng dụng vào quá trình sản xuất ethanol. Do đó đề tài Phân lập và tuyển chọn nấm men chịu nhiệt từ men cơm rượu được thực. Các chủng nấm men phân lập từ men ở Ninh Kiều, Thành phố Cần Thơ 29 Hình 14: Các chủng nấm men phân lập từ men ở Ô Môn, Thành phố Cần Thơ 30 Hình 15: Các chủng nấm men phân lập từ men ở Thốt. Hình 16: Các chủng nấm men phân lập từ men ở Lấp Vò, Đồng Tháp 31 Hình 17: Các chủng nấm men phân lập từ men ở Phụng Hiệp, Hậu Giang 32 Hình 18: Các chủng nấm men phân lập từ men ở Vĩnh Châu,