Đang tải... (xem toàn văn)
Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây Phân lập streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh hà tây
Bộ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI SINH VIÊN: Lê Thị Hưởng PHÂN LẬP STREPTOMYCES có KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP KHÁNG SINH TỪ CÁC MẪU ĐẤT THUỘC TỈNH HÀ TÂY ■ KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ KHOÁ 1997-2002 Người hướng dẫn: Cử nhân Nguyễn Lệ Phi Thạc sỹ Phạm Thu Nga Nơi thực hiện: Bộ môn Vi sinh-sinh học Thời gian thực hiện: 0210312002 - 2010512002 HÀ NỘI 06-2002 - ■ T ĩC O-' Lời cảm ơn! Trong quá trình học tập tại trường Đại Học Dược Hà Nội, tôi đã nhận được sự dạy dỗ chỉ bảo ân cần của các thầy, cô và sự giúp đỡ của các phòng ban chức năng trong nhà trường. Nhờ có sự hướng dẫn giúp đỡ tận tình của Cử nhân Nguyễn Lệ Phi, Tiến Sỹ Chu Thị Lộc, Thạc Sỹ Phạm Thu Nga, Kỹ Thuật Viên Bùi Thị Xuyến, Kỹ Thuật Viên Nguyễn Thị Vân Sơn - Bộ môn Vi sinh - Sinh học, tôi đã hoàn thành khoá luận tốt nghiệp trong thời gian quy định. Tôi xin bày tỏ lòng biết 0fn sâu sắc tới tất cả các thầy, cô trong nhà trường và đặc biệt là các thầy cô trong Bộ môn Vi sinh - Sinh học về sự giúp đỡ quý báu này. Hà Nội ngày 28 tháng 05 năm 2002 Sinh viên: Lê Thị Hưởng MỤC LỤC Trans 7 ĐẶT VẤN Đ Ề 1 PHẦN 1. TỔNG Q U A N 1.1. Đại cương về chi Streptomyces 2 1.1 .1. Đặc điểm sinh thái 2 1.1.2. Đặc tính hình thái . . 2 1.1.3. Đặc điểm nuôi cấy 3 1.1.4. Đặc tính sinh lý sinh sinh hoá 4 1.1.5. Sự tạo kháng sinh của Streptomyces 4 ì2.Ỹ\iấĩ\\oọ.ì Streptomyces 5 1.2.1. Khoá phân loại xạ khuẩn đối kháng theo Gauze 1957 6 1.2.2. Khoá phân loại Waksman 1961 6 1.2.3. Khoá phân loại Krassilnicov 1970 7 1.2.4. Khoá phân loại ISP 1972 7 PHẦN 2. THựC NGHỆM VÀ KẾT Q U Ả 8 2.1. Nguyên liệu và phương pháp thực nghiệm 8 2.1.1. Nguyên liệu 8 2.1.2. Phưcỉng pháp thực nghiệm 9 2.2. Kết quả thực nghiệm và nhận x ét 19 2.2.1. Phân lập Ẵíre/ítomyceí và thử hoạt tính kháng sin h 19 2.2.2. Chọn môi trường sinh tổng hợp kháng sinh thích hợp cho các chủng nghiên cứu .19 2.2.3. Xác định tên các chủng ức chế nấm m ạnh 21 PHẦN 3. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT : .29 TÀĨ LỆƯ THA.VI KHẢO ĐẬT VẤN ĐỂ Xạ khuẩn là nhóm vi sinh vật phân bố rộng rãi ữong tự nhiên. Người ta đã nghiên cứu và ứng dụng các đặc tính đáng quí của nó trong nhiều lĩnh vực như nông nghiệp, công nghệ thực phẩm Trong ngành Y-Dược, xạ khuẩn được biết đến chủ yếu vói vai trò là nguồn sinh tổng hợp kháng sinh tự nhiên và một số sản phẩm chuyển hoá khác như vitamin, enzym Streptomyces, một chi thuộc bộ Actinomycetales, là những vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp nhiều kháng sinh thuộc các nhóm khác nhau như streptomycin, erythromycin, cloramphenicol Hiện nay, việc nghiên cứu tìm ra các kháng sinh mới nói chung và các kháng sinh chống nấm nói riêng đang được thế giói quan tâm. Do đó, để góp phần nghiên cứu xác đinh tên và đánh giá khả năng sinh tổng hợp kháns sinh của các loài Streptomyces có ở Việt Nam, chúng tôi đã tiến hành đề tà i: ” Phân lập Streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh Hà Tây”. Mục tiêu của đề tài: 1. Phân lập Streptomyces từ các mẫu đất thuộc tỉnh Hà Tây và thử khả năng sinh tổng hợp kháng sinh của các chủng này. 2. Sơ bộ tìm môi trưòíng nuôi cấy thích hợp cho sự phát triển và sinh tổng hợp kháng sùứi của các chủng nghiên cứu, trong điều kiện cho phép. 3. Phân loại một số chủng có tác dụng ức chế nấm txên cơ sở các khoá phân loại phổ biến. PHẦN 1. TỔNG QƯAN 1.1. Đại cương về chi Streptomyces 1.1.1. Đặc điểm sinh thái [3, 4, 5,16,18] Streptomvces là một chi thuộc họ Streptomỵcetaceae, bộ Actinomycemles, lớp Actinomvcetes. Xạ khuẩn nói chung và Streptomyces nói riêng phàn bố rất rộng rãi trong tự nhiên và thường có nhiều trong đất, nước, bùn ao và trong các cơ chất hữu cơ khác, thậm chí ngay cả trên các cơ chất mà nấm mốc và vi khuẩn không thể phát triển được. Điều đó cho thấy nhu cầu về chất dinh dưỡng cùa xạ khuẩn là tương đối đơn giản và chúng thích nghi với nhiều điều kiện sống khác nhau. Trong đất, xạ khuẩn chiếm tỷ lệ rất lớn, có hàng triệu xạ khuẩn trong một gam đất. Phần lớn các xạ khuẩn sống hoại sinh và hiếu khí, một số ít kị khí hoặc vi hiếu khí có thể gây ra các bệnh cho người, cho động vật và cho cây trồng. 1.1.2. Đặc điểm hình thái [3, 4, 5,16,18] Đặc tính hình thái là những dấu hiệu quan trọng để xác định loài Atinomycetes. Streptomvces là nhóm vi sinh vật có nhiều đặc điểm hình thái khác với vi khuẩn và nấm . Hệ sợi hay còn gọi là khuẩn ti chia thành hai loại là khuẩn ty khí sinh và khuẩn ty cơ chất (khuẩn ty địa sinh), đưòíng kính của khuẩn ty thay đổi từ 0,2 - 1,0 |J. đến 2-3 |J. , đa số không có vách ngăn và không tự đứt đoạn. Hệ sợi phân nhánh đa dạng và có mầu sắc phong phú: trắng, vàng, da cam, tím, đỏ. nâu, xám Cuống sinh hào tử, sau một thời gian phát triển, trên đỉnh khuẩn ty khí sinh sẽ xuất hiện các sợi mang bào tử (cuống sinh bào tử). Hình thái cuống sinh bào tử là dấu hiệu quan trọng để phân loại xạ khuẩn, chúng có thể có dạng thẳng (straight), xoắn (spiral), sóng (wave) có thể mọc vòng quanh một trục theo kiểu đơn hoặc kép. Bào tử được hình thành bên trong một lớp màng có cấu trúc sợi, do đó một số trường hợp vẫn quan sát được lớp màng này do nó không bị mất đi khi bào tử hình thành. Số lượng hào tử trong một chuỗi thường trên 50 bào tử nhưng cũng có khi chỉ có từ 5 đến 10 bào tử tạo thành một đoạn thẳng. Bào tử cũng có nhiều dạng như hình cầu, hình chữ nhật, hình que, hình oval, hình ống Bể mặt bào tử có thể quan sát thấy một trong bốn dạng nhẵn (smooth), có gai (spiny), có bướu (warty) hoặc có lông (hair-like). Thành tế hào của chi Streptomyces thuộc kiểu I, thành phần chính gồm acid L, L - 2, 6 diaminopimelic, giycin, acid glutamic và alanin, không có hoặc có rất ít đường pentose, đa số Streptomyces là các tế bào Gram dương. Khuẩn lạc của Strepromỵces rất đặc biệt, nó không trơn ướt như khuẩn lạc vi khuẩn mà thô ráp, xù xì, có thể có dạng phấn, nhung có các nếp toả ra theo hình phóng xạ (vì thế có tên là xạ khuẩn). Streptomyces cũng không làm vẩn đục môi trường lỏng như vi khuẩn mà mọc thành một lớp màng trên bề mặt hoặc lắng ở đáv bình thành đám như những sợi bông. 1.1.3. Đặc điểm nuòi cấy [5, 6,16,18] Nhiều tác giả đã coi các đặc tính nuôi cấy như là dấu hiệu quan trọng để xác định loài Streptomyces. Đó là các đặc điểm như màu sắc khuẩn ty khí sinh, cơ chất và dạng khuẩn tv khí sinh (dạng nhung, dạng phấn ), sự tạo thành các giọt nước trên bề mặt khuẩn ty khí sinh, sắc tố hoà tan trong các môi trưòíng nuôi cấy. Sắc tố hoà tan cũn2 có nhiều loại: nâu, vàng, tím, đỏ, xanh da tròd, xanh lục Người ta lại chia sác tố hòa tan làm hai loại di truyền và không di truyền, nếu là sắc tố di truyền thì không thay đổi sau 30 ngày nuôi cấy, ngược lại sắc tố không di truyền thì thay đổi theo điều kiện và thời gian nuôi cấy: pH, nhiệt độ, thời gian nên lúc có màu lúc không màu. 1.1.4. Đặc điểm sinh lý, sinh hoá [5,16,18] Nhiệt độ ứiích hợp cho sự sinh trưcmg và phát tiiển của Streptomyces là 25 - 30° c, pH trung tính, ở giá trị pH 5,0 có rất ít bào tử phát triển. Bào tử Streptomyces bị tiêu diệt ở nhiệt độ 70° c trong 10 phút. Khả năng chịu muối, sống trong điều kiện khô tuỳ thuộc vào từng loài. Nhiều tác giả cho rằng các đặc tính sinh lý, sinh hoá không phải là dấu hiệu quan trọng để phân ioại Streptomyces. Tuy nhiên khi mô tả một loài Streptomyces cần đề cập tới vấn đề này bởi vì nó đánh giá được túứi chất sinh học của loài đó. Hơn nữa, những đặc tính này tuy không ổn đinh nhưng không thể không dùng tói nó khi xác định các loài có cùng các đặc túih khác (nuôi cấy, hình thái ) giống nhau. Tuỳ theo loài Streptomyces có các đặc tính sinh hoá như : • Dịch hoá gelatin • Làm đông vón và pepton hoá sữa • Thuỷ phân tinh bột • Đồng hoá các nguồn carbon khác nhau • Thuỷ phân cellulose • Khử niừat • Sự hình thành sắc tố melanin • Sinh HjS 1.1.5. Sự tạo thành kháng sinh của Streptomyces [2,8,9,12,17] Chi Streptomyces có khả năng sinh tổng hợp nhiều chất kháng sinh thuộc các nhóm khác nhau như: các aminoglycosid, phenicol, các tetracyclin, các macrolid, rifamycin và các kháng sinh chống nấm. Nhưng do độc tính của chúng nên chỉ có rất ít txong số đó được sử dụng trong điều trị cho con người. Những chủng khác nhau của một ỉoài có thể sinh tổng hợp những kháng sinh khác nhau, chẳng hạn s. griseus có thể cho các chất streptomycin, cycloheximid, streptocin hay s. /radiae có thể cho neomycin, íradicin. Có những loài có thể cho vài chất kháng sinh tương tự nhau ví như các viomycin A, B, c của loài s. vinaceus. Tuy nhiên, cùng một chủng ưong ĩihững điều kiện sinh tổng hợp khác nhau có thể cho những chất khác nhau điển hình là các actinomycin. Nói chung các Streptomyces đều kháng các kháng sinh do chúng tạo ra. Bảng 1. Một số kháng sinh có nguồn gốc từ Streptomyces. S'1'1' Tên kháng sinh Nhóm Nguồn gốc 1 Streptomycin Aminoglycosid s. griseus 2 Kanamycin Aminoglycosid s. kanamyceus 3 Tobramycin Aminoglycosid s. tenebrarius 4 Neomycm Aminoglycosid s.fradiae 5 Cloramphenicol Phenicol s. venezuelae 6 Tetracyclin Tetracyclin s. viridifaciens 7 Oxytetracyclin Tetracyclin s. rimosus 8 Erythromycin Macrolid s. erythreus và S.sp khác 9 Rifampicin Rifamicin s. mediterranei 10 Lincomycin Lincosamid s. ỉincolnensis 11 Nystatin Kháng sinh chống nấm s. noursei và s. griseus 12 Amphotericin Kháng sinh chống nấm s. nodosus 1.2. Phân loại Streptomyces [5,11,13,14,15,16,18,19] Streptomyces là vi sinh vật đã được nghiên cứu rất nhiều về phân loại cũng như khả năng sinh tổng hợp kháng sinh của chúng. Hàng triệu chủng đã được phân lập ở các phòng thí nghiệm ữên khắp thế giói, và số chủng được xác định tên đã lên tód trên 600 chủng. Khi nghiên cứu một chủng xạ khuẩn cho kháng sinh, bên cạnh việc phân lập chủng, giữ chủng, tìm điều kiện lên men thích hợp, chiết xuất và xác định thành phần kháng sinh, việc xác định chủng giống là một khâu quan trọng Việc phân loại xạ khuẩn nói chung wkStreptomyces nói riêng là một vấn đề khá phức tạp. Ngàv nay, cùng với sự phát triển của công nghệ sinh học, các phương pháp tiên tiến đã được ứng dụng trong phân loại xạ khuẩn. Tuy nhiên, không phải nơi nào cũng có điều kiện để sử dụng các phưoíng pháp hiện đại, do đó một số phương pháp cổ điển vẫn được dùng. Các phương pháp phân loại cổ điển thường dựa trên đặc điểm nuôi cấy, hình thái, sinh lý sinh hoá, khả năng ức chế vi sinh vật kiểm định và điều kiện sinh thái. Sau đây là một số khoá phân loại phổ biến : 1.2.1. Khoá phân loại xạ khuẩn đối kháng theo Gauze 1957 [5] Khoá phân loại này chủ yếu dựa vào màu sắc của hệ khuẩn ty khí sinh và cơ chất khi nuôi cấy trên hai môi trưcmg có ngiổn nitrat vô cơ và hữu cơ. Theo đó, xạ khuẩn {Actinomyces) đối kháng được chia thành 15 nhóm (seris- một vị trí trung gian giữa loài và giống). 1.2.2. Khoá phân loại Waksman 1961 [5] Khoá này đã mô tả 252 loài Streptomyces dựa trên các tính chất: • Kích thước, hình dạng và cấu tạo bề mặt của bào tử, hình thái cuống sinh bào tử, màu sắc khuẩn ty khí sinh, khuẩn ty cơ chất. • Sự thay đổi màu sắc môi trường khi xạ khuẩn phát triển. • Sự hình thành sắc tố đen (melanin) trên môi tatờng có protid. • Sự hình thành sắc tố hoà tan trên môi trường tổng hợp, một số tính chất sinh hoá, đặc biệt là khả năng ihuỷ phân tinh bột, thuỷ phân protid, khử nitrat, sinh H2S, sử dụng carbon và sự hình thành các chất kháng sinli đặc hiệu. 1.2.3. Khoá phàn loại xạ khuẩn của Krassilnikov 1970 [5] Để xây dựng khoá phân loại này, tác giả đã dùng các đặc tính sau đây: • Đặc tính hình thái: Hình dạng và kích thước của bào tử, cuống sinh bào tử, cách hình thành bào tử và cấu tiTJC màng bào tử. • Đặc tính nuôi cấy: Hình dạng và cấu tạo của khuẩn lạc, màu sắc khuẩn ty khí sinh và môi ti-ường, các sắc tố tiết ra môi trường. • Hoạt tính men của xạ khuẩn: Khả năng hình thành các men phân huỷ protid, cellulose, men khử nitrat và các men khác như catalase, urease • Khả năng đồng hoá các chất dinh dưỡng: Nguồn carbon (glucose, mannitol ), nitơ từ các nguồn khác nhau (muối amon, nitrat ) • Khả năng tạo các sản phẩm trao đổi chất, chủ yếu là chất kháng sinh. Toàn bộ lớp xạ khuẩn {Actinomycetes) được Ki-assilnikov chia ra làm hai lớp phụ, 6 họ và 26 giống, Streptomyces thuộc giống Actinomyces. Giống Actinomyces lại được chia làm 16 nhóm dựa trên màu sắc hệ sợi, sắc tố hoà tan và hình thái cuống sinh bào tử. 1.2.4. Khoá phân loại - ISP 1972 [13,14,15] Hiên nay, khoá phân loại này được dùng rất phổ biến dựa trên các đặc điểm: • Màu sắc khuẩn ty lchí sinh, cơ chất, cuống sinh bào tử, bề mặt bào tử, số bào tử trên một chuỗi. • Sắc tố hoà tan trong môi trường hữu cơ. • Khả năng hình thành sắc tố đen (meỉanin) • Khả năng đồng hoá các nguồn carbon khác nhau (các loại đường: glucose, galactose, mannitol, inositol ). Theo khoá phân ỉoại đơn giản của Eberhard Küster [13], đã có 274 loài Streptomyces được xác định tên. [...]... tính kháng sinh, có lẽ kháng sinh do chủng S31 sinh tổng hợp không phải là các kháns sinh này vì nó có phổ tác dụng trên cả c albicans và vi khuẩn Gram(-) PHẦN 3 KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 1 Chúng tôi đã phân lập được 89 chủng Streptomyces từ các mẫu đất thuộc tỉnh Hà Tây và xác định được 52 chủng có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh, chiếm 58,42% tổng số chủng Trong 52 chủng này có: • 17 chủng ức chế Candida... tính Trường hợp không có màu đỏ xuất hiện sau khi thêm bột kẽm thể hiện sự khử nitrat của các chủng nghiên cứu đến NH3 hoặc N2 2.2 Kết quả thực nghiệm và nhận xét 2.2.1 Phân lập Streptomyces và thử hoạt tính kháng sinh Qiúng tôi đã tiến hành phân lập được 89 chủng Streptomyces từ các mẫu đất trên, ký hiệu các chủng từ SI đến S89 Phần lớn các chủng có kliuẩn ty khí sinh màu xám, một số có màu hồng,... nghiệm 2.1.1 Nguyên liệu 2.1.1.1 Các mẫu đát Các mẫu đất dùng để phân lập Streptomyces được lấy ờ một số ruộng ttồng lúa, hoa màu và đất vườn thuộc huyện Thưòng Tín, tỉnh Hà Tây 2.1.1.2 Các chủng Streptomyces đặi diện để nghiên cứu Chúng tôi đã phân lập được 89 chủng Streptomyces khác nhau Sau khi thử hoạt tính kháng khuẩn của các chủng này, chúng tôi đã chọn ra 4 chủng có tác dụng ức chế Candida albicans... vi sinh vật kiểm định trở lên, chiếm21,15% • 17 chủng ức chế nấm, chiếm 23,69% Từ kết quả trên chúng tôi đã chọn ra bốn chủng khả năng ức chế Candida albicans mạnh để nghiên cứu chọn môi trường tối ưu cho kháng súứi và xác định tên của các chủng này Đó là các chủng có kí hiệu Sl, S31, S32 và S34 2.2.2 Chọn môi trưòng sinh tổng hợp kháng sinh thích hợp cho các chủng nghiên cứu Kết quả thử khả năng sinh. .. xám, một số có màu hồng, màu trắng Tất cả các chủng này đều được thử hoạt tính kháng sinh, thể hiện qua khả năng ức chế vi sinh vật kiểm đinh được tình bày b bảng 2 Qua các số liệu trong bảng 2 ta thấy trong số 89 chủng Streptomyces phân lập được có 52 chủng có ức chế ít nhất một vi sinh vật kiểm định (VSVKĐ), chiếm 58,42% tổng số chủng phân lập được Trong đó có: • 7 chủng chỉ ức chế vi khuẩn Gram âm,... (MT5) Bảng 3 Khả năng sinh tổng hợp kháng sinh của chủng Sl, S31, S32, S34 (Biểu thị bằng đường kính vòng ức chế vi sinh vật kiểm định c albicans) Đường kính vòng ức chế vsvkđ (mm) Môi trường SI S31 S32 S34 MTl 2 L2 23,5 22,5 2 0 ,0 MT2 14,2 18,5 20,3 2 0 ,6 MT3 17,2 17,2 14,0 21,3 MT4 13,7 14,0 15,6 26,3 MT5 19,4 16,0 16,0 28,8 Ả nhl Khả năng sinh tổng hợp kháng sinh của chủng S34 trên các môi tìxròíng... Phương pháp thực nghiệm 2.1.2.1 Phương pháp lây mẫu đất Để phân lập các chủng Streptomyces chúng tôi đã tiến hành lấy các mẫu đất ruộng và đất vưcm ở độ sâu cách từ 5 km đến 10 1 0 -2 0 cm, tại 10 địa điểm khác nhau với khoảng km, sau đó trộn đều để phân lập chủng 2.1.2.2 Phương pháp phân XỈỊ Streptomyces Mỏi trường M Tl: Gauze I Tinh bột khoai tây 20, 0 g KọHPƠ4 v ạ o 0, 5 g N a C l ... quả thử khả năng sinh tổng hợp kháng sinh của bốn chủng Sl, S31, S32 và S34 trên các môi trường M Tl, MT2, MT3, MT4, MT5 được aình bày ở bảng 3 Từ bảng 3 chúng tôi nhận thấy môi ứường MTl thích hợp với chủng Sl, S31, S32 và môi trường MT5 thích hợp cho chủng S34 phát ttiển và sinh tổng hợp kháng sinh Đây là hai môi trường có nguồn đường và đạm đơn giản, dễ kiếm: tinh bột khoai tây, kali niữat (MTl),... dưỡng thích hợp, sau đó được làm thành nhũ dịch có khoảng 10'-10^ tế bào trong Iml với NaCl 0,9% Chúng tôi đã tiến hành thử hoạt tính kháng sinh của 89 chủng phân lập được trên môi trưòmg M Tl, sau đó bốn chủng được chọn nghiên cứu sẽ được thử tiếp trên các môi trường MTl, MT2, MT3, MT4 và MT5 để so sánh chọn môi trưÒTig thích hợp cho mỗi chủng sinh tổng hợp kháng sinh 2.I.2.4 Phương pháp nghiên cứu... chất kháng sinh vào môi trường sẽ tạo vòng ức chế vi sinh vật kiểm định có đường kmh tỷ lệ thuận với logarit nồng độ kháng sinh Các chủng Streptomyces được cấy ria trên các đĩa petri với những môi trường khác nhau Sau 5 - 7 ngàv nuôi cấy ở 28 - 3Q c, lấy ra thử tác dụng kháng P khuẩn bằng phương pháp khối thạch (Ezopob 1969) Vi sinh vật kiểm định được nuôi cấy trên môi trường dinh dưỡng thích hợp, . giá khả năng sinh tổng hợp kháns sinh của các loài Streptomyces có ở Việt Nam, chúng tôi đã tiến hành đề tà i: ” Phân lập Streptomyces có khả năng sinh tổng hợp kháng sinh từ các mẫu đất thuộc. sinh từ các mẫu đất thuộc tỉnh Hà Tây . Mục tiêu của đề tài: 1. Phân lập Streptomyces từ các mẫu đất thuộc tỉnh Hà Tây và thử khả năng sinh tổng hợp kháng sinh của các chủng này. 2. Sơ bộ tìm. Bộ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI SINH VIÊN: Lê Thị Hưởng PHÂN LẬP STREPTOMYCES có KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP KHÁNG SINH TỪ CÁC MẪU ĐẤT THUỘC TỈNH HÀ TÂY ■ KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ