Y học thực hành (8 73 ) - số 6 /201 3 22 So sánh giá trị của PCR đa mồi với cấy khuẩn trong chẩn đoán Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae và Moraxella catarrhalis Lê Hữu Song - Bệnh viện TƯQĐ 108 TóM TắT Chẩn đoán nhanh các mầm bệnh đang là nhu cầu thiết yếu hiện nay. 90 mẫu bệnh phẩm đã đợc tiến hành đồng thời nuôi cấy và PCR để phát hiện Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae và Moraxella catarrhalis. Kết quả cho thấy PCR với bộ mồi universal 16s rRNA có thể phát hiện sự có mặt của vi khuẩn ở 76/90 (84,5%) so với nuôi cấy là 63/90 (70%). PCR đa mồi và nuôi cấy cho kết quả tơng đơng nhau về tỷ lệ dơng tính (82,14 % so với 78,57%), tuy nhiên khác nhau về tỷ lệ phát hiện giữa các mầm bệnh. Nh vậy, so với nuôi cấy PCR tỏ ra có u thế hơn trong chẩn đoán Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae và Moraxella catarrhalis. Từ khóa: PCR, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae và Moraxella catarrhalis. summary Currently, rapid detection of pathogen is needed. 90 clinical samples were cultured and amplified by PCR for identifying Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae and Moraxella catarrhalis. The results showed that universal 16s rRNA PCR can detect these bacteria in 76/90 (84.5%) samples compared to 63/90 (70%) in culture. Multiplex PCR and bacteria culture have a similar number of positive samples (82.14 % vs 78.57%), however, the rate of each pathogen was differentiated. Thus, it demonstrated that PCR is priority as culture for detecting Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae and Moraxella catarrhalis. Keywords: PCR, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae and Moraxella catarrhalis. ĐặT VấN Đề Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae và Moraxella catarrhalis là các nguyên nhân chủ yếu gây viêm đờng hô hấp cấp tính cũng nh gây một số nhiễm khuẩn nặng nh viêm màng não, nhiễm khuẩn huyết và viêm phổi [1]. Để chẩn đoán các mầm bệnh này thì cấy khuẩn là tiêu chuẩn vàng. Tuy nhiên, phơng pháp này đòi hỏi mẫu bệnh phẩm phải tơi, mẫu bệnh sau khi lấy thờng phải làm ngay bởi vì có một số vi khuẩn nhạy cảm và dễ chết nh H. influenza. Để thực hiện các phơng pháp này rất phức tạp và đòi hỏi kỹ thuật viên phải có tay nghề tốt hạn chế tối đa sự bội nhiễm của các loài vi khuẩn khác gây ra kết quả nhầm lẫn. Và do vi khuẩn phải tơi nên tồn tại yếu tố nguy cơ lớn lây nhiễm cho ngời làm xét nghiệm. Trong trờng hợp xử lý bệnh phẩm không tốt còn phát tán vi khuẩn ra môi trờng xung quanh. Bên cạnh đó, thời gian kéo dài là nhợc điểm lớn nhất của phơng pháp vi sinh. Để giải quyết những khó khăn đó ngày nay ngời ta đã đa vào ứng dụng các kỹ thuật sinh học phân tử nh PCR, Real Time PCR Tuy nhiên, cho đến nay phần lớn ngời ta sử dụng các PCR đơn mồi. Mà PCR đơn mồi thì vẫn đòi hỏi tốn nhiều thời gian, kinh phí. Vì vậy, nhu cầu bức thiết hiện nay là phải tìm ra đợc các phơng pháp chẩn đoán mới có độ nhạy và độ đặc hiệu cao hơn, có thời gian trả lời kết quả nhanh hơn và mức độ an toàn cao. Để giải quyết những khó khăn đó chúng tôi tiến hành nghiên cứu ứng dụng PCR đa mồi để phát hiện đồng thời 3 mầm bệnh trên trong 1 lần xét nghiệm. ĐốI TƯợNG Và PHƯƠNG PHáP 1. Đối tợng. - Các chủng vi khuẩn: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae và Moraxella catarrhalis đợc phân lập và nuôi cấy trên môi trờng chuẩn do Khoa Vi sinh vật tại Bệnh viện TƯQĐ 108 cung cấp. Các chủng vi khuẩn đợc định lợng và pha loãng thành dải nồng độ từ cao đến thấp (10 3 : 10 2 : 10 1 : 10 0 CFU/ml). DNA tổng số đợc tách chiết và tinh sạch từ các dung dịch chứa vi khuẩn đã biết nồng độ kể trên để đánh giá độ nhạy kỹ thuật. DNA tổng số đợc tách chiết từ 6 mẫu huyết tơng của bệnh nhân mang vi rút viêm gan B (HBV) và 10 mẫu máu ngời khỏe mạnh để làm chứng âm. - 90 mẫu bệnh phẩm lâm sàng đợc thu thập từ các bệnh nhân đợc điều trị tại các Khoa Truyền nhiễm, Nhi, Tai Mũi Họng, Bệnh viện TƯQĐ 108. 2. Phơng pháp: Tất cả các mẫu bệnh phẩm đợc chia thành 2 phần, một nửa đợc tiến hành cấy khuẩn tại Khoa Vi sinh vật, Bệnh viện TƯQĐ 108. Một nửa còn lại đợc tiến hành thực hiện PCR đa mồi tại Khoa Sinh học phân tử, Bệnh viện TƯQĐ 108. Kết quả từ 2 bộ phận đợc giữ kín độc lập, chỉ đến khi kết thúc nghiên cứu mới đợc tổng hợp lại. Sản phẩm DNA tách từ mỗi bệnh phẩm đợc kiểm tra chất lợng bằng phơng pháp đo độ hấp thụ quang phổ của DNA ở bớc sóng 260 nm và 280 nm, nồng độ của DNA đợc tính bằng độ hấp thụ OD260 nm và mức độ tinh sạch đợc đánh giá bằng tỷ số hấp thụ OD260/OD280. - Các cặp mồi đơn đợc thiết kế bắt cặp đặc hiệu vào các khu vực bảo tồn cao cho mỗi loài nh các gene mã hóa cho protein độc tố đặc trng của loài. Các cặp mồi không bắt cặp chéo với nhau (khi thực hiện phản ứng đa mồi) và không bắt cặp với genomics Y học thực hành (8 73 ) - số 6/2013 23 DNA ngời. Ngoài các bộ mồi đơn đặc hiệu cho mỗi loài, chúng tôi còn thiết kế một cặp mồi bắt vào khu vực bảo tồn chung của tất cả các loài vi sinh vật (universal primer) nhằm kiểm chứng sự lây nhiễm vi sinh vật tổng số hoặc các vi sinh vật không nằm trong danh sách đợc quan tâm. Sự khác biệt về kích thớc giữa các đoạn sản phẩm tạo ra nằm trong khoảng 80 - 100bp, nó đảm bảo cho việc các đoạn sản phẩm có thể dễ dàng đợc phân biệt khi điện di trên gel agarose 1,5-2,5%. Các cặp mồi đặc hiệu cho phát hiện các vi khuẩn trong đề tài đợc sử dụng cho phản ứng PCR nhân các đoạn gene đích có trình tự tơng ứng: Bảng 1. Trình tự mồi cho PCR đa mồi là: Vi khuẩn Đặc điểm Trình tự (5'-3') Gene đích Sản phẩm khuếch đại (bp) S. pneumoniae F TGA AGC GGA TTA TCA CTG GC autolysin (lytA) 701 R GCT AAA CTC CCT GTA TCA AGC G H. influenzae F CGG TTT TGA TAA ATA TGA CAT TACT Outer membrane protein 6 (P6) 273 R CAA CAC CTT TAC CAG CTA AA M. catarrhalis F GTG AGT GCC GCT TTT ACA ACC Outer membrane protein (copB) 155 R TGT ATC GCC TGC CAA GAC AA PCR sử dụng mồi chung cho các loài vi khuẩn khác nhau (Universal Primer) đợc thiết kế dựa trên đoạn 16S rRNA có trình tự nh sau: PF: 5- CCAGCAGCCGCGGTAATACG-3; RP: 5- ATCGG(C/T)TACCTTGTTACGACTTC-3. Sản phẩm PCR có kích thớc là 996 bp. KếT QUả 1. Kết quả tách chiết DNA từ các đối tợng Bảng 1. Kết quả đo OD các mẫu chuẩn dơng và mẫu bệnh phẩm Mẫu bệnh phẩm n Nồng độ DNA ( SD) Độ sạch DNA ( SD) Chủng vi sinh 3 100 2,504 1,87 0.058 Dịch hầu họng 56 73,96 25,78 1.823 0.095 Máu 24 70,51 21,72 1,846 0,101 DNT 10 82,95 38,93 1, 79 0,077 Tổng số 90 74,88 26,39 1,827 0,094 Qua kết quả đo OD ta thấy, 100% mẫu DNA đạt tiêu chuẩn về độ sạch và nồng độ DNA. Trong đó nồng độ DNA thấp nhất là 42,63, cao nhất là 164,58; độ tinh sạch giao động từ 1,733 đến 1,921. DNA thu đợc có độ tinh sạch dao động trong khoảng 1,7 đến 2,4 cho thấy mẫu DNA khá tinh sạch không lẫn protein và các tạp chất. Nh vậy, dung dịch DNA tổng số thu đợc đảm bảo yêu cầu chất lợng để sử dụng làm panel mẫu chuẩn cho các nghiên cứu tiếp theo. 2. Kết quả tối u hóa điều kiện PCR sử dụng mồi Universal 16S rRNA Hình 2: Kết quả PCR mồi Universal 16S rRNA. Nhận xét: Chỉ cần 1 mồi nhng có thể nhân sản phẩm PCR lên ở cả 3 mầm bệnh khác nhau. 3. Kết quả tối u hóa điều kiện PCR đa mồi Hình 2: Kết quả tối u PCR đa mồi phát hiện 3 mầm bệnh. Nhận xét: Với điều kiện Tm=57, MgCl2 =3mM chúng tôi thu đợc hình ảnh sản phẩm PCR đa mồi rõ nét, đúng kích thớc dự kiến. Ghi chú: M=marker, MC=Moraxella catarrhalis, HI=Haemophilus influenzae và SP=Streptococcus pneumoniae 4. Kết quả áp dụng PCR đơn mồi chung (universal 16s rRNA) chẩn đoán vi khuẩn trong các mẫu bệnh phẩm. Các mẫu DNA tách chiết đợc kiểm tra trong mẫu có nhiễm khuẩn không bằng cách PCR mồi universal khuếch đại gene đích là 16s rRNA. Kết quả nh sau: Bảng 2. Kết quả PCR sử dụng cặp mồi 16s rRNA xác định sự có mặt vi khuẩn trong các bệnh phẩm. Bệnh phẩm Số lợng PCR ( - ) với mồi 16s rRNA PCR (+) với mồi 16s rRNA Nuôi cấy (+) Nuôi cấy (-) Dịch hầu họng 56 0 56 56 0 Máu 24 12 12 7 17 DNT 10 2 8 0 10 Tổng số 90 (100%) 14 (15,5%) 76 (84,5%) 63 (70%) 27 (30%) Nhận xét: Kết quả nuôi cấy có tỷ lệ dơng tính là 63/90 (70 %) còn với bộ mồi universal 16s rRNA mà chúng tôi sử dụng có thể phát hiện sự có mặt của vi khuẩn lên tới 76/90 (84,5%). 5. Kết quả áp dụng PCR đa mồi chẩn đoán vi khuẩn trong các mẫu bệnh phẩm. Y học thực hành (8 73 ) - số 6 /201 3 24 Bảng 3. So sánh kết quả nuôi cấy và PCR đa mồi chẩn đoán vi khuẩn trên các mẫu bệnh phẩm dịch hầu họng. PP chẩn đoán Mầm bệnh Nuôi cấy (+) (n=46) Nuôi cấy ( - ) (n=121) Chẩn đoán cuối cùng PCR (+) PCR (-) PCR (+) PCR (-) M.catarrhalis (n,%) 9 (23,08) 30 (76,92) 2 (11,76) 15 (88,24) 11 H.influenzae (n,%) 3 (50) 3 (50) 14 (28,57) 35 (71,43) 17 S.pneumonie (n,%) 1 (100) 0 (0) 15 (33,33) 40 (66,67) 16 Tổng 13 33 31 90 44 Nhận xét: Qua kết quả trên cho thấy số mẫu dơng tính ở cả hai phơng pháp là tơng đơng nhau. Trong nhóm bệnh phẩm hầu họng, phơng pháp nuôi cấy có 46 mẫu dơng tính với một trong ba tác nhân trong tổng số 56 ca (82,14%) và 10 mẫu âm tính (17,86%). Kết quả của PCR đa mồi có 44 trờng hợp dơng tính trong tổng số 56 ca (78,57%), âm tính là 12 ca (21,43%). Bảng 4. So sánh kết quả nuôi cấy và multiplex PCR sử dụng 3 cặp mồi chẩn đoán vi khuẩn trên các mẫu bệnh phẩm máu và DNT Kết quả Bệnh phẩm Nuôi cấy PCR đa mồi (+) ( - ) (+) ( - ) Máu (n,%) 0 (0) 24 (100) 0 (0) 24 (100) DNT (n,%) 0 (0) 10 (100) 1 (10) 9 (90) Tổng số (n,%) 0 (0) 34 (100) 1 (2,94) 33 (97,06) Nhận xét: Không trờng hợp nào ở mẫu máu có kết quả dơng tính với nuôi cấy và PCR đa mồi. Tuy nhiên, trong mẫu DNT, mặc dù cấy khuẩn âm tính 100%, nhng PCR đa mồi phát hiện đợc một mẫu DNT có S.pneumonie và 9 mẫu âm tính. BàN LUậN Chẩn đoán nhanh, chính xác các mầm bệnh đang là nhu cầu cần thiết hiện nay. Một trong những phơng pháp đợc sử dụng là PCR phát hiện gene đích. Tuy nhiên, nếu sử dụng PCR đơn mồi thì mỗi lần xét nghiệm chúng ta chỉ có thể phát hiện đợc tối đa 1 mầm bệnh. Do đó, phát triển các kỹ thuật PCR đa mồi là xu hớng hiện nay. Trong nghiên cứu này chúng tôi tiến hành sử dụng đoạn mồi chung (Universal primer) bắt đoạn 16S rRNA để phát hiện sự có mặt của tất cả các loài vi khuẩn [2]. Cơ sở của phơng pháp này là rRNA có mặt ở tất cả các loại vi sinh vật, có khả năng xác định, có tính bảo thủ cao, chúng chỉ khác nhau rất ít giữa các nhóm vi sinh vật. Chúng tôi đã tiến hành kiểm tra cặp mồi này dựa trên trình tự nucleotide của chủng chuẩn quốc tế, sử dụng công cụ BLAST trên ngân hàng gene quốc tế (NCBI), khuếch đại gene đích có độ dài 371 bp. Kết quả cho thấy chỉ có những mẫu chứa vi khuẩn thì mới cho kết quả dơng tính. Chứng tỏ điều kiện PCR đã đợc tối u. Nh vậy, trong thực hành trớc khi chúng ta cần định danh chính xác mẫu bệnh phẩm có vi khuẩn không chúng ta chỉ cần thực hiện một xét nghiệm PCR. Sử dụng PCR 16S rRNA chúng tôi tiến hành kiểm tra trên 90 mẫu bệnh phẩm. So sánh với kết quả cấy khuẩn cho thấy nuôi cấy có tỷ lệ dơng tính là 63/90 (70 %) còn với bộ mồi universal 16s rRNA mà chúng tôi sử dụng có thể phát hiện sự có mặt của vi khuẩn lên tới 76/90 (84,5%). Nh vậy, so với nuôi cấy PCR 16S rRNA có độ nhạy cao hơn có ý nghĩa. Kết quả này cũng phù hợp với những nghiên cứu trớc đây. Nghiên cứu của Insa và cộng sự cho thấy 16S PCR cho kết quả dơng tính là 81.7%, trong khi đó nuôi cấy chỉ là 54.9% [3]. Sau khi khẳng định chất lợng của PCR đa mồi cho ba gene đích copB, P6 gene, LytA của Moraxella catarrhalis, Haemophilus influenzae và Streptococcus pneumoniae, chúng tôi tiến hành thử nghiệm trên các mẫu bệnh phẩm lâm sàng nghi nhiễm khuẩn thu thập tại khoa Nhi, Khoa vi sinh vật và Khoa truyền nhiễm của Bệnh viện TƯQĐ 108. Qua kết quả trên cho thấy số mẫu dơng tính ở cả hai phơng pháp là tơng đơng nhau. Trong nhóm bệnh phẩm hầu họng, phơng pháp nuôi cấy có 46 mẫu dơng tính với một trong ba tác nhân trong tổng số 56 ca (82,14%) và 10 mẫu âm tính (17,86%). Kết quả của PCR đa mồi có 44 trờng hợp dơng tính trong tổng số 56 ca (78,57%), âm tính là 12 ca (21,43%). Tuy nhiên, xét trên từng trờng hợp chúng tôi thấy có sự khác nhau giữa nuôi cấy và PCR đa mồi. Cụ thể, bằng phơng pháp nuôi cấy đã phát hiện 84,78% M.catarrhalis, 2,24% H.influenzae, và 2,98% S.pneumonie. Trong khi đó khi sử dụng PCR đa mồi cho thấy khả năng phát hiện tác nhân vi sinh khá đồng đều M.catarrhalis là 25,01%, H.influenzae là 38,63% và S.pneumonie là 36,36%. Nh vậy, tỷ lệ phát hiện H.influenzae, S.pneumonie bằng PCR đa mồi là cao hơn rõ rệt so với phơng pháp nuôi cấy. Kết quả này cũng phù hợp với các nghiên cứu trớc đây. Trong đó, tỷ lệ nuôi cấy thờng xuyên thấp hơn PCR: M.catarrhalis (9,5% so với 36,5%), H.influenzae (9,5% so với 95,2%), và S.pneumonie (15,9% so với 19%) [4]. KếT LUậN Nghiên cứu so sánh hai phơng pháp nuôi cấy và PCR đa mồi tiến hành trên 90 mẫu bệnh phẩm lâm sàng kết quả cho thấy: Phản ứng PCR với bộ mồi universal 16s rRNA có thể phát hiện sự có mặt của vi khuẩn ở 76/90 (84,5%) so với nuôi cấy là 63/90 (70%). PCR đa mồi và nuôi cấy cho kết quả tơng đơng nhau về tỷ lệ dơng tính (82,14 % so với 78,57%). Mặc dù, tỷ lệ phát hiện giữa các mầm bệnh thì PCR đa mồi tỏ ra có u thế hơn. Tuy nhiên, trong thực hành không thể thay thế phơng pháp này bằng phơng pháp khác mà nên phối hợp cả 2 phơng pháp để cho kết quả chẩn đoán cao hơn. Tài liệu tham khảo 1. Angus, D.C., W.T. Linde-Zwirble, J. Lidicker, G. Clermont, J. Carcillo, et al. (2001). "Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care," Crit Care Med, 29(7): 1303-10. 2. Hagenbuchle, O., M. Santer, J.A. Steitz, R.J. Mans (1978). "Conservation of the primary structure at the 3' end of 18S rRNA from eucaryotic cells," Cell, 13(3): 551- 63. Y học thực hành (8 73 ) - số 6/2013 25 3. Insa, R., M. Marin, A. Martin, P. Martin-Rabadan, L. Alcala, et al. "Systematic use of universal 16S rRNA gene polymerase chain reaction (PCR) and sequencing for processing pleural effusions improves conventional culture techniques," Medicine (Baltimore), 91(2): 103-10. 4. Shishegar, M., A. Faramarzi, T. Kazemi, A. Bayat, M. Motamedifar "Polymerase chain reaction, bacteriologic detection and antibiogram of bacteria isolated from otitis media with effusion in children, shiraz, iran," Iran J Med Sci, 36(4): 273-80. KếT QUả ĐIềU TRị BệNH NứT HậU MÔN MạN TíNH BằNG PHẫU THUậT CắT BÊN CƠ THắT TRONG PHạM VĂN NĂNG, NGUYễN VĂN HIÊN Bộ môn Ngoại, Trờng ĐHYD Cần Thơ Tóm tắt Tổng quan: Nứt hậu môn mạn là nguyên nhân thờng gây đau ở vùng hậu môn với sự tăng trơng lực cơ thắt trong. Làm giảm trơng lực cơ thắt trong sẽ làm lành vết nứt. Phẫu thuật cắt cơ thắt trong làm giảm hoàn toàn trơng lực cơ thắt trong và vết nứt ở hậu môn sẽ lành tốt. Phơng pháp: nghiên cứu có 44 trờng hợp (26 nữ, 18 nam, tuổi trung bình 34 tuổi) áp dụng cắt cơ thắt trong cho bệnh nứt hậu môn mạn từ 2011 đến 2012. Kết quả: Trong nghiên cứu 44 bệnh nhân đợc phẫu thuật cắt bên cơ thắt trong, có 39 bệnh nhân theo dõi tái khám ở 24 giờ, 1, 4 và 12 tuần sau mổ. 5 bệnh nhân không tái khám đầy đủ. Tuần thứ 12 sau mổ có 89,7% lành bệnh. Tất cả bệnh nhân giảm đau ngay ở ngày thứ nhất sau mổ. Biến chứng nhẹ bao gồm chảy máu (6,8%), nhức đầu (2,3%) và rối loạn trung tiện mức độ nhẹ có 9,1% ở tuần thứ nhất hậu phẫu. Trung đại tiện phục hồi sau 12 tuần theo dõi. Kết luận: cắt bên cơ thắt là phẫu thuật an toàn hiệu quả để điều trị bệnh nứt hậu môn mạn. Summary Background: Chronic anal fissure is the most common cause of anal pain associated with internal anal sphincter hypertonia. Reduction of hypertonia favours fissure healing. Surgical sphincterotomy achieves permanent reduction of sphincter hypertonia and is very successful at healing anal fissures. Methods: A study was undertaken on 44 patients (26 women, 18 men, mean age 34 years) who had undergoing lateral internal sphincterotomy for a chronic anal fissure from 2011 to 2012. Results: During the study period, the 44 patients underwent total lateral internal sphincterotomy. Thirty- nine patients returned for their postoperative visits at 24 hours, 1, 4 and 12 weeks, while five patients were lost to follow-up. At 12 weeks postoperatively, 89.7% of fissures were completely healed. Pain was significantly reduced in all patients at day 1 postoperatively. Minor complica-tions included haematoma (6.8%), head- ache (2.3%) and minor flatus incontinence was seen in 9.1% of patients at one week postoperative. The flatus continence was recovered at 12 week follow-up. Conclusions: Lateral internal sphincterotomy is a safe and effective treatment for chronic anal fissures. ĐặT VấN Đề Nứt hậu môn là bệnh lý thờng gặp ở vùng hậu môn, đứng hàng thứ ba sau bệnh trĩ và bệnh nhiễm trùng hậu môn-trực tràng [1]. Năm 1895 Edouard Quénu mô tả bệnh là một vết nứt nằm ở ống hậu môn kéo dài từ đờng lợc đến rìa hậu môn [1]. Mục đích của việc điều trị là làm giảm đi trơng lực cơ thắt trong. Từ đó giúp cho bệnh nhân hết đau hậu môn và vết nứt sẽ lành tốt. Gabriel phổ biến cắt bỏ thơng tổn và cắt một phần cơ thắt trong ngay vết nứt để điều trị nứt hậu môn. Boyer, Goodsall, Miles cắt cơ thắt trong ngay đờng giữa ở phía sau, phẫu thuật này làm hết đau nhng vết nứt chậm lành và có hội chứng lỗ chìa khóa (hậu môn không kiểm soát hoàn toàn đợc hơi hoặc thỉnh thoảng không kiểm soát đợc phân). Từ đó, Eisenhammer và Park đề nghị nên cắt bên cơ thắt trong để làm giảm tình trạng. Tỷ lệ lành bệnh sau 6 tuần trên 97,5%. ở Việt Nam có rất ít nghiên cứu về bệnh nứt hậu môn. ở Cần Thơ đã thực hiện phẫu thuật cắt bên cơ thắt trong nhng cha có nghiên cứu nào. Từ đó, chúng tôi thực hiện nghiên cứu này để hiểu về đặc điểm lâm sàng của bệnh nứt hậu môn mạn tính và kết quả điều trị bệnh nứt hậu môn mạn tính bằng phẫu thuật cắt bên cơ thắt trong. ĐốI TƯợNG Và PHƯƠNG PHáP NGHIÊN CứU 1. Thiết kế nghiên cứu: mô tả cắt ngang, tiến cứu. 2. Chọn mẫu: bệnh nhân đợc khám chẩn đoán nứt hậu môn mạn tính. Thời gian mắc bệnh trên 6 tuần nhập viện và đợc điều trị bằng phơng pháp phẫu thuật cắt bên cơ thắt trong tại Bệnh viện Trờng Đại Học Y Dợc Cần Thơ trong khoảng thời gian từ 5/12/2011 5/12/2012. 3. Kỹ thuật mổ: rạch da theo đờng hậu môn da, vị trí bên 3 giờ hoặc 9 giờ, dài khoảng 1 cm, phẫu tích vào rãnh liên cơ thắt, bộc lộ cơ thắt trong, dùng dao điện cắt từ bờ trong cơ thắt trong đến đờng lợc. 4. Đánh giá mức độ đau: dựa theo thang điểm đau VAS (Visual Analogue Scale). 5. Xử lý số liệu: đợc xử lý theo phần mềm thống kê SPSS for Window 18.0 KếT QUả NGHIÊN CứU Trong thời gian nghiên cứu có 44 trờng hợp thỏa mãn tiêu chuẩn chọn bệnh, không tái khám 5 (11,4%). Giới tính có 26 nữ (59,1%), 18 nam (40,9%). Tuổi trung bình 33,39 10,57 (10-58). Thời gian mắc bệnh trung bình 55 tuần (8 - 384). Điều trị nội khoa trớc 39 (88,6%). Tiền sử táo bón 37 (84,1%), thủ thuật ở vùng hậu môn 2 (4,6%). Bệnh trĩ kèm theo 25 (56,8%). . 22 So sánh giá trị của PCR đa mồi với cấy khuẩn trong chẩn đoán Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae và Moraxella catarrhalis Lê Hữu Song - Bệnh viện TƯQĐ 108 TóM TắT Chẩn đoán. dơng tính với nuôi cấy và PCR đa mồi. Tuy nhiên, trong mẫu DNT, mặc dù cấy khuẩn âm tính 100%, nhng PCR đa mồi phát hiện đợc một mẫu DNT có S.pneumonie và 9 mẫu âm tính. BàN LUậN Chẩn đoán nhanh,. detecting Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae and Moraxella catarrhalis. Keywords: PCR, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae and Moraxella catarrhalis. ĐặT VấN Đề Streptococcus