BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THỊ HUYỀN ĐỊNH LƯỢNG CEFOPERAZON TRONG CHẾ PHẨM BẰNG CỰC PHỔ SÓNG VUÔNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC HÀ NỘI - 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO THỊ HUYỀN ĐỊNH LƯỢNG CEFOPERAZON TRONG CHẾ PHẨM BẰNG CỰC PHỔ SÓNG VUÔNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Người hướng dẫn: TS VŨ ĐẶNG HOÀNG Nơi thực hiện: Bộ môn hóa phân tích – độc chất Trường Đại Học Dược Hà Nội HÀ NỘI – 2013 Lời cảm ơn Lời đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành nhất, sâu sắc nhất tới TS VŨ ĐẶNG HOÀNG người đã trực tiếp giao đề tài và là người thầy đã tận tình hướng dẫn, giảng giải những vấn đề thắc mắc về lý thuyết cũng như thực nghiệm, giúp em hoàn thành đề tài này. Tiếp đó, em xin gửi lời cảm ơn đến các thầy cô bộ môn Hóa Phân Tích, các anh chị kĩ thuật viên đã giúp đỡ em trong vấn đề hóa chất, dụng cụ thí nghiệm, phòng thí nghiệm và các trang thiết bị khác trong quá trình làm thực nghiệm. Em cũng chân thành cảm ơn các bạn, các anh chị làm đề tài cùng đã luôn ủng hộ em về tinh thần, vật chất, kiến thức để em có thể hoàn thiện đề tài một cách tốt nhất. Cuối cùng em xin cảm ơn nhà trường và các thầy cô trong ban lãnh đạo trường đã tạo điều kiện cho em có cơ hội được thực hiện đề tài, có cơ hội nghiên cứu, thực hiện đam mê của mình. Trong quá trình làm thực nghiệm và viết bài chắc chắn còn có nhiều thiếu sót, em rất mong nhận được những ý kiến đóng góp để em có thể hoàn thiện hơn luận văn của mình. Em xin chân thành cảm ơn! HÀ NỘI, 2013 Đào Thị Huyền Mục lục Trang ĐẶT VẤN ĐỀ 01 CHƯƠNG I. TỔNG QUAN 02 1.1. Ph ư ơng pháp cực phổ 02 1.1.1. Phương pháp cực phổ sóng vuông (Square Wave P olarography) 03 1.2. Định lượng trong phân tích cực phổ sóng vuông 05 1.3. Cefoperazon 06 1.3.1. Công thức cấu tạo 06 1.4. Các ph ư ơng pháp định lượng cefoperazon 06 CHƯƠNG II. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1. Đối tượng - nguyên liệu và thiết bị 16 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.2. Nguyên liệu và thiết bị 17 2.2. Ph ương pháp nghiên cứu 18 2.2.1. Xây dựng phương pháp định lượng cefoperazon bằng cực phổ sóng vuông trong dung dịch đệm 19 2.2.2. Ứng dụng phương pháp cực phổ sóng vuông để định 19 lượng cefopearazon trong một số chế phẩm trên thị trường 2.2.3. Xử lí kết quả thực nghiệm 19 CHƯƠNG III. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN 20 LUẬN 3.1. Kết quả thực nghiệm và nhận xét 20 3.1.1. Chuẩn bị hóa chất 20 3.1.2. Chuẩn bị mẫu 21 3.1.3. Nghiên cứu cơ chế khử cực của cefoperazon với điện 21 cực giọt thủy ngân treo 3.1.4. Xây dựng phương pháp định lượng cefoperazon bằng 23 cực phổ sóng vuông trong dung dịch đệm 3.1.4.1. Tối ưu hóa điều kiện phân tích 23 3.1.4.2. Khảo sát khoảng tuyến tính 29 3.1.4.3. Độ lặp và độ đúng 33 3.2. Ứng dụng ph ư ơng pháp cực phổ sóng vuông để định 34 lượng cefoperazon trong các chế phẩm trên thị trường 3.2.1. Chuẩn bị dung dịch thử 34 3.2.2. Kết quả định lượng 34 Bàn luận 38 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Danh mục chữ cái viết tắt HPLC  High performance liquid chromatography (sắc kí lỏng hiệu năng cao) UV-Vis:  Ultraviolet - visible (quang phổ tử ngoại khả kiến) SWP  Square wave polarography (cực phổ sóng vuông) HDME  Harging mercury drop electrode (điện cực giọt thủy ngân) B-R  Briston - Robinson (đệm vạn năng) Current  Cường độ dòng Amplitude  Biên độ xung Voltage step  Bước thế Depossition time  Thời gian tích góp Frequency  Tần số TBC  Trung bình cộng SD  Độ lệch chuẩn RSD  Độ lệch chuẩn tương đối Danh mục các bảng Trang Bảng 3.1  Kết quả đo cực phổ sóng vuông cefoperazon 0,03 ppm theo mô hình thiết kế m ặt phức hợp trung tâm (Central Composite Face - CCF) 26 Bảng 3.2  Phương trình biểu diễn mối quan hệ giữa cường độ dòng điện với các thông số thời gian tích góp, tần số, biên độ xung, bước thế 29 Bảng 3.3  Kết quả khảo sát khoảng tuyến tính cefoperazon trong nền đệm B-R pH 4 30 Bảng 3.4  Kết quả khảo sát khoảng nồng độ tuyế n tính của cefoperazon (0,01 → 0,07 ppm) tr ong nền đệm B-R pH 4 khi có mặt của sulbactam 0, 03 ppm 31 Bảng 3.5  Kết quả khảo sát độ lặp và độ đúng của dung dịch cefoperazon 0,03 ppm 33 Bảng 3.6  Kết quả khảo sát độ lặp và độ đúng c ủa dung dịch cefoperazon 0,03 ppm khi có sulbactam 0,03 ppm 34 Bảng 3.7  Kết quả định lượng các chế phẩm có chứa cefoperazon trên thị trường 37 Bảng 3.8  Thông số quá trình HPLC của cefoperazon 20 ppm 38 Danh mục các hình Trang Hình 1.1  Các thành phần điện áp trong SWP 03 Hình 1.2  Dạng tín hiệu đo của phương pháp SWP 04 Hình 1.3  Công thức cấu tạo của cefoperazon natri 06 Hình 3.1a  Đường cong vôn-ampe vòng của dung dịc h cefoperazon 0,03 ppm trong nền đệm vạn năng pH 3,05 (a), 4,04 (b), 5,1 (c), 6,02 (d) 22 Hình 3.1b  Đồ thị sự phụ thuộc vị trí xuất hiện píc trê n đường cong vôn-ampe vòng cefoperazon 0, 03 ppm vào pH của đệm B-R 23 Hình 3.2a  Cực phổ đồ sóng vuông của dung dịc h cefoperazon 0,03 ppm trong các nền đệm pho sphat pH 4 24 Hình 3.2b  Cực phổ đồ sóng vuông của dung dịc h cefoperazon 0,03 ppm trong các nền đệm ace tat pH 4 25 Hình 3.2c  Cực phổ đồ sóng vuông của dung dịch cefoperazon 0,03 ppm trong các nền đệm B-R pH 4 25 Hình 3.3a  Mặt đáp biểu diễn ảnh hưởng của biên độ x ung với bước thế đến cường độ dòng (tần số 80Hz, thời gian tích góp 120s) 28 Hình 3.3b  Mặt đáp biểu diễn ảnh hưởng của thời gi an tích góp với tần số đến cường độ dòng (biên đ ộ x ung 0,1 V, bước thế 0,007 V) 28 Hình 3.4  Cực phổ đồ sóng vuông sự phụ thuộc cường độ dòng vào nồng độ cefoperazon (0,01 → 0,06 ppm) trong nền đệm B-R 4 30 Hình 3.5  Đồ thị biểu diễn đường chuẩn cefoperazon trong nền đệm B-R 4 31 Hình 3.6  Cực phổ đồ sóng vuông biểu diễn sự tư ơng quan cường độ dòng điện với nồng độ cefoperazon (0,01 → 0,07 ppm) trong đệm B- R pH 4 khi có mặt sulbactam 0,03 ppm 32 Hình 3.7  Đồ thị biểu diễn đường chuẩn cefoperaz on trong nền đệm B-R pH 4 khi có mặt của sulbactam 0,03 ppm 32 Hình 3.8a  Cực phổ đồ sóng vuông của cefoperazon trong chế phẩm Cefobid 36 [...]... thuốc hiện nay Trong Dược Điển Anh, Mỹ, cefoperazon được định lượng bằng HPLC Với mong muốn đề xuất một phương pháp có thể thay thế HPLC trong phép định lượng cefoperazon trong chế phẩm, chúng tôi tiến hành đề tài này với 2 mục tiêu: 1 Xây dựng phương pháp định lượng cefoperazon bằng cực phổ sóng vuông với điện cực giọt thủy ngân treo 2 Ứng dụng phương pháp này để định lượng cefoperazon trong một số... lượng cefoperazon bằng cực phổ sóng vuông - Tối ưu hóa điều kiện phân tích - Chọn khoảng nồng độ có sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ và giá trị cường độ dòng điện tương ứng - Kiểm tra độ lặp lại của phương pháp - Kiểm tra độ đúng của phương pháp 2.2.2 Ứng dụng phương pháp cực phổ sóng vuông để định lượng cefoperazon trong một số chế phẩm trên thị trường Định lượng cefoperazon trong một số chế phẩm. .. 290 nm; 272,5 nm; 290 nm Định lượng cefoperazon trong chế phẩm - Tạo phản ứng với folin- [24] ciocalteau trong môi trường kiềm (Na2CO3) và đo quang tại λmax của hợp chất màu xanh 652 nm Định lượng cefoperazon trong chế phẩm - Tạo phản ứng với folin - [27] ciocalteau phenol trong môi trường Na2CO3 và đo quang tại λmax của hợp chất màu xanh 668 nm Định lượng cefoperazon trong chế phẩm Đo quang tại - Nitrat... vào cloroform (IV): 415 nm Định lượng cefoperazon trong chế phẩm - Đo quang trong 1,2- [19] dicloroethan tại 364 nm sản phẩm của phản ứng với iod - Đo quang trong methanol tại 460 nm sản phẩm của phản ứng với 2,3-dicloro-5,6-dicyano-p-benzoquinon - Đo quang trong acetonitril tại 843 nm sản phẩm của phản ứng với 7,7,8,8-tetracyanoquinodimethan Định lượng cefoperazon trong chế phẩm - Đo quang tại λ = 510... Quang phổ huỳnh quang Định lượng cefoperazon trong chế phẩm - Đo quang phức bậc ba tạo thành nhờ phản ứng với Tb3+ trong [25] 13 đệm Tris với pH 8 - λ kích thích = 240 nm, λ phát xạ = 485 nm Định lượng cefoperazon trong chế phẩm - Đo quang dẫn xuất coumarin [5] phát quang màu vàng được tạo thành nhờ phản ứng với ethyl acetat trong môi trường acid sulfuric - λ kích thích = 412, λ phát xạ = 465 nm Định lượng. .. methanol, ít tan trong ethanol 96% 1.4 Các phương pháp định lượng cefoperazon Tài liệu Phương pháp Đặc điểm tham khảo Định lượng cefoperazon và sulbactam trong Sắc ký lỏng hiệu năng cao chế phẩm - Chuẩn nội: Ornidazol - Pha động: Đệm phosphat pH [14] 7 3,5 : acetonitril (35 : 65) - Cột: Kromasil C8 5 µm, 150 x 4,6 mm - Tốc độ dòng: 1ml/phút - Detector: 215 nm Định lượng cefoperazon trong chế phẩm và huyết... g/l natri dodecylsulfat và 17,4 g/l pentanesulfonic acid - Detector: 214 nm Định lượng cefoperazon trong chế phẩm - Dung môi: MeOH - Đo quang tại λ = 230 nm - Đo diện tích dưới đường cong phổ hấp thụ trong khoảng 225 ÷ 235 nm Định lượng đồng thời cefoperazon và [16] 11 sulbactam trong chế phẩm [6] Quang phổ UV Dung môi: Nước - Phổ đạo hàm ( = 4 nm) bậc 1, bậc 2: theo phép đo giao điểm không 277,5;... điện nên độ nhạy của phép định lượng bằng cực phổ cổ điển chỉ đạt được 10-4 ÷ 10-5 M Cùng với sự phát triển của khoa học và kỹ thuật đã có nhiều cải tiến được áp dụng với mục đích tăng độ nhạy của phương pháp cực phổ Một trong những cải tiến này là sự ra đời kỹ thuật cực phổ sóng vuông 1.1.1 Phương pháp cực phổ sóng vuông (Square Wave Polarography) Hình 1.1 Các thành phần điện áp trong SWP : Điện áp một... cân bằng 10 s Thời gian sục khí 100 s Khoảng thế – 0,3 ÷ – 1,2 V Bước thế 0,005 V Tốc độ quét 0,3 V/s Tốc độ khuấy 2000 vòng/phút Kích cỡ giọt 4 100 nA Hình 3.2a Cực phổ đồ sóng vuông của dung dịch cefoperazon 0,03 ppm trong nền đệm phosphat pH 4 25 100 nA Hình 3.2b Cực phổ đồ sóng vuông của dung dịch cefoperazon 0,03 ppm trong nền đệm acetat pH 4 100 nA Hình 3.2c Cực phổ đồ sóng vuông của dung dịch cefoperazon. .. thích = 412, λ phát xạ = 465 nm Định lượng cefoperazon trong chế phẩm - So màu tại bước sóng 525 nm So màu và phổ hoặc đo quang tại bước sóng 358,6 hấp thụ nguyên nm cặp ion tạo thành giữa chất phân tử [22] tích và muối amoni reineckat trong môi trường acid - Dung môi: Aceton Định lượng cefoperazon trong chế phẩm và dịch sinh học Vôn-ampe sóng vuông Vôn-ampe - Điện cực công tác: Giọt thủy ngân treo - Thời . phương pháp định lượng cefoperazon bằng cực phổ sóng vuông trong dung dịch đệm 19 2.2.2. Ứng dụng phương pháp cực phổ sóng vuông để định 19 lượng cefopearazon trong một số chế phẩm trên. phương pháp định lượng cefoperazon bằng cực phổ sóng vuông với điện cực giọt thủy ngân treo. 2. Ứng dụng phương pháp này để định lượng cefoperazon trong một số bột thuốc pha tiêm có chứa cefoperazon. 3.1.3. Nghiên cứu cơ chế khử cực của cefoperazon với điện 21 cực giọt thủy ngân treo 3.1.4. Xây dựng phương pháp định lượng cefoperazon bằng 23 cực phổ sóng vuông trong dung dịch đệm