Nghiên cứu xây dựng phương pháp xác định hàm lượng một số chất phân lập được từ vỏ thân cây gạo

65 453 0
Nghiên cứu xây dựng phương pháp xác định hàm lượng một số chất phân lập được từ vỏ thân cây gạo

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

P NG H P HÁ P S Ố TR Ư H IÊN C P XÁ C Ố CH Ấ V KHÓA L Ư ỜNG Đ L Ụ C ỨU C ĐỊ N Ấ T P H Ỏ T H L UẬN T H BỘ Y ẠI HỌ C WY  Ụ C TU Ấ XÂ Y N H H À H ÂN L H ÂN C T ỐT N G H À NỘI TẾ C DƯỢ C ZX Ấ N TÚ Y DỰ N À M L L ẬP Đ C ÂY G G HIỆP D - 2013 C HÀ N Ộ N G P H L ƯỢ N Đ Ư Ợ G ẠO D ƯỢC S Ộ I H ƯƠ N N G M Ợ C T Ừ Ĩ N G M ỘT Ừ BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI WY  ZX LỤC TUẤN TÚ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT PHÂN LẬP ĐƯỢC TỪ VỎ THÂN CÂY GẠO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1. PGS.TS. Thái Nguyễn Hùng Thu 2. DS. Phạm Lê Minh Nơi thực hiện: 1. Trung tâm kiểm nghiệm Dược phẩm và Mỹ phẩm Hà Nội 2. Bộ môn Hóa phân tích – Độc chất Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2013 LỜI CẢM ƠN Sau một thời gian thực hiện đề tài “Nghiên cứu xây dựng phương pháp xác định hàm lượng một số chất phân lập được từ vỏ thân cây Gạo”, ngoài sự làm việc nghiêm túc, sự cố gắng, nỗ lực hết mình của bản thân, tôi đã nhận được rất nhiều sự khích lệ từ phía nhà trường, thày cô, gia đình và bè bạn. Trước hết, tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS. Thái Nguy ễn Hùng Thu – Trưởng Bộ môn Hóa phân tích – Độc chất, người đã dành nhiều thời gian và tâm huyết hướng dẫn nghiên cứu, giúp tôi hoàn thành khóa luận tốt nghiệp. Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS. Nguyễn Thái An – Bộ môn Dược Liệu, người đã rất nhiệt tình hướng dẫn tôi trong quá trình thực hiện đề tài. Đồng thời tôi xin gửi lời cảm ơn tới ThS. Hồ Thị Thanh Huyền và DS. Phạm Lê Minh - Bộ môn Hóa phân tích – Độc chất cùng toàn thể các cán bộ Bộ môn Hóa phân tích-Độc chất, cán bộ Trung tâm Kiểm nghiệm Dược phẩm và Mỹ phẩm Hà Nội đã tạo mọi điều kiện thuận lợi để tôi hoàn thành khóa luận này. Tôi xin chân thành cảm ơn quý thày cô Trường Đại học Dược Hà nội, đặc biệt là những thày cô đã trực tiếp giảng dạy tôi suốt thời gian học tập tại Trường. Cuối cùng, tôi xin tỏ lòng biết ơn gia đình, b ạn bè đã động viên tôi về mọi mặt và giúp đỡ tôi tận tình trong quá trình học tập, nghiên cứu, là động lực không nhỏ để tôi có kết quả ngày hôm nay. Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà nội, tháng 05 năm 2013. Lục Tuấn Tú MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ 1 1.1.TỔNG QUAN VỀ CÂY GẠO 2 1.1.1. Đặc điểm thực vật 2 1.1.2. Tính vị và công năng của cây Gạo 2 1.1.3. Bộ phận dùng, thu hái và chế biến 3 1.2.TÁC DỤNG DƯỢC LÝ VỎ THÂN CÂY GẠO 3  Hoạt động antiangiogenic của Lupeol 4  Tác dụng hạ huyết áp 4  Tác dụng chống viêm 4  Tác dụng bảo vệ gan 4  Tác dụng ức chế sự hình thành các tế bào tĩnh mạch trung tâm rốn của con người ……………………………………………………………………………4  Tác dụng kháng khuẩn, kháng n ấm 5 1.3.CÔNG DỤNG CỦA VỎ THÂN CÂY GẠO 5 1.4.THÀNH PHẦN HÓA HỌC VỎ THÂN CÂY GẠO 5 1.4.1. Công thức hoá học, tính chất vật lý, tác dụng dược lý của một số chất phân lập từ vỏ thân cây Gạo 6 1.5.MÁY SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 12 1.5.1. Khái niệm sắc ký lỏng hiệu năng cao 12  1.5.2. Các thông số đặc trưng 13 1.5.3. Hệ thống máy HPLC 15 1.5.4. Các phương pháp định lượng bằng kỹ thuật HPLC 16 1.5.5. Tổng quan về sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS) 17 CHƯƠNG II - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 21 2.2.THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 21 2.2.1. Hóa chất 21 2.2.2. Dụng cụ thiết bị 21 2.3.NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 22 2.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.4.1. Chuẩn bị mẫu thử 22 2.4.2. Chuẩn bị các chất đối chiếu 23 2.4.3. Khảo sát và tìm điều kiện sắc ký 23 2.4.4. Thẩ m định phương pháp phân tích 24 2.4.5. Phương pháp xử lý số liệu 26 CHƯƠNG III - THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 27 3.1. HÀM ẨM VÀ HIỆU SUẤT CHIẾT CẮN TOÀN PHẦN 27 3.1.1. Hàm ẩm của dược liệu: 27 3.1.2. Hiệu suất chiết 27 3.2. KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ 27 3.3. XÁC ĐỊNH ĐỘ TINH KHIẾT CỦA CÁC HỢP CHẤT NGHIÊN CỨU 30 3.4. ĐỊNH TÍNH CÁC HỢP CHẤT TRÊN SẮC KÝ ĐỒ 33 3.5. THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CÁC CHẤT TRONG VỎ THÂN CÂY GẠO BẰNG HPLC 36 3.5.1. Kiểm tra sự phù hợp của hệ thống sắc ký: 36 3.5.2. Tính đặc hiệu 36 3.5.3. Độ lặp lại 37 3.5.4. Khoảng nồng độ tuyến tính 37 3.5.5. Độ đúng 41 3.5.6. Giới hạn phát hiện LOD và giớ i hạn định lượng LOQ 41 3.6. ỨNG DỤNG ĐỊNH LƯỢNG CÁC CHẤT TRONG VỎ THÂN CÂY GẠO42 3.7.BÀN LUẬN 42 3.7.1. Về phương pháp xử lý mẫu 42 3.7.2. Về khảo sát điều kiện sắc ký HPLC 43 3.7.3. Về kết quả định lượng các chất trong vỏ thân cây Gạo 43 3.7.4. Về thẩm đị nh phương pháp định lượng 43 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 45 KẾT LUẬN 45 ĐỀ XUẤT 46  TÀI LIỆU THAM KHÁO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT C: Nồng độ (µg/mL) ESI: Ion hóa bằng phun điện tử (Electronspray ionization) EtOH: Ethanol HPLC: Sắc ký lỏng hiệu năng cao LC-MS: Sắc ký lỏng ghép khối phổ (Liquid Chromatography – Mass Spectrometry) LOD: Giới hạn phát hiện (Limit of Detection) LOQ: Giới hạn định lượng (Limit of Quatification) MeCN: Acetonitril MeOH: Methanol MS: Khối phổ (Mass Spectrometry) RSD: Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) S/N: Tín hiệu/nhiễu đường nền (Signal/Noise) SD: Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) STT: Số thứ tự S: Diện tích pic sắc ký (mAu.s) TP: Thành phần t R : Thời gian lưu UV-VIS: Tử ngoại khả kiến (Ultraviolet visible)  DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1. Độ ẩm bột dược liệu 27 Bảng 3.2. Một số thông số thể hiện sự phù hợp của hệ HPLC đã lựa chọn 36 Bảng 3.3. Kết quả khảo sát độ lặp lại với các chất phân tích 37 Bảng 3.4. Kết quả khảo sát tuyến tính với epicatechin 38 Bảng 3.5. Kết quả khảo sát tuyến tính với catechin 38 Bảng 3.6. Kết quả khảo sát tuyến tính với daucosterol 39 Bảng 3.7. Kết quả khảo sát tuyến tính với Lupeol 39 Bảng 3.8. Kết quả khảo sát tuyến tính với Stigmasterol 40 Bảng 3.9. Kết quả khảo sát tuyến tính với friedelin 40 Bàng 3.10. Tổng hợp kết quả khảo sát độ đúng của 6 chất 41 Bảng 3.11. Kết quả khảo sát LOD và LOQ (µg/mL) 41 Bảng 3.12. Kết quả xác định hàm lượng từng chất trong mẫu vỏ thân cây Gạo nghiên cứu 42 Bảng phụ lục. Kết quả khảo sát độ đúng của 6 chất trong vỏ thân cây Gạo. DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1. Hệ thống máy HPLC 15 Hình 1.2. Sơ đồ khối của máy khối phổ 18 Hình 1.3. Sơ đồ bộ tứ cực chập ba. 19 Hình 3.3. Sắc ký đồ của epicatechin phân lập được từ vỏ thân cây Gạo. 31 Hình 3.4. Sắc ký đồ của catechin phân lập được từ vỏ thân cây Gạo. 31 Hình 3.5. Sắc ký đồ của daucosterol phân lập được từ vỏ thân cây Gạo 31 Hình 3.6. Sắc ký đồ của lupeol phân lập được từ vỏ thân cây Gạo. 32 Hình 3.7. Sắc ký đồ của stigmasterol phân lập được từ vỏ thân cây Gạo 32 Hình 3.8. Sắc ký đồ của friedelin phân lập được từ vỏ thân cây Gạo 32 Hình 3.9. Phổ khối lượng ứng với các pic của epicatechin trên sắc ký đồ của mẫu thử và hỗn hợp chất đối chiếu 33 Hình 3.10. Phổ khối lượng ứng với các pic của catechin trên sắc ký đồ của mẫu thử và hỗn hợp chất đối chiếu. 34 Hình 3.11. Phổ khối lượng ứng với các pic của daucosterol trên sắc ký đồ của mẫu thử và hỗn hợp chất đối chiếu 34 Hình 3.12. Phổ khối lượng ứng với các pic của lupeol trên sắc ký đồ của mẫu thử và hỗn hợp chất đối chiếu 34 Hình 3.13. Phổ khối lượng ứng với các pic của stigmasterol trên sắc ký đồ của mẫu thử và hỗn hợp chất đối chiếu 35 Hình 3.14. Phổ khối lượng ứng với các pic của friedelin trên sắc ký đồ của mẫu thử và hỗn hợp chất đối chiếu 35 Hình 3.15. Sắc ký đồ của mẫu trắng (dung môi pha mẫu) 37 Hình phụ lục. Sắc ký đồ của hỗn hợp mẫu thử. [...]... Nghiên cứu xây dựng phương pháp xác định hàm lượng một số chất phân lập được từ vỏ thân cây Gạo đã được thực hiện nhằm mục tiêu: 1 Xây dựng được một quy trình định lượng đồng thời một số hợp chất đã được phân lập từ vỏ thân cây Gạo bằng phương pháp HPLC 2 Ứng dụng phương pháp xây dựng được để sơ bộ xác định hàm lượng epicatechin, catechin, daucosterol, lupeol, stigmasterol và friedelin có trong một. .. kết nối - Thẩm định các điều kiện định lượng một số hợp chất trên với chất đối chiếu là các chất phân lập được đã qua nhận dạng cấu trúc và xác định tổng tạp chất bằng phương pháp chuẩn hóa diện tích - Áp dụng để sơ bộ xác định hàm lượng 6 hợp chất trên có trong mẫu thân cây Gạo đã thu hái được 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.4.1 Chuẩn bị mẫu thử 2.4.1.1 Xác định độ ẩm của bột dược liệu Vỏ thân sau khi... chất béo, caroten [11], [12], [13], [34], [43] Cũng từ vỏ thân cây Gạo, tác giả sử dụng sắc ký cột với chất hấp thụ là silicagel có cỡ hạt 40-63 µm đã phân lập được 2 chất: epicatechin và bis (2-ethylhexyl) adipate [11] - 6Vỏ thân chứa chất nhầy Năm 2003, các nhà khoa học Hàn Quốc đã phân lập được một chất từ phân đoạn dicloromethan là lupeol [33], [43] Năm 1971, βsitosterol cũng được phân lập từ vỏ. .. rất đáng kể Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng kỹ thuật MS/MS để định tính 6 hợp chất có trong vỏ thân cây Gạo - 21 - CHƯƠNG II - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Mẫu nghiên cứu là vỏ thân của cây Gạo (được làm khô tự nhiên) thu hái vào mùa hè tại Hương Sơn (Mỹ Đức, Hà Nội) và đã được TS Trần Huy Thái (Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh học) giám định tên khoa học là:... ghi tín hiệu và xử lý số liệu (Data System) 1.5.4 Các phương pháp định lượng bằng kỹ thuật HPLC [1] Tất cả các phương pháp định lượng bằng sắc ký đều dựa trên nguyên tắc: nồng độ của chất tỷ lệ với chiều cao hoặc diện tích pic của nó Có 4 phương pháp định lượng thường được sử dụng trong sắc ký là: - Phương pháp chuẩn ngoại - Phương pháp chuẩn nội - Phương pháp thêm chuẩn - Phương pháp chuẩn hóa diện... gốc Cân chính xác một lượng từng chất nghiên cứu đã phân lập và tinh chế được, cho vào bình định mức 25mL, thêm vừa đủ methanol, lắc đều cho tan hoàn toàn Dung dịch này dùng để kiểm tra tổng tạp và được pha loãng thích hợp để xây dựng dãy dung dịch chuẩn 2.4.3 Khảo sát và tìm điều kiện sắc ký 2.4.3.1 Cột sắc ký Qua tham khảo các tài liệu nghiên cứu về phương pháp tách chiết, định lượng một số thành phần... giữa giá trị của các lần định lượng 2.4.4.4 Xác định khoảng nồng độ tuyến tính Độ tuyến tính của một phương pháp phân tích: là sự phụ thuộc tuyến tính giữa đại lượng đo được (y) và nồng độ chất cần phân tích (x) trong khoảng xác định Nó được biểu thị bằng phương trình hồi quy y = ax + b và hệ số tương quan r Cách xác định: khảo sát trên 1 dãy chất chuẩn có nồng độ biến thiên Xác định sự phụ thuộc tuyến... βsitosterol cũng được phân lập từ vỏ thân [32] Ngoài ra, từ vỏ thân cây Gạo còn phân lập được shamimicin [33], shamimin [28], 5-isopropyl-3-methyl-2,4,7 trimethoxy-8,1-naphtalen carbolacton và một naphthoquinon là 8-formyl-7hydroxy-5-isopropyl-2-methoxy-3-methyl-1,4-naphthoquinon [32] 1.4.1 Công thức hoá học, tính chất vật lý, tác dụng dược lý của một số chất phân lập từ vỏ thân cây Gạo 1.4.1.1 Lupeol • Nguồn... THÂN CÂY GẠO Vỏ thân cây Gạo dùng tươi chữa gãy xương, sai khớp, viêm khớp và một số bệnh khác liên quan tới cơ xương khớp Đồng bào ở Tây Nguyên dùng vỏ Gạo và vỏ cây đa quả to, phơi khô, thái nhỏ, sắc uống chữa bệnh đậu mùa Nước sắc đặc của vỏ Gạo được ngậm chữa đau răng [15], [4], [9], [18], [19] Vỏ thân còn dùng để cầm máu trong chứng băng huyết (phối hợp với rễ non và hạt cây tươi) [6], [7] Vỏ Gạo. .. methanol được chọn làm dung môi để pha dung dịch đối chiếu Các chất nghiên cứu được cân chính xác, hòa tan và định mức thành các dung dịch trong methanol, lọc qua màng lọc và tiêm vào hệ thống sắc ký Độ tinh khiết của các hợp chất nghiên cứu được đánh giá qua tổng tạp có trong chúng sau khi được phân lập và tinh chế để xác định cấu trúc Tổng tạp của các hợp chất được đánh giá theo phương pháp chuẩn . Nghiên cứu xây dựng phương pháp xác định hàm lượng một số chất phân lập được từ vỏ thân cây Gạo đã được thực hiện nhằm mục tiêu: 1. Xây dựng được một quy trình định lượng đồng thời một số. của lupeol phân lập được từ vỏ thân cây Gạo. 32 Hình 3.7. Sắc ký đồ của stigmasterol phân lập được từ vỏ thân cây Gạo 32 Hình 3.8. Sắc ký đồ của friedelin phân lập được từ vỏ thân cây Gạo 32 Hình. epicatechin phân lập được từ vỏ thân cây Gạo. 31 Hình 3.4. Sắc ký đồ của catechin phân lập được từ vỏ thân cây Gạo. 31 Hình 3.5. Sắc ký đồ của daucosterol phân lập được từ vỏ thân cây Gạo 31 Hình

Ngày đăng: 29/07/2015, 06:55

Từ khóa liên quan

Mục lục

  • Document1.pdf

  • BIA 2 tu.pdf

  • Luc Tuan Tu-Khoa luan.pdf

Tài liệu cùng người dùng

Tài liệu liên quan