BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI PH N TH HƯ NG NGHI N CỨU ỘT S Đ C T NH SINH Ư C CỦ CH CHI T TỪ HẠT Đ U Đ N (Vigna cylindrica) Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 42 01 14 LU N VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn: TS Trần Thị Phương Liên HÀ NỘI 2014 i LỜI CẢ N Trong trình tìm hiểu, nghiên cứu hồn thành luận văn tốt ngiệp, nhận lời bảo, hướng dẫn tận tình giáo Ti n s Tr n Th Th hư ng iên Tôi xin ch n thành cảm n cô giáo Ti n s hư ng C Tr n Th – ph ng guy n a sinh, iện công nghệ sinh h c iệt am t o u iện cho hoàn thành m t số th nghiệm Bên c nh đ , Ban giám hiệu, h ng sau đ i h c, Trung t m chuyển giao công nghệ, h ng, Ban trường Đ S i t o u iện thuận lợi nh t cho tơi q trình làm việc C ng với đ s h trợ nh t đ nh t gia đìn b n b Tơi xin ch n thành cảm n s giúp đỡ quý báu đ ! i, tháng 05 năm 2014 Học viên Ph n Thị Hương ii LỜI C ặp ề ĐO N i, tháng 05 năm 2014 Học viên Ph n Thị Hương iii MỤC LỤC Ụ Ụ Ụ Ụ Ụ MỞ ẦU Ư ỔNG QUAN TÀI LI U 1.1 Vài nét chung Vigna cylindrica 1.1.1 Th c vật h c 1.1.2 Phân bố, sinh thái 1.1.3 Thành ph n hóa h c 1.1.4 M t số tác dụng Sinh - dược công dụng c y đậu đen 12 ợp 1.2.1 Các hợp ch t thứ sinh ch t có ho t tính sinh h c 1.2.2 Hợp ch t phenolic 1.2.3 Flavonoid th c vật 1.2.4 Tannin 12 1.2.5, Alkaloid th c vật 13 13 p 14 1.3.1 Khái niệm phân lo i béo phì 14 1.3.2 Th c tr ng béo phì th giới nước 14 1.3.3 Nguyên nhân gây béo phì 15 1.3.4 Các tác h i nguy c cụ thể béo phì 16 1.3.5, M t số số hoá sinh liên quan đ n rối lo n trao đổi lipid máu 16 1.3.6, Giải pháp ph ng u tr 17 iv 1.4 B ờng 18 1.4.1 Tỷ lệ mắc bệnh ĐTĐ 19 1.4.2 Phân lo i c ch sinh bệnh ĐTĐ 20 Đái tháo đường type 1(ĐTĐ phụ thu c insulin) 20 2 Đái tháo đường type (ĐTĐ hông phụ thu c insulin) 20 1.4.2.3 M t số d ng ĐTĐ hác 21 143 t số thuốc u tr bệnh ĐTĐ 22 1.5, M i quan h giữ Ư 21 Ố ợ ƯỢ p À Ư ờng 23 Ê ỨU 24 24 2.1.1 Nguyên liệu th c vật 24 2.1.2 Mẫu đ ng vật ch đ thức ăn 24 2.1.3 Hóa ch t, dụng cụ thí nghiệm 25 2.1.3.1 Hóa ch t 25 2.1.3.2 Dụng cụ thí nghiệm 25 22 p áp u 26 221 hư ng pháp tách chi t nghiên cứu 26 222 hư ng pháp hảo sát thành ph n hóa h c h t đậu đen 26 2 Đ nh tính m t số nhóm hợp ch t t nhiên 26 2 2 Đ nh lượng polyphenol tổng số theo phư ng pháp FolinCiocalteau 27 2.2.3 Nghiên cứu tác dụng ph n đo n d ch chi t t h t đậu đen (Vigna cylindrica) lên tr ng lượng m t số số hóa sinh máu chu t béo phì th c nghiệm 28 2.2.3.1 Thử đ c tính c p, xác đ nh LD50 28 2.2.3.2 Xây d ng mơ hình chu t béo phì th c nghiệm 29 v 2.2.4 Nghiên cứu tác dụng h đường huy t d ch chi t h t đậu đen chu t nhắt g y ĐTĐ STZ 29 2241 hư ng pháp g y ĐTĐ th c nghiệm mô type 31 2.2.4.2 Thử khả h glucose huy t ph n đo n d ch chi t h t đậu đen mơ hình chu t ĐTĐ type 32 2.2.5, Sử dụng phư ng pháp h a sinh - y dược 32 2.2.5,1 hư ng pháp đ nh lượng glucose huy t 32 2.2.5,2 Đ nh lượng m t số số lipid huy t 33 2.2.6, hư ng pháp xử lý số liệu 35 Ư 31 T QU NGHIÊN CỨU VÀ TH O LUẬN 37 ợ ợp (Vigna cylindrica) 37 3.1.1 K t tách chi t ph n đo n 37 3.1.2 K t đ nh tính m t số nhóm hợp ch t t nhiên phân đo n d ch chi t t h t đậu đen ( igna cylindrica) 39 3.1.3 Phân tích thành ph n hợp ch t t nhiên ph n đo n d ch chi t t h t đậu đen ( igna cylindrica) sắc kí lớp mỏng 40 Đ nh lượng hàm lượng polyphenol tổng số cao d ch chi t ph n đo n t h t đậu đen ( igna cylindrica) 42 3.1.4.1 K t xây d ng đường chuẩn acid gallic 42 Đ nh lượng polyphenol tổng số theo phư ng pháp FolinCiocalteau 43 3.2 K t 3.3 K t n d ch chi 331 nh liề c c p 44 t béo phì th c nghi ợ ụng c p t béo phì 45 t t o mơ hình chu t b o phì th c nghiệm 45 vi 3.3.2 Tác dụng ph n đo n d ch chi t t h t đậu đen đ n tr ng lượng chu t béo phì th c nghiệm 49 34 ả á ụ ụ ụ n chuy n hóa lipid c Vigna cylindrica) 52 3.4.1 K t t o mơ hình chu t đái tháo đường type th c nghiệm 52 3.4.2 Tác dụng ph n đo n d ch chi t t h t đậu đen ( igna cylindrica) đ n nồng đ glucose huy t lúc đ i chu t ĐTĐ 54 3.4.3 Tác dụng đ n chuyển hóa lipid h t đậu đen ( igna cylindrica) mơ hình chu t ĐTĐ type 57 K T LUẬN 60 KI N NGHỊ 61 À 62 vii NH ỤC C C ợ BMI CHCl3 HI U CH Chloroform ề ề á EtOH Ethanol EtOAc Ethylacetat HDL-c High density lipoprotein-cholesterol LDL-c Low density lipoprotein-cholesterol Met Metformin p TC TG WHO Triglycerid ổ VI T T T viii NH ỤC C C ẢNG ả 11 ả 12 ả 1: ả 22 ả 31 ả 32 ả p ả 33 ả ả 34 ẩ Â p ả W ỗ 18 25 p ả ặ 26 p ợ p 14 38 39 ẩ p 42 ổ p Vigna cylindrica) 43 ả ả ả p ợ ) ằ ả ỡ p p ả á 46 ữ 47 ợ ề ả 44 p 50 tiêm STZ 53 ả 10 ả 21 ả 11 ề p ằ p p ề 55 p E 58 ix NH 21 ỤC C C H NH ả Vigna cylindrica 24 22 Z p áp Hình 2.3: β 31 ụ ả 31 33 p ợp Vigna cylindrica) 37 32 ồở 33 p Hình 3.4, 41 ẩ 43 5, Hình 3.6, p p Hình 3.8, ề hau vòng 9, 45 ợ ỡ 7, ễ 41 .46 ữ 48 ợ p 51 STZ 53 10, ả 21 11 ề ằ ề p p ằ p 56 p E 58 51 K t th hi n bi hình 3.8, Hình 3.8 Biểu đờ so s nh trọng lượng lô chuột o ph trước s u điều trị ả 38 38 21 : ề p ề ĩ 6,83% p p ợ ả ề 15 68 h 78 p>0,05) Ở 85 ợ 65 21 97% ề ả Ở 29 2%) p chloroform p 14 43%) p ả n-hexa p E 22,41%, 17,85%, 20,05% ả hợp ữ chloroform ả ợ ụ p 52 ết tạo mô h nh chuột ĐTĐ thực nghiệm sử dụng chuột ĐTĐ để 3.4 đ nh gi t c dụng hạ đường hu ết t c dụng đến chu ển hó lipid củ hạt đ u đen (Vigna cylindrica) 3.4.1 K t t o ìn c u t t áo ờn type t ực n iệ ề p p ả β ả ỳ Z ỵ Z ụ p ỷ ặ p ò p p ề ề Z ề ặ ặ ề Z ợp p p Z ề p ặp STZ (Streptozotocin) có tên hóa h c là: 2-deoxy-2-(3-metyl-3ợc phân l p nitrosoureido)-D- glucopyranose p á tiêu u t tính ch Z ợp p p ỷ ỷ ả , p p β β 1960 u tiên v ) β ỵ ặ ả [19], [20] ả p 2: Z 2008) p 2ở ợ 200 – 250 ặp Z ề p 30 ằ ò ợp / ò w p 6–8 ) ề Z ò ũ [28] W ) [31] Ở theo Swain J ằ X v ò p Z 50 / ) [13] ữ 53 p 12 ụ 4.5, ề p 0,01M, pH ợ ả ợ ả 39 ợ 110 p Z) p / ò 72 h 3.9: ảng 3.9 Nờng độ glucose hu ết lúc đói củ c c lô chuột trước s u tiêm STZ ồn Các l c u t 7,32 ± 0,52 IIII - Z 110 / ) 7,45 ± 0,69 7,62 ± 0,47 8,79 ± 0,45 8,76± 0,59 II p 7,41 ± 0,36 8,43 ± 0,46 Z (110mg/ kg) p p ol/l) 72 ờ lucose uy t IV - 22,35 ± 0,39 p< 0,05 p Z Z H nh 3.9 Nồng độ glucose hu ết củ c c lô chuột trước s u tiêm STZ 54 ảở ả 39 39 ằ ổ ẩ ề ề tiêm STZ ề ợ ợ p 8,76 glucose Z 22,35 mmol/l) : p p ỡ ả 72 ỡ p ợ - p ợ ả - Z ả ỡ ợ p ợp p á ả ỗ 2006) ề ằ 18 Z ề 110 Z ề / [7], [8], [13] ợp / p p 3.4.2 Tác d n c cylindrica) ồ ỡ ả p ổ p ân o n d c n nồn c i t t lucose uy t lúc ói c t u en c u t ĐTĐ ) p 21 ề ụ ả i n ợ ả 10 p 10: á 55 ảng 3.10 ết nờng độ glucose hu ết lúc đói củ c c c c ph n đoạn dịch chiết từ hạt đ u đen chuột ĐTĐ s u 21 ngà điều trị Phân lô /) 14 21 7,28 16,21* 13,47* 10,29* ±3,52 ±2,16 ±2,29 ±1,22 ↓41 61 ↓55,4 19,17* 16,54* 13,91* ±3,21 ±1,43 ±1,56 ±1.29 ↓26 74 ↓38,4 18,98* 17,36* 15,62* ±4,13 ±1,63 ±1,39 ±1.18 ↓19 22 ↓27,32 18,54* 15,41* 12,79* ±3,02 ±2,05 ±1.62 ±1.39 ↓32 15 ↓43 68 19,06* 16,83* 15,38* ±3,15 ±1,52 ±1,24 ±1.53 ↓21,83 ↓28,56 22,04 19,63* 17,72* 16,58* ±2,37 ±1,21 ±0,94 ±0,82 ↓10,93 p