Đang tải... (xem toàn văn)
BÁO CÁO PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỚP MỎNG
TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ĐÀ NẴNG BÁO CÁO PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỚP MỎNG NHÓM 6 Định nghĩa Sắc ký: Sắc ký là một phương pháp tách hỗn hợp dựa vào sự phân bố khác nhau của chúng giữa hai pha động và tĩnh thành các thành phần để phân tích, nhận biết, tinh chế hoặc định lượng hỗn hợp hay các thành phần. tách • phân tích • nhận biết • tinh chế • định lượng Các thành phân cấu thành Hỗn hợp Những kĩ thuật sắc ký phổ biến E.Sắc ký trao đổi ion (Ion exchange chromatography) A.Sắc lý lỏng (Liquid Chromatography-LC) B.Sắc ký khí (Gas Chromatography- GC) C.Sắc ký bản mỏng (Thin Layer Chromatography-TLC D.Sắc ký giấy ( Paper Chromatography) Những kĩ thuật sắc ký phổ biến E.Sắc ký trao đổi ion (Ion exchange chromatography) A.Sắc lý lỏng (Liquid Chromatography-LC) B.Sắc ký khí (Gas Chromatography- GC) D.Sắc ký giấy ( Paper Chromatography) C.Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography-TLC SẮC KÝ LỚP MỎNG (Thin layer chromatography) • Phương pháp sắc ký lớp mỏng đã được 2 nhà bác học Nga Izmailov và Shraiber mô tả từ năm 1938 nhưng mãi đến 1958 - 1959 sau khi các công trình của E.Stahl được công bố thì nó mới được ứng dụng rộng rãi và ngày càng được cải tiến . Nội dung Định nghĩa 1 2 Hệ sắc ký lớp mỏng3 Công tác chuẩn bị và cách tiến hành 4 Nguyên tắc hoạt động 5 Ví dụ minh họa Sắc kí bản mỏng là một kỹ thuật sắc ký, trong đó pha tĩnh là chất hấp phụ được trải thành lớp mỏng, mịn và đồng nhất, được cố định trên phiến kính hoặc phiến kim loại, nhựa; pha động là một hệ gồm một dung môi đơn thuần hay hỗn hợp nhiều dung môi phối hợp với nhau theo tỷ lệ quy định và được hút lên bản sắc ký bởi mao dẫn , tách dung dịch thí nghiệm dựa trên tính phân cực của các thành phần trong dung dịch. Định nghĩa Nguyên tắc hoạt động - Sắc ký được tiến hành khi cho pha động di chuyển qua pha tĩnh trên đó đã đặt các chất cần tách - Giọt dung dịch mẫu được nhỏ trên đường xuất , còn rìa bản được nhúng vào dung môi thích hợp . - Dưới tác dụng của lực mao quản , dung môi sẽ chuyển động dọc theo lớp hấp phụ và chuyển vận các cấu tử chủa hỗn hợp với các vận tốc khác nhau đưa đến việc tách các cấu tử - Sự khếch tán các cấu tử trong lớp hấp phụ vừa theo chiều dọc vừa theo chiều ngang vì vậy có thể xem quá trình sắc ký thực hiện theo 2 chiều Nguyên tắc hoạt động Hệ sắc ký lớp mỏng 2 3 4 Bản mỏng : chế bằng thủy tinh , polimer , nhôm Pha tĩnh : làm bằng các chất hấp phụ như : silicagel , nhôm oxit , xenlulose , tinh bột Pha động : thường kết hợp nhiều dung môi để tăng khả năng tách các cấu thử ra khỏi nhau 1 Mẫu chất: thường là hỗn hợp nhiều chất có độ phân cực khác nhau. [...]... lại một lớp dày khoảng 5 mm đến 10 mm ở đáy bình Ðậy kín nắp bình và để yên 10 phút ở nhiệt độ phòng Sử dụng bản mỏng TLC silicagel 60 F 254 của hãng Merck được cắt bằng kéo thành bản hình chữ nhật có kích thước 3,5 cm x 12 cm và bản tự chế tạo từ tinh bột sắn dây kích thước 4 cm x 12 cm Ví dụ : Tách chất màu thực vật trong lá xanh làm với các hệ dung môi khác nhau bằng phương pháp sắc kí lớp mỏng Sử... và hoạt tính chất hấp thụ + Bề dày của lớp mỏng + Chất lượng và độ tinh khiết của pha động Công tác chuẩn bị và cách tiến hành Cách tiến hành Đọc kết quả Ví dụ: Ví dụ : Tách chất màu thực vật trong lá xanh làm với các hệ dung môi khác nhau bằng phương pháp sắc kí lớp mỏng Bình khai triển là bình thủy tinh hình trụ cao 25 cm đường kính miệng 10 cm, có nắp đậy kín Bão hòa hơi dung môi trong bình bằng...Hệ sắc ký lớp mỏng Công tác chuẩn bị và cách triển khai Công tác chuẩn bị Chất hấp phụ, bản mỏng sắc ký Trong SKLM, bột rải lớp mỏng thường là loại bột rất mịn chất hấp phụ các chất hấp phụ thường dùng là: - Silicagel loại hạt qua rây cỡ lỗ 0,07-0,10 mm - Nhôm oxyd... mẫu lên bản mỏng Thể tích dung dịch từ 0,001ml đến 0,005ml đối với trường hợp đưa mẫu lên bản mỏng dưới dạng điểm và từ 0,l - 0,2ml khi đưa mẫu lên bản mỏng dưới dạng vạch Ðường xuất phát phải cách mép dưới của bản mỏng 1,5cm - 2cm và cách bề mặt dung môi từ 0,8 - 1 cm Các vết chấm phải nhỏ, có đường kính 2 -6mm và cách nhau 15mm Các vết ở bìa phải cách bờ bên của bản mỏng 1cm Ðặt bản mỏng gần như... G, loại có chỉ thị huỳnh quang có chữ F (ví dụ silicagel GF254) SKLM thường được tiến hành trên một bản thuỷ tinh hay chất dẻo có rải một lớp mỏng các hạt bột mịn dính chắc trên đó Bản mỏng có thể tự rải lấy, nhưng ngày nay thường dùng loại bản mỏng tráng sẵn - Bản mỏng thường phải sấy 120oC trong 30 phút đê hoạt hoá trước khi dùng Công tác chuẩn bị và cách triển khai Công tác chuẩn bị Dung môi - Dung... lên bản mỏng - Kẻ một vạch thẳng nằm ngang bằng bút chì, cách mép dưới của bản mỏng 1 cm làm vạch xuất phát Dùng mao quản hay micropipet chấm các vết dung dịch thử và dung dịch chuẩn lên đó Các vết phải cách nhau và cách mép bản mỏng ít nhất 1 cm Công tác chuẩn bị và cách tiến hành Cách tiến hành Khai triển sắc ký Là quá trình cho pha động chạy, kéo mẫu phân tích di chuyển trên pha tĩnh Đặt bản mỏng. .. tĩnh Đặt bản mỏng vào bình sắc ký đã bão hoà hơi dung môi của pha động, mép phía chấm mẫu được nhúng vào dung môi động nhưng không được cho điểm đã chấm mẫu chạm trực tiếp vào dung môi động Sau khi dung môi chạy được nửa hay hai phần ba bản mỏng ta lấy ra để khô hay sấy khô Công tác chuẩn bị và cách tiến hành Cách tiến hành Phát hiện các vết trên bản mỏng: Có nhiều phương pháp để phát hiện các vết... 1cm Ðặt bản mỏng gần như thẳng đứng với bình triển khai, các vết chấm phải ở trên bề mặt của lớp dung môi khai triển Ðậy kín bình và để yên ở nhiệt độ không đổi Khi dung môi đã triển khai trên bản mỏng được một đoạn, lấy bản mỏng ra khỏi bình, đánh dấu mức dung môi, làm bay hơi dung môi còn đọng lại trên bản mỏng rồi chụp ảnh, đo khoảng di chuyển của dung môi và các chất cần tách.Tính Rf "XIN CHÂN... ninhydrin cho acid amin) Cũng có thể thêm một chất huỳnh quang vào pha tĩnh: cả bản mỏng sẽ sáng (huỳnh quang) khi soi đèn tử ngoại (ví dụ đèn Hg cho 254 nm) Nơi có chất sẽ tối hoặc có huỳnh quang màu khác với nền sáng của bản mỏng Công tác chuẩn bị và cách tiến hành Cách tiến hành Phát hiện các vết trên bản mỏng: Sắc phổ quan sát trong ánh sáng thường và đèn UV Công tác chuẩn bị và cách tiến hành... môi xếp theo thứ tự mạnh dần (sức đẩy, phản hấp phụ): hexan, heptan, cyclohexan, carbon tetraclorid, benzen, cloroform, butyl acetat, ethet, ethyl acetat, pyridin, aceton, ethanol, methanol, nước Bình sắc kí - Có thể là bình chuyên dụng hoặc các lọ rộng miệng, ống hình trụ, có nắp Công tác chuẩn bị và cách triển khai Công tác chuẩn bị Ống vi quản (1) Hai tay cầm ống thủy tinh hơ trên ngọn lửa xanh của . TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ĐÀ NẴNG BÁO CÁO PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỚP MỎNG NHÓM 6 Định nghĩa Sắc ký: Sắc ký là một phương pháp tách hỗn hợp dựa vào sự phân bố khác nhau của chúng. Chromatography- GC) D .Sắc ký giấy ( Paper Chromatography) C .Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography-TLC SẮC KÝ LỚP MỎNG (Thin layer chromatography) • Phương pháp sắc ký lớp mỏng đã được 2 nhà. nghĩa 1 2 Hệ sắc ký lớp mỏng3 Công tác chuẩn bị và cách tiến hành 4 Nguyên tắc hoạt động 5 Ví dụ minh họa Sắc kí bản mỏng là một kỹ thuật sắc ký, trong đó pha tĩnh là chất hấp phụ được trải thành lớp mỏng,