Trang 2 ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP. HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN ………………………………… NGUYỄN ĐỖ PHÚC NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ĐỘC TỐ RUỘT (ENTEROTOXIN) CỦA STAPHYLOCOCCUS AUREUS GÂY NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM Chuyên ngành : Vi sinh vật học Mã số: 62 42 40 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ: VI SINH VẬT HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS. NGUYỄN THỊ KÊ PGS.TS. TRẦN LINH THƯỚC TP. Hồ Chí Minh – năm 2010 Luận án tiến sĩ Nguyễn Đỗ Phúc Trang 3 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn GS.TS Nguyễn Thị Kê, PGS.TS. Trần Linh Thước, người thầy đã tận tình hướng dẫn, động viên và tạo mọi điều kiện tốt nhất trong suốt thời gian em thực hiện luận án. Thầy, Cô đã dạy bảo em rất nhiều điều trong khoa học cũng như trong cuộc sống. Em xin chân thành cảm ơn TS. Phạm Hùng Vân, giảng viên trường Đại học Y Dược TP. HCM đã tận tình giúp đỡ cho em rất nhiều về kiến thức lẫn những kinh nghiệm thực tế cho em thực hiện tốt luận án. Em rất cảm ơn Ban Giám Đốc Viện Vệ sinh Y tế Công cộng TP. HCM đã tạo mọi điều kiện về cơ sở vật chất, kinh phí và thời gian giúp cho em thực hiện tốt luận án này. Em xin chân thành cảm ơn các Thầy, Cô trong Khoa Sau Đại học - Trường ĐH Khoa học Tự nhiên, ĐH Quốc gia TP.HCM đã tận tình giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi trong suốt thời gian học tập tại trường. Tôi xin cảm ơn các anh, chị Phòng Thí nghiệm Công nghệ Sinh học Phân tử A – Trường ĐH Khoa học Tự nhiên, ĐH Quốc gia TP.HCM đã nhiệt tình giúp đỡ để tôi thực hiện tốt luận án này. Tôi xin cảm ơn các anh, chị Labo Vi sinh thực phẩm, Trung tâm Kiểm nghiệm An toàn Vệ sinh Thực phẩm khu vực phía Nam – Viện Vệ sinh Y tế Công cộngTP.HCM đã hỗ trợ rất nhiều cho tôi trong quá trình làm luận án. Xin gửi những lời thân thương đến vợ và hai con tôi đã luôn luôn ở bên tôi và động viên tôi trong những lúc mệt nhọc, lo lắng trong công việc và trong thời gian thực hiện luận án. Cảm ơn bạn Đặng Vũ Bích Hạnh, giảng viên Trường ĐH Bách Khoa, ĐH Quốc gia TP. HCM, là người bạn cùng khóa NCS, đã luôn luôn hỗ trợ và động viên tôi trong thời gian thực hiện luận án. Và trên hết, con xin chân thành cảm ơn công ơn sinh thành, dạy dỗ và tảo tần nuôi con khôn lớn của Cha, Mẹ ruột; Cha, Mẹ vợ đã hết lòng thương yêu và lo lắng cho gia đình và các con của con và mọi người trong gia đình hai bên nội ngoại để cho con yên tâm học tập và công tác tốt. Xin cảm ơn tất cả! Thành phố Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2010 Nguyễn Đỗ Phúc Luận án tiến sĩ Nguyễn Đỗ Phúc Trang 4 MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC HÌNH v DANH MỤC CÁC BẢNG vi MỞ ĐẦU 1 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC, TÍNH CHẤT GÂY BỆNH VÀ GÂY NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM CỦA S. AUREUS 3 1.1.1. Đặc điểm sinh học chính 3 1.1.2. Các nhân tố độc lực 5 1.1.3. Ngộ độc thực phẩm do S. aureus 7 1.2. ĐỘC TỐ RUỘT CỦA S. AUREUS 10 1.2.1. Đặc điểm chung và phân loại 10 1.2.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến sự tạo độc tố SE. 12 1.2.3. Hoạt tính của độc tố ruột SE 13 1.3. PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG S. AUREUS TRONG THỰC PHẨM 13 1.3.1. Định lượng S. aureus trong thực phẩm bằng phương pháp nuôi cấy 13 1.3.2. Phát hiện và định lượng S. aureus trong thực phẩm bằng phản ứng PCR 14 1.4. PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG SE TRONG THỰC PHẨM 17 1.5. XÁC ĐỊNH TIỀM NĂNG SINH ĐỘC TỐ CỦA CÁC CHỦNG S. AUREUS BẰNG PHẢN ỨNG PCR DỰA VÀO GEN MÃ HÓA ĐỘC TỐ 21 1.6. PHƯƠNG PHÁP TẠO KHÁNG THỂ ĐA DÒNG VÀ ỨNG DỤNG VÀO VIỆC PHÁT TRIỂN QUI TRÌNH ELISA 21 1.6.1. Phương pháp tạo kháng thể đa dòng 21 1.6.2. Tinh chế và đánh dấu kháng thể 23 1.6.3. Các bước qui trình ELISA sandwich 25 CHƯƠNG 2. VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP 2.1. VẬT LIỆU 28 2.1.1. Dụng cụ 28 2.1.2. Thiết bị 28 2.1.3. Hóa chất 29 2.1.4. Sinh vật phẩm 32 2.2. PHƯƠNG PHÁP 34 2.2.1. Chọn mẫu và địa điểm thu mẫu 34 2.2.2. Định lượng S. aureus trên mẫu thực phẩm bằng phương pháp MPN 35 2.2.3. Kiểm tra độ sống S. aureus bằng phương pháp hộp trãi 36 2.2.4. Phân tích định tính SE bằng bộ kit Tecra 36 2.2.5. Phát hiện gen sinh độc tố SE bằng phương pháp multiplex- PCR 38 Luận án tiến sĩ Nguyễn Đỗ Phúc Trang 5 2.2.6. Phương pháp gây miễm dịch trên thỏ và kiểm tra hiệu giá kháng huyết thanh 39 2.2.7. Tinh chế kháng thể 41 2.2.8. Kiểm tra độ sạch kháng thể bằng phương pháp điện di SDS-PAGE 42 2.2.9. Xác định nồng độ kháng thể bằng phương pháp Bradford 42 2.2.10. Đánh dấu kháng thể kháng độc tố A và B với enzyme HRP 43 2.2.11. Phương pháp ELISA trực tiếp phát hiện SEA, SEB bằng kháng thể cộng hợp HRP 44 2.2.12. Kiểm tra phản ứng chéo của kháng thể cộng hợp HRP 44 2.2.13. Xây dựng qui trình ELISA sandwich phát hiện SEA, SEB trong thực phẩm 45 2.2.14. Đánh giá qui trình ELISA sandwich phát hiện độc tố SEA/SEB 46 CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ - BÀN LUẬN 3.1. KHẢO SÁT TÌNH HÌNH NHIỄM S. AUREUS TRONG THỰC PHẨM ĐƯỜNG PHỐ VÀ TỶ LỆ GÂY NGỘ ĐỘC BỞI S. AUREUS TẠI TP. HỒ CHÍ MINH 49 3.1.1. Khảo sát tình hình nhiễm S. aureus trong thực phẩm đường phố tại TP. HCM 49 3.1.2. Tỷ lệ gây ngộ độc thực phẩm bởi S. aureus trong một số vụ ngộ độc thực phẩm tại TP. HCM 50 3.2. XÁC ĐỊNH LOẠI ĐỘC TỐ RUỘT PHỔ BIẾN GÂY NGỘ ĐỘC BỞI S.AUREUS 51 3.2.1. Khảo sát khả năng sinh độc tố ruột của các chủng phân lập trên môi trường TSGM và BHI 51 3.2.2. Xác định loại độc tố SE bằng phương pháp ELISA 53 3.2.3. Xác định loại độc tố SE phổ biến bằng phương pháp multiplex-PCR nhân bản sao các gen mã hóa độc tố 55 3.3. TẠO KHÁNG THỂ ĐA DÒNG VÀ XÂY DỰNG QUI TRÌNH ELISA PHÁT HIỆN ĐỘC TỐ SEA, SEB TRONG THỰC PHẨM 62 3.3.1. Gây miễn dịch tạo kháng huyết thanh thỏ kháng SEA và SEB 62 3.3.2. Thu nhận và tinh chế kháng thể đa dòng kháng SEA và SEB 65 3.3.3. Tạo kháng thể cộng hợp với enzyme HRP 67 3.3.4. Xây dựng qui trình ELISA sandwich phát hiện độc tố SEA và SEB 69 3.3.5. Đánh giá hiệu lực qui trình ELISA sandwich phát hiện SEAvà SEB 79 CHƯƠNG 4. KẾT LUẬN – ĐỂ NGHỊ 4.1. KẾT LUẬN 82 4.2. ĐỀ NGHỊ 82 NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN 83 CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Luận án tiến sĩ Nguyễn Đỗ Phúc Trang 6 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Diễn giải Ab Antibody (kháng thể) ABTS 2,2’-Azino-di(3-ethyl-benzonthiazoline-6-sulfonic acid) Ag Antigen (kháng nguyên) AP Alkaline phosphatase APS Ammonium persulfate BHI Beef Heart Infusion BP Baird - Parker CFA Complete Freund’s Adjuvant CFU Colony Forming Unit (đơn vị hình thành khuẩn lạc) ELISA Enzyme linked immunosorbent assay entA Gen maõ hoaù ñoäc toá SEA entB Gen maõ hoaù ñoäc toá SEB entC Gen maõ hoaù ñoäc toá SEC entD Gen maõ hoaù ñoäc toá SED entE Gen maõ hoaù ñoäc toá SEE ETA Exfoliative exotoxin A ETB Exfoliative exotoxin B Fc Fragment crystalizable HRP Horse radish peroxidase IFA Incomplete Freund’sadjuvant Ig G Immunoglobulin (Kháng thể lớp G) IL Interleukin INF Interferon kDa Kilodalton MHC Major histocompatiblity complex MPN Most probable number MSA Mannitol salt agar MWCO Molecular weight cut off ODTB OD trung bình OD Optical density OPD o-Phenylenediamine ORF Open reading frame PBS Phosphate buffer saline PCR Polymerase chain reaction pI Isoelectric point Pre Prebleed SDS - PAGE Sodium dodecyl sulfate – polyacrylamide gel electrophoresis SE Staphylococcal enterotoxin TB Trung bình Luận án tiến sĩ Nguyễn Đỗ Phúc Trang 7 TEMED Tetramethyl ethylene diamine TMB Tetramethybenzidine TSA Trypticase soy agar TSGM Tecra staphylococcal growth medium DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1. Hình thái của S. aureus 3 Hình 1.2. Hình thái khuẩn lạc S. aureus trên môi trường Bair-Parker (A) và môi trường Manitol salt agar (B) 4 Hình 1.3. Các dạng thử nghiệm ELISA phổ biến 20 Hình 1.4. Cơ chế hình thành Schiffbase trong phương pháp cộng hợp kháng thể - enzyme thông qua nhóm NH 2 24 Hình 2.1. Thang phân tử lượng protein 33 Hình 2.2. Bố trí mẫu trong phương pháp khuếch tán trong gel 40 Hình 3.1. Động học tăng trưởng và tạo độc tố của chủng S. aureus trong môi trường TSGM 52 Hình 3.2. Động học tăng trưởng và tạo độc tố của chủng S. aureus trong môi trường BHI 53 Hình 3.3. Kết quả phân tích gen mã hóa độc tố SE ở các chủng S. aureus phân lập từ thực phẩm và mẫu chất nôn 59 Hình 3.4. Kết quả phản ứng của kháng huyết thanh kháng SEA với độc tố SEA ở thỏ trước khi gây miễn dịch 63 Hình 3.5. Kết quả phản ứng của kháng huyết thanh kháng SEB với độc tố SEB ở thỏ trước khi gây miễn dịch 64 Hình 3.6. Kiểm tra độ sạch của kháng thể qua các bước tinh chế bằng điện di SDS-PAGE 65 Hình 3.7. Định lượng kháng thể bằng phương pháp Bradford 66 Hình 3.8. Kết quả ELISA trực tiếp kiểm tra khả năng phát hiện độc tố SEA và SEB của kháng thể cộng hợp bằng phương pháp ELISA trực tiếp 68 Hình 3.9. Kết quả khảo sát loại dung dịch đệm phủ giếng trong qui trình ELISA sandwich phát hiện SEA, SEB 70 Hình 3.10. Kết quả khảo sát loại tác chất khóa giếng trong qui trình ELISA phát hiện SEA, SEB 71 Hình 3.11. Kết quả khảo sát nồng độ kháng thể kháng SEA thích hợp để phủ giếng trong qui trình ELISA phát hiện SEA 72 Hình 3.12. Kết quả khảo sát nồng độ kháng thể kháng SEB thích hợp dùng để phủ giếng trong qui trình ELISA phát hiện SEB 73 Hình 3.13. Kết quả khảo sát thời gian ủ giếng thích hợp của qui trình ELISA phát hiện SEA, SEB 74 Hình 3.14. Kết quả khảo sát thời gian thích hợp ủ kháng nguyên trong qui trình ELISA phát hiện SEA, SEB 75 Hình 3.15. Kết quả khảo sát thời gian thích hợp ủ kháng thể cộng hợp trong Luận án tiến sĩ Nguyễn Đỗ Phúc Trang 8 qui trình ELISA phát hiện SEA, SEB 76 Hình 3.16. Kết quả xác định giới hạn phát hiện của qui trình ELISA sandwich phát hiện SEA, SEB ở các nồng độ kháng nguyên là 16, 14, 12, 10, 8, 6, 4, 2 (ng/ml) 78 DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1. Các đặc tính chính của S. aureus 5 Bảng 1.2. Qui định về mức cho phép hiện diện của S. aureus trong thực phẩm tại Việt Nam 7 Bảng 1.3. Một số đặc điểm sinh hóa chính cuảa độc tố ruột 12 Bảng 2.1. Trình tự các mồi dùng để nhân bản sao các gen mã hóa độc tố SAE bằng phản ứng PCR 34 Bảng 2.2. Bố trí thực hiện dựng đường chuẩn bằng phươg pháp Bradford 43 Bảng 2.3. Xử lý kết quả đánh giá qui trình ELISA sandwich so với qui trình ELISA của TECRA 47 Bảng 3.1. Tỷ lệ nhiễm S. aureus trong thực phẩm đường phố tại TP. HCM 49 Bảng 3.2. Tỷ lệ ngộ độc do S. aureus trong một số vụ ngộ độc thực phẩm tại TP. HCM 51 Bảng 3.3. Kết quả định loại độc tố SE được tổng hợp bởi 19 chủng S. aureus phân lập từ thực phẩm 54 Bảng 3.4. Kết quả kiểm tra khả năng nhân bản và độ đặc hiệu của 5 cặp mồi nhân bản sao 5 gen mã hóa 5 loại độc tố SE bằng phản ứng multiplex-PCR 56 Bảng 3.5 Kết quả kiểm chứng loại độc tố được sản sinh bởi các chủng S. aureus bằng phản ứng multiplex-PCR nhân bản sao các gen mã hóa độc tố SE 58 Bảng 3.6. So sánh kết quả xác định loại độc tố tạo ra bởi các chủng S. aureus bằng phương pháp ELISA và kết quả xác định gen mã hóa độc tố bằng phản ứng multiplex-PCR 60 Bảng 3.7. Kiểm tra sự hình thành kháng thể kháng SEA, SEB trong huyết thanh thỏ được gây đáp ứng miễn dịch xác định bằng phương pháp khuếch tán trên gel 62 Bảng 3.8. Kết quả kiểm tra hoạt tính của kháng thể kháng SEA, kháng thể kháng SEB cộng hợp HRP bằng phản ứng ELISA trực tiếp 67 Bảng 3.9. Kết quả kiểm tra phản ứng chéo giữa kháng thể kháng SEA cộng hợp với SEA với SEB và của kháng thể kháng SEB cộng hợp với SEA 68 Bảng 3.10. Kết quả khảo sát loại dung dịch phủ giếng 69 Bảng 3.11. Kết quả khảo sát lọai tác chất khóa giếng trong qui trình ELISA phát hiện SEA, SEB 71 Bảng 3.12. Kết quả khảo sát nồng độ kháng thể kháng SEA thích hợp để phủ giếng Luận án tiến sĩ Nguyễn Đỗ Phúc Trang 9 trong qui trình ELISA phát hiện SEA 71 Bảng 3.13. Kết quả khảo sát nồng độ kháng thể kháng SEB thích hợp dùng để phủ giếng trong qui trình ELISA phát hiện SEB 72 Bảng 3.14. Kết quả khảo sát thời gian ủ giếng thích hợp của qui trình ELISA phát hiện SEA, SEB.………………………… 74 Bảng 3.15. Kết quả khảo sát thời gian thích hợp ủ kháng nguyên trong qui trình ELISA phát hiện SEA, SEB 75 Bảng 3.16. Kết quả khảo sát thời gian thích hợp ủ kháng cộng hợp trong qui trình ELISA phát hiện SEA, SEB 76 Bảng 3.17. Kết quả xác định giới hạn phát hiện của qui trình ELISA sandwich phát hiện SEA, SEB 78 Bảng 3.18. Kết quả đánh giá độ phù hợp giữa qui trình ELISA sandwich phát hiện SEA và qui trình ELISA của TECRA 79 Bảng 3.19. Kết quả đánh giá các thông số qui trình ELISA sandwich phát hiện độc tố SEA 80 Bảng 3.20. Kết quả đánh giá độ phù hợp giữa qui trình ELISA sandwich phát hiện SEB và qui trình ELISA của TECRA 80 Bảng 3.21. Kết quả đánh giá các thông số kỹ thuật tương đối của qui trình ELISA sandwich phát hiện độc tố SEB 81 Luận án tiến sĩ Nguyễn Đỗ Phúc Trang 10 MỞ ĐẦU Luận án tiến sĩ Nguyễn Đỗ Phúc Trang 11 An toàn Vệ sinh thực phẩm là vấn đề được nhiều quốc gia trên thế giới rất quan tâm. Việc sử dụng thực phẩm không an toàn là một trong những nguyên nhân gây ra các bệnh truyền nhiễm lây qua thực phẩm. Theo Cục An toàn Vệ sinh Thực phẩm (Bộ Y tế) và Tổ chức Y tế Thế giới, hàng năm tại Việt Nam có khoảng 3 triệu người bị nhiễm độc từ thực phẩm, gây thiệt hại hơn 200 triệu USD. Mặt khác, theo số liệu của Bộ Y tế, trong các năm 2000-2007 cả nước có 1.358 vụ ngộ độc thực phẩm ở bếp ăn tập thể với 34.411 người bị ngộ độc và 379 người tử vong (Hội thảo về Vệ sinh an toàn thực phẩm ngày 23/10/2007). Hiện nay phương pháp tiêu chuẩn để kiểm tra vi sinh vật gây ô nhiễm thực phẩm là phương pháp nuôi cấy kết hợp với các thử nghiệm sinh hóa và miễn dịch. Các phương pháp mới như PCR, ELISA đang được nghiên cứu ứng dụng trong phân tích vi sinh vật trong thực phẩm nhằm giúp cho công tác thanh tra giám sát thực phẩm hoặc điều tra nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm do vi sinh vật được nhanh chóng hơn. S. aureus là một trong những vi khuẩn gây ra ô nhiễm thực phẩm và là nguyên nhân thường gặp trong ngộ độc thực phẩm. Theo Cục An toàn Vệ sinh Thực phẩm 51% các vụ ngộ độc trong 6 tháng đầu năm 2007 có nguyên nhân là do thực phẩm nhiễm vi sinh vật, 8% do hóa chất, và 27% là do thực phẩm chứa chất độc tự nhiên. Trong các vụ ngộ độc tập thể được xác định nguyên nhân là do vi sinh vật thì S. aureus chiếm 20-30%, đứng thứ hai sau Salmonella [65]. Ngộ độc thực phẩm do S. aureus được gây ra bởi độc tố ruột của vi khuẩn này [64]. Để xác định nhanh S. aureus có liên quan đến một vụ ngộ độc hay không phương pháp PCR với cặp mồi chuyên biệt, nhân bản sao trình tự gen nuc mã hóa cho protein nuclease chịu nhiệt đặc trưng cho S. aureus có thể được sử dụng để thay cho phương pháp nuôi cấy. Tuy nhiên để kết luận S. aureus là nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm thì bên cạnh việc phát hiện sự hiện diện của vi khuẩn cần phải xác định sự hiện diện của độc tố ruột của vi khuẩn. Luận án tiến sĩ Nguyễn Đỗ Phúc [...]... sốt trong thực phẩm Tuy nhiên, ngun nhân trực tiếp gây ngộ độc thực phẩm do S aureus là độc tố ruột của vi khuẩn này vẫn chưa được các cơ quan quản lý quan tâm đúng mức Để góp phần xây dựng các cơng cụ phân tích hữu hiệu dùng cho việc xét nghiệm, giám sát độc tố ruột do S aureus trong thực phẩm, luận án “ Nghiên cứu xác định độc tố ruột (enterotoxin) của S aureus gây ngộ độc thực phẩm được thực hiện... độc tố ruột của S aureus trong thực phẩm có thể được thực hiện một cách gián tiếp thơng qua việc xác định sự hiện diện của gen mã hóa độc tố trong vi khuẩn có trong thực phẩm bằng phản ứng PCR Mặt khác, độc tố ruột của S aureus trong thực phẩm có thể được xác định một cách trực tiếp bằng phản ứng ELISA sử dụng kháng thể kháng độc tố này Ở Việt Nam S aureus đã được các cơ quan quản lý nhà nước xác định. .. [12] Tại Mỹ, S aureus gây ra khoảng 14% trong các vụ ngộ độc thực phẩm, gây thiệt hại khoảng 1,5 tỷ đơ la hằng năm; trong đó độc tố ruột A (SEA) chiếm 77,8%, độc tố D (SED) 37,5% và độc tố B (SEB) 10% [46] Ở Nhật Bản, năm 2000, ngộ độc sữa do độc tố A (SEA) của S aureus đã gây ngộ độc cho 14.780 người lớn [42] Số liệu thống kê cho thấy trong các năm 19941998 số trường hợp ngộ độc do S aureus chiếm 3,1... 11,9% các vụ ngộ độc thực phẩm do vi khuẩn tại Nhật Bản Ở Tây Ban Nha, năm 2002, đã xảy ra ba vụ ngộ độc do dùng thực phẩm bị nhiễm độc tố A (SEA) hoặc độc tố C (SEC) của S aureus Ở Đài Loan, S aureus là ngun nhân gây 30% các trường hợp ngộ độc trong thời gian từ 1986 đến năm 1995 Hầu hết các vụ ngộ độc liên quan đến S aureus là do q trình chế biến hoặc bảo quản thực phẩm khơng tốt S aureus thường... nhằm mục tiêu xác định loại độc tố S aureus gây ngộ độc phổ biến tại Việt Nam, xây dựng qui trình multiplex-PCR phát hiện các gen sinh độc tố và xây dựng qui trình ELISA phát hiện các độc tố này trong thực phẩm, góp phần xây dựng các cơng cụ phân tích hữu hiệu dùng cho việc xét nghiệm, giám sát độc tố ruột do S aureus trong thực phẩm ở nước ta Nội dung nghiên cứu của luận án Nội dung của luận án tập... SE mới này trong ngộ độc thực phẩm thì chưa rõ Do vậy, hiện nay hầu hết các bộ bộ kít thương mại chỉ được phát triển đối với 5 độc tố SE là SEA, SEB, SEC, SED và SEE, chính là các độc tố thường gặp nhất trong ngộ độc thực phẩm do S aureus [21] [38] Mặt khác, có khoảng 5% các vụ ngộ độc do S .aureus được cho là có ngun nhân bởi các độc tố chưa được xác định [52] - Độc tố A (SEA) Độc tố SEA được mã hóa... chuẩn kiểm sốt độc tố ruột SE trong thực phẩm tại Việt Nam Các cơng trình khác nghiên cứu về độc tố ruột và sản xuất bộ ELISA để xác định độc tố ruột cũng chỉ giới hạn phát hiện SEA, trong đó các thành phần bộ kít ELISA đều nhập ngoại do nhóm tác giả Lê Quang Hà và CS (2009) của Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội nghiên cứu Bảng 1.2 Qui định về mức cho phép hiện diện của S aureus trong thực phẩm tại Việt Nam... nhiễm S aureus là rất cao 53% ở các mẫu bánh mì thịt nguội, 90% các mẫu thịt quay đã khảo sát [2] [3] Năm 2006, đã ghi nhận được vụ ngộ độc thực phẩm của 105 người tại Nha Trang do thức ăn nhiễm độc tố ruột của S aureus Cùng năm này đã ghi nhận vụ ngộ độc ở nhà trẻ tại Huyện Phú Quốc, Kiên Giang do yaourt bị nhiễm độc tố A (SEA) của S aureus Tháng 12/2007 đã ghi nhận được 2 vụ ngộ độc thực phẩm do S aureus. .. 102CFU/g (khơng đạt tiêu chuẩn) 1.4 PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG ĐỘC TỐ RUỘT SE TRONG THỰC PHẨM Việc phát hiện độc tố ruột SE trong thực phẩm cần những phương pháp nhạy với lượng thấp, ít hơn 1ng/g thực phẩm và lượng độc tố SE gây ngộ độc thực phẩm thay đổi từ 1 đến 50 ng/g [54] Các phương pháp để phát hiện và định lượng độc tố thường được sử dụng hiện nay là các phương pháp miễn dịch bao gồm phương... giờ sau khi ăn thực phẩm bị nhiễm, tùy vào lượng thực phẩm đã dùng, lượng độc tố có trong thực phẩm, độ nhạy với độc tố và sức khỏe của từng người Thơng thường, các triệu chứng ngộ độc chỉ kéo dài khoảng 6 - 8 giờ và hết bệnh sau 1 - 2 ngày [4] b Ngộ độc do S aureus trên thế giới Trên thế giới, vụ ngộ độc lớn đầu tiên do S .aureus xảy ra vào năm 1884 ở Michigan (Mỹ) do phơ mai Các vụ ngộ độc lớn sau này . độc tố ruột do S. aureus trong thực phẩm, luận án “ Nghiên cứu xác định độc tố ruột (enterotoxin) của S. aureus gây ngộ độc thực phẩm được thực hiện nhằm mục tiêu xác định loại độc tố S. aureus. lệ gây ngộ độc thực phẩm bởi S. aureus trong một số vụ ngộ độc thực phẩm tại TP. HCM 50 3.2. XÁC ĐỊNH LOẠI ĐỘC TỐ RUỘT PHỔ BIẾN GÂY NGỘ ĐỘC BỞI S .AUREUS 51 3.2.1. Khảo sát khả năng sinh độc. CHẤT GÂY BỆNH VÀ GÂY NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM CỦA S. AUREUS 3 1.1.1. Đặc điểm sinh học chính 3 1.1.2. Các nhân tố độc lực 5 1.1.3. Ngộ độc thực phẩm do S. aureus 7 1.2. ĐỘC TỐ RUỘT CỦA S. AUREUS