b ọ Y t ễ TRƯ Ờ N G ĐẠI H Ọ C Dược HÀ N Ộ I » D c a NG Ô ANH NG Ọ C XfìV DỰNG PHƯƠNG PHRP Đ.ÌNH LƯỢNG • • • XVLOM€TnZOLIN.Ha TRONG THUỐC NHỎ MŨI NOSTRRVIN củn CÔNG TV CỔ PHẦN Dược PHẨM TRRPHRCO BÀNG HPLC (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP D ược SỸ KHOÁ 2001-2006) Người hướng dãn; PGS.TS Trần Đức Hậu Nơi thực hiện: Bộ môn Hoá Dược Thời gian thực hiện: tháng 06 - 12/2005 Hà nội, tháng 05 - 2006 Lời cảm ơn Nhân dịp hoàn thành khoá luận tốt nghiệp, tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn và cám ơn chân thành lới: P Q § . T S T r ầ n Đ ứ c l ị ậ u Người thầy kính mến đã trực tiếp hướng dẫn và tận tình chỉ bảo, giúp đỡ tôi hoàn thành khoá luận. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn đến: - Các thầy cô, các cán bộ trong bộ môn Hoá Dược đã tạo điều kiện về cơ sở vật chất, đồng thời đã giúp đỡ, động viên tôi. - Phòng KTCL - CTCPDP Traphaco đã có sự hợp tác và cung cấp nguyên liệu cho đề tài. - Bộ môn Hoá vô cơ và bộ môn Bào chế. Cuối cùng, tôi xin cảm ơn gia đình, bè bạn đã động viên, giúp đỡ tôi trong thời gian qua. H à nội, tháng 05 - 2006 Sinh viên N gô A n h N gọc MỤC LỤC CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT ĐẬT VẤN Đ Ể . I PHẦN I: TỔNG QUAN 3 1.1. Tổng quan về thuốc nhỏ mũi Nostravin 3 1.1.1. Hình ảnh sản phẩm 3 1.1.2. Công thức bào chế 3 1.1.3. Tác dụng 4 1.1.4. Chỉ định 5 1.1.5. Tác dụng không mong m uốn 5 1.1.6 . Thận trọng 5 1.1.7. Tương tác thuốc 5 1.1.8. M ột số thuốc nhỏ mũi chứa Xylometazolin.HC l 5 1.2. Tổng quan về HPLC 6 1.2.1. Khái niệm về sắc ký và sắc ký lỏng hiệu năng cao 6 1.2.2. Nguyên tắc cấu tạo của hệ thống HPLC 6 1.2.3. Các thông số đặc trưng của quá trình sắc ký và các yếu tố ảnh hưởng 10 1.2.4. Cơ sở lý thuyết của việc lựa chọn điều kiện sắc ký 15 1.2.5. Định lượng bằng phương pháp HPLC 18 PHẦN II: ĐỐI TƯỢNG, THIẾT BỊ, HOÁ CHẤT, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứ u 20 2.1. Đới tượng 20 2.2. Thiết bị, dụng cụ, hoá chất 20 2.2.1. Thiết bị, dụng cụ 20 2.2.2. Hoá chất 20 2.3. Nội dung và phương pháp nghiên cứu . 21 2.3.1. Nghiên cứu, xây dựng phương pháp định lượng Xylom etazolin.HCl bằng HPLC (sắc ký pha đảo) 21 2.3.2. Đánh giá phương pháp vừa xây dựng về các mặt: tính chính xác, tính tuyến tính, tính đặc hiệu và tính đúng 22 2.3.3. Áp dụng phương pháp để xác định hàm lượng Xylom etazolin.HCl cho một lô sản phẩm Nostravin 23 2.3.4. M ột số công thức toán thống kê được sử dụng để đánh giá kết quả 23 PHẦN III: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QU Ả . 24 3.1. Xây dựng phương pháp định lượng Xyiometazolin.HCl trong thuốc nhỏ mũi Nostravin bằng H PLC 24 3.1.1. Nguyên tắc lựa chọn điều kiện sắc k ý 24 3.1.2. Tiến hành khảo sát và lựa chọn các điều kiện sắc ký cho phương pháp định lượng 24 3.1.3. Thử tính thích hợp của hệ thống 27 3.2. Đánh giá phương pháp 29 3.2.1. Tính chính xác 29 3.2.2. Tính tuyến tính 29 3.2.3. Tính đặc hiệu 31 3.2.4. Tính đúng 34 3.3. Áp dụng phưong pháp đê xác định hàm lượng Xylometazolin.HCl trong một lô sản phẩm Nostravin 36 3.4. Kết quả và bàn luận 37 PHẦN IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XưẤT 40 4.1. Kết luận 40 4.2. Đề xuất 40 TÀI LIÊU THAM KHẢO PHU LUC CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT CTCPDP Công ty cổ phần dược phẩm HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao NXB Nhà xuất bản PA Tinh khiết phân tích KTCL Kiểm tra chất lượng TKH Tên khoa học VKN Viện kiểm nghiệm ĐẬT VÂN ĐỂ Cảm lạnh là một bệnh thường gặp ở nhiều quốc gia trên thế giới, trong đó có Việt Nam. Bệnh do nhiều loại virus khác nhau gây ra, bao gồm; rhinovirus, Coronavirus, RSV, parainfluenza virus, adenovirus, enterovirus, influenza A virus, và influenza B virus. Triệu chứng thường gặp của bệnh; nghẹt mũi, tắc mũi. đau họng, hắt hơi, đau đầu. khó chịu, chảy nước mắt, ho, khản giọng, Tác nhân là virus nên chưa có liệu pháp điều trị đặc hiệu, chủ yếu là điều trị triệu chứng [12]. Thuốc nhỏ mũi chứa Xylometazolin.HCl là một trong những thuốc điều trị có hiệu quả đối với bệnh trên; làm giảm xung huyết mũi và dùng dưới dạng nhỏ mũi nên tác dụng nhanh, ít tác dụng phụ (chủ yếu là tác dụng khư trú). Sản phẩm thuốc nhỏ mũi chứa hoạt chất này được nhiều công ty trong nước và ngoài nước sản xuất; Otrivin (Novartis - Mỹ), Nostravin (Traphaco - Việt Nam), Có một số phương pháp được dùng để định lượng Xylometazolin.HCl trong thuốc nhỏ mũi như sau: <♦ Trong các Dược điển: - Trong Dược điển Anh BP2003 và Dược điển Mỹ USP28 ¡phụ lục I ỉ: Nguyên tắc: Dùng phương pháp đo quang trong vùng khả kiến với quá trình tạo màu sau nhiều giai đoạn chiết tách với dung môi hữu cơ. Đặc điểm: Phương pháp này có quá nhiều công đoạn, mất nhiều thời gian để thực hiện. Đặc biệt là phải qua giai đoạn chiết tách, đây là giai đoạn dễ làm hao hụt lượng Xylometazolin.HCl. - Còn trong Dược điển Việt Nam ỉlỉ và Dược điên quốc fế (third edition): chưa có chuyên luận về Xylometazolin.HCl và thuốc nhỏ mũi chứa Xylometazolin.HCl. <♦ Tại CTCPDP Traphaco đã áp dụng hai phương pháp định lượng Xylometazolin.HCl trong thuốc nhỏ mũi Nostravin: - Phương pháp đo quang: Nguyên tắc: thực hiện tương tự phương pháp định lượng có trong BP2003 nhưng bỏ qua giai đoạn chiết tách để rút ngắn thời gian định lượng. Đây là sự vận dụng của phòng KTCL - CTCPDP Traphaco để đáp ứng nhu cầu kiểm nghiệm nhanh sản phẩm sau khi sản xuất ra. - Phương pháp HPLC [phụ lục 21: phương pháp này được sử dụng gần đây tại phòng KTCL - CTCPDP Traphaco để kiểm tra hàm lượng Xylometazolin.HCl cho sản phẩm Nostravin. Nguyên tắc: sử dụng sắc ký pha thuận với cột Si 60. Cả hai phương pháp định lượng trên đều có chung hạn chế: độ ổn định của phương pháp không cao. Trước thực tế đó, các cán bộ phòng KTCL - CTCPDP Traphaco mong muốn xây dựng một phương pháp định lượng cho kết quả ổn định hơn. Theo đề nghị của phòng KTCL - CTCPDP Traphaco, chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu đề tài “X«J dựng phương pháp định lượng Xylometazolin.HCl trong thuốc nhỏ mũi Nostravin'" với những muc tiêu: 7. Xầy dựng phương pháp định lượng Xyỉometaiolin.HCÌ trong thuốc nhỏ mũi Nostravin do CTCPDP Traphaco sản xuất hằng HPLC đáp ứng đầy đủ các chỉ tiêu của một phương pháp cíịnli lượng. 2. Áp dụng phương pháp trên đê' xác định hàm lượng Xylometazolin.HCỉ cho một lô sản phẩm Nostravin. PHẦN I: TỔNG QUAN 1.1. TỔNG QUAN VỂ THƯỐC NHỞ MŨI NOSTRAVIN [8], [11], [16 [17], [18]. 1.1.1. Hình ảnh sản phẩm 1.1.2. Công thức bào chế - Dạng dùng: dung dịch Xylometazolin.HCl 0,05%. Dung tích: lOml - Thành phần; +Xylometazolin.HCl 5 mg +Thiomersal 2,25 mg +Một số thành phần khác *x* Xylometazolin.HCl: - Công thức; • HCI Công thức phân tử: C,f,H24N2.HCl Phân tử lượng; 280.84 TKH: 2-(4-tert-butyl-2,6-dimethylbenzyl)-2-imidazoline hydrochloride. - Tính chất vật lý: Bột tinh thể màu trắng hoặc gần như trắng. Tan nhiều trong nước, tới 3 %; cũng tan trong methanol, ethanol; thực tế không tan trong ether, benzene. pH = 5,0->6,6 (dung dịch 5%). - Tác dụng: Chất chủ vận bộ phận tại receptor a l và a2 - adrenergic. ❖ Thiomersal: - Công thức: Công thức phân tử: CụHyHgNaOìS Phân tử lượng: 404.8 TKH: Na ethyl [2 -sulphanyl benzoato(2-)-ơ,5'] Hg (1-). - Tính chất vật lý: + Bột tinh thê màu trắng hoặc gần như trắng. + Dễ tan trong nước, tan trong cồn, không tan trong methylen clorid. - Tác dụng: Sát khuẩn Được dùng làm chất bảo quản. 1.1.3. Tác dụng Thuốc nhỏ mũi chứa Xyỉometazolin.HCl là một thuốc làm thông mũi do: làm co các mạch máu, đặc biệt có tác dụng trực tiếp trên các mạch máu của mô mũi. Sự co các mạch máu ở mũi và xoang làm giảm xung huyết mũi. [...]... - Chn ct sc ký: trong phng phỏp HPLC vi iu kin sc ký pha o ct sc ký thng dựng l Nucieosil C 8 C18: Lichrosord RP 8 RP18, Vi iu kin sn cú cua phũng thớ nghim, chỳng lụi s dng CI Nucleosil C18 (250 X 4mm; 5|im) - Chn pha ng: Trong phng phỏp HPLC pha o, pha ng thng dựng l acetonitril, methanol nc hay hn hp ca cỏc dung mụi trờn Da vo pKa ca Xylometazolin. HCl v iu kin hoỏ cht hin cú trong phũng thớ nghim... kt qu thu c: RSD = 0,1570 % ( ô 2 %) - phõn gii gia pic ca Xylometazolin. HCl v tp l: Rs = 2.78 (>1,5) 28 - Cỏc giỏ tr AF u nm trong khong: 0,9 - 2,0 Nh vy, h thng m chỳng tụi s dng m bo tớnh thớch hp nh lng Xylometazolin. HCl trong thuc nh mi Nostravin 3.2 ỏnh giỏ phong phỏp Chỳng tụi tin hnh ỏnh giỏ phng phỏp nh lng Xylometazolin. HCl bng HPLC mi xõy dng vi cỏc chi tiờu: - ỏnh giỏ tớnh chớnh xỏc -... (KH2PO4): PA + A c id phosphoric (H3PO4) c: PA + Acetonitril dựng cho HPLC (Merck) + Chun pH 4,00; pH 6 ,88 do vin Kim nghim sn xut 20 + Nc ct tinh khit 2 ln (ct trc tip ti B mụn Hoỏ vụ c - Trng H Dc H ni), dựng cho mỏy HPLC v mt vi hoỏ cht khỏc 2.3 Ni dung v phng phỏp nghiờn cu 2.3.1 Nghiờn cu, xõy dng phng phỏp nh lng Xylometazolin. HCI bng HPLC (sc ký pha o) ** Tham kho cỏc phng phỏp nh lng ó cụng... dng phng phỏp ờ xỏc nh hm luTig Xylometazolin. HCI cho mt lũ sn phm Nostravin 2.3.4 Mt sụ cụng thc toỏn thụng kộ c s dng ỏnh giỏ kt qu 1 - Giỏ tr trung bỡnh; x= - X - lch chuỏn SD: SD " xi /=1 /7 - 1 - lch chun tng i RSD: RSD(%) = ^ 100 - Khong tin cy: S X 23 PHN III; THC NGHIM V KấT QU 3.1 Xõy dng phng phỏp nh lng Xylometazolin. HCI trong thuc nh mi Nostravin bng HPLC 3.1.1 Nguyờn tc la chn iu... hoỏ lý dựng tỏch cỏc thnh phn ca mt hn hp S tỏch sc ký c da trờn s phõn chia khỏc nhau ca cỏc cht gia hai pha luụn tip xỳc v khụng ho ln vo nhau: mt pha tnh v mt pha ng b Khỏi nim v sc ký lng hiu nng cao (HPLC) Phng phỏp HPLC l phng phỏp sc ký c xỏc nh da trờn s phõn tỏch ca cỏc cht gia hai pha: pha ng v pha tnh HPLC s dng pha ng l cht lng tỏch cỏc cht trong hn hp Nhng cht ny u tiờn c ho tan trong. .. lc u Dựng pipet hỳt chớnh xỏc 10,0 ml dung dch trờn cho vo bỡnh nh mc 2 0 ,0 ml; thờm acetonitril va ti vch, lc u Lc qua mng lc 0.45 |.im Nng cỳa mu em o: Q -0,05m g/m l + Mu trng: acetonitril - nc = 50/50 - Cỏch tớnh kt qu; Da vo din tớch pic thu c t sc ký ca mu th v mu chun tớnh hm lng Xylometazolin. HCl trong ch phm nh sau; _/ - S l m c p / A O O Sc Trong ú: x% : hm lng Xylometazolin. HCl trong. .. o: nhúm thờ lm gim phõn cc: PHA O Octadecyl Octyl Dimethyl - CH, + Mt S loi ct thng dựng trong sc ký pha thun v pha o: Loi sc ký N húm th R Tờn thng mi Pha thun -OH Lichiosorb Si 60 Octyl (-Q H p) Nucleosil C 8 (Silica trung tớnh) Pha o Lichj'osord RP 8 (Silica ó alkyl hoỏ) Octadecyl (-C,x]-37) N ucleosilC lS Lichrosord RP18 + Yờu cu pha tnh trong HPLC: Phi tr v bn vng vi mụi trng sc ký Cú kh nng... cha Xylometazolin. HCI cú mt trờn th trũng O trtvM M vlrt Thuc nh mi Otrivin ca Novartis l mt thuc ni ting trờn th gii Thuc cú mt ti nhiu nc, trong ú cú Vit Nam Ngoi Otrivin, cũn cú mt s thuc nh mi khỏc cha Xylometazoline.HCl vi cỏc tờn bit dc: Neo-Rinoleina; Novorin; Olynth; Otriven; Xymelin 1.2 TNG QUAN V HPLC [4], [5], [6], [14], [15], [19], [20] 1.2.1 Khỏi nim v sỏc ký v sỏc ký lng hiu nng cao (HPLC) ... hnh, - Phng phỏp chi dựng khi khụng lo c mu placebo 3 Phng phỏp chun hoỳ din tớch pic: - Nguyờn tc; Hm lng phn trm ca mt cht trong hn hp nhiu thnh phn c tớnh bng t l phn trm din tớch pic ca nú so vi tng din tớch ca tt ca cỏc pic thnh phn Irờn sỏc Phng phỏp ny yờu cu tt c cỏc thnh phn u c ra gii v c phỏt hin, v tt c cỏc thnh phn u cú ỏp ng detector nh nhau - p dng: ớt dựng, ch dựng trong xỏc nh hm lng... chuyn thnh tớn hiu trờn sc ký Quỏ trỡnh xy ra trong detector: khi detector hot ng, cú mt chựm sỏng c phỏt ra xuyờn dũng pha ng ang chy (cell) S bin i trong cng sỏng do: s hp th t ngoi, s phỏt hunh quang, hay thay i trong ch s khỳc x (tu thuc vo loi detector) t cỏc thnh phn trong mu i qua t bo (cell), c chuyn thnh s thay i in th S thay i in th c ghi li trong thit b ghi kiu th v thng xuyờn c chuyờn . Traphaco, chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu đề tài “X«J dựng phương pháp định lượng Xylometazolin. HCl trong thuốc nhỏ mũi Nostravin& apos;" với những muc tiêu: 7. Xầy dựng phương pháp định. Nội dung và phương pháp nghiên cứu . 21 2.3.1. Nghiên cứu, xây dựng phương pháp định lượng Xylom etazolin.HCl bằng HPLC (sắc ký pha đảo) 21 2.3.2. Đánh giá phương pháp vừa xây dựng về các. định lượng Xylometazolin. HCl trong thuốc nhỏ mũi như sau: <♦ Trong các Dược điển: - Trong Dược điển Anh BP2003 và Dược điển Mỹ USP28 ¡phụ lục I ỉ: Nguyên tắc: Dùng phương pháp đo quang trong