Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp HPLC
BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI • • • • NGUYỄN THỊ HANH NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG CETIRIZIN TRONG CHẾ PHẨM RẮN PHÂN LIÈU BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC (KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ ĐẠI HỌC KHOÁ 2002- 2 />' \ ' ' f ị' »■ \ — ỉ ĩ \ % t Ằ V:v -< M .i Người hướng dẫn : TS Đoàn Cao Sơn TS Nguyễn Hải Nam Nơi thực hiện : Khoa KN các dạng bào chế - VKN Thời gian thực hiện : 9/2006 đến 5/2007 Hà nội, tháng 5/2007 LỜI CẢM ƠN Khóa luận này được thực hiện và hoàn thành tại khoa kiểm nghiệm các dạng bào chế - Viện kiểm nghiệm thuốc TW và bộ môn Hóa Dược trường Đại học Dược Hà Nội. Trong quá trình thực hiện khóa luận tốt nghiệp tôi đã nhận được sự giúp đỡ tận tình của các thầy hướng dẫn, các giảng viên của bộ môn Hóa dược và các cán bộ khoa KNCDBC - Viện KNTTW. Tôi xin được bày tỏ lời cảm ơn chân thành sâu sắc tớ i: - Tiến sĩ Đoàn Cao Sơn -Trưởng Khoa kiểm nghiệm các dạng bào chế Viện kiểm nghiệm - Bộ Y tế. - Tiến sĩ Nguyễn Hải Nam - Bộ môn Hóa Dược - Trường Đại học Dược Hà nội. - Thạc sĩ Nguyễn Thị Thanh Thảo - Cán bộ khoa kiểm nghiệm các dạng bào chế-Viện KNTTW. Là những người thầy trực tiếp hướng dẫn, dìu dắt chỉ bảo tôi những ý kiến quý báu trong suốt quá trình thực hiện khóa luận. Tôi xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ của các thầy cô các kĩ thuật viên bộ môn Hóa Dược, các cán bộ khoa KNCDBC - Viện KNTTW đã tạo điều kiện tốt • 7 • • • • nhất để tôi hoàn thành khóa luận này. Tôi xin chân thành cảm ơn sự quan tâm của ban Giám hiệu, phòng đào tạo và các thầy cô đã truyền đạt kiến thức cho tôi trong suốt thòi gian ngồi trên ghế nhà trường. Tôi vô cùng biết ơn gia đình, bạn bè, và những người luôn sát cánh bên tôi động viên và giúp đỡ tôi trong học tập cũng như trong cuộc sống. Nguyễn Thị Hạnh A1K57 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 1 PHẦN 1. TỔNG QUAN 3 1.1. TỔNG QUAN VỀ CETIRIZIN 3 1.1.1. Công thức cấu tạo 3 1.1.2. Tính chất 3 1.1.3. Tác dụng dược lỷ 4 1.1.4. Tác dụng không mong muốn 4 1.1.5. Chỉ định 4 1.1.6. Một sổ chế phẩm 5 1.1.7. Các phương pháp định lượng . 5 1.2. T ỔNG QUAN VÈ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 6 1.2.1. Khái niệm sắc kỷ và sắc kỷ lỏng hiệu năng cao (HPLC) . 6 1.2.2. Nguyên tắc của quả trình sắc kỷ 7 1.2.3. Cơ sở lý thưyết sắc kỷ . 8 1.2.4. Nguyên tắc cấu tạo của hệ thống HPLC . 9 1.2.5. Các thông sổ đặc trưng của quá trình sắc kỷ và các yếu tố ảnh hưởng 10 1.2.6. Cơ sở lý thuyết của việc lựa chọn điều kiện sắc kỷ . . 14 1.2.7. ứng dụng của HPLC . 18 PHẦN 2. ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP, NỘI DUNG, VÀ PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 21 2.1. Đ ỐI TƯỢNG NGHIÊN c ứ u 21 2.2. PHƯƠNG TIỆN, DỤNG cụ , HÓA CHẤT 21 2.2.1. Hóa chất . . . 21 2.2.2. Thiết bị, dụng cụ 22 2.3. NỘI DUNG 22 2.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 23 2.4.1. Các thông sổ thống kê đặc trưng để xử lý kết quả nghiên cứu 23 2.4.2. Cách đánh giá kết quả 23 PHẦN 3. THỰC NGHIỆM VÀ KÉT QUẢ . 25 3.1. XÂY DựNG ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ ĐÊ ĐỊNH LƯỢNG CETIRIZIN TRONG CHẾ PHẨM 25 3.1.1. Nghiên cứu lựa chọn sắc kỷ 25 3.1.2. Khảo sát tỉnh thích hợp của hệ thống sắc kỷ 30 3.1.3. Khảo sát độ tuyến tỉnh của phương pháp 31 3.1.4. Khảo sát độ lặp lại của phương pháp . 33 3.1.5. Khảo sát độ đủng của phương pháp: 36 3.2. ỨNG DỤNG ĐỊNH LƯỢNG CETIRIZIN TRONG CHẾ PHẨM 40 3.3. BÀN LUẬN VỀ KẾT QUẢ 42 KÉT LUẬN 44 Chú giải chữ viết tắt HPLC : High Performance liquid chromatography ACN : Acetonitril MeOH : Methanol mg : miptgam ml : mipilit |J,1 : microlit |im : micromet g : gam KNCDBC : Kiểm nghiệm các dạng bào chế KNTTW : Kiểm nghiệm thuốc Trung ương ĐẶT VẤN ĐÈ Dị ứng là tình trạng tổn thương và rối loạn bệnh lý điển hình thể hiện phản ứng miễn dịch của cơ thể với các dị nguyên. Nhưng con người sống trong môi trường và luôn phải chịu tác động yếu tố ngoại cảnh vì vậy dị ứng rất dễ xảy ra, có thể xảy ra với mọi đối tượng khác nhau. Để điều trị các rối loạn trên một nhóm thuốc kháng histamin ra đời với tác dụng kháng histamin trên thụ thể Hi. Nhưng các thuốc trước đây khi sử dụng luôn gây khó khăn cho con người trong công việc và sinh hoạt do tác dụng phụ gây buồn ngủ, cùng việc sử dụng liều nhiều lần trong ngày. Kháng histamin thế hệ 2 ra đời là một giải pháp hữu hiệu khắc phục nhược điểm trên nên kháng histamin thế hệ 2 nhanh chóng được sử dụng rộng rãi và phổ biến trong đó điển hình có cetirizin [1,8]. Cetirizin là kháng histamin có tác dụng mạnh, kéo dài, chọn lọc trên thụ thể Hi- Hiện nay trên thị trường dược phẩm trong nước và nước ngoài có hàng ngàn chế phẩm cetirizin được sản xuất. Chính vì vậy việc đảm bảo chất lượng cho rất nhiều chế phẩm của một thuốc như vậy là vấn đề đáng được quan tâm. Các dược điển European 4th, BP 2005 [9, 10] mới chỉ có chuyên luận kiểm tra cetirizin dạng nguyên liệu mà chưa có chuyên luận kiểm tra chất lượng các dạng chế phẩm của cetirizin. Vì vậy xây dựng một phương pháp định lượng có thể dùng cho cả dạng nguyên liệu và viên nén một cách chính thống là hết sức cần thiết. Trong lĩnh vực kiểm nghiệm thuốc, với sự phát triển vượt bậc của khoa học kĩ thuật, đã có nhiều thành tựu mới được đưa vào ứng dụng đem lại cho chúng ta những phương pháp kiểm nghiệm nhanh, đạt độ chính xác cao. Một trong những phương pháp đó là sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Phương pháp này đã được nghiên cứu và ứng dụng để định tính và định lượng có kết quả nhiều hoạt chất trong đa dạng các loại chế phẩm. 1 Từ các cơ sở trên chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “ Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) ” với các mục tiêu cụ thể sau: - Nghiên cứu xây dựng, thẩm định phương pháp định lượng cetirizin bằng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao, đóng góp cho ngành Dược một phương pháp kiểm nghiệm cetirizin có tính đăc hiệu, độ chính xác cao, độ đúng cao. - Áp dụng phương pháp đã xây dựng để định lượng nhanh và chính xác một số chế phẩm rắn phân liều có chứa cetirizin đang lưu hành trên thị trường Việt Nam. 2 PHẦN 1. TÒNG QUAN 1.1. TỔNG QUAN VÈ CETIRIZIN [ 8, 13, 14, 15] 1.1.1. Công thức cấu tạo _ , Mô phỏng cấu tạo của cetirizin Công thức cấu tạo cetirizin. Công thức phân tử : C18H25CIN2O3 Khối lượng phân tử: 461,82 Tên khoa học: acid (RS)-2-[2[4[(4-Clorophenyl)phenylmethyl]piperazin- 1-yl] ethoxy]acetic. 1.1.2. Tính chất Cetirizin có dạng bột kết tinh màu trắng, không mùi, pKai = 2,9 tương ứng pKa cuả nhóm cacboxylic, pKa2 = 8,3 tương ứng pKa nhóm amin bậc 3. Tan tốt trong nước, đặc biệt là trong aceton và methylen clorid. Trong phân tử cetirizin có dây nối liên hợp nên có khả năng hấp thụ ánh sáng tử ngoại. Phổ hấp thụ của dung dịch 20 Ịig/ml trong dung dịch acid hydrochloric R (10,3 g/1) trong giới hạn quét phổ từ 210 nm đến 350 nm có cực 3 đại hấp thụ tại 230 nm với độ hấp thụ riêng 359-381 [9,10]. 1.1.3. Tác dụng dược lý - Tác dụng dược lực học: Cetirizin là chất thuộc nhóm dẫn chất của piperazin, là chất chuyển hoá của hydroxyzin (oxy hoá nhóm chức -OH alcol thành -COOH) có tác dụng đối kháng histamin mạnh, kéo dài và đặc biệt chọn lọc trên thụ thể Hj. Cetirzin có tác dụng an thần, gây ngủ và kháng cholinergic đều rất yếu, không kháng serotonin. Cetirizin ức chế giai đoạn sớm của phản ứng dị ứng qua trung gian histamin và cũng làm giảm sự di dời của các tế bào viêm. Giảm giải phóng các chất trung gian ở giai đoạn muộn của phản ứng dị ứng. Chất này có tác dụng bảo vệ dưỡng bào, giảm đáng kể đáp ứng hen suyễn với histamin. - Tác dụng dược động học: Cetirizin sau khi uống hấp thu rất nhanh, nồng độ thuốc trong huyết tương đạt được sau 30 phút đến 60 phút. Trên nghiên cứu những người tình nguyện với 10 mg cetirizin mỗi ngày, uống trong 10 ngày nồng độ đỉnh huyết tương đạt 311 ng /ml, nửa đời huyết tương xấp xỉ 11 giờ, liên kết với protein mạnh 93 %. Thời gian bán huỷ trung bình khoảng 8,3 giờ. Thuốc chịu ảnh hưởng chuyển hoá của hệ enzym cytochrom 3A4P. Thuốc được đào thải chủ yếu qua thận khoảng 70 %, qua gan khoảng 10 %. 1.1.4. Tác dụng không mong muốn - Tác dụng không mong muốn xảy ra nhiều nhất là hiện tượng ngủ gà phụ thuộc vào liều sử dụng. - Ngoài ra thuốc có thể gây mệt mỏi, khô miệng viêm họng, chóng mặt, buồn nôn, nhức đầu. 1.1.5. Chỉ định - Cetirizin được chỉ định trong viêm mũi dị ứng dai dẳng, viêm mũi dị 4 ứng theo mùa. - Mày đay mạn tính vô căn ở người lớn và trẻ em trên 12 tuổi. Cetirizin chỉ định điều trị các dạng ngứa, ngứa kết hợp với tổn thương da. Theo nghiên cứu mới nhất của trường đại học ở Mỹ cetirizin có tác dụng làm giảm các tổn thương da ở những người điều trị prednisolon. 1.1.6. Một số chế phẩm Hiện nay chế phẩm citirizine tương đối nhiều, có thể ở dạng đơn thành phần: - ZYRTEC viên nén 10 mg - ZYRTEC dung dịch uống 1 mg/lml lọ 75 ml - ZYRTEC dung dịch uống 10 mg/ml lọ 10 ml V - Chế phẩm của hãng UCB PHARM - CETINAX viên nén 10 mg -V ( - Chế phẩm của MEDOPHARM -TENAMYD CANADA - HICET viên nén 10 mg bao phim ^ - Chế phẩm của công ty MICRO LABS LIMITED - CEZIL viên nén 10 mg bao phim A - Chế phẩm của công ty ALKEM LABS. ^ Ngoài ra cetirizin thường được kê đon với pseudoephedrin nên có ché phẩm kết hợp với pseudoephedrin - ZYRTEC-D, VILIX-D chế phẩm của ƯCB PHARM. 1.1.7. Các phương pháp định lượng [ 7, 9, 10, 11, 12] Qua các tài liệu tham khảo ta có một số phương pháp định lượng đã được đưa ra như sau: * Phương pháp chuẩn độ acid - base [9, 10] Cân chính xác lượng bột tương ứng với khoảng 0,lg cetirizin hoà tan 5 [...]... định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u - Phương pháp thực nghiệm để tìm điều kiện sắc ký cho phép phát hiện được cetirizin trong chế phẩm và tách tốt cetirizin với các pic của dung môi và tá dược, thu thập số liệu và xử lý thống kê để đánh giá kết quả - Phương pháp cụ thể: sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) 2.4.1 Các thông số thống kê đặc trưng để xử lý kết quả nghiên. .. của dung dịch chất chuẩn cetirizin trong pha động ta thu được kết quả cetirizin có độ hấp phụ lớn nhất tại bước sóng 230 nm Đây là bước sóng thích hợp để phát hiện cetirizin trong phương pháp sắc ký trên 28 Hình 3.1 Phổ hấp thụ tử ngoại của dung dịch chất chuẩn cetirizin Như vậy qua các khảo sát trên chúng tôi lựa chọn phương pháp định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều như sau: - Máy sắc... cao có ứng dụng rất lớn trong định lượng chất trong hỗn hợp và xác định giới hạn tạp chất Trong sắc ký, chất muốn phân tích được tách riêng ra khỏi hỗn hợp và được định lượng dựa vào chiều cao hay diện tích của đáp ứng pic so với chất chuẩn Một số phương pháp định lượng hay áp dụng trong kĩ thuật HPLC: - Phương pháp chuẩn ngoại: Cả hai mẫu thử và mẫu chuẩn đều được tiến 18 hành trong cùng một điều kiện... sắc ký trên đảm bảo được tính thích họp của hệ thống với việc phân tích định tính và định lượng thành phần cetirizin trong các chế phẩm rắn phân liều 3.1.3 Khảo sát độ tuyến tính của phương pháp Khảo sát sự phụ thuộc tuyến tính của diện tích pic và nồng độ chất cần định lượng trên chất chuẩn cetirizin bằng cách pha một dãy dung dịch chuẩn cetirizin có nồng độ biến thiên từ 0,01 mg/ml đến 0,5 mg/ml Khoảng... cho cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều, bao gồm: - Chọn cột sắc ký - Chọn pha động - Chọn dung môi pha mẫu - Lựa chọn bước sóng phát hiện r n n A 4 A 1 > - Tôc độ dòng - Thể tích tiêm - Cách xử lý mẫu 22 - Tiến hành xác định tính thích hợp của hệ thống sắc ký - Xác định độ tuyến tính giữa nồng độ và diện tích pic - Xác định độ lặp lại của phương pháp - Xác định độ đúng của phương pháp * ứng dụng định. .. chất chuẩn nội - Phương pháp thêm chuẩn: Phương pháp này dùng trong HPLC khi có ảnh hưởng của chất phụ hay quá trình xử lý mẫu phức tạp Mầu thử được thêm một lượng chính xác chất chuẩn Nồng độ chưa biết của mẫu thử được tính dựa trên sự chênh lệch nồng độ (lượng chất chuẩn thêm vào) và độ tăng của diện tích Với phương pháp thêm nhiều lần ta có phương pháp thêm đường chuẩn - Phương pháp chuẩn hóa diện... biệt dựa trên những đặc tính của cetirizin Chúng tôi tiến hành lựa chọn các điều kiện sắc ký như sau: * Lựa chọn cột (pha tĩnh) Do Cetirizin có các đặc điểm cấu tạo như sau: N / - Trong phân tử cetirizin có nhóm carboxylic - Dạng dược dụng ngậm 2HC1 và tan tốt trong nước - Phân tử cetirizin khá phân cực Chúng tôi quyết định lựa chọn phương pháp sắc ký mới đó là phương pháp sắc ký pha thuận có nước (Aqueous... động trong một đơn vị thời gian - tR và Vr là các đại lượng phản ánh sự phân bố của chất tan vì vậy hai đại lượng phụ thuộc tốc độ dòng, tính chất chất tan, nhiệt độ b Hê số phân bổ K Trong quá trình sắc ký luôn có sự phân bố của các chất tan giữa pha động và pha tĩnh Sự phân bố này được đặc trưng bởi cân bằng phân bố với hệ số phân bố tính theo công thức: Trong đó, c s và c m là nồng độ chất tan phân. .. côt (pha tĩnh) Pha tĩnh trong HPLC chính là chất nhồi cột để làm nhiệm vụ tách một hỗn 14 hợp chất phân tích Đó là các chất rắn, xốp kích thước hạt rất nhỏ đường kính hạt từ 3-10 Jj.m, diện tích bề mặt thường từ 50-500 m2/g Trong phương pháp định lượng cetirizin sử dụng sắc ký phân bố nên dưới đây chỉ tập trung vào lựa chọn pha tĩnh cho sắc ký phân bố Theo tài liệu mới sắc ký phân bố được chia làm ba... chuẩn - mc: Lượng chất chuẩn đã cân (mg) - C: lượng chuẩn tương ứng (%) - mv : Khối lượng trung bình viên (g) - mt : Khối lượng bột viên đem thử (g) 24 PHÀN 3 THựC NGHIỆM VÀ KÉT QUẢ 3.1 XÂY DựNG ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ ĐẺ ĐỊNH LƯỢNG CETIRIZIN • • • • TRONG CHẾ PHẨM 3.1.1 Nghiên cứu lựa chọn sắc ký Qua tham khảo tài liệu, và các điều kiện cơ sở vật chất sẵn có của khoa kiểm nghiệm các dạng bào chế - Viện kiểm . loại chế phẩm. 1 Từ các cơ sở trên chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “ Nghiên cứu định lượng cetirizin trong chế phẩm rắn phân liều bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) ” với. BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI • • • • NGUYỄN THỊ HANH NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG CETIRIZIN TRONG CHẾ PHẨM RẮN PHÂN LIÈU BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC (KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ ĐẠI HỌC KHOÁ 2002- 2 />'. trong những phương pháp đó là sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) . Phương pháp này đã được nghiên cứu và ứng dụng để định tính và định lượng có kết quả nhiều hoạt chất trong đa dạng các loại chế