BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VƯƠNG LAN HƯƠNG XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI LAMIVUDIN, ZIDOVUDIN & NEVIRAPIN TRONG CHẾ PHẨM VIÊN NÉN BẰNG MEKC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI, 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VƯƠNG LAN HƯƠNG XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI LAMIVUDIN, ZIDOVUDIN & NEVIRAPIN TRONG CHẾ PHẨM VIÊN NÉN BẰNG MEKC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ GV hướng dẫn: Nguyễn Thị Thùy Linh Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa phân tích - Độc chất Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI, 2013 LỜI CẢM ƠN Khóa luận tốt nghiệp này được hoàn thành tại bộ môn Hóa phân tích - Độc chất trường Đại học dược Hà Nội. Em xin chân thành gửi lời cảm ơn sâu sắc tới cô Nguyễn Thị Thùy Linh, người đã tận tâm dìu dắt, chỉ bảo em trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành khóa luận. Em cũng xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, các thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội cũng như các thầy cô giáo, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Hóa phân tích - Độc chất đã tạo điều kiện tốt nhất cho em trong quá trình học tập và nghiên cứu. Cuối cùng em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, những người đã hết lòng giúp đỡ và động viên em hoàn thành khóa luận này Hà Nội, tháng 02 năm 2013 Sinh viên Vương Lan Hương MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 1 PHẦN I: TỔNG QUAN 3 1.1 Tổng quan về Lamivudin, Zidovudin & Nevirapin 3 1.1.1 Tổng quan chung 3 1.1.2 Dược động học 4 1.1.3 Ứng dụng Lamivudin, Zidovudin & Nevirapin trong điều trị HIV 6 1.2 Cơ sở lý thuyết điện di mao quản 8 1.2.1 Cơ chế của quá trình điện di trong mao quản 8 1.2.2 Các kiểu điện di mao quản 10 1.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình điện di 12 1.2.4 Điện di mao quản micelle (MEKC) 12 1.2.5 Ưu - nhược điểm của MEKC 17 1.3 Một số nghiên cứu gần đây về tách và định lượng đồng thời 3TC, AZT & NVP 18 1.3.1 Phương pháp HPLC 18 1.3.2 Phương pháp CE 20 PHẦN II: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG & PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Điều kiện nghiên cứu 21 2.1.1 Các chất chuẩn đối chiếu 21 2.1.2 Hóa chất 21 2.1.3 Thiết bị và dụng cụ 23 2.2 Đối tượng nghiên cứu 23 2.3 Nội dung và phương pháp nghiên cứu 24 2.3.1 Nội dung nghiên cứu 24 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu 24 3.1 Lựa chọn điều kiện điện di tối ưu 27 3.1.1 Lựa chọn bước sóng 27 3.1.2 Điều kiện điện di 28 3.1.3 Lựa chọn phương pháp bơm mẫu 29 3.1.4 Lựa chọn kiểu điện di 30 3.1.5 Lựa chọn dung dịch điện ly nền 31 3.1.6 Khảo sát điều kiện pH của dung dịch điện ly nền 32 3.1.7 Khảo sát nồng độ dung dịch điện ly nền 35 3.1.8 Khảo sát nồng độ chất tạo micelle SDS 37 3.1.9 Khảo sát thế đặt vào hai đầu mao quản 39 3.1.10 Khảo sát áp suất tiêm mẫu 41 3.1.11 Định tính Lamivudin, Zidovudin, Nevirapin trong điều kiện điện di đã được thiết lập 43 3.1.12 Kết luận 45 3.2 Thẩm định phương pháp 45 3.2.1 Khảo sát tính tương thích hệ thống 45 3.2.2 Tính đặc hiệu 46 3.2.3 Xác định khoảng tuyến tính 48 3.2.4 Độ lặp lại của phương pháp 52 3.2.5 Độ đúng của phương pháp 54 3.3 Ứng dụng định lượng trong chế phẩm 56 PHẦN IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 58 4.1 Kết luận 58 4.2 Đề xuất 59 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AIDS Hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải ở người ( Acquired immunodeficiency syndrome) AZT Zidovudin C Nồng độ CE Điện di mao quản (Capillary Electrophoresis) CEC Điện sắc ký mao quản (Capillary Electrochromatography) CGE Điện di mao quản gel (Capillary Gel Electrophoresis) CZE Điện di mao quản vùng (Capillary Zone Electrophoresis) C max Nồng độ đỉnh của thuốc trong huyết tương DAD Detector mảng diod (Diod Array Detector) EOF Dòng điện thẩm (Electro – osmotic Flow) HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao (High Performance Liquid Chromatography) HIV Virus gây bệnh suy giảm miễn dịch ở người ( Human Immunodeficiency Virus) NVP Nevirapin MEKC Sắc ký điện động micelle (Micellar Electrokinetic chromatography) RSD % Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) S pic Diện tích pic SD Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) STT Số thứ tự T 1/2 Thời gian bán thải T max Thời gian để đạt C max T m Thời gian di chuyển T nc Nhiệt độ chảy UV – VIS Bước sóng tử ngoại - khả kiến (Ultra Violet – Visiable) WHO Tổ chức Y tế thế giới (World Heal Organization) 3TC Lamivudin ddC Zalcitabine ddI Didanosine DANH MỤC CÁC BẢNG STT bảng Tên bảng 1 Tổng quan chung về Lamivudin, Zidovudin & Nevirapin 2 Dược động học của Lamivudin, Zidovudin & Nevirapin 3 Các kiểu điện di, cơ chế tách và ứng dụng 4 Kết quả khảo sát tính tương thích hệ thống của phương pháp (n=6) 5 Diện tích pic trên điện di đồ và nồng độ 3TC tương ứng 6 Diện tích pic trên điện di đồ và nồng độ AZT tương ứng 7 Diện tích pic trên điện di đồ và nồng độ NVP tương ứng 8 Kết quả xác định độ lặp lại của phương pháp MEKC trong định lượng 3TC 9 Kết quả xác định độ lặp lại của phương pháp MEKC trong định lượng AZT 10 Kết quả xác định độ lặp lại của phương pháp MEKC trong định lượng NVP 11 Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp trên thêm chuẩn Lamivudin 12 Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp trên thêm chuẩn Zidovudin 13 Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp trên thêm chuẩn Nevirapin 14 Kết quả định lượng viên nén Avocomb-N 15 Kết quả định lượng viên nén Lamivudin 150mg & Zidovudin 300mg DANH MỤC CÁC HÌNH STT hình Tên hình 1 Sơ đồ nguyên tắc hoạt động của CE 2 Sự di chuyển của ion và phân tử trong mao quản 3 Thứ tự rửa giải trên điện di đồ 4 Cấu trúc của các micelle và dòng EOF trong MEKC 5 Micell hình cầu 6 Phổ hấp thụ của Lamivudin 7 Phổ hấp thụ của Zidovudin 8 Phổ hấp thụ của Nevirapin 9 Điện di đồ chuẩn Lamivudin, Zidovudin, Nevirapin ở ba dung dịch điện ly nền khác nhau 10 Điện di đồ hỗn hợp ba chuẩn với dung dịch điện ly nền Na 2 B 4 O 7 10mM/ SDS 50mM ở các pH khác nhau 11 Điện di đồ hỗn hợp 3 chuẩn với dung dịch điện ly nền ở các nồng độ borat khác nhau 12 Điện di đồ hỗn hợp 3 chuẩn với dung dịch điện ly nền ở các nồng độ SDS khác nhau 13 Điện di đồ hốn hợp 3 chuẩn với dung dịch điện ly nền borat 10mM/SDS 50mM ở các thế khác nhau 14 Điện di đồ hỗn hợp chuẩn với thời gian tiêm mẫu khác nhau 15 Điện di đồ hỗn hợp thử [...]... dụng trong phác đồ điều trị HIV/AIDS ở Việt Nam 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu Phương pháp được chọn ở đây là phương pháp điện di mao quản với hai kiểu điện di CZE và MEKC Tiến hành khảo sát các điều kiện để: - Xây dựng phương pháp tách và định lượng đồng thời 3TC, AZT & NVP - Ứng dụng trong định lượng chế phẩm viên nén 2.3.2.1 Thẩm định phương pháp Phương pháp phân tích đang xây dựng được thẩm định. .. Lamivudin, Nevirapin & Zidovudin bằng MEKC nhằm hai mục tiêu - Xây dựng phương pháp phù hợp và ổn định để tách và định lượng đồng thời Lamivudin, Zidovudin & Nevirapin - Ứng dụng phương pháp đã xây dựng được để kiểm tra một số chế phẩm chứa Lamivudin, Zidovudin & Nevirapin được dùng trong phác đồ điều trị HIV/AIDS 3 PHẦN I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan về Lamivudin, Nevirapin và Zidovudin 1.1.1 Tổng quan chung... dung và phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Nội dung nghiên cứu Tham khảo và nghiên cứu các tài liệu về CE, MEKC, các đặc tính lý hóa của hoạt chất cần phân tích Trên cơ sở đó khảo sát các điều kiện điện di nhằm tìm ra điều kiện tối ưu nhất để tách và định lượng đồng thời Lamivudin, Zidovudin và Niverapin trong chế phẩm viên nén Thẩm định phương pháp xây dựng được Từ phương pháp đó, tiến hành kiểm tra chất lượng. .. dược phẩm vẫn còn rất hạn chế Với những mục đích trên, đồng thời nhằm nâng cao chất lượng việc xây dựng tiêu chuẩn và quản lý các thuốc điều trị HIV đang được sử dụng tại Việt Nam; giúp kiểm nghiệm viên có thêm nhiều lựa chọn khi tìm phương pháp kiểm nghiệm phù hợp với điều kiện nơi làm việc nhất, chúng tôi đã tiến hành khóa luận Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời Lamivudin, Nevirapin & Zidovudin. .. hiệu suất không cao - Thời gian lưu của dung dịch phụ thuộc rất nhiều vào thành phần đệm, dung dịch điện ly Vì vậy đòi hỏi phải cẩn thận và tỉ mỉ 1.3 Một số nghiên cứu gần đây về tách và định lượng đồng thời 3TC, AZT & NVP 1.3.1 Phương pháp HPLC Dưới đây chúng tôi trình bày một số nghiên cứu gần đây về tách và định lượng đồng thời Lamivudin, Zidovudin và Nevirapin bằng phương pháp HPLC 19 - Bin Fan,... phút, của ddC là 5,2 phút và của NVP là 15,0 phút 1.3.2 Phương pháp CE Gần đây, phương pháp CE được sử dụng rộng rãi do tính ưu việt về hiệu quả tách cao, thời gian phân tích ngắn, lượng mẫu tiêm tốn ít Phương pháp này đã được ứng dụng trong nghiên cứu tách và định lượng Lamivudin, Zidovudin và Nevirapin trong nhiều hỗn hợp khác nhau - Bin Fan và J.T Stewart sử dụng phương pháp điện di mao quản vùng... mục đích xây dựng một phương pháp nghiên cứu phân tích ít tốn kém và ít độc hại hơn, chúng tôi hướng đến phương pháp điện di mao quản Đã có nhiều nghiên cứu phân tích 3TC, AZT & NVP bằng phương pháp HPLC Tuy nhiên, chưa thấy một nghiên cứu nào phân tích định lượng đồng thời ba chất đó bằng phương pháp CE Mặt khác, CE tuy không còn mới lạ trên thế giới, nhưng ở Việt Nam, việc ứng dụng CE vào trong kiểm... của MEKC MEKC là một kiểu điện di có nhiều ứng dụng bởi vì có thể tách định lượng các chất trung hòa và mang điện tích, có đặc tính sơ nước và thân nước như acid amin, nucleotide, vitamin, hydrocarbon thơm Với chế phẩm dược có thể dùng MEKC để xác định hoạt chất trong các loại viên, dung dịch tiêm 1.2.5 Ưu - nhược điểm của MEKC Phương pháp MEKC là một phương pháp phân tích hiện đại cho độ tin cậy và. .. được quá 5%  Độ đúng của phương pháp Độ đúng của phương pháp được xác định bằng tỷ lệ tìm lại của một mẫu thử đã được cho thêm những lượng chuẩn nhất định Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã tiến hành lặp lại năm lần, chuẩn thêm vào khoảng 20% so với lượng trong mẫu Phương pháp thêm chuẩn vào mẫu được chuẩn bị như sau: Mẫu thử: là dung dịch chế phẩm được pha với nồng độ nằm trong khoảng tuyến tính Mẫu... 30cm, đường kính 50µm Phương pháp cho phép tách 3TC, ddI & NVP và chúng được phát hiện bởi detector DAD ở bước sóng 210nm Thời gian lưu thu được của ba chất lần lượt là: 3TC là 4,3 phút; NVP là 6,2 phút và ddI là 9,8 phút.[19] - Nghiên cứu tách và định lượng đồng thời AZT, ddI & NVP trong huyết tương người bằng MEKC, Bin Fan và cộng sự sử dụng dung dịch điện ly nền là đệm phosphat 15mM và đệm borat, pH . Lamivudin, Nevirapin & Zidovudin bằng MEKC nhằm hai mục tiêu - Xây dựng phương pháp phù hợp và ổn định để tách và định lượng đồng thời Lamivudin, Zidovudin & Nevirapin. - Ứng dụng phương pháp. phương pháp MEKC trong định lượng 3TC 9 Kết quả xác định độ lặp lại của phương pháp MEKC trong định lượng AZT 10 Kết quả xác định độ lặp lại của phương pháp MEKC trong định lượng NVP 11. ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VƯƠNG LAN HƯƠNG XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI LAMIVUDIN, ZIDOVUDIN & NEVIRAPIN TRONG CHẾ PHẨM VIÊN NÉN BẰNG MEKC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ