TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THUỶ SẢN NGUYỄN THỊ TRÚC GIANG NGHIÊN CỨU VỀ SỰ KHÁNG THUỐC KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN PHÂN LẬP TỪ CÁ KÈO (Pseudapocryptes lanceolatus) BỆNH XUẤT HUYẾT LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN 2014 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THUỶ SẢN NGUYỄN THỊ TRÚC GIANG ĐẶC ĐIỂM HUYẾT HỌC CỦA CÁ BỐNG KÈO (Pseudapocryptes lanceolatus Bloch & Schneider, 1801) BỆNH XUẤT HUYẾT NUÔI TRONG AO Ở BẠC LIÊU VÀ SÓC TRĂNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGs. Ts. ĐẶNG THỊ HOÀNG OANH 2014 ĐẶC ĐIỂM HUYẾT HỌC CỦA CÁ BỐNG KÈO (Pseudapocryptes lanceolatus Bloch & Schneider, 1801) BỆNH XUẤT HUYẾT NUÔI TRONG AO Ở BẠC LIÊU VÀ SÓC TRĂNG Nguyễn Thị Trúc Giang Đặng Thị Hoàng Oanh* Bộ môn Bệnh học Thủy sản, Khoa Thủy sản, Trường Đại học Cần Thơ * Email: dthoanh@ctu.edu.vn ABSTRACT This study was carried out to figure out the change of hematological characteristics of mudskipper (Pseudapocryptes lanceolatus Bloch & Schneider , 1801) which were collected in Bac Lieu and Soc Trang province . The fish samples were collected from healthy ponds (30 samples) and diseased ponds (70 samples) with hemorrhagic clinical sign is dorsal, pectoral and pelvic fin and curved body. Bblood samples were collected from both diseased and heathy fish for hematological analysis. Results revealed that the density of red blood cells in diseased decreased compared with healthy one. However, there was a significant increase in the density of neutrophils , monocytes , platelets and lymphocytes in the diseased fish compared with healthy specimens . Keywords: Pseudapocryptes lanceolatus, hematology, hemorrhagic disease Title: Hematological characteristics of mudskipper (Pseudapocryptes lanceolatus Bloch & Schneider, 1801) with hemorrhagic diseases cuktured in ponds in Bac Lieu and Soc Trang province. TÓM TẮT Đề tài thực nhằm tìm hiểu thay đổi huyết học cá bống kèo vẩy nhỏ (Pseudapocryptes lanceolatus Bloch & Schneider, 1801) thu tỉnh Bạc Liêu Sóc Trăng. Các mẫu cá thu từ ao cá khỏe (30 mẫu) ao cá bệnh (70 mẫu) với dấu hiệu bệnh lý xuất huyết vây lưng, vây ngực, vây bụng cong thân. Mẫu máu thu để phân tích tiêu huyết học. Kết phân tích cho thấy mật độ tế bào hồng cầu cá có dấu hiệu bệnh lý giảm so với cá khỏe. Đồng thời, có gia tăng mật độ loại bạch cầu trung tính, bạch cầu đơn nhân, tiểu cầu lympho mẫu cá có dấu hiệu bệnh lý so với mẫu cá khỏe. Từ khóa: Cá bống kèo Pseudapocryptes lanceolatus, huyết học, bệnh xuất huyết I. GIỚI THIỆU Cá kèo đối tượng nuôi mang lại hiệu kinh tế sức thu hút đầu tư lớn chất lượng thịt cá thơm ngon. Cá kèo loài ăn tạp thiên thực vật tự nhiên, thức ăn chúng tảo khuê bùn bã hữu (Trần Đắc Định ctv., 2002). Cá bống kèo nuôi thương phẩm ao, nuôi thức ăn công nghiệp lượng thức ăn tự nhiên ao (Phạm Văn Khánh, 2006). Nhiều mô hình nuôi hình thành mô hình bán thâm canh, quảng canh, luân canh tôm-cá, muối-cá (Lê Kim Yến, 2005), số tỉnh Long An, Bến Tre, Trà Vinh, đặc biệt Bạc Liêu Sóc Trăng. Song, mô hình nuôi thâm canh hóa với việc tăng mật độ vấn đề dịch bệnh xảy thường xuyên mối đe dọa cho nghề nuôi cá kèo. Trong điều kiện Việt Nam nay, tài liệu nghiên cứu đối tượng cá kèo vẩy nhỏ ít, tập trung vào số đặc điểm sinh học phân loại, hình dạng cấu tạo, tính ăn đặc điểm phân tác giả như: Mai Đình Yên (1992), Nguyễn Hữu Phụng (1997), Mohsin Ambak (1996), Rainboth (1996),… gần có số nghiên cứu Hứa Thái Nhân (2004), Võ Thành Toàn (2005), Lê Kim Yến (2005), Nguyễn Hùng Tính (2007), Trần Thị Thanh Lý (2010) tập trung điều tra nghiên cứu vấn đề nguồn lợi, nuôi cá kèo thương phẩm, tập tính di cư,… Do đó, nhiều vấn đề liên quan đến cá kèo vẩy nhỏ chưa nghiên cứu. Vì vậy, nhằm hoàn thiện hiểu biết cá kèo ngăn ngừa số bệnh nói chung, thay đổi đặc điểm huyết học bệnh xuất huyết xảy cá kèo nói riêng nên đề tài “ Đặc điểm huyết học cá bống kèo (Pseudapocryptes lanceolatus Bloch & Schneider, 1801) bệnh xuất huyết nuôi ao Bạc Liêu Sóc Trăng” thực hiện. II. 2.1 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phương pháp thu mẫu Những ao nuôi chọn để thu mẫu ao nuôi cá kèo thương phẩm khoảng 3-4 tháng đại diện cho vùng nuôi mô hình nuôi chủ yếu thuộc tỉnh Bạc Liêu vàSóc Trăng nơi có nghề nuôi cá kèo phát triển. Chọn 11 ao, ao có biểu bệnh xuất huyết thu 70 mẫu cá bệnh ao cá không bệnh thu 30 mẫu. Mẫu máu thu chỗ để làm kính phết máu, cố định mẫu sau đưa phòng thí nghiệm tiếp tục tiến hành xác định tiêu huyết học. Cá sát trùng cồn (700) quanh khu vực lấy máu. Máu lấy động mạch chủ đuôi (Houston, 1990), dùng ống tiêm tiệt trùng 1ml lấy máu (Lượng máu tối thiểu 0,3ml). 2.2 Định lượng hồng cầu (Natt & Herrick, 1952) Hút 10µl máu cho vào ống nghiệm nhựa có chứa 1990µl dung dịch Natt & Herrick. Lắc nhẹ cho ống nghiệm. Mật độ hồng cầu xác định buồng đếm hồng cầu thông qua quan sát kính hiển vi quang học (40X). Đầu tiên xem vật kính 10X, định vị vùng đếm (Vùng ký hiệu chữ C), đưa vào thị trường, chuyển sang vật kính 40X. Mật độ hồng cầu tính theo công thức: C x 10 x x 200 (tb/mm3) với C tổng số hồng cầu vùng đếm. 2.3 Định lượng định loại tế bào bạch cầu Mẫu máu cố định lame nhuộm dung dịch nhuộm Wright & Giemsa (Chinabut ctv., 1991). Theo thứ tự sau: (1) nhuộm với dung dịch Wright 3-5 phút; (2) ngâm dung dịch pH 6,2 – 6,8 -6 phút; (3) nhuộm với dung dịch Giemsa 20 – 30 phút; (4) ngâm dung dịch pH 6,2 15 – 30 phút; (5) rửa lại nước cất, để mẫu khô tự nhiên đọc mẫu. Quan sát kính hiển vi vật kính X100. Định loại tế bào máu theo Chinabut ctv., (1991). Tổng bạch cầu (TBC) (Hrubec & ctv., 2000) Đếm tổng số hồng cầu bạch cầu 1.500 tế bào hồng cầu mẫu nhuộm. Tổng bạch cầu xác định công thức: TBC (tb/mm3) = (số bạch cầu x mật độ hồng cầu buồng đếm) / số hồng cầu mẫu. Từng loại bạch cầu (Hrubec & ctv., 2000) Đếm tổng số bạch cầu 200 tế bào bạch cầu. Mật độ loại bạch cầu (tb/mm 3) = (số lượng loại BC x mật độ TBC)/200. 2.4 Xử lý số liệu Số liệu thí nghiệm xử lý Excel SPSS. Sau so sánh khác biệt ao khỏe ao có dấu hiệu bệnh nhờ độ lệch chuẩn. 3.1 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Dấu hiệu bệnh lý bên Hình 1.Cá kèo khỏe cá kèo bệnh. (A) Cá bệnh, (B) Cá bị xuất huyết vây bụng, (C) Cá bị lồi mắt, (D) Cá khỏe Cá bệnh bơi lội lờ đờ, tấp mé, bỏ ăn, bên xuất huyết vi ngực, vi bụng, vi hậu môn, vi đuôi; xuất huyết mặt bụng, hai bên thân, nắp mang cuống đuôi. Ngoài ra, cá bị cong thân, mắt lồi, u nhọt thân nắp mang (Hình 1A, 1B 1C). Cá không phản ứng phản ứng chậm với tiếng động. Trong khi, cá khỏe: bơi lội nhanh nhẹn, phản ứng nhanh với tiếng động, vây không bị mòn rách, thân vết loét, xuất huyết hay vùng da bị màu, mang cá đỏ tươi sáng bóng (Hình 1D). Dấu hiệu bệnh lý bên 3.2 Khi giải phẫu cá khỏe thấy gan có màu trắng kem, tỳ tạng, thận tim có màu đỏ đậm. Cấu trúc quan rắn chắc, biểu sưng to nhũn, dịch xoang nội quan (Hình 2A) giải phẫu cá có biểu bệnh quan sát thấy số quan nội tạng gan bị xuất huyết (Hình 2B). Hình 2.Giải phẫu cá khỏe cá bệnh. (A) Cá khỏe, (B) Cá bệnh: gan cá bị xưng, xuất huyết 3.3 Kết huyết học Hồng cầu Hình thái: Khi quan sát buồng đếm Neubauer hay tiêu thấy hầu hết tế bào hồng cầu phân biệt rõ hồng cầu với tế bào khác. Hồng cầu có hình tròn hay hình oval, có nhân tròn nằm tế bào chất, nhân bắt màu tím đậm, tế bào chất lớn so với nhân có màu xám xanh, phân chia rõ ràng với nhân (Hình 3). Đây dạng hồng cầu trưởng thành phù hợp với miêu tả Hibiya (1982), Chinabut et al. (1991), phù hợp với mô tả hồng cầu cá nghiên cứu Nguyễn Thị Thúy Liễu (2008), Cao Ngọc Trâm (2010), Phạm Thanh Hương (2006), Dương Văn Nhí (2009), Nguyễn Thành Tân (2011), Bùi Thị Diễm My (2012). Không quan sát thấy tế bào hồng cầu không nhân, hồng cầu đa nhân, không nhân thấy hồng cầu tiền trưởng thành. Một số nghiên cứu hồng cầu cho hồng cầu giảm nhiều nguyên nhân, chế thiếu máu cá hồng cầu bị vỡ, chu kì sống rút ngắn hay trình chuyển hóa chất sắt bị hạn chế (Phạm Thị Phương Tiến, 2008). Cá trê bị ngộ độc gây thiếu máu sưng phồng hủy hoại hồng cầu. Tỉ lệ máu cá biến động theo phương thức sống, trạng thái sinh lý thể cá thay đổi theo môi trường sống. Cá vận động nhiều lượng máu nhiều cá vận động ít. Tỉ lệ máu gia tăng theo tuổi giai đoạn thành thục cá. Cá sống điều kiện dinh dưỡng tốt lượng máu nhiều so với cá thể loài sống điều kiện dinh dưỡng (Evans, 1997, trích dẫn Đỗ Thị Thanh Hương, 2010). Hình 3.Tế bào hồng cầu cá kèo khỏe Bảng 1. Sự khác số lượng hồng cầu cá kèo khỏe cá kèo bệnh xuất huyết Ao Mật độ hồng cầu (tế bào x 106/mm3) Ao 15,6 ± 0,13d Ao 14,6 ± 0,21cd Ao 14,9 ± 0,15bc Ao 15,5 ± 0,17cd Ao 15,8 ± 0,23bcd Ao 14,4 ± 0,17bc Ao 12,7 ± 0,31ab Ao 11,4± 0,25a Ao 15,5 ± 0,04bcd Ao 10 13,5 ± 0,18abc 15,2 ± 0,05bcd Ao 11 Các giá trị cột (a, b, c, d ) có chữ khác khác biệt có ý nghĩa thống kê (P[...]... Thơ, 15 trang 13 7 Nguyễn Thị Bé Hậu, 2012 Luận văn tốt nghiệp đại học Nghiên cứu bệnh xuất huyết trên cá kèo (Pseudapocryptes lanceolatus) nuôi ở tỉnh Bạc Liêu, 51 trang 8 Nguyễn Thành Tân, 2011 Nghiên cứu ảnh hưởng của vitamin C lên tỉ lệ sống và một số yếu tố huyết học của cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) giống nhiễm vi khuẩn Aeromonas hydrophila Luận văn tốt nghiệp Khoa Thủy Sản, ĐHCT 9 Chinabut,... nhân của cá kèo ở các ao cho thấy mật độ bạch cầu đơn nhân chiếm khoảng 2x104 – 8x104 tb/mm3 Ở 3 ao cá khỏe, mật độ bạch cầu đơn nhân khác nhau có ý nghĩa thống kê với các ao có dấu hiệu bệnh lý (trừ ao 4) (p . TRÚC GIANG NGHIÊN CỨU VỀ SỰ KHÁNG THUỐC KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN PHÂN LẬP TỪ CÁ KÈO (Pseudapocryptes lanceolatus) BỆNH XUẤT HUYẾT LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN. đến cá kèo vẩy nhỏ chưa được nghiên cứu. Vì vậy, nhằm hoàn thiện sự hiểu biết về cá kèo và ngăn ngừa một số bệnh nói chung, sự thay đổi về đặc điểm huyết học khi bệnh xuất huyết xảy ra trên cá. dấu hiệu bệnh nhờ độ lệch chuẩn. 5 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Dấu hiệu bệnh lý bên ngoài Hình 1 .Cá kèo khỏe và cá kèo bệnh. (A) Cá bệnh, (B) Cá bị xuất huyết ở vây bụng, (C) Cá bị lồi