TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG www.hsph.edu.vn KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH SALMONELLA TRÊN ĐĨA THẠCH www.hsph.edu.vn MỤC TIÊU • Trình bày được phạm vi áp dụng qui trình xác định Salmonella trên đĩa thạch. • Nêu và thực hiện được các bước của qui trình xác định Salmonella trên đĩa thạch. • Nhận định được kết quả của qui trình xác định Salmonella trên đĩa thạch. www.hsph.edu.vn Phạm vi áp dụng • Các sản phẩm dùng cho con người và thức ăn chăn nuôi • Các mẫu môi trường khu vực sản xuất và xử lý thực phẩm www.hsph.edu.vn Nguyên lý • Phát hiện Salmonella trong mẫu thử bằng cách phân lập và xác định các khuẩn lạc điển hình hoặc ít điển hình trên môi trường chọn lọc kết hợp với các phản ứng sinh hoá đặc trưng trong phép thử khẳng định. (-) (+) (+) (-) Môi trường TSI MT Hektoen enteric www.hsph.edu.vn Salmonella • Trực khuẩn • Gram âm • Không sinh nha bào • Có khả năng di động • Đặc điểm sinh hóa:  Lên men glucose và manitol  Không lên men saccharose và lactose  Không sinh indole  Không phân giải ure  Không có khả năng tách nhóm amine từ tryptophan  Hầu hết các chủng đều sinh hydro sulfur (H 2 S). www.hsph.edu.vn TIẾN HÀNH www.hsph.edu.vn Chuẩn bị dụng cụ • Bình tam giác • Que cấy • Đèn cồn • Găng tay • Cân mẫu • Dụng cụ đồng nhất mẫu www.hsph.edu.vn Chuẩn bị môi trường • Pepton • RV (Rappaport Vassiliadis) • Tetrathiolate • Đỏ phenol lục sáng • HE (Hektoen enteric) www.hsph.edu.vn Chuẩn bị môi trường (tiếp) • Thạch TSI • Thạch ure • Canh thang Trypton • Canh thang MR-VP www.hsph.edu.vn Chủng chuẩn • Chứng dương: Salmonella typhimurium ATCC 14028 • Chứng âm: Escherichia coli ATCC 25922 Các chủng phải ở trạng thái hoạt hoá [...]... C y chuyển 1ml dịch nuôi c y đệm pepton vào bình có sẵn 10ml môi trường canh thang Tetrathionate, ủ ở 41,5±1oC trong 24±3 h www.hsph.edu.vn Bước 3: C y chuyển lên môi trường thạch chọn lọc • L y một vòng que c y dịch nuôi c y từ môi trường RV c y chuyển lên hai đĩa môi trường: thạch đỏ phenol lục sáng và Hektoen enteric • L y một vòng que c y dịch nuôi c y từ môi trường canh thang Tetrathionate, c y. .. Tetrathionate, c y chuyển lên hai đĩa môi trường: thạch đỏ phenol lục sáng và Hektoen Enteric • Ủ ở 37oC / 21-27h www.hsph.edu.vn Bước 4: Nhận dạng khuẩn lạc Salmonella • Trên thạch đỏ phenol lục sáng: khuẩn lạc đục, làm thay đổi màu môi trường từ hồng sang đỏ • Trên thạch Hektoen Enteric: khuẩn lạc Salmonella điển hình thường màu xanh, có tâm đen hoặc không • Lưu ý: Nếu Salmonella mọc y u hoặc không có... Chọn tối thiểu 5 khuẩn lạc nghi ngờ c y chuyển vào môi trường BHI hoặc TSA để thử phản ứng sinh hoá www.hsph.edu.vn Đỏ phenol lục sáng www.hsph.edu.vn HE Bước 5: Kiểm tra tính chất sinh vật hóa học của Salmonella • Lên men đường glucose (+), saccarose (-), lactose (-) • Khả năng sinh H2S (+/-) • Khả năng phân giải Ure (-) • Khả năng sinh Indol (-) • Lysin decarboxyl (+) • Phản ứng VP (-) www.hsph.edu.vn... Chủng VSV www.hsph.edu.vn MT TSI Âm tính Dương tính Hình ảnh trên môi trường TSI www.hsph.edu.vn Thử nghiệm khả năng sinh Indol • Mục đích Phát hiện các VSV có khả năng sinh indol  các VSV có hệ emzym tryptophanase Thuốc thử Kovac’s 44oC / 24h Chủng VSV www.hsph.edu.vn MT canh trypton Pứ dương tính Pứ âm tính Kết quả phản ứng sinh Idol (+) (-) Salmonella không sinh Indol www.hsph.edu.vn Thử nghiệm Urease... www.hsph.edu.vn MT MR-VP Pứ âm tính Pứ dương tính Kết quả phản ứng VP (-) Salmonella cho kết quả (-) với phản ứng VP www.hsph.edu.vn (+) Tính chất sinh hóa PHÉP THỬ PHẢN ỨNG TỶ LỆ % CÁC CHỦNG SALMONELLA CÓ PHẢN ỨNG TSI glucose (hình thành axit) + 100 TSI glucose ( sinh khí) TSI lactose TSI succarose TSI hydro sunfua Phân giải U re Lysin decacboxyl Phản ứng β - galactosidase Phản ứng Voges Proskauer Phản ứng... galactosidase Phản ứng Voges Proskauer Phản ứng Indol quả của các Bảng: Kết www.hsph.edu.vn + + + phản ứng sinh 91,9 99,2 99,5 91,6 99 94,6 98,5 100 98,9 hoá Câu hỏi thu hoạch • H y sơ đồ hóa quy trình phân lập và xác định Salmonella trong thịt lợn? www.hsph.edu.vn ... VP Dung dịch A: 5% α-napthol trong cồn tuyệt đối (để tủ lạnh trước khi dùng) Dung dịch B: 40% NaOH/KOH www.hsph.edu.vn Bước 1: Tiền tăng sinh trong môi trường lỏng không chọn lọc • Cân 25g mẫu thử đã đồng nhất c y vào 225 ml nước đệm peptone • Ủ và nuôi c y các ống nghiệm ở 37±1oC / 18 ± 2h www.hsph.edu.vn Bước 2: Tăng sinh trong môi trường lỏng chọn lọc • Chuyển 0,1ml dịch nuôi trong đệm pepton vào . TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y TẾ CÔNG CỘNG www.hsph.edu.vn KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH SALMONELLA TRÊN ĐĨA THẠCH www.hsph.edu.vn MỤC TIÊU • Trình b y được phạm vi áp dụng qui trình xác định Salmonella trên đĩa thạch. • Nêu. thạch. • Nêu và thực hiện được các bước của qui trình xác định Salmonella trên đĩa thạch. • Nhận định được kết quả của qui trình xác định Salmonella trên đĩa thạch. www.hsph.edu.vn Phạm vi áp dụng • Các. chọn lọc • L y một vòng que c y dịch nuôi c y từ môi trường RV c y chuyển lên hai đĩa môi trường: thạch đỏ phenol lục sáng và Hektoen enteric. • L y một vòng que c y dịch nuôi c y từ môi trường