ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP. HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ LỆ THU KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY CÒNG MÙ U (CALOPHYLLUM THORELII PIERRE) Chuyên ngành: HÓA HỮU CƠ Mã số chuyên ngành: 62 44 27 01 Phản biện 1: PGS.TS. Nguyễn Ngọc Hạnh Phản biện 2: PGS.TS. Phạm Thành Quân Phản biện 3: PGS.TS. Trương Thế Kỷ Phản biện độc lập 1: PGS.TS. Võ Thị Bạch Huệ Phản biện độc lập 2: PGS.TS. Trần Hùng NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC 1. PGS.TS. Nguyễn Diệu Liên Hoa 2. GS.TS. Nguyễn Minh Đức Tp. Hồ Chí Minh - 2011 iv MỤC LỤC Trang Lời cam đoan Mục lục Danh mục các chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình MỞ ĐẦU 1 Chương 1 TỔNG QUAN 3 1.1 Giới thiệu về họ Bứa (Guttiferae) 3 1.2 Giới thiệu về chi Calophyllum 3 1.2.1 Đặc điểm thực vật 3 1.2.2 Thành phần hóa học 3 1.2.3 Hoạt tính sinh học 19 1.2.4 Công dụng 21 1.3 Giới thiệu về cây còng mù u 22 1.3.1 Đặc điểm thực vật 22 1.3.2 Các nghiên cứu hóa học trước đây 22 Chương 2 THỰC NGHIỆM 24 2.1 Nguyên liệu 24 2.2 Thiết bị và hóa chất 24 2.3 Phương pháp nghiên cứu 25 2.3.1 Chiết xuất và phân lập 25 2.3.2 Xác định cấu trúc 25 v 2.3.3 Thử nghiệm hoạt tính sinh học 25 2.4 Quy trình phân lập chất 28 2.4.1 Vỏ cây thu hái năm 2003 28 2.4.2 Vỏ cây thu hái năm 2006 31 2.4.3 Trái cây thu hái năm 2006 40 Chương 3 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 46 3.1 Thành phần hóa học của vỏ cây thu hái năm 2003 46 3.1.1 Thorelion (125) (CVH7A) 47 3.1.2 1,5,6-Trihydroxyxanthon (131) (CVH7B) 54 3.1.3 6-Deoxyisojacareubin (132) (CVH6A) 55 3.1.4 Osajaxanthon (133) (CVH6B) 56 3.1.5 1,5-Dihydroxyxanthon (4) (CVH6C) 58 3.2 Thành phần hóa học của vỏ cây thu hái năm 2006 59 3.2.1 Guttiferon I (134) (BH5A) 60 3.2.2 Thorelion (125) (BH5B) 64 3.2.3 Calothorelion A (135) (BH5C) 65 3.2.4 Calothorelion B (136) (BH5D) 71 3.2.5 Guttiferon F (114) (BH5E) 75 3.2.6 30-epi-Cambogin (137) (BH5F) 78 3.2.7 Acid benzoic (138) (BH5G) 81 3.2.8 Acid 3-furancarboxylic (139) (BH5H) 82 3.2.9 Calothorexanthon (140) (BH4A) 83 3.2.10 Garbogiol (141) (BH4B) 85 3.2.11 1,4,8-Trihydroxyxanthon (142) (BH4C) 87 3.2.12 1,7-Dihydroxyxanthon (5) (BH3A) 88 vi 3.2.13 Globuxanthon (143) (BH3B) 89 3.2.14 δ-Tocotrienol (128) (BH2A) 91 3.2.15 Osajaxanthon (133) (BE2A) 93 3.2.16 1,4,8-Trihydroxyxanthon (142) (BE3A) 94 3.2.17 1,3,5-Trihydroxy-4-(3-metylbut-2-enyl)xanthon (144) (BE3B) 94 3.2.18 1,2,5-Trihydroxyxanthon (145) (BE6A) 96 3.2.19 Acid protocatechuic (146) (BE7A) 97 3.2.20 1,3,5,6-Tetrahydroxyxanthon (147) (BE8A) 98 3.3 Thành phần hóa học của trái cây thu hái năm 2006 99 3.3.1 Thorexanthon (148) (FH2A) 100 3.3.2 Guttiferon F (114) (FH2B) 103 3.3.3 Thorelion (125) (FH2C) 103 3.3.4 30-epi-Cambogin (137) (FH2D) 105 3.3.5 Acid trans-cinnamic (149) (FH3A) 106 3.3.6 Thoreliolid A (150) (FH4A) 107 3.3.7 Thoreliolid B (151) (FH4B) 112 3.3.8 Wogonin (152) (FE6A) 117 3.3.9 6-Deoxyisojacareubin (132) (FE6B) 119 3.3.10 Acid vanillic (153) (FE7A) 120 3.3.11 Acid 4-hydroxybenzoic (154) (FE7B) 121 3.3.12 Acid syringic (155) (FE7C) 121 3.4 Hoạt tính sinh học 122 3.4.1 Hoạt tính gây độc tế bào theo phương pháp SRB 124 3.4.2 Ho ạt tính kháng oxy hóa với thuốc thử DPPH 125 3.5 Nhận xét chung 125 vii 3.5.1 Về thành phần hóa học 125 3.5.2 Về hoạt tính sinh học 131 KẾT LUẬN 132 Kiến nghị các hướng nghiên cứu tiếp theo 134 Tài liệu tham khảo 135 Danh mục công trình 151 Danh mục phụ lục 153 Phụ lục 156 viii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT br Broad, rộng d Doublet, mũi đôi DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer DMAPP 3,3-Dimetylallyl pyrophosphat DPPH 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl Đnc Điểm nóng chảy HIV-1 Human Immunodeficiency Virus Type 1 HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation HPLC High Performance Liquid Chromatography, sắc ký lỏng hiệu năng cao HR-EIMS High Resolution Electron Impact Mass Spectroscopy, Khối phổ bắn phá điện tử phân giải cao HR-ESIMS High Resolution Electron Spray Ionization Mass Spectroscopy Khối phổ phân giải cao ion hóa bằng kỹ thuật phun điện IC 50 Half maximal inhibitory concentration, nồng độ ức chế 50% IR Infra Red, hồng ngoại J Hằng số ghép cặp m Multiplet, mũi đa NMR Nuclear Magnetic Resonance, cộng hưởng từ hạt nhân pđ Phân đoạn q Quartet, mũi bốn s Singlet, mũi đơn SKC Sắc ký cột SKLM Sắc ký lớp mỏng SRB Sulforhodamin B t Triplet, mũi ba UV Ultra Violet, tử ngoại ix DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của thorelion (125) (CVH7A) trong CD 3 OD 53 Bảng 3.2 Tương quan COSY của thorelion (125) (CVH7A) trong CD 3 OD 54 Bảng 3.3 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của 1,5,6-trihydroxyxanthon (131) (CVH7B) trong aceton-d 6 55 Bảng 3.4 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của 6-deoxyisojacareubin (132) (CVH6A) trong aceton-d 6 56 Bảng 3.5 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của osajaxanthon (133) (CVH6B) trong CDCl 3 và metanol-d 4 57 Bảng 3.6 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của 1,5-dihydroxyxanthon (4) (CVH6) trong aceton-d 6 58 Bảng 3.7 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của guttiferon I (134) (BH5A) trong CD 3 OD 62 Bảng 3.8 Tương quan COSY của guttiferon I (134) (BH5A) trong CD 3 OD 63 Bảng 3.9 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của thorelion (125) (BH5B) trong CD 3 OD 64 Bảng 3.10 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của calothorelion A (135) (BH5C) trong CD 3 OD 69 Bảng 3.11 Tương quan COSY của calothorelion A (135) (BH5C) trong CD 3 OD 70 Bảng 3.12 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của calothorelion B (136) (BH5D) trong CD 3 OD 74 Bảng 3.13 Tương quan COSY của calothorelion B (136) (BH5D) trong CD 3 OD 75 x Bảng 3.14 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của guttiferon F (114) (BH5E) trong CD 3 OD (BH5E) 77 Bảng 3.15 Tương quan COSY của guttiferon F (114) (BH5E) trong CD 3 OD 78 Bảng 3.16 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của 30-epi-cambogin (137) (BH5F) trong aceton-d 6 80 Bảng 3.17 Tương quan COSY của 30-epi-cambogin (137) (BH5F) trong aceton-d 6 81 Bảng 3.18 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của acid benzoic (138) (BH5G) trong CDCl 3 82 Bảng 3.19 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của acid 3-furancarboxylic (139) (BH5H) trong aceton-d 6 83 Bảng 3.20 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của calothorexanthon (140) (BH4A) trong aceton-d 6 85 Bảng 3.21 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của garbogiol (141) (BH4B) trong aceton-d 6 86 Bảng 3.22 Tương quan NOESY của garbogiol (141) (BH4B) trong aceton-d 6 87 Bảng 3.23 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của 1,4,8-trihydroxyxanthon (142) (BH4C) trong aceton-d 6 88 Bảng 3.24 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của 1,7-dihydroxyxanthon (5) (BH3A) trong aceton-d 6 89 Bảng 3.25 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của globuxanthon (143) (BH3B) trong aceton-d 6 90 Bảng 3.26 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của δ-tocotrienol (128) (BH2A) trong CDCl 3 92 Bảng 3.27 Số liệu phổ 1 H NMR và 13 C NMR của 1,3,5-trihydroxy-4- (3-metylbut-2-enyl)xanthon (144) (BE3B) trong aceton-d 6 95 xi Bảng 3.28 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của 1,2,5-trihydroxyxanthon (145) (BE6A) trong aceton-d 6 96 Bảng 3.29 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của acid protocatechuic (146) (BE7A) trong aceton-d 6 97 Bảng 3.30 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của 1,3,5,6- tetrahydroxyxanthon (147) (BE8A) trong aceton-d 6 98 Bảng 3.31 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của thorexanthon (148) (FH2A) trong CDCl 3 102 Bảng 3.32 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của thorelion (125) (FH2C) trong CD 3 OD 104 Bảng 3.33 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của 30-epi-cambogin (137) (FH2D) trong aceton-d 6 105 Bảng 3.34 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của acid trans-cinnamic (149) (FH3A) trong aceton-d 6 107 Bảng 3.35 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của thoreliolid A (150) (FH4A) trong aceton-d 6 110 Bảng 3.36 Tương quan COSY của thoreliolid A (150) (FH4A) trong aceton-d 6 111 Bảng 3.37 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của thoreliolid B (151) (FH4B) trong aceton-d 6 115 Bảng 3.38 Tương quan COSY của thoreliolid B (151) (FH4B) trong aceton-d 6 116 Bảng 3.39 Số liệu phổ 1 H NMR, 13 C NMR và tương quan HMBC của wogonin (152) (FE6A) trong aceton-d 6 118 Bảng 3.40 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của 6-deoxyisojacareubin (132) (FE6B) trong aceton-d 6 119 Bảng 3.41 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của acid vanillic (153) (FE7A) trong aceton-d 6 120 xii Bảng 3.42 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của acid 4-hydroxybenzoic (154) (FE7B) trong aceton-d 6 121 Bảng 3.43 Số liệu phổ 1 H và 13 C NMR của acid syringic (155) (FE7C) trong aceton-d 6 122 Bảng 3.44 Hoạt tính sinh học của các hợp chất đã biết phân lập từ cây còng mù u 123 Bảng 3.45 Nồng độ gây độc tế bào IC 50 (µg/ml) của các dẫn xuất benzophenon lồng thu được từ cây còng mù u trên các dòng tế bào HeLa, MCF-7, NCI-H460 124 Bảng 3.46 Tỉ lệ (%) gây độc tế bào của 125a và 125b trên các dòng tế bào HeLa, MCF-7 và NCI-H460 125 Bảng 3.47 Kết quả thử hoạt tính kháng oxy hóa với thuốc thử DPPH 125 Bảng 3.48 Bảng tổng kết các hợp chất phân lập từ vỏ và trái cây còng mù u 130 [...]... bào và kháng virus [99] Đi u này thu hút sự quan tâm nghiên c u của các nhà khoa học Ở Việt Nam, một số lồi thuộc chi Calophyllum được sử dụng làm thuốc trong y học dân gian để trị bỏng, thấp khớp, viêm gan, các bệnh về da và làm thuốc tẩy xổ Luận án này khảo sát thành phần hóa học của vỏ và trái cây còng mù u (Calophyllum thorelii Pierre) thu hái ở Lâm trường Sơng Kơn, tỉnh Bình Định Sau đó thử hoạt... rugosum), còng trắng (C soulatri), vẩy ốc (C tetrapterum), còng mù u (C thorelii) , choi (C touranensis) Một số ít là ti u mộc như còng da (C membranaceum), còng dây (C pisiferum), còng poilanei (C poilanei) hoặc dạng bụi như rù ri (C balansae) Gỗ đỏ Lá có gân phụ rất mịn, nhi u, khít nhau Hoa trắng hoặc vàng Quả nhân cứng hình c u Phân bố từ Quảng Trị đến Phú Quốc [6] 1.2.2 Thành phần hóa học Các nghiên c u. .. Calophyllum ở Việt Nam Ở Khoa Hóa, Trường Đại Học Khoa học Tự nhiên Tp HCM, nhóm nghiên c u của PGS Phạm Đình Hùng và PGS Nguyễn Di u Liên Hoa đã khảo sát thành phần hố học của bốn lồi thuộc chi Calophyllum là còng tía (C saigonense Pierre hay C calaba  L var bracteatum (Wight) Stevens), mù u (C inophyllum), còng nước (C dongnaiense Pierre) và còng núi (C dryobalanoides Pierre) và đã phân lập được 34... guttiferon F (114) đ u có hoạt tính kháng HIV [53, 39] 1.2.4 Cơng dụng Nhi u lồi thuộc chi Calophyllum được sử dụng trong y học cổ truyền, ti u bi u nhất là cây mù u (C inophyllum) Nhựa mù u dùng chữa viêm họng, ghẻ, mụn nhọt, nấm tóc, các bệnh về da nói chung D u mù u được dùng chữa viêm dây thần kinh trong bệnh cùi, trị bỏng, đau dạ dày, viêm chân răng, làm lành sẹo [2] Vỏ mù u được dùng làm thuốc chữa viêm... tẩy u Lá được dùng làm thuốc xơng chữa đau mắt, đau nửa đ u và chóng mặt Trái chín có chất độc được sử dụng làm bã chuột D u của hạt mù u dùng trị thấp khớp, ghẻ ngứa và nấm ngồi da [34] Rễ cây còng trắng (C drybalanoides) dùng làm thuốc tẩy xổ Rễ và lá cây còng da (C membranaceum) được dùng trị thấp khớp, đau nhức xương, viêm gan vàng da, kinh nguyệt khơng đ u, đau bụng kinh, vết thương chảy m u [2,... (Guttiferae) với khoảng 200 lồi, phân bố khắp các miền nhiệt đới [99] Gỗ rất chắc và bền nên được sử dụng nhi u trong xây dựng và đóng thuyền [90] Ở Việt Nam, chi Calophyllum có 15 lồi, thường là đại mộc, có độ cao từ 5-30 m như mù u (C inophyllum), còng tía (C calaba), khơng (C ceriferum), còng nước (C dongnaiense), còng núi (C dryobalannoides), còng nhi u hoa (C polyanthum), còng nhám (C rugosum),... polyisoprenyl hóa 18 Hình 1.2 Hình cây, trái, hoa và lá cây còng mù u (Calophyllum thorelii) 22 Hình 3.1 Tương quan HMBC của vòng 3,4-dihydroxybenzoyl trong 125 49 Hình 3.2 Tương quan HMBC của nhóm 3-metylbut-2-enyl thứ nhất trong 125 49 Tương quan HMBC và COSY của vòng 2,2-dimetyl-3isopropenylcyclopentyl trong 125 50 Tương quan HMBC của các dây nhánh trên hệ vòng bicyclo[3.3.1]nonan trong 125 51 Hóa học lập... kháng oxy hóa và khả năng ức chế tế bào ung thư của một số hợp chất phân lập được trên ba dòng tế bào ung thư cổ tử cung (HeLa), ung thư vú (MCF-7) và ung thư phổi (NCI-H460) Mục ti u của luận án là cung cấp thơng tin khoa học về thành phần hố thực vật của họ Bứa ở Việt Nam, làm gi u danh mục các hợp chất tự nhiên mới trên thế giới, khẳng định giá trị tài ngun thực vật Việt Nam Ngồi ra, việc khảo sát hoạt... vi khuẩn Gram dương Bacillus cereus và Staphylococcus epidermidis từ trung bình đến mạnh Trong đó 83 và 84 mạnh hơn chất chuẩn chloramphenicol (trong trường hợp vi khuẩn B cereus) còn 87 và 88 có hoạt tính y u hơn [24] Một biflavonoid là amentoflavon (89) có khả năng kháng nhi u virus gây bệnh như Avian myeloblastosis (AMV)-RT, Rous-associated 21   virus-2 (RAV-2)-RT và Moloney murine leukemia virus... betulinic (104) có khả năng kháng khối u ác tính h u hi u [42] và kháng lại ba dòng tế bào ung thư người là MCF-7, H-460 và SF-268 [100] Các dẫn xuất phloroglucinol có c u trúc phức tạp và hoạt tính sinh học lý thú nên có nhi u hứa hẹn cho việc phát triển làm thuốc kháng HIV, kháng ung thư và kháng oxy hóa Ví dụ như enervosanon (108) có hoạt tính kháng khuẩn mạnh đối với cả vi khuẩn Gram-(+) (Bacillus