BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI TRỊNH THỊ HẰNG CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ THÀNH PHẦN TỪ LÁ CÂYGẠO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2013 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI TRỊNH THỊ HẰNG CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ THÀNH PHẦN TỪ LÁ CÂYGẠO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Ngƣời hƣớng dẫn: PGS. TS. Nguyễn Thái An Nơi thực hiện: Bộ môn Dược liệu - Đại Học Dược Hà Nội HÀ NỘI – 2013 LỜI CẢM ƠN Trong quá trình thực hiện đề tài này, tôi đã nhận được sự quan tâm, giúp đỡ tận tình của các thầy cô giáo, các anh chị kỹ thuật viên, các bạn đồng môn và gia đình. Nhân dịp này, tôi xin bày tỏ lòng cám ơn chân thành và sâu sắc tới: PGS. TS. Nguyễn Thái An Cùng những thầy cô đã trực tiếp hướng dẫn, chỉ bảo, quan tâm, động viên tôi trong quá trình thực hiện đề tài. Đồng thời, tôi xin gửi lời cám ơn chân thành tới: PSG. TS. Thái Nguyễn Hùng Thu ThS. NCS. Hồ Thị Thanh Huyền đã cho tôi những đóng góp quý giá về đề tài. Tôi xin gửi lời cảm ơn đến các thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu - Trường Đại học Dược Hà Nội, Viện Hóa học - Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam đã hỗ trợ tôi trong quá trình nghiên cứu. Xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo, cùng toàn thể các thầy cô giáo, các cán bộ Trường Đại học Dược Hà Nội đã tạo điều kiện để tôi có thể lĩnh hội những kiến thức quý giá về ngành Dược trong suốt 5 năm học. Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè đã luôn giúp đỡ, động viên tôi trong quá trình học tập và thực hiện khoá luận này. Hà Nội, ngày 23 tháng 4 năm 2013 Sinh viên Trịnh Thị Hằng. MỤC LỤC DANH MC CÁC KÝ HIU, CH VIT TT DANH MC CÁC HÌNH DANH MC CÁC BNG T V 1  1.1. V TRÍ PHÂN LOM THC VT 3 1.1.1. V trí phân loi ca chi Bombax L 3 m thc vt h Go Bombacaceae. 3 m thc vt chi Bombax L. 4 m thc vt, phân b loài Bombax malabaricum DC. 4 m thc vt loài Bombax malabaricum DC. 4 1.1.4.2. Phân b, sinh thái. 5 1.1.5. B phn dùng, thu hái ch bin 6 m vi hc lá cây Go Bombax malabaricum DC. 6 m vi phu lá. 6 m bt lá 7 1.2. THÀNH PHN HOÁ HC CA LÁ CÂY GO 7 1.3. TÁC DC LÝ CA LÁ GO 9 1.3.1. Tác dng chng oxy hoá 9 1.3.2. Tác dng gi 9 1.3.3. Tác dng h huyt áp 10 1.3.4. Tác dng h st 10 1.3.5. Tác dng h ng huyt 10 1.3.6. Tác dng dit giun sán 11 1.3.7. Tác dng dit vector truyn bnh giun ch Culex quinquefasciatus. . 11 1.3.8. Tác dng bo v gan 11 1.3.9. Tác dng chu tr HIV 12 1.3.10. Tác dng kháng khun kháng nm 12 c tính ca lá Go 12 1.4. CÔNG DNG CA LÁ GO 13 U 14 2.1.           14 2.1.1. Nguyên liu 14 2.1.2. Hoá cht và thit b 14 2.1.2.1. Hóa cht 14 2.1.2.2. Máy móc thit b 14 2.2.      15 nh tính các thành phn hoá hc 15 2.2.2. Chit xut 15 2.2.3. Phân l 2.2.4. Nhn dng cht tinh khit 17 THC NGHIM, KT QU VÀ BÀN LUN 18 3.1. CHIT XU 18  c liu 18 3.1.2. Chit xut 18 nh tính cn toàn phn bng sc ký lp mng 18 n bng sc ký lp mng 21 nh tính cn cloroform bng sc ký lp mng 21 nh tính cn ethyl acetat bng sc ký lp mng 24 nh tính cn dch chic bng sc ký lp mng 26 3.2. PHÂN LP 28 3.2.1. Phân lp 28 3.2.2. Ki tinh khit cht phân lp 29 3.2.2.1. Hp cht BBL1 29 3.2.2.2. Hp cht BBL3 30 3.3. NHN DNG CÁC CHT PHÂN LP 32 3.3.1. Hp cht BBL1 32 3.3.2. Hp cht BBL3 35 3.4. BÀN LUN37      XUT 41 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ 1 AST ng 2 BBL Cn toàn phn 3 BBL-A Cn n-hexan 4 BBL-B Cn cloroform 5 BBL-C Cn ethyl acetat 6 BBL-D Dch chic 7 13 C-NMR Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance 8 DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer 9 EtOAc Ethyl acetat 10 HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation 11 1 H-NMR Proton (1) Nuclear Magnetic Resonance 12 HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence 13 MeOH Methanol 14 MS Mass Spectroscopy 15  n 16 R f H s di chuyn 17 SKLM Sc ký lp mng 18 TP Toàn phn 19 TT Thuc th 20 UV 254nm Ánh sáng t ngoc sóng 254 nm 21 UV 365nm Ánh sáng t ngoc sóng 365 nm DANH MỤC CÁC HÌNH STT Ký hiu Tên hình Trang 1 Hình 3.1 S ca cn TP vi 7 h    365nm 19 2 Hình 3.2 S ca cn toàn phn vi h dung môi VII  các u kin quan sát 20 3 Hình 3.3 S ca cn cloroform vi h dung môi III  u kin quan sát 23 4 Hình 3.4 S ca cn ethyl acetat vi h dung môi IV  u kin quan sát 25 5 Hình 3.5 S ca dch chic vi h dung môi IV  u kin quan sát 27 6 Hình 3.6  chit xut và phân lp các thành phn t lá cây Go 29 7 Hình 3.7 S ca BBL1 vi 3 h dung môi sau khi phun TT,  AST 30 8 Hình 3.8 Sc ký so sánh BBL1 vi cn TP, h dung môi II sau khi phun thuc th  AST 30 9 Hình 3.9 S ca BBL3 vi 3 h dung môi  UV 254nm , c khi phun thuc th. 31 10 Hình 3.10 S ca BBL3 vi h dung môi II 32 11 Hình 3.11 nh tinh th ci kính hin vi vt kính 40 32 12 Hình 3.12 Mt s a hp cht BBL1 34 13 Hình 3.13 Cu trúc hoá hc ca hp cht BBL1 35 14 Hình 3.14 nh tinh th i kính hin vi vt kính 40 35 15 Hình 3.15 Mt s a hp cht BBL3 37 16 Hình 3.16 Cu trúc hoá hc ca hp cht BBL3 38 DANH MỤC CÁC BẢNG STT Ký hiu Tên bng Trang 1 Bng 1.1 Mt s hp cht phân lc t lá Go 8 2 Bng 3.1 Hiu sut chit các cn t lá cây Go 18 3 Bng 3.2  f       21 4 Bng 3.3  f         23 5 Bng 3.4  f         25 6 Bng 3.5  f n dch chic        27 7 Bng 3.6 Kt qu SKLM ca BBL1 vi 3 h dung môi 29 8 Bng 3.7 Kt qu SKLM ca BBL3 vi 3 h dung môi 31 9 Bng 3.8 D liu ph NMR ca BBL1 33 10 Bng 3.9 D liu ph NMR ca BBL3 36 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Vi m trong vùng nhit m thc vng và phong phú vi  c vt khác nhau.  n nay, vic nghiên c        c ph    các ngun nguyên liu t       .  c nhân dân ta s dng rng rãi theo kinh nghi               nhiên. Tuy nhiên,                  ,        . Cây Go là loài cây quen thui vi mi dân Vic bii dân min Bcc trng nhiu   làm cnh, ly bóng mát. Bên cnh giá tr bing, nhiu b phn khác nhau ca cây Gc s dng t lâu trong dân gian làm thuc cha bnh  c giã nh làm thuc ch thuc cha thp khp, l   phn khác c    , gôm, nhc dùng cho ma bnh. -2012, H Th Thanh Huyn và cng s o sát thành phn hoá hc ca lá cây G   u phân l c taraxeryl acetat, -hydroxysitosterol t phân n cloroform. Nhm nghiên cu  thành phn hoá hc ca lá cây Go và trong khuôn kh ca khoá lu tài “Chiết xuất phân lập một số thành phần từ lá Gạo” c tin hành vi nhng mc tiêu sau: 1) Chiết xuất phân lập một số thành phần từ lá Gạo 2) Nhận dạng các chất phân lập được.  thc hin nhng m  c tin hành vi các ni dung sau: [...]... cứu 2) Chiết xuất, phân lập một số thành phần từ dịch chiết ethyl acetat và dịch chiết nước của lá Gạo 3) Nhận dạng các chất phân lập dựa trên dữ liệu phổ MS, 1D- và 2DNMR 3 Chƣơng 1 TỔNG QUAN 1.1 VỊ TRÍ PHÂN LOẠI, ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT 1.1.1 Vị trí phân loại của chi Bombax L Theo [4], [7], [11], chi Bombax L có vị trí phân loại nhƣ sau: Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp... LÝ CỦA LÁ GẠO 1.3.1 Tác dụng chống oxy hoá Năm 2005, Dar A và cộng sự đã nghiên cứu tác dụng chống oxy hoá của mangiferin, một xanthone phân lập đƣợc từ dịch chiết methanol của lá cây Gạo và các dẫn xuất acetyl, cinnamoyl, methyl của hợp chất này cùng với dịch chiết methanol của lá Gạo và dịch chiết các phân đoạn bằng phƣơng pháp định lƣợng khả năng thu dọn gốc tự do DPPH, định lƣợng giáng phân đƣờng... triterpenoid, đƣờng khử, flavonoid và coumarin [28] Năm 2012, Nguyễn Hải Ngọc đã phân lập từ dịch chiết phân đoạn cloroform của lá Gạo 3 chất và đã đƣợc nhận dạng là taraxeryl acetat, taraxerol và 7-hydroxysitosterol [18] Faizi S và cộng sự đã phân lập đƣợc shamimin là một flavonol Cglycoside là một loại bột màu vàng từ dịch chiết ethanol lá tƣơi của Bombax ceiba Cấu trúc của hợp chất đƣợc xác định bằng các... Schott de Endl.) là một chi nhỏ, gồm một số loài là cây gỗ, phân bố ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới Ở Việt Nam có 3 loài Hai loài thƣờng đƣợc nói đến là B.anceps Pierre (Gạo hoa trắng, Pơ lăng) và B.ceiba L (Cây Gạo, cây bông gạo, cây mộc miên) [9] 1.1.4 Đặc điểm thực vật, phân bố loài Bombax malabaricum DC 1.1.4.1 Đặc điểm thực vật loài Bombax malabaricum DC Tên Việt Nam: cây Gạo Tên khác: Cỏ nghịu... dịch chiết các phân đoạn thì không thay đổi Điều này gợi ý rằng cơ chế tác dụng giảm đau của mangiferin giống nhƣ của morphin, cơ chế của các dịch chiết thì không hoàn toàn giống 10 1.3.3 Tác dụng hạ huyết áp Dịch chiết nƣớc, dịch chiết methanol, dịch chiết các phân đoạn và chất tinh khiết shamimin phân lập từ lá cây Gạo có tác dụng hạ huyết áp ở chuột đã gây tê, tác dụng phụ thuộc vào liều Dịch chiết. .. acetat Thu đƣợc 3 phân đoạn dịch chiết và phần dịch chiết nƣớc Các phân đoạn dịch chiết đƣợc cất thu hồi dung môi tới cắn, cô cắn đến khối lƣợng không đổi, ký hiệu lần lƣợt là BBL-A, BBL-B, BBL-C; dịch chiết nƣớc còn lại đƣợc ký hiệu là BBL -D Hiê ̣u suấ t chiế t của các phân đoa ̣n đƣơ ̣c tổ ng hơ ̣p trong bảng 3.1 Bảng 3.1: Hiệu suất chiết các cắn từ lá cây Gạo STT Phân đoạn Khối lượng % so với... thích hợp Sử ̣ dụng SKLM để kiểm tra thành phần dịch hứng, dồn các phân đoạn có cùng thành phần - Tinh chế các chất thu được - Kiểm tra độ tinh khiết của các chất phân lập Độ tinh khiết của chất phân lập đƣợc kiểm tra bằng SKLM Mỗi chấ t phân lâ ̣p đƣơ ̣c kiể m tra bằ ng nhiề u hê ̣ dung môi khác nhau 2.2.4 Nhận dạng chất tinh khiết Nhận dạng chất phân lập đƣợc dựa trên dữ liệu phổ MS, 1D-... phút Dịch chiết nƣớc làm giảm 51,21% huyết áp ở liều 30 mg/kg và vẫn còn tác dụng sau 2-4 phút Cũng từ kết quả của thử nghiệm này, các nhà nghiên cứu đƣa ra giả thiết rằng cơ chế tác dụng của các dịch chiết lá Gạo và shamimin là kích hoạt receptor M2 ở cơ tim hoặc làm giãn mạch do làm tăng calci nội bào [38] 1.3.4 Tác dụng hạ sốt Dịch chiết methanol cuả lá Gạo có tác dụng hạ sốt trên chuột gây sốt bằng... động vật giống cái khi điều trị bằng dịch chiết nƣớc khoảng 1 g/kg dịch chiết [38] 1.4 CÔNG DỤNG CỦA LÁ GẠO Theo [30], lá Gạo dùng để điều trị viêm hạch, chữa bệnh thấp khớp, lỵ, thiếu máu, đau mình mẩy, rắn cắn, rong kinh, khí hƣ Lá Gạo còn đƣợc dùng làm thuốc chống viêm và điều trị các bệnh về da [28], lá còn đƣợc làm thành hồ bôi lên da trị phát ban, bột của lá cùng với dầu mè đƣợc dùng cho các bệnh... dịch chiết methanol của lá và các phân đoạn cùng với mangiferin đều làm giảm số chuột quặn đau tuỳ thuộc vào liều so với nhóm đối chứng Giá trị IC50 giảm dần từ dịch chiết methanol đến dịch chiết phân đoạn và mangiferin Khi sử dụng phƣơng pháp mâm nóng, các số liệu chỉ ra rằng khi có mặt của naloxone thì tác dụng giảm đau của mangiferin bị đảo ngƣợc lại khoảng 38%, nhƣng tác dụng của dịch chiết toàn phần . ca lá cây Go và trong khuôn kh ca khoá lu tài Chiết xuất phân lập một số thành phần từ lá Gạo c tin hành vi nhng mc tiêu sau: 1) Chiết xuất phân lập một số thành phần từ lá. CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ THÀNH PHẦN TỪ LÁ CÂYGẠO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2013 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI TRỊNH THỊ HẰNG CHIẾT XUẤT,. học của mẫu nghiên cứu 2) Chiết xuất, phân lập một số thành phần từ dịch chiết ethyl acetat và dịch chiết nước của lá Gạo 3) Nhận dạng các chất phân lập dựa trên dữ liệu phổ MS, 1D- và 2D-