TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THUỶ SẢN PHAN MINH THIỆN ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC NỒNG ĐỘ NITRITE KHÁC NHAU ĐẾN SỰ THAY ĐỔI HÌNH THÁI, CẤU TRÚC MÔ MANG VÀ GAN TỤY CỦA TÔM THẺ CHÂN TRẮNG (Litopenaeus vannamei) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN 2014 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THUỶ SẢN PHAN MINH THIỆN ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC NỒNG ĐỘ NITRITE KHÁC NHAU ĐẾN SỰ THAY ĐỔI HÌNH THÁI, CẤU TRÚC MÔ MANG VÀ GAN TỤY CỦA TÔM THẺ CHÂN TRẮNG (Litopenaeus vannamei) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGs. Ts. ĐẶNG THỊ HOÀNG OANH PGs. Ts. TRƯƠNG QUỐC PHÚ 2014 ẢNH HƢỞNG CỦA CÁC NỒNG ĐỘ NITRITE KHÁC NHAU ĐẾN SỰ THAY ĐỔI HÌNH THÁI, CẤU TRÚC MÔ MANG VÀ GAN TỤY CỦA TÔM THẺ CHÂN TRẮNG Litopenaeus vannamei Phan Minh Thiện Đặng Thị Hoàng Oanh* Bộ môn Bệnh học Thủy sản, Khoa Thủy sản, Trường Đại học Cần Thơ * Email: dthoanh@ctu.edu.vn ABSTRACT This study was carried out to examine the effects of nitrite on the morphological changes and gill tissue and tissue structure of of hepatopancreas (HP) white shrimp (Litopenaeus vannamei) PL15. The experiment included treatments and a control. Shrimp were esposed to the nitrite concentration at 0; 0.5; 1; 2.5; and 10 mg/L NO2-N. Shrimp samples were collected for observation by using microscope at the magnification of 25 times, and samples were collected at the same time for histological analysis. Results showed that the HP of experimental shrimp had bright colors, gill looked apparently healthy and intact, healthy body shrimp and quick response. Histological analysis revealed that gill and HP tissues were normal. However, shrimp displayed slow growth in treatments with nitrite concentrations of and 10 mg/L NO2-N which was statistically significant (p < 0.05) with the other treatments. Keyword: Litopenaeus vannamei, nitrite, histopathology TÓM TẮT Đề tài thực nhằm xem xét ảnh hưởng nitrite lên thay đổi hình thái cấu trúc mô mang mô gan tụy tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei) giai đoạn PL15. Thí nghiệm bố trí gồm nghiệm thức cảm nhiễm nghiệm thức đối chứng. Tôm cảm nhiễm nồng độ nitrite 0; 0,5; 1; 2,5; 10 mg/L NO2-N. Mẫu tôm thí nghiệm thu để quan sát hình thái kính hiển vi độ phóng đại 25 lần, đồng thời mẫu thu thời gian để phân tích mô học. Kết cho thấy khối gan tụy có màu sắc tươi sáng, mang tôm bình thường, nguyên vẹn, thể tôm khỏe, phản ứng nhanh. Kết mô học ghi nhận cấu trúc mô mang mô gan tụy tôm thí nghiệm bình thường. Tuy nhiên, nghiệm thức có nồng độ nitrite 10 mg/L NO2-N tôm chậm lớn khác biệt có ý nghĩa thống kê (p6,5 mg/L, dao động từ 6,92–6,98mg/L (buổi sáng) 7,02–7,07 mg/L (buổi chiều), nghiệm thức DO có biến động >4mg/L hàm lượng oxy cần thiết để trì hoạt động bình thường cho tôm (Nguyễn Thanh Phương Trần Ngọc Hải, 2004). Khi DO xuống thấp làm động vật thủy sản tăng cường độ hô hấp làm độc chất hấp thụ vào thể nhanh hơn, gây độc nhanh (Trần Sỹ Nam, 2012). 3.2 Hình thái tôm thẻ chân trắng thí nghiệm Tôm thẻ chân trắng trước bố trí thí nghiệm tiến hành phân tích mô bệnh học để xác định nguồn tôm bệnh. Kết phân tích mô học cho thấy tôm bố trí tôm khỏe với vùng gan tụy tôm bình thường, không thấy có tổn thương nào. Ngoài ra, kiểm tra PCR không phát WSSV, YHV MBV. Quan sát kính hiển vi nổi, ruột tôm đầy thức ăn, màu sắc tôm tươi sáng (Hình 2A B). Nhìn bên gan tụy tôm bình thường (Hình 2C). C Hình 2: Hình thái tôm thẻ chân trắng nuôi môi trƣờng có nitrite. (A) Tôm khỏe nhƣng chậm lớn, màu sắc bình thƣờng, ruột đầy thức ăn, nghiệm thức (10 mg/L NO2-N) (độ phóng đại 25 lần). (B) Tôm khỏe, màu sắc bình thƣờng, ruột đầy thức ăn nghiệm đối chứng (độ phóng đại 25 lần). (C) Khối gan tụy bình thƣờng tôm nồng độ 10 mg/L NO2-N (độ phóng đại 25 lần). Mang tôm quan chịu tác động mạnh chất độc từ môi trường sống. Khi môi trường chứa chất độc NH3, H2S, NO2 gây tượng bất thường tổn thương mang tôm. Nhưng nghiên cứu có lẽ tiếp xúc với nồng độ độc tố nitrite cao nên tôm không chịu đựng chết, số tôm lại có lẽ thích nghi dần. Bên cạnh độc tính nitrite chịu chi phối độ mặn nước, độ mặn 25 ppt khả gây ảnh hưởng lâu dài nitrite bị giảm. Do mang tôm bình thường. 3.3 Mô bệnh học Mô bệnh học phương pháp xác định tổn thương mô tế bào (vi thể). Phương pháp kết luận tính chất vùng tổn thương so sánh đối chiếu tổn thương với biểu lâm sàng vật chủ để tìm hiểu mối quan hệ mầm bệnh biến đổi hình thái, rối loạn chức vật chủ nhằm làm sở cho việc chẩn đoán (Chanratchakool et al., 2010). Nếu dựa vào hình thái tổn thương bên mà thông tin liên quan đến mô tế bào kết luận không xác (Đặng Thị Hoàng Oanh, 2011). Kết phân tích mô bệnh học cho thấy mô gan tụy tôm thí nghiệm bình thường. Có diện tế bào B tế bào F, tế bào R (Hình 3). Hình 3: Mô gan tụy tôm thẻ chân trắng nghiệm thức (40X). (A) Mô gan tụy bình thƣờng có xuất tế bào B tế bào F, tế bào R. (B) mô gan tụy bình thƣờng nghiệm thức đối chứng có xuất tế bào B tế bào F, tế bào R. Mặc dù nitrite dạng độc chất ảnh hưởng lên gan tụy của tôm với thời gian tiếp xúc lâu dài, độc tính nitrite giảm môi trường nước lợ nên ảnh hưởng nitrite lên gan tụy tôm thẻ chân trắng không thấy rõ. Mặc khác bể nuôi có sục khí liên tục dễ dẫn đến tượng nitrite kết hợp với oxy qua chuyển hóa vi khuẩn nitrobacter môi trường nước tạo nên nitrat không gây độc cho tôm. Sousa et al. (2007) cho bề mặt sợi mang phủ lớp cutium mỏng chạy dọc theo bắt màu hồng đậm so với toàn sợi mang. Các sợi mang cấu tạo tế bào biểu mô. Lớp biểu mô bao bọc sợi mang sơ cấp sợi mang thứ cấp mỏng thường dầy đầu sợi mang. Qua lát cắt thấy bên tế bào máu hình cầu, bắt màu tím đậm thuốc nhuộm H&E phân bố khắp nơi sợi mang. Hình 4. Mang tôm bình thƣờng, thay đổi cấu trúc mang, sợi mang sơ cấp thứ cấp bình thƣờng (40X). (A) Mang tôm nghiệm thức đối chứng, (→) tế bào máu phân bố khắp phiến mang. B. Mang tôm nghiệm thức (10X). Qua đợt thu cắt mẫu nhận thấy cấu trúc mang bình thường nghiệm thức gồm vật chất bắt màu hồng đậm thuốc nhuộm haematoxylin eosin kéo dài bên mang, phiến mang có hình lông chim phiến mang có khoảng không gọi khe mang, tế bào máu hình cầu bắt màu tím đậm thuốc nhuộm phân bố khắp sợi mang (Hình 4). Tuy nhiên, nghiên cứu tôm xanh tiếp xúc với Trichlorfon cho thấy mang tôm tiếp xúc với Trichlorfon 24mg/l-1 vòng 24h phiến mang bị phồng ra, tế bào biểu mô phồng lên. Bên cạnh đó, phần đầu mang có cấu trúc không bình thường, bị hoại tử (Bhavan, 2000). 3.4 Tốc độ tăng trƣởng tôm thẻ chân trắng thí nghiệm Sau 30 ngày nuôi, tôm thẻ chân trắng tăng trưởng chậm theo nồng độ độc tố nitrite tăng dần (Hình 5). Trong tôm có khối lượng lớn tôm nghiệm thức đối chứng (0.22g) tôm có khối lượng nhỏ tìm thấy nghiệm thức (0.07g). Ở NT4 NT5 có khối lượng tôm nhỏ khác biệt có ý nghĩa thống kê với nghiệm thức lại (p0,1-1 mg/L ảnh hưởng đến sinh trưởng tôm. Nghiệm thức đối chứng nuôi môi trường độc tố nitrite nên tôm trăng trưởng tốt, ruột đầy thức ăn, mang, khối gan tụy màu sắc, hình dạng bình thường. 0.3 Khối lƣợng (g) 0.25 0.19ab 0.22a 0.17b 0.2 0.14c 0.15 0.09d 0.1 0.07d 0.05 NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 ĐC Nghiệm thức Hình 5. Tăng trƣởng tôm thẻ chân trắng sau 30 ngày nuôi Nhiều nghiên cứu cho thấy sau 24 tôm tiếp xúc nitrit, chức sinh lý tôm bị rối loạn (Jensen, 1990; Chen and Cheng, 1994, 1995a, 1995b, 1996; Chen and Lee, 1997a, 1997b; Cheng and Chen, 2000). Cụ thể nitrite tích tụ vào máu tôm với hàm lượng cao theo thời gian tiếp xúc, làm thay đổi cân acid–bazơ áp suất thẩm thấu máu tôm nước Astacus astacus (Jensen, 1990), làm giảm độ pH máu, tăng PO2 giảm oxyhemocyanin máu, làm rối loạn tiết nitơ, điều hòa ion trao đổi khí hô hấp tôm xanh Macrobrachium rosenbergii, dẫn đến tình trạng thiếu oxy, điều kiện pH nước thấp (Chen and Lee, 1997a, 1997b) mà tích tụ cơ, gan tụy, mang, ruột trước, máu, tim, cuống mắt ruột tôm sú Penaeus monodon (29,42 ± 0,39 g) (Cheng and Chen, 2000). KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Các nồng độ nitrite thí nghiệm không gây ảnh hưởng đến hình thái cấu trúc gan tụy tôm thẻ chân trắng thí nghiêm. Nồng độ nitrite 5; 10 mg/L NO2-N ảnh hưởng đến tăng trưởng tôm làm tôm chậm lớn khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức lại (p[...]... 1): 79-86, June 2007 23 Trần Sỹ Nam, Nguyễn Văn Công, Phạm Quốc Nguyên và Võ Ngọc Thanh 2012 Ảnh hưởng của alpha – cypermethrin lên enzyme Cholinesterase và sinh trưởng cá rô đông (Anabas Testudineus) Trường Đại học Cần Thơ Tạp chí Khoa học 2012:23a 262-272 24 Tổng cục thủy sản Hội chứng hoại tử gan tụy cấp ở tôm nước lợ: nguyên nhân và giải pháp phòng ngừa Ngày đăng 21/ 12/ 2012 Ngày truy cập 20/ 06/... Ph.D 100 pages 27 Vũ Thế Trụ, 2001 Thiết lập và điều hành trại sản xuất tôm giống tại Việt Nam Nhà xuất bản Nông nghiệp TP Hồ Chí Minh, 108 trang 28 VASEP, 2012 Xuất khẩu tôm năm 2012 Ngày đăng 07/ 02/ 2012; Xuất khẩu tôm tiếp tục giảm Ngày đăng 24/ 04/ 2012 Ngày truy cập 14/ 09/ 2012 29 VASEP, 2013 Hội nghị tổng kết xuất khẩu tôm năm 2013 Ngày đăng 03/ 01/ 2014 Ngày truy cập 05/08/2014 10 ... Wang, J Xian, X Chen, N Gou, S Zhang, L Wang and X Xu, 2012 Effect to nitrite on immunity of the white shrimp L vannamei at low temperture and low salinity Ecotoxicology (2012), volume 21 College of Life Science, South China normal university, pages from 1603 to 1608 20 Nguyễn Thanh Phương và Trần Ngọc Hải, 2004 Giáo trình sản xuất giống và nuôi giáp xác trường Đại Học Cần Thơ 21 Phillips S, H J Laanbroek... to ambient nitrite Archives of Environmental Contamination and Toxicology 30 (2): 151–155 10 Chen, J C and Lee Y., 1997a Effects of nitrite exposure on acid–base balance, respiratory protein, and ion concentrations of giant freshwater prawn Macrobrachium rosenbergii at low pH Archives of Environmental Contamination and Toxicology 33, (3): 290-297 11 Chen, J C and Lee Y., 1997b Effects of nitrite on... http://www.fistenet.gov.vn/thong-tin-huu-ich/thong-tin-thong-ke/thong-tin/hoi-chung-hoaitu -gan- tuy-cap-o-tom-nuoi-nuoc-lo-nguyen-nhan-va-giai-phap-phong-ngua/ 26 Ujang Komarudin AK 2004 Acute Toxicity of Nitrite to Penaeus monodon (Fab.) and Litopenaeus vannamei (Boone) at Low Salinity Levels Master of Science (Aquaculture), Major Field: Aquaculture, Department of Aquaculture Thesis Advisor: Associate Professor Yont Musig, Ph.D 100 pages 27 Vũ Thế Trụ, 2001 Thiết lập và điều hành... concentrations Aquatic Toxicology, 39: 291-305 12 Cheng, S Y and Chen J C., 2000 Accumulation of Nitrite in the Tissues of Penaeus monodon Exposed to Elevated Ambient Nitrite After Different Time Periods Archives of Environmental Contamination and Toxicology 39 (2): 183-192 13 Dominic, J.S., 2008 Acute toxicity of ammonia and nitrite to white shrimp (L vanamei) at low salinity Thesis submitted to the faculty of... Hoàng Oanh, 2011 Nguyên lý và kỹ thuật chuẩn đoán bệnh thủy sản Nhà xuất bản Nông Nghiệp, 148 trang 15 Johnston, D.J., C.G Alexander & D Yellowhees 1998 Epithelial cytology and function in the digestive gland of Thenus orientalis (Decapoda, Scyllaridae) J Crust Biol 18: 271-278 16 Jensen, FB (1990) Sublethal physiological changes in freshwater crayfish, Astacus astacus, exposed to nitrite; haemolympb and... Nguyễn Thanh Phương và Trần Ngọc Hải, 2004 Giáo trình sản xuất giống và nuôi giáp xác trường Đại Học Cần Thơ 21 Phillips S, H J Laanbroek and W Verstraete, 2002 Origin, cause and effects of increased nitrite concentrations in aquatic environments, pages 115 - 141 Rewiev environment science and biology technology 1 Printed in the Netherlands 9 22 Sousa L.G and A.M Petriella (2007) Functional morphology . MINH THIỆN ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC NỒNG ĐỘ NITRITE KHÁC NHAU ĐẾN SỰ THAY ĐỔI HÌNH THÁI, CẤU TRÚC MÔ MANG VÀ GAN TỤY CỦA TÔM THẺ CHÂN TRẮNG (Litopenaeus vannamei) . MINH THIỆN ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC NỒNG ĐỘ NITRITE KHÁC NHAU ĐẾN SỰ THAY ĐỔI HÌNH THÁI, CẤU TRÚC MÔ MANG VÀ GAN TỤY CỦA TÔM THẺ CHÂN TRẮNG (Litopenaeus vannamei) LUẬN. ẢNH HƢỞNG CỦA CÁC NỒNG ĐỘ NITRITE KHÁC NHAU ĐẾN SỰ THAY ĐỔI HÌNH THÁI, CẤU TRÚC MÔ MANG VÀ GAN TỤY CỦA TÔM THẺ CHÂN TRẮNG Litopenaeus vannamei Phan Minh Thiện và Đặng Thị Hoàng Oanh* Bộ môn