• Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO •• TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC DƯƠNG THỊ LOAN BƯỚC ĐÀU PHÁT TRIỂN Bộ KIT CHẨN ĐOÁN NHANH BỆNH LAO BẢNG KỸ THUẬT POLYMERASE CHAIN REACTION LUẬN VĂN THẠC sĩ KHOA HỌC Chuyên ngành CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số : 60- 42- 80 Người hướng dẫn khoa học TS. TRẦN NHÂN DŨNG Năm 200 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT 9LỜI BẢN QUYÈN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu thân thầy hướng dẫn. Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thực chưa công bố luận văn trước đây. Người hướng dẫn Tác giả luậnvăn TS. Trần Nhân Dũng Dương Thị LoanLuận văn đính kèm theo đây, với tên đề tài: “Bước đầu phát triển kit chẩn đoán nhanh bệnh lao kỹ thuật polymerase Chain reactỉon ” Dương Thị Loan thực báo cáo hội đồng chấm luận văn thông qua. Thư ký ủy viên Phản biện Phản biện Cần Thơ, ngày tháng năm 2009 Chủ tịch hội đồn gLỜI CẢM TẠ Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS.Trần Nhân Dũng người dành nhiều thời gian, hướng dẫn tận tình, động viên, cung cấp nhiều tài liệu, kiến thức quý báu, tạo điều kiện thuận lợi tốt để hoàn thành luận văn này. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Sinh học Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT Tôi muốn gửi lòi cám ơn đến tất thầy cô giảng dạy, anh, chị, em Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học trường Đại học cần thơ, đặc biệt em Đỗ Tấn Khang, Trần Yăn Bé Năm, Nguyễn Thị Giáng Đan giúp đỡ ữong suốt thời gian thực đề tài. phía trường Đại học Y Dược cần thơ, tập thể Bộ môn sinh lý bệnh - miễn dịch Khoa Y có giúp đỡ, tạo hội cung cấp thứ cần thiết động viên, khích lệ tinh thần, để thực hoàn tất luận văn. Tôi vô biết ơn Ba mẹ hai bên, chồng, tất anh chị em gia đình yêu thương, luôn thông cảm, chia khó khăn, tạo thuận lợi cho yên tâm, có điều kiện tốt để hoàn thành đạt kết tốt suốt trình học tập mình. Yà cuối lời cám ơn đến tập thể lớp cao học công nghệ sinh học K13. TÓM LƯỢC • Tóm lược Bệnh lao bệnh truyền nhiễm có khả lây lan cộng đồng cao, phát sớm vi khuẩn lao điều chủ yểu chiến dịch kiểm soát bệnh lao, việc điều trị cho bệnh nhân đạt kết khả quan xét nghiệm phát nhanh vỉ khuẩn lao có độ xác độ nhạy đáng tin cậy, phản ứng PCR thử nghiệm khả thi, đáp ứng yêu cầu như: nhanh, nhạy xác. Mặc dù vậy, kỹ thuật PCR dùng để chẩn đoán bệnh lao chưa ứng dụng rộng rãi, thực đề tài nhằm bước đầu phát triển kit chẩn đoán nhanh bệnh lao TP cần thơ. Mau thu nhận từ bệnh viện lao bệnh phổi TP cần thơ, bảo quản xử lý. ADN ly trích phương pháp tốt để tránh ngoại nhiễm. Chọn ba cặp mồi sổ nhiều cặp mồi công bố, thông số công thức phản ứng PCR điều chỉnh. Theo kết nghiên cứu, bước đầu phát triển kit nhằm góp phần chẩn đoán bệnh lao, số 127 mẫu thu phát 40,9 % so với soi trực tiếp % tương đương với phương pháp nuôi cấy (được xem tiêu chuẩn vàng) 39,37%, kết gần phù hợp với kit thương mại. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Sinh học Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT Từ khóa: bệnh lao, phản ứng chuỗi, đoạn mồi, độ nhạy, độ đặc hiệu Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Sinh học Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT .ABSTRACT Abstract. Preliminary develop a tuberculosis diagnose kit by the use of polymerase chain reaction (PCR) method at Can Tho City Tuberculosis is a highly contagious disease. Early detection on infected patient is of most importance in the control of tuberculosis. Benefit in therapy may be improved if a fast and reliable test could be developed. Polymerase chain reaction (PCR), in principle, is a rapid, cost effective test to be used in the detection of Mycobacterium tuberculosis. Although there are many PCR methods for this disease were published, but there are no standard PCR method have been introduced. In this study, Can Tho Hospital for Tuberculosis was selected to collect samples. Approriate method was used to treat samples to avoid contamination. Selected method of DNA extraction was used to obtain best result. Three primers among many primers have been introduced which were used to test in this study. Different parameters that influence PCR were modified to obtain high specificity and high sensitivity. To validate the kit, there are 127 samples were collected from the hospital. Result showed that PCR test was much better than direct observing under microscope. Among 127 samples, there was 40,9 % samples were positive while % samples was observed under microscope. PCR test as good as culturing test (a golden method), 39,37% samples were positive. Keywords: tuberculosis, polymerase chain reaction, primer, sensitivity, specificity Chuyên ngành Công nghệ Sinh họcX Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh họcX Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT .MỤC LỤC DANH SÁCH BẢNG Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Sinh học Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT DANH SÁCH HÌNH Chuyên ngành Công nghệ Sinh họcX Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh họcX Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT TỪ VIẾT TẮT AFB acid fast bacilli BK bacilli de koch. BCG Bacillus Calmette-Guerin IS 6110 insertion sequence 6110 NA-carrier nucleotide acid carrier PCR polymerase chain reaction Tuberculin PPD WHO tuberculin purified protein derivative world heath organization ZN Ziehl-Neelsen ĐBSCL Đồng sông Cửu Long TCYTTG Tổ chức y tế giới Chuyên ngành Công nghệ Sinh học nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học nghệ Sinh học Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT CHƯƠNGI GIỚI THIỆU • Bệnh lao ba bệnh truyền nhiễm gây tử vong cao giới HIV/AĨDS giết triệu người năm, bệnh lao giết triệu người bệnh sốt rét giết triệu người (http://wikipedia.org/wiki/Lao). Hơn 100 năm trước đây, Robert Koch chứng minh lao bệnh nhiễm khuẩn ông tìm thấy đàm người bị bệnh lao phổi có loại trực khuẩn hình que kháng cồn, kháng toan gọi trực khuẩn Koch (bacilie de Koch:viết tắt BK). Ngày nay, bệnh lao xuất trở lại với đại dịch HIV/AIDS trở thành nguyên gây mắc bệnh tử vong chủ yếu, đặc biệt nước phát triển. Ở nước này, người dân có mức thu nhập thấp nên có tỷ lệ nhiễm lao mắc lao cao nước phát triển, nghèo đói suy dinh dưỡng làm giảm sức đề kháng thể nguyên nhân quan trọng chủ yếu làm cho người ta dễ mắc lao (http://wikipedia.org/wiki/Lao ỵ Do việc phát hiện, chẩn đoán sớm xác bệnh lao yêu cầu xúc xã hội. Để phát triển kỹ thuật chẩn đoán bệnh lao điều tất yếu cần thiết. Hiện có công ty TP.HỒ Chí Minh sản xuất kit dùng để chẩn đoán bệnh lao kỹ thuật PCR vói xu hướng ngày PCR xem qui trình chuẩn góp phần việc phát vi khuẩn gây bệnh, vừa nhanh chóng, vừa xác kỹ thuật xét nghiệm thiếu cần chẩn đoán bệnh truyền nhiễm phòng xét nghiệm đại (Phạm Hùng Vân. 1996). Tuy nhiên kỹ thuật đòi hỏi phòng xét nghiệm phải trang bị thiết bị phù hợp, với phát triển xã hội tương lai gần có nhiều thành phố Là hỗn hợp hóa chất làm sẳn để xử lý mẫu, trích ADN PCR master mix. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT vùng Đồng sông Cửu Long (ĐBSCL) có khả để trang bị loại thiết bị này. Như vậy, nhu cầu kit xét nghiệm cho bệnh nhiễm trùng lớn qua cho thấy rằng, kit cần phát triển nhằm theo dõi tính hiệu lực cách thường xuyên trước đưa vào qui trình xét nghiệm, để làm điều kit phải nghiên cứu sản xuất cho, vói yêu cầu trên, thực đề tài “ Bước đầu phát triển kỉt chẩn đoán nhanh bệnh lao kỹ thuật polymerase Chain reaction” Mục tiêu đề tài: - Chọn cặp mồi (primers) thích hợp sử dụng hóa chất cần thiết để tạo nên kit hổ trợ cho việc xét nghiệm bệnh lao. - So sánh kit thử nghiệm chẩn đoán bệnh lao với xét nghiệm hành. So sánh kết kit thử nghiệm vói kit pha chế sẳn (bộ kit thương mại) .CHƯƠNG II LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1. Tình hình bệnh lao giói Việt Nam 2.1.1. Tình hình bệnh lao gỉói Theo số thống kê WHO (Tổ chức Y tế giới:TCYTTG) có khoảng tỷ người giới bị nhiễm bệnh lao. Các chuyên gia cho cần có nhiều loại thuốc trị lao nhiều phương pháp chẩn đoán nhằm phát sớm bệnh lao đặc biệt chủng lao kháng thuốc. Hiện bệnh lao số bệnh có tỷ lệ mắc tử vong hàng đầu bệnh nhiễm trùng giới, nước phát triển có nước ta. Theo thông báo TCYTTG năm có thêm 8-9 triệu người mắc lao 98% số người chết lao thuộc nước phát triển. Năm 1993, TCYTTG tuyên bố tình trạng khẩn cấp toàn cầu bệnh lao mối Chuyên ngành Công nghệ Sinh học nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học nghệ Sinh học 10 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công 10 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT nhân trường hợp có kết PCR dương tính kết nuôi cấy lại âm tính. Đối với mẫu bệnh phẩm lao kháng thuốc loại mẫu có thêm thông tin mặt chẩn đoán lâm sàng lại kết kit thương mại, nhóm bệnh phẩm kit thử nghiệm PCR cho kết cao hẳn với nhóm bênh nhân lao thường, cụ thể kết nuôi cấy nhóm 80% PCR kit thử nghiệm 77,2% kết soi trực tiếp 0%. Như kết gần phù hợp vói nghiên cứu công bố trước đây.CHƯƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1.Kết luận. - Qua kết đạt được, kit PCR thử nghiệm bước đầu đưa vào áp dụng chẩn đoán nhằm hổ trợ phương pháp thường qui nay. -Trong 127 mẫu bệnh phẩm, kit phát 40,9%, soi trực tiếp 0%, nuôi cấy 39,37%. -Bộ kit thử nghiệm cho kết tương đối phù hợp với nghiên cứu trước kết gần tương đương với kit thương mại. 5.2.Đề nghị. -Để đưa kit vào sử dụng chẩn đoán hổ trợ cho xét nghiệm thường qui cần đánh giá kit thử nghiệm với số lượng mẫu lớn hơn. -Cần kết hợp với Bệnh viện lao bệnh phổi cần Thơ thời gian dài để có sở so sánh với kết luận xác định bệnh lao bác sĩ lâm sàng. -Phải xây dựng thêm qui trình chuẩn nhằm kiểm soát thành phần chuyên biệt để khắc phục hai nhược điểm lớn thử nghiệm PCR đề cập phần thảo luận kết dương giả âm giả. -Với trang thiết bị sở kết kit thử nghiệm đưa thêm kỹ thuật realtime-PCR để định lượng mẫu thử Chuyên ngành Công nghệ Sinh học48 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học48 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT .TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Âu Thanh Tùng. 2001. Vai trò thử nghiệm polymerase chain reaction (PCR) chẩn đoán lao màng phổi. Tạp chí y học TP Hỗ Chí Minh, Tập số 5, Phụ số 2. Đái Duy Ban. 2006. Công nghệ gen, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội. Khuất Hữu Thanh. 2006. Kỹ thuật gen, nguyên lý ứng dụng, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội. Mai Nguyệt Thu Hồng, Cao Minh Nga, Huỳnh Thanh Bình. 2005. Phản ứng PCR phát vi khuẩn lao số đối tượng khác nhau. Tạp chí y học TP Hồ Chí Minh, Tập số 9, Phụ số 1. Nguyễn Ngọc Lan, Trần Ngọc Đường, Lê Quốc Thịnh,Phạm Hùng Yân. 1999. Chẩn đoán lao màng não ttẻ em phương pháp polymerase chain reaction. Tạp chí y học TP Hồ chí Minh, Tập số 3, số 2. Nguyễn Ngọc Lan. 2001. Nghiên cứu áp dụng kỹ thuật phản ứng chuỗi polymerase (polymerase chain reaction) chẩn đoán lao. Luận văn tiến sĩ y học, chuyên ngành dịch tể học, Trường Đại học Y Dược Thành Phố Hồ Chí Minh. Nguyễn Văn Thanh. 2007. Sinh học phân tử. Nhà xuất giáo dục, Hà Nội Nguyễn Việt cồ. 2006. (chủ biên) Bệnh học lao, Nhà xuất Y học Hà Nội Phạm Hùng Vân. 1996. Phản ứng chuỗi polymerase (PCR), cách mạng sinh học phân tử. Tạp chí y học TP Hồ Chí Minh, số đặc biệt :27-35. Phạm Hùng Vân. 2001. cẩm nang kỹ thuật PCR RT-PCR phát M. tuberculosis, Hepatitis virus B, Hepatitis virus c, Dengue hemorrhagic fever. Phạm Thành Hổ. 2005. Nhập môn công nghệ sinh học. Nhà xuất giáo dục Trần Thị Bích Liên, Cao Minh Nga, Đông Thị Hoài An. 2003. Chẩn đoán lao hạch bệnh nhân nhiễm HĨV/AĨDS phương pháp PCR áĩạp chí y học TP Hồ Chí Minh. Tập số 7, Phụ số 3. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học49 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học49 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT Trần Văn Sáng. 2000. Sinh học phân tử miễn dịch học bệnh lý hô hấp. Nhà xuất y học Hà Nội. Trần Thị Xô. 2004. Cơ sở di truyền công nghệ gen. Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội. Trịnh Đình Đạt. 2007. Công nghệ sinh học, tập bốn, công nghệ di truyền. Nhà xuất giáo dục. Tiếng Anh Berenguer J., s. Moreno., F. Laguna., T. Vicente., M. Adrados., A. Ortega., J. GonzâlezLaHoz., E. Bouza 1992. Tuberculous meningitis in patients infected with the human immunodeficiency virus. N Engl JMed. ;326(10):668-72. Boom R., C.J. Sol., M.M.S. Salimans., C.L. Jansen., P.M. Wertheim-van Dillen., Noordaa J van der 1990. Rapid and simple method for purification of nucleic acids. J Clin Microbiol ; 28(3): 495-503. Brisson-Noel A., c. Aznar., c. Chureau., s. Nguyen., c. Pierre., M. Bartoli., G. Bonete., G. Pialoux., B. Gicquel., G. Garrigue 1991. Diagnosis of Tuberculosis by DNA amplification in clinical practice evaluation. Lancet.338: 364-366. Clamdge J.E., R.M.Shawar., T.M Shinnick., B.B. Plikaytis 1993. Large- scale use of polymerase chain reaction for detection of Mycobacterium tuberculosis in a routine mycobacteriology laboratory. J. Clin. Microbiol. 31: 2049-2056. DeWit D., M. Wooton, B. Allan, and L. Steyn. 1993. Simple method for production of internal control DNA for Mycobacterium tuberculosis polymerase chain reaction assays. J. Clin. Microbiol. 31:2204-2207. Donnabella V., F. Martiniuk., D. Kinney., M. Bacerdo., s. Bonk., B. Hanna., W.N.Rom. 1994. Isolation of the gene for the beta subunit of RNA polymerase from rifampicinresistant Mycobacterium tuberculosis and identification of new mutations. Am J Respir Chuyên ngành Công nghệ Sinh học50 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học50 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT Cell Mol Biol. Dec; 11(6):639-43 Eisenach K. D., M. D. Sifford., M. D. Cave., J. H. Bates., and J. T. Crawford. 1991. Detection of Mycobacterium tuberculosis in sputum samples using a polymerase chain reaction. Am. Rev. Respir. Dis. 144:1160-1163. Forbes B.A. and E.s. Karen. 1993. Direct detection of Mycobacterium tuberculosis in respiratory specimens in a clinical laboratory by polymerase chain reaction. J. Clin. Microbiol. 1688. Grosset J. 1996. Bacteriological diagnosis of tuberculosis. Rev Prat 46:1337- 43. Hermans P.W.M., D. Van Soolingen., J. W. Dale., A.R.J. Schuitema., R.A. McAdam., D. Catty., and J.D. A. van Embden. 1990. “Insertion element IS 986 from Mycobacterium tuberculosis a useful tool for diagnosis and epidemiology of tuberculosis”, J. Clin. Micribiol., 28, pp. 2051-2058. Imboden P., F. Marchesi., D. Lowrie., S. Cole., M.J. Colston. 1993. Detection of rifampicin-resistance mutations in Mycobacterium tuberculosis. Lancet ; 341:647- 650. Kolk A H J., Paul R. Klatser., Sjoukje Kuijper., Cor W.van Ingen. 1998. Stabilized, Freeze-Dried PCR Mix for Detection of Mycobacteria. J Clin Microbiol.', 36(6): 17981800. Kolk A.H.J., A.RJ. Schuitema., S. Kuijper., J. Van Leeuwen., P.W.M. Hermans., J.D.A. Van Embden., R.A.Hartskeerl. 1992. Detection of Mycobacterium tuberculosis in clinical samples by using polymerase chain reaction and a non radioactive detection system. J. Clin. Microbiol. 30:2567-2575. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học51 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học51 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT Kubica G.P., W.E. Dye., M.L. Cohn M.L.and G. Middlebrook. 1963. Sputum digestion and decontamination with N-Acetyl-l-cysteine sodium hydroxide for culture of bacteria. American Review of Respiratory Diseases 87, 775- 779. Noordhoek G.T., J.A. Kaan., S. Mulder., H. Wilke., A.H.J. Kolk., G. Bjune., D. Catty., J.W. Dale., P.E.M. Fine. 1994. “Sensitivity and specificity of PCR for detection of Mycobacterium tuberculosis: a blind comparison study among seven laboratories”, J. Clin. Microbiol., 32, pp. 277-284. Noordoek G.T., J.A.Kaan., S. Mulder., H. Wilke., and A.H.J. Kolk. 1995. Routine application of the polymerase chain reaction for detection of Mycobacterium tuberculosis in clinical samples. J .Clin.Pathol., 48, pp. 810-814. Samuel Ratnam., A. Florence Stead and Mary Howes. 1987. Simplified AcetylcysteineAlkali Digestion-Decontamination Procedure for Isolation of Mycobacteria from Clinical Specimens. J. Clin. Microbiol. 25 (8): 1428- 1432. Schluger N. et al. 1994. Clinical utility of the polymerase chain reaction in the diagnosis of infections due to Mycobacterium tuberculosis. Chest. Apr; 105 (4): 1116-21. Thiery D., A. Brisson-Noel., V. Vincent-Levy-Frebault., S. Nguyen., J. Guesdon., B. Gicquel. 1990. Characterization of a Mycobacterium tuberculosis insertion sequence, IS6110, and its application in diagnosis”, J. Clin. Microbiol. 28: 2668- 2673. Yuen L.K.W., B.C. Ross., K.M. Jakson., B. Dwyer. 1993. Characterization of Mycobacterium tuberculosis from Vietnamese patients by Southern blot hybridization. J. Clin. Microbiol. 31: 1615-1618. Zhang Y., B. Heym., B. Allen., D. Young., S. Cole. 1992. The catalase- peroxidase gene and isoniazid resistance of Mycobacterium tuberculosis Nature;358:591-3. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học52 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học52 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT Trang web h //www.cimsi.ora.vn/Lao/home.asp tt h //wikipedia.org/wiki/Lao tt h //www.freepatentonline.com/5731150.html tt p PHỤ CHƯƠNG PHÀN I. DANH SÁCH BỆNH NHÂN Bảng 5. Danh sách bệnh nhân nghi lao phổi ST T 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 Mã số B1.0 B1.0 B1.0 B1.0 B1.0 B1.0 B1.0 B1.0 B1.0 B4.0 B1.1 Bl.ll B1.1 B1.1 B1.1 B1.1 Tên họ bệnh nhân Nam Trần Thị Ngọc Ảnh Nữ Tuổi Ngày nhận mẫu X 23 27/08/08 Phạm Văn lọi X 31 27/08/08 Đặng Văn Ri X 61 29/08/08 Huỳnh văn Nai X 46 29/08/08 Bùi Văn Thắng X 59 29/08/08 Nguyễn Thị Trang X 34 29/08/08 Trương Lê Kim Uyên X 34 04/09/08 30 04/09/08 Võ Thanh Hùng X Nguyễn Thị Hai X 63 04/09/08 Nguyễn Thị Viên X 80 04/09/08 44 08/09/08 Trần văn Mười X Phạm Thị Ảnh X 56 11/09/08 Nguyễn Thị Sự X 53 11/09/08 61 12/09/08 24 12/09/08 37 22/09/08 Phan Hữu Phụng X Hà Thị Tuyết Mai Nguyễn Đức Huy X X Chuyên ngành Công nghệ Sinh học53 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học53 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 B3.0 B1.1 B1.1 B1.1 B1.1 B3.0 B1.2 B1.2 B1.2 B1.2 B2.0 B1.2 B1.2 B1.2 B1.2 B1.2 B1.2 B1.3 B1.3 B1.3 B1.3 B1.3 B2.0 B1.3 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT Hồ Hữu Hiệp X 87 22/09/08 Võ Văn Sen X 53 29/09/08 Nguyễn Thiên Thanh X 56 29/09/08 Lê Thị Nhạn X 52 03/10/08 Trần Ngọc Thu X 32 03/10/08 72 03/10/08 30 13/10/08 33 13/10/08 30 13/10/08 41 17/10/08 32 13/10/08 Trần Văn Sang X Âu Thị Ngọc Xoàn Lê Văn Tuấn X X Nguyễn Ngọc Trinh Nguyễn Thành Tài X X Bạch Thị Phượng Em X Trần Văn Be X 60 27/10/08 Lai Văn Luật X 68 27/10/08 Nguyễn Văn Mừng X 45 27/10/08 Lê Văn Bé Hai X 47 27/10/08 Mai văn Tặng X 26 27/10/08 Tăng Thức Hòa X 46 06/11/08 38 06/11/08 Lê Thị Kim Thanh X Trần Văn Be X 60 06/11/08 Lê Văn Năng X 56 17/11/08 Võ Thị Ben X 24 17/11/08 Nguyễn Thị Mỹ Phương X 20 17/11/08 35 28/11/08 76 07/01/09 Lê Văn Phúc Huỳnnh Thị My X X Chuyên ngành Công nghệ Sinh học54 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học54 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Bảng 6. Danh sách bệnh nhânMã lao kháng Họthuốc Tên Bệnh nhân SỐT số T 01 C1.00 Huỳnh Văn Lạc 02 c Trương Văn Minh 1.002 03 c Nguyễn Hữu Hạnh 1.003 04 c Nguyễn Thanh Sơn 1.004 05 c Nguyễn Văn sấm 1.005 06 c Nguyễn Hùng Dũng 1.006 07 c Mai Văn Qúi 1.007 08 c Trần Văn Bi 1.008 09 c Trần Tân Hưng 1.009 10 C1.01 Huỳnh Kim Gấm 11 C1.01 Trần Thanh Tiến 12 C1.01 Biện Việt Hùng 13 C1.01 Huỳnh Văn Năng 14 C1.01 Hồ Văn Quân 15 C1.01 Trần Thị Hương 16 C1.01 Lê văn Minh 17 C1.01 Nguyễn Thị Bảy 18 C1.01 Huỳnh Ngọc Nam 19 C1.01 Hà Văn Bảy 20 c Trần Văn Thương 1.020 21 C1.02 Thạch Văn Hên 22 c Thạch Ngọc Quyên 1.022 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT Nam N ữ Tuổi Ngày nhận mẫu X 69 04/09/08 X 82 08/09/08 X 64 08/09/08 X 62 08/09/08 X 60 11/09/08 X 43 11/09/08 X 29 11/09/08 X 62 11/09/08 X 81 12/09/08 23 12/09/08 X 46 22/09/08 X 55 22/09/08 X 52 22/09/08 X 60 22/09/08 32 22/09/08 54 29/09/08 59 29/09/08 X 52 29/09/08 X 77 29/09/08 X 59 03/10/08 X 52 13/10/08 24 27/10/08 X X X X X Chuyên ngành Công nghệ Sinh học55 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học55 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 c 1.023 c 1.024 c 1.025 c 1.026 c 1.027 c 1.028 c 1.029 c 1.030 C1.03 c 1.032 C1.03 c 1.034 c 1.035 c 1.036 c 1.037 C1.03 c 1.039 c 1.040 C1.04 c 1.042 c 1.043 c 1.044 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT Kiêm Tuyết Kiều X 54 06/11/08 Nguyễn Tấn Quốc X 21 06/11/08 Trần Minh Quang X 52 17/11/08 Dương Văn Bắc X 50 17/11/08 Đinh Thị Tám X 51 24/11/08 Nguyễn Thị út X 38 24/11/08 Nguyễn Hữu Tài X 26 28/11/08 Đinh Văn Siêng X 49 03/12/08 42 03/12/08 Nguyễn Thị Vui X Phạm Văn Tùng X 30 10/12/08 Nguyễn Văn Tâm X 35 10/12/08 Nguyễn Thị Ba X 49 29/12/08 Nguyễn Thị Nhánh X 50 29/12/08 Nguyễn Kim Hoàng X 30/12/08 Nguyễn Thanh Hùng X 32 07/01/09 Trần Văn Beo X 60 22/04/09 Lê Văn Tân X 80 22/04/09 Võ Trường Quang X 29 08/05/09 Hồ Văn Hòa X 57 08/05/09 Huỳnh Văn Diễn X 39 25/05/09 38 25/05/09 51 29/05/09 Tuổi Ngày nhận mẫu Đỗ Thị Xuân Linh Phạm Văn Lý Bảng 7. Danh sách bệnh nhân lao tên phổi Mãnghi Họ bệnh nhân STT số X X Nam Nữ Chuyên ngành Công nghệ Sinh học56 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học56 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 A00 A00 A00 A00 A00 A00 A00 A00 A00 A01 A011 A01 A01 AO 14 A01 A01 A01 A01 A01 A02 A02 A02 A02 A02 Phạm Văn Định Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT X 77 27/08/08 Huỳnh Thị Huệ X 24 27/08/08 Trần Thị Ngọc Ánh X 23 27/08/08 Phạm Thế Hiển X 28 29/08/08 Trần Văn Tỷ X 67 29/08/08 Võ Hoàng Sơn X 21 29/08/08 34 04/09/08 Trần Thị Kim Loan X Trần Văn Chung X 42 04/09/08 Trương Minh Tuấn X 49 08/09/08 Đinh Văn Việt X 51 08/09/08 Đặng Văn út X 62 08/09/08 Triệu Phúc Anh Thi X 14 08/09/08 Ngô Thị Phường X 30 11/09/08 Trịnh Văn Văn X 57 11/09/08 Nguyễn Văn Nhỡ X 25 12/09/08 Trần Văn Vinh X 52 12/09/08 Huỳnh Phú Cường X 75 22/09/08 Phan Hữu Phụng X 61 22/09/08 Đinh Văn Nhượng X 23 29/09/08 Nguyễn Văn Nghiệp X 60 29/09/08 Nguyễn Thành Luân X 46 29/09/08 Lê Văn Nghiệp X 40 13/10/08 Huỳnh Văn Thơi X 59 27/10/08 37 06/11/08 Dương Thị Thu Hà X Chuyên ngành Công nghệ Sinh học57 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học57 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 A02 A02 A02 A02 A02 A03 A03 A03 A03 A03 A03 A03 A03 A03 A03 A04 A04 A04 A04 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT Đỗ Minh Hùng X 54 06/11/08 Nguyễn Văn Nhạn X 27 24/11/08 Trần Trọng Thơ X 40 27/11/08 48 27/11/08 Hồ Quỳnh Trâm X Võ Anh Huy X 20 27/11/08 Nguyễn Văn Ngoãn X 37 27/11/08 75 27/11/08 Lưu Thị So X Nguyễn Văn Lộc X 47 27/11/08 Nguyễn Văn Xê X 55 27/11/08 31 03/12/08 Phùng Ngọc Bích X Sầm minh Hải X 39 0312/08 Huỳnh Đức Linh X 41 03/02/08 Nguyễn Thanh Nhàn X 31 16/12/08 Đoàn Thị Tuyết X 40 16/12/08 Nguyễn Phương Ngân X 27 29/12/08 Lê Thị hồng Thắm X 35 29/12/08 Hoàng Thị Hạnh X 36 30/12/08 Cao Quốc Hưng X 49 30/12/08 Thái Văn Minh X 42 30/12/08 PHẦN II: NGUỒN BLAST Basic Local Alignment Search Tool NCBI/ BLAST/ Microbes/ Formatting Results - 29SXG1R7014 See details CitationReference Search SummarvrTaxonomv reportsirDistance tree of Chuyên ngành Công nghệ Sinh học58 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học58 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT resultsl Graphic Summary PHÀN III. KÉT QUẢ ĐO NỒNG Độ ADN. Bảng 8. Nồng độ ADN Mẩu 260nm 260nm/280nm Nồng độ ADN (ug/ml) 0.0735 1.9145 36.75 0.0546 2.0561 27.3 0.0730 2.0131 36.5 0.0691 1.9254 34.55 0.0764 1.8422 38.2 0.0621 1.9756 31.05 0.0684 1.9803 34.2 0.0592 1.8816 29.6 0.0483 1.9758 24.15 10 0.0514 2.0187 25.7 11 0.0432 1.8105 21.6 12 0.0359 1.8865 17.95 13 0.0634 1.9699 31.7 14 0.0508 1.7920 25.4 15 0.0501 1.8410 25.05 16 0.0699 1.7700 34.95 17 0.0409 1.7564 20.45 18 0.0535 1.9670 26.75 19 0.0743 1.7543 37.15 20 0.0484 1.8421 24.2 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học59 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học59 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 21 Bảng (TT) Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT 0.0721 1.7151 36.05 0.0423 1.7041 21.15 0.0502 2.0030 25.1 24 0.0390 1.9465 19.5 25 0.0414 1.7444 20.7 26 0.0402 1.9354 20.1 27 0.0537 1.8874 26.85 28 0.0625 1.9354 31.25 29 0.0304 2.0121 15.2 30 0.0621 1.9031 31.05 31 0.0592 1.9244 29.6 32 0.0724 1.7426 36.2 33 0.0534 1.7756 26.7 34 0.0403 1.9603 20.15 35 0.0571 1.8168 28.55 36 0.0522 1.8061 26.1 37 0.0706 2.0031 35.3 38 0.0491 1.8235 24.55 39 0.0473 1.8245 23.65 40 0.0604 1.8756 30.2 41 0.0536 1.9603 26.8 42 0.0578 1.7546 28.9 43 0.0634 2.0061 31.7 44 0.0418 1.9121 20.9 22 23 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học60 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học60 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khóa XIII-2009 Bảng (TT) Tr ưòng ĐHCT Tr ưòng ĐHCT 0.0421 1.9124 21.05 0.0732 1.7444 36.6 47 0.0601 1.8365 30,05 48 0.0435 1.7705 21.75 49 0.0390 1.8166 19.5 50 0.0443 2.0061 22.15 51 0.0579 1.9151 28.95 52 0.0685 1.8264 34.25 45 46 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học61 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học Chuyên ngành Công nghệ Sinh học61 Viện Nghiên cứu vồ Phát triển Công nghệ Sinh học PHÀN IV. LÝ LỊCH KHOA HỌC I. LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên: Dương Thị Loan Ngày tháng năm sinh: 18/07/1961 Nơi sinh: cần thơ Chổ nay: 146 đường 30/4-Hưng lợi-Ninh kiều - thành phố cần thơ Điện thọai: 0919065661 Điện thọai nhà riêng: 0710. 3838235 II. QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO 1. Đại học Hệ đào tạo: chức Ngành đào tạo:kỹ thuật Y học Nơi đào tạo: Trường Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh 2. Trình độ ngọai ngữ Chứng c Anh văn. [...]... tễ bệnh lao toàn cầu, công tác chống lao thực sự bắt đầu phải đối mặt với những thách thức mới là bệnh lao kháng thuốc và Lao/ HIV, nhà nước và Bộ Y tế Việt Nam đã quyết định đưa Chương trình phòng chống lao thành một trong những chương trình y tế Quốc gia ừọng điểm Cùng với sự đầu tư phát triển các Chương tình y tế quốc gia nói chung, Bộ Y tế và Chính phủ đã ưu tiên đầu tư đồng bộ lượng rất lớn cán bộ, ... tính lúc chưa nhiễm lao, lúc nhiễm lao chưa quá một tháng, ỉức bị lao nặng trong tình trạng suy nhược không còn phản ứng, lức mắc bệnh cấp tính như sồi, bệnh Hodgkin 2.4 Chẩn đoán lao bằng chụp hình x-quang phồỉ Phương pháp phổ biến hiện nay dùng đề phát hiện bệnh lao là đọc kết quả hình ảnh phổi qua kỹ thuật chụp bằng tia X (hình 5) đây là một phương pháp quí báu gốp phần trong chấn đoán ỉao phổi Phương... dùng trong chẩn đoán bệnh lao là làm xét nghiệm đàm tìm vi khuẩn lao (phương pháp soi trực tiếp) mẫu đàm được soi trực tiếp trên kính hiển vi sau khỉ đã được nhuộm bằng phương pháp Ziehl - Neelsen (ZN) Chẩn đoán lao phổi bằng xét nghiệm đàm tìm vi khuẩn lao là biện pháp rất cơ bản, đơn giản, rẻ tiền rất phù hợp vói hoàn cảnh và điều kiện của các nước nghèo, đang phát triển Người bệnh nghỉ là bị lao khỉ... kết quả được vì vi khuẩn lao tăng trưởng rất chậm trong điều kiện bình thường, trung bình từ 20 - 24 giờ/1 lần).Vì vậy việc nuôi cấy để nhận định vi khuẩn cần nhiều thời gian Các kỹ thuật nuôi cấy như kỹ thuật BACTEC, MGIT ở các nước phát triển cũng ngày càng được hoàn thiện 2.5.3 Kỹ thuật sinh học phân tử: kỹ thuật PCR (polymerase Chain reactỉon) Những năm gần đây các kỹ thuật sinh học phân tử được... 2000).Những nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật PCR trong chẩn đoán bệnh lao Tại Khoa Vi sinh, Bệnh viện Lao -Bệnh phổi trung ương nhận thấy với chủng vi khuẩn lao châu Á thì 71% vi khuẩn có từ 5 đoạn IS 6110 trở xuống, trong khi vi khuẩn cổ điển tỷ lệ này là 10% (Nguyễn Văn Hưng, 1999) Tại Việt Nam đã có các đề tài nghiên cứu như: - Chẩn đoán lao hạch ở bệnh nhân nhiễm HIV/AIDS bằng phương pháp PCR” thử nghiệm... đặc hiệu thấp Nhiều bệnh có hình ảnh x-quang phổi giống với lao phổi, lao phểỉ ngược lại cũng cổ hình ảnh dễ nhầm lẫn với các bệnh phổi khác Mặt khác rất khó phân biệt tổn thương ở phổi do lao cũ đã ổn định hay lao mới đang tiến triển, vì thế x-quang không phải là yếu tố quyết định trong việc chẩn đoán lao phổi Kết quả chẩn đoán càng phức tạp hơn khỉ tồn thương ở những người mắc bệnh lao phổi đồng thời... phát hiện, chẩn đoán nhanh, chính xác các thể lao này Berenguer et al (1992) sử dụng PCR trong chẩn đoán lao màng não PCR còn được sử dụng trong chẩn đoán trực khuẩn lao kháng thuốc Zhang Y et al (1992) sử dụng PCR xác định được chủng trực khuẩn lao kháng INH do thiếu gen catalase (gen Kat G) Imboden p et al (1993) phát hiện đột biến kháng thuốc rifamicine của trực khuẩn lao bằng kỹ thuật PCR Donnabella... Nghiên cứu và Phát triển Công nghệ Sinh học Trường Đại học cần Thơ để tiến hành thử nghiệm tiếp theo như: xử lý mẫu bênh phẩm, ly trích ADN, khuếch đại ADN bằng phản ứng PCR (thực hiện phương pháp PCR song song giữa bộ kit thương mại và bộ kit thử nghiệm) Mau bệnh phẩm được chia thành hai nhóm 1- Nhóm lao thường:là những bệnh nhân có những triệu chứng nghi bị bệnh lao đến khám lần đầu tiên gồm: -Lao phổi:... trong tương lai là bệnh lao kháng thuốc, tỷ lệ điều trị thành công trên toàn cầu đạt 82%, nhưng ước tính tỷ lệ phát hiện chỉ đạt 37% số bệnh nhân Như vậy, còn rất nhiều bệnh nhân lao không được chữa trị đang tiếp tục lây bệnh cho cộng đồng, hơn 33% số bệnh nhân lao toàn cầu thuộc về khu vực Đông-Nam Châu Á Mức độ nặng nề của bệnh lao đã ảnh hưởng tói thu nhập quốc dân và chỉ số phát triển con người của... hoại sinh ở đất, nước, thực vật; một số gây bệnh ở người và động vật Nhóm gây bệnh lao + Mycobacterium tuberculosis: vi khuẩn lao gây bệnh lao trên người + Mycobacterium bovis: vi khuẩn lao bò có thể gây bệnh ở ngưòi + Mycobacterium avium: vi khuẩn lao chim, ít gây bệnh ở người, thường gặp trong lao hạch ở người + Mycobacterium microti: vi khuẩn gây bệnh lao ở chuột Mycobacterium Atipìques: là các . Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO • • • TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC DƯƠNG THỊ LOAN BƯỚC ĐÀU PHÁT TRIỂN Bộ KIT CHẨN ĐOÁN NHANH BỆNH LAO BẢNG KỸ THUẬT POLYMERASE. Dương Thị LoanLuận văn đính kèm theo đây, với tên đề tài: Bước đầu phát triển bộ kit chẩn đoán nhanh bệnh lao bằng kỹ thuật polymerase Chain reactỉon ” do Dương Thị Loan thực hiện và báo cáo đã. cho đến nay kỹ thuật PCR dùng để chẩn đoán bệnh lao vẫn chưa được ứng dụng rộng rãi, vì thế chúng tôi thực hiện đề tài này nhằm bước đầu phát triển bộ kit chẩn đoán nhanh bệnh lao tại TP cần