\ \ Ể BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ược HÀ NỘI NGUYỄN THỊ PHƯỢNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐlỂM TH ựC VẬT, ĐẶC ĐIỂM GIẢI PHẪU VÀ TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN CỦA CÂY XUÂN HOA LÁ HOA (KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP Dược sĩ KHÓA lO O p^Ị \ . ; ị Người hướng dẫn : GS.TS. PHẠM XUÂN DS. VŨ CÔNG THỌ Nơi thực hiện : BỘ MÔN Dược HỌC c ổ TRUYỂN BỘ MÔN THựC VẬT • • • BỘ MÔN VI SINH - SINH HỌC TRƯỜNG ĐH DƯỢC HÀ NỘI 'Thời gian : 03/2007 - 05/2007 HÀ NỘI, 05/2007 jQ j i e t L ầợre4tjg, qtLể. trinh, tớuie. kiu ỳA hjỡut thnh. kho lu tt tt. t i Lun, ii^ i eh bja im. ft it& n kiờl tin h ecL eỏe. ih e- giểM^. ầợối ổitt vCe. ự- t lũn. b iỏ. n ehõ*i Ih tih óAu 1ặC li: ^ớtnt (Xjun Sinh - ch. nhim b mjn ^ e kj^ eõ trun. ^Njtũng, ^'X> n)i^ '3ễCL Qti. nS.^ Qũtq, ~ (Bờnh ỳiti ^ h^ Cj Irun (Be. Qnh jÊ nhn. tt ttũ i th. ó lee. lỡờ i tutõng. tin ằ n. g ột nlựu t Uiờn qn tỡ ỳ lớ OI tũi. Qum õ, M eng. ổin ehõn. thnh etn. tt: (ti ầợhti eh. n h iờ n i h tn ố n (7) iin h - ó itih hj^ Q^ett. n)^ '3ụ. Qới. ầợhS.'Jụeng, (Vn Mónt - (B mn. ^ha t nớie. ^ớ^n. ^'30 <T)e^ '3 Qti. ^Jiiq. lũn. th eỏe th, e gỳ^, en. bA k, th uót tựờn. ea, eỏe. bũ^ m tt: n)e. hj^ e tvnn, liiớ, ^he. i n)je., (Z linh,- ènh h^ itó ta itiu hựtt thuụn Uii giỳjfL i tt*L thnh khỏ èMn nA,. (Xjin. ent n. m. eha, ih, e- iỏụ^f hn b ó Lun. inh nhtt tỡnh em ihõtL ihn, nhộ. eha t i m l 5 nm h^ qtu t. ợo- iu kiJn thi ựut eựn. nh nhựt. hut ehờ. eL bn thn rõớ mmt. kie. i mtg. ộft ý- k iự t ea, qu ỳ t ehAtt th n h em. n 7ụ Qli 2 0 /0 5 /2 00 7 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỂ 1 PHẦN 1: TỔNG QUAN 2 1.1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CHI PSEUDERANTHEMUM 2 1.1.1. Vị trí phân loại 2 1.1.2. Đặc điểm chung của họ Ô rô - Acanthaceae 2 1.1.3. Đặc điểm chung của chi Pseuderanthemum 3 1.1.4. Các loài trong chi Pseuderanthemum 3 1.2. PHÂN BỐ SINH THÁ I 6 1.3. THÀNH PHẦN HOÁ H ỌC 7 1.4. TÁC DỤNG SINH HỌC 8 1.4.1. Tác dụng kháng khuẩn và Iháng nấm 8 1.4.2. Hoạt tính thuỷ phân Protein (Proteinase) 9 1.4.3. Tác dụng ức chế MAO 9 1.4.4. Tác dụng bảo vệ gan 9 1.4.5. Độc tính 10 1.5. CÔNG DỤNG 10 PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ 12 2.1. NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP THựC NGHIỆM 12 2.1.1. Nguyên vật liệu 12 2.1.2. Phương pháp thực nghiệm 13 2.2. KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT 14 2.2.1. Nghiên cứu về thực vật 14 2.2.2. Thăm dò tác dụng kháng khuẩn trên invitro 24 2.3. BÀN LUẬN 31 2.3.1. Về các kết quả nghiên cứu thực vật 31 2.3.2. Mối quan hệ giữa tác dụng kháng khuẩn và kinh nghiệm sử dụng XHLH trong dân gian 32 PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 33 3.1. KẾT LUẬN 33 3.1.1. Về kết quả nghiên cứu thực vật 33 3.1.2. Về tác dụng kháng khuẩn trên invitro 33 3.2. ĐỂ XUẤT 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO. PHU LUC. DANH MỤC CÁC HÌNH. 1. Hình 1: Dược liệu XHLH 12 2. Hình 2: Ảnh hình thai thực vật 16 3. Hình 3: Cấu tạo chi tiết cuống lá XHLH 17 4. Hình 4: Cấu tạo chi tiết lá XHLH 19 5. Hình 5: Cấu tạo chi tiết thân XHLH 21 6. Hình 6: Cấu tạo chi tiết rễ XHLH 21 7. Hình 7: Đặc điểm bột phần trên mặt đất XHLH 22 8. Hình 8: Đặc điểm bột lá XHLH 23 9. Hình 9: Một số hình ảnh vòng vô khuẩn điển hình 31 DANH MỤC CÁC BẢNG. 1. Bảng 1: Đường kính vòng vô khuẩn của chế phẩm thử XHLH 29 CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT BPeG Benzathin Penicillin G ĐH Đại học ĐHQGHN Đại học quốc gia Hà Nội Ge Gentamicin MNC Mẫu nghiên cứu NXB Nhà xuất bản vsv Vi sinh vật VK Vi khuẩn XHLH Xuân hoa lá hoa ĐẶT VẤN ĐỂ Nước ta nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, có hệ sinh thái thực vật đa dạng và phong phú. Đó là nguồn tài nguyên vô cùng quý giá của nhân dân ta. Nguồn tài nguyên này đã và đang được các cộng đồng thuộc 54 dân tộc khác nhau sử dụng trong chăm sóc sức khoẻ chữa trị bệnh tật cũng như phục vụ các nhu cầu kinh tế khác. Tuy nhiên, có nhiều loại cây thuốc còn dùng trong phạm vi kinh nghiệm dân gian, lưu truyền từ đời này qua đời khác. Vì vậy việc nghiên cứu các cây thuốc này một cách khoa học nhằm làm sáng tỏ kinh nghiệm dân gian, đẩy mạnh việc khai thác, trồng và sử dụng, nâng cao tính an toàn, hiệu quả điều trị là một vấn đề cần thiết. Bệnh nhiễm khuẩn là một bệnh khá phổ biến và hiện nay đang phát triển mạnh. Đặc biệt điều kiện khí hậu của nước ta nóng ẩm rất thích hợp cho sự phát triển của vi khuẩn. Thuốc Y học cổ truyền có những đóng góp đáng kể vào việc trị các bệnh nhiễm khuẩn nói chung. Do đó việc phát hiện các cây thuốc trong dân gian để điều trị bệnh này là một vấn đề đáng được quan tâm. Cây Xuân hoa lá hoã(Pseuderanthemum bracteatum Imlay, họ Ô rô - Acanthaceae) là một cây thuốc được sử dụng trong phạm vi dân gian với các tác dụng chữa viêm đại tràng, trĩ xuất huyết, chữa đầy hơi chướng bụng vói các tên địa phương khác nhau như: Hoàn ngọc đỏ, Hồng ngọc .Nhưng những tài liệu nghiên cứu về cây thuốc này cho đến nay rất khiêm tốn. Do vậy chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “ Nghiên cứu đặc điểm thực vật, đặc điểm giải phẫu và tác dụng kháng khuẩn của cây Xuân hoa lá hoa” Trong khuôn khổ của khoá luận này, chúng tôi nghiên cứu một số nội dung sau: - Nghiên cứu đặc điểm thực vật của cây Xuân hoa lá hoa, trên cơ sở đó góp phần làm rõ tên khoa học của vị thuốc Xuân hoa lá hoa. - Nghiên cứu về đặc điểm giải phẫu của cây Xuân hoa lá hoa. - Sơ bộ nghiên cứu tính kháng khuẩn của cây Xuân hoa lá hoa. PHẦN 1: TỔ N G QUAN 1.1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT c m PSEUDERANTHEMUM 1.1.1. Vị trí phân loại [9], [16], [36] Theo các tài liệu phân loại về thực vật, chi Pseuderanthemum có vị trí phân loại như sau: Giứi Thực vật (Plantae) Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) Hiân ngành Ngọc lan (Magnoliophytina) Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida) Hiân lớp Hoa môi (Lamiidae) Bộ Hoa mõm chó (Scrophulariales) HọÔrô (Acanthaceae) Qứ Pseuderanứiemum 1.1.2. Đặc điểm chung của họ Ô rô- Acanthaceae Juss [9], [15], [16], [20], [35] Cây cỏ nhiều năm, cây nửa bụi hoặc bụi, ít khi là cây gỗ. Lá đơn nguyên mọc đối, không có lá kèm. Hoa mọc liêng lẻ hoặc mọc thành cụm hoa xim hoặc chùm ở kẽ lá hay ở ngọn. Hoa lưỡng tính, đối xứng hai bên, có lá bắc và thưòng có cả lá con. Đài 4-5 tìiuỳ, hai môi. Tràng 5, dứủi nhau, thường chia làm 2 môi, môi trên đôi khi không phát triển. Nhị 4-2, đính vào ống tràng, đôi khi có nhị lép. Đĩa mật hình vòng hoặc tuyến rời. Bộ nhụy gồm 2 lá noãn, tạo ứiành bầu trên, hai ô, mỗi ô có hai hoặc nhiều noãn đảo, một vòi hạt ở mỗi ô. Mỗi hạt có cuống do cán lá noãn hoá gỗ, tác dụng như một cái lò xo để tung hạt đi. Hạt tìiường có phôi lớn và không có nội nhũ. Đặc điểm giải phẫu: ừong ửiân và lá của nhiều loài có nhiều túi đá (nang thạch). Một số ít loài có libe quanh tủy. 1.1.3. Đặc điểm chung của chi Pseuderanthemum [35], [36] Cây thảo hoặc nhỡ. Lá mọc đối. Hoa mọc riêng lẻ hoặc mọc thành cụm đơn, không cuống hoặc cuống ngắn. Hoa đơn hoặc lưỡng tính mọc ở nách lá bắc nhỏ đối xứng bỏi trục hoa. Đài 5 lá đài rời hoặc gần rời. Tràng hình ống dài, hẹp có khi mở rộng xuống phía dưới, chia 5 thuỳ. Nhị thường 2, chỉ nhị ngắn. Bộ nhụy gồm 2 lá noãn tạo thành bầu 2 ô. 1.1.4. Các loài trong chỉ Pseuderanthemum [1], [2], [11], [12], [13], [14], [31] Theo tài liệu [1] chi Pseuderanthemum ở Việt Nam có 10 loài. Theo tài liệu [19] chi psenderanthemum à Việt Nam có 9 loài 2 thứ trong đó chỉ có 4 loài 2 thứ có tên Việt Nam. Theo tài liệu [31] chi Pseuderanthemum ở Việt Nam có 10 loài. Theo tài liệu [23] đã xác định được tên khoa học của cây con khỉ là Pseuderanthemum palatiferum và đặt tên Việt Nam là Xuân hoa. Trong dân gian cây này còn được gọi là Nhật Nguyệt, Hoàn Ngọc, Nội đồng, Tu linh, Trạc nhã, Thần tượng linh. > Pseuderanthemum caruthersỉi ( Seem.) GuilLvar. atropurpureum (Bull.) Forb (Xuân hoa đỏ) [11], [13], [14], [18], [19],[31] Tên khác Ô rô đỏ, Nhớt tím. Cây nhỏ cao 1-2 m, phân nhánh nhiều, không lông. Lá có phiến xoan, bầu dục, mỏng không lông, dài 4-10 cm đỏ bầm có bớt đậm, ít khi vàng có bớt đỏ cuống ngắn. Qiùm ở ngọn, hoa trắng có trung tâm hồng, thuỳ thường có đốm đỏ, nhị 2, thò. Bộ phận dùng rễ, lá và hoa. Nơi trồng và ứiu hái: ừồng làm cảnh vì lá đẹp. Có thể Ü1U hái lá, rễ quanh năm, thường dmig tưd. > Pseuderanthemum eberhardtìỉR.Bcn [^9], [31], [36] Cây nhỏ cao 1 m; nhánh non vuông vuông, có lông mịn. Lá có phiến xoan bầu dục, có thể thon dài, to 10-12x3-4 cm, không lông mặt trên, có lông mịn mặt dưới; cuống dài 1-1,5 cm. Gié ở ngọn, dài 10-15 cm; lá hoa, tiền diệp nhỏ, không lông; lá đài 5 mm, không lông, vành tím, cao vào 1,5 cm, môi trên 2 răng, môi dưói 3 thuỳ; tiểu nhụy thụ 2, lép 2; noãn sào không lông. Phân bố ở Việt Nam: Bắc Cạn và Thái Nguyên, > Pseuderanthemumpalatiferum Radlk. [2], [11], [12], [14], [17], [23], [26], [30], [31], [32], [36] Cây bụi, cao từ 1-3 m, sống nhiều năm. Thân non màu xanh lục, rải rác có lông che chở đa bào, phần thân già hoá gỗ màu nâu, nhẵn, phân nhánh nhiều cành mảnh. Lá mọc đối, phiến lá hình mũi mác, hai đầu nhọn, dài 12-17 cm, rộng 3,5-5 cm. Mép lá nguyên, gốc lá hơi men xuống, hai mặt phiến lá có lông che chở đa bào ngắn và lông tiết có chân đơn bào đầu đa bào, dọc gân giữa có nhiều lông hctti. Cuống lá dài 1,5-3 cm, có nhiều lông che chở đa bào. Cụm hoa dài 10-16 cm, ở kẽ lá hay ở đầu cành, gồm các xim ngắn ở các mấu. Hoa lưỡng túứi, không đều, 5 đài rời tồn tại đến khi quả già. Tràng họfp, màu trắng, ống tràng hẹp và dài khoảng 2,5-2,7 cm, có 5 thùy, chia làm 2 môi. Môi trên gồm hai thùy nhỏ đính liền nhau đến nửa chiều dài của thuỳ. Môi dưới gồm 3 thuỳ to. Thuỳ giữa của môi dưới có các chấm màu tím, hai nhị lép nhỏ dính ở gốc hai chỉ nhị. Bầu trên, nhẵn, dài khoảng 1,5 mm, 2 lá noãn liền nhau tạo thành bầu 2 ô, vòi nhụy dài 2,5-2,7 cm, nửa dưói của vòi có lông, 2/3 vòi về phía trên có màu tím nhạt. Quả nang, 2 ô, mỗi ô chứa 2 hạt. Mùa hoa: tháng 4-5. Cây mọc hoang ra hoa gần như quanh năm. Phân bố ở Lào, Trung Quốc, ở Việt Nam được thấy có ở các rừng bình nguyên mấy năm gần đây được trồng rộng rãi trong nhân dân. [...]... 7-8 cp; phỏt hoa l chựm- t tỏn hp; hoa thnh t tỏn ngn; vnh cao 2 cm, tai xoan nh nhau Phõn b Vit Nam thy cú Si Gũn, Sụng Bộ > Pseuderanthemum acuminaóssimum Miq (Xuõn hoa nhn) [19], [35] Tiu mc; nhỏnh non vuụng, khụng lụng Lỏ cú phin thon nhn to n 25x9 cm, ỏy tự tự hp trờn cung, mng, bỡa nguyờn, gõn ph 6 cp, cung di 4-5 cm Phỏt hoa di n 30 cm, khụng nhỏnh, nh cú rõu vỡ vũi nhy di cũn li; hoa nh chm... tng nh Nh vy kt lun s b Xuõn hoa cú tỏc dng bo v gan 1.4.5 c tớnh [27] Cho chut nht trng ung cao c cỏc nng thp 0,83-3,13 g/kg thy chut hot ng bỡnh thng Tng nng lờn 5,56-11,5 g/kg chut gim hot ng, nhng sau mt gi chut tr v trng thỏi hot ng bỡnh thng 1.5 CễNG DNG [13], [18], [20], [32] Võn Nam, Trung Quc ngi ta dựng r ca cõy Xuõn hoa cha chn thng R, lỏ v hoa ca cõy Xuõn hoa cha l ming lm lnh vt thng... trong t m 37c, thcd gian nuụi t 18-24h n nng 10^ t bo/ml (kim tra bng pha loóng v dóy dch chun) 2.2.2.3 Chun b khoanh giy th - c khoanh giy lc cú ng ki D = 6-6,5 mm khi lng 33,5-34,0 mg - Hp tit trựng cỏc khoanh giy nhit 121đ c trong thũi gian 30 phỳt, sau ú sy 60c trong 5-lOh - Cho cỏc khoanh giy ó tit trựng vo 5 a petri sch mi a tm mt trong cỏc mu th Sau mi ln tm, em sy nhit 50c n khụ, tm 3 ln... hoa 4-7 mm cú tin dip gia lỏ i khụng lụng; vnh tớm m, ng cao 2,7 cm, cú lụng tit mt ngoi, thu di 1,3 cm, tiu nhy th 2, lộp 2, noón so khụng lụng Phõn b Cm Ging, Quý c, Kim Bụi > Pseuderanthemum bracteatum Imlay [19], [31] Cõy c cao 50-60 cm, ớt nhỏnh; thõn vng , cú 4 cnh, cú lụng mn lỳc non Lỏ cú phin thon, to 5-9X3-5 cm, cú lụng mn hai mt, gõn ph 5-6 cp; cung di 2-3 cm Phỏt hoa cao 8-10 cm, lỏ hoa. .. trong chi Pseuderanthemum cũn ớt c nghiờn cu v s dng Vit Nam mi ch cú mt s ti liờu cụng b v tỏc dng sinh hc ca cõy Xuõn hoa {Pseuderanthemum palatiferum) 1.4.1 Tỏc dng khỏng khun v khỏng nm [26] Nghiờn cu cao c chit bng methanol t lỏ khụ mu Xuõn hoa: XHj v XH2 cho thy: - C hai mu Xuõn hoa u cú tỏc dng trờn vi khun Escherichia coli v vi khun Gr(-) ng tiờu hoỏ, cha cú tỏc dng trờn Pseudomonas aeruginosa,... th 2 Nang cú lụng mn, lộp gn 1/2 dúi Phõn b Nha Trang > Pseuderanthemum reniculatum Radlk (Xuõn hoa mng) [19], [31], [34], [36] Tiu mc cao n 2,5 m; nhỏnh gi trũn, v mc, trúc thnh my Lỏ cú phin bu dc, to vo 11x5,5 cm, dy, nõu lỳc khụ, gõn ph 9-10 cp; cung di 1 cm Chựm t tỏn ngn, lỏ hoa thon; cng hoa di 3-5 mm; lỏ i 2 mm; vnh , thm, ng di 1,2 cm, mụi trờn 2 tai, mụi di 3, gn nh bng nhau, tiu nhy... Nguyờn liu - Mu cõy ti cú r, thõn, lỏ, hoa phõn tớch hỡnh thỏi v giỏm nh tờn khoa hc - Noi iu hỏi: xó Bỡnh Miii- huyn Kin Xng - tnh Thỏi Bỡnh - Thi im thu hỏi: 03/2006 v 03/2007 - Thu hỏi b phn ờn mt t, ra sch, ct on, phoi khụ hoc sy khụ 60c Bo qun nghiờn cu tỏc dng khỏng khun - R, thõn, lỏ bo qun trong cn 40-50C lm vi phu - Tiờu bn phcd sy khụ bo qun kim tra tờn khoa hc - Cỏc mụi trng dựng cho nghiờn... ti liu v thc vt v mu lu gi ti cỏc trung tõm khoa hc ln: Vin Dc liu, Khoa Sinh HQG H Ni, Vin Sinh thỏi v ti nguyờn sinh vt (H Ni) - Tham kho ý kin ca chuyờn gia ^ Nghiờn cu c im gii phu Lm vi phu (r, thõn, lỏ, cung lỏ, soi bt) theo ti liu [6 ], [8 ], [22] 2.1.2.2 Nghiờn cu v tỏc dng khỏng khun [5], [7], [10] Nguyờn tc dựng phng phỏp khuch tỏn trờn thch: cỏc khoanh giy t tiờu chun quy nh tm mu th t trờn... nỳm nhy chia 2, hỡnh mi mỏc di 2-3 mm (H2g, H2h) Bu trờn, 2 ụ ng kớnh khong 1-1,2 mm (H2i) Mu cõy ti c GS V Vn Chuyờn giỏm nh tờn khoa hc l Pseuderanthemum bracteatum Imlay h ễ rụ (Acanthaceae) (ph lc 1) Lm mu khụ, em i chiu vúi mu lu gi ti Vin Dc liu, khoa Sinh Trng H Khoa hc t nhiờn HQG H Ni, Vin Sinh thỏi v ti nguyờn sinh vt (H Ni) nhng cho túi nay ti cỏc trung tõm ny cha cú mu cõy ny Lu mu tiờu... b mụn Thc vt Trng H Dc H Ni S hiu phũng tiờu bn HNIP/15218/07 (ph lc 2) H2a: Cõy XHLH chp ti thc a H2c:Lỏbc H2g: Nhy H2d: i H2f: Nh H2h: Nỳm nhy H2b: Cm hoa H2e:Nh trờn trng H2i: Bu 2.2.I.2 c im gii phu - Lm vi phu lỏ, cung lỏ, thõn, r xuõn hoa lỏ hoa - Quan sỏt tiờu bn di ki hin vi vt ki 4,10,40 > Vi phu cung lỏ (Hỡnh 3) - Cung lỏ li lờn c hai mt, mt di li hn mt trờn - T ngoi vo trong cú: Biu bỡ . vị thuốc Xuân hoa lá hoa. - Nghiên cứu về đặc điểm giải phẫu của cây Xuân hoa lá hoa. - Sơ bộ nghiên cứu tính kháng khuẩn của cây Xuân hoa lá hoa. PHẦN 1: TỔ N G QUAN 1.1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT c. nghiên cứu về cây thuốc này cho đến nay rất khiêm tốn. Do vậy chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “ Nghiên cứu đặc điểm thực vật, đặc điểm giải phẫu và tác dụng kháng khuẩn của cây Xuân hoa. PHƯỢNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐlỂM TH ựC VẬT, ĐẶC ĐIỂM GIẢI PHẪU VÀ TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN CỦA CÂY XUÂN HOA LÁ HOA (KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP Dược sĩ KHÓA lO O p^Ị . ; ị Người hướng dẫn : GS.TS. PHẠM XUÂN DS.