m p Bộ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ ANH TUẤN TỎNG QUAN VÈ ASPARAGINASE ỨNG DỤNG LÀM THUỐC ĐIÈU TRỊ UNG THƯ (KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ KHÓA 2005-2010) Người hướng dẫn : GVC Nguyễn Duy Thiệp TS Nguyễn Văn Rư Nơi thực : Bộ mơn Hóa sinh \ HÀ N Ộ I-2 m LỜI CẦM ƠN Em xin chân thành gửi lời cảm ơn sâu sắc tới: Giảng viên chỉnh Nguyễn Duy Thiệp mơn Hóa sinh trường đại học Dược Hà Nội Tiến sĩ Nguyễn Văn Rư Chủ nhiệm mơn Hóa sình trường Đại học Dược Hà Nội Là hai người thầy tận tâm dìu dắt em học tập nghiên cứu suốt q trình hồn thành luận văn Em xỉn trân trọng cảm ơn: Tiến sĩ Nguyễn Thị Lập Dược sĩ Nguyễn Xuân Bẳc giúp đỡ, truyền đạt kỉnh nghiệm để em cỏ thể hoàn thành luận văn Em xỉn chân thành cảm ơn: Toàn thể thầy cô giảo trường đại học Dược Hà Nội thầy cô giáo, anh chị kỹ thuật viên mơn Hóa sinh tạo điều kiện cho em suốt trình nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè người giúp đờ, động viên tơi q trình học tập nghiên cứu Hà Nội, tháng 05 năm 2010 Sinh viên Lê Anh Tuấn MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN Đ Ề CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm nguồn gốc, cấu trúc vai trò 1.1.1 Tên vị trí hệ thống phân loại enzyme Asparaginase 1.1.2.Nguồn gốc tự nhiên Asparaginase 1.1.3 Đặc điểm cấu tạo cấu trúc Asparaginase .7 1.1.4 Một số tính chất vai trò Asparaginase 12 1.2 ứng dụng Asparaginase điều trị ung thư bạch cầu cấptínhdịng lympho (acute lymphoblastic leukemia - ALL) 13 1.2.1 Sơ lược hệ thống tế bào m áu 13 1.2.2 Khái quát bệnh ung thư bạch cầu cấp dòng lympho 14 1.2.3 Các thuốc điều trị ung thư bạch cầu cấp dòng lympho 22 1.2.4 Một số thông tin lâm sàng Asparaginase dược dụng 24 1.3 Tạo chế phẩm Asparaginase công nghệ DNA tái tổ hợp 34 1.3.1 Giới thiệu khái quát công nghệ DNA tái tổ hợp 34 1.3.2 Tóm tắt quy trình sản xuất Asparaginase cơng nghệ DNA tái tổ hợp 36 CHƯƠNG 2: BÀN LUẬN 43 2.1 v ề ứng dụng Asparaginase điều trị ung thư bạch cầucấpdòng lympho 43 2.1.1 u ’ nhược điểm Asparaginase hiệu điều trị ung thư u bạch cầu cấp dòng lym .43 2.1.2 So sánh Asparaginase tự nhiên Asparaginase polyethylene glycol hóa 45 2.2 sản xuất Asparaginase công nghệ DNA tái tổ họp 50 2.3 HưĨTig ứng dụng cơng nghệ DNA để sản xuất protein, enzyme trị liệu Việt N am .52 KỂT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 55 DANH MỤC CHŨ VIÉT TẮT Aa : Acid amine ADR ; Adverse Drug Reaction (Tác dụng không mong muốn) ALL : Acute Lymphoblastic Leukemia (Ung thư bạch cầu cấp dòng lympho) Asparaginase : L-asparaginase BAL : Biphenotypic acute Leukemia (Bạch cầu cấp có kháng nguyên bề mặt lympho B T ) BMT ; Bone marrow transplant (Cấy tủy xương) BN : Bệnh nhân CSF : Cerebrospinal Fluid (Dịch não tủy) DNA ; Deoxyribonucleic acid FDA : Food and Drug Administration (Cơ quan giám sát dược phẩm lương thực Hoa Kỳ) GI : Gastrointestinal GST ; Glutathion sulfur transferase IM : Intramuscular (Tiêm bắp) IPTG : Isopropylthio- ß- galactoside IU : International Unit (Đơn vị quốc tế) IV : Intravencular (Tiêm tĩnh mạch) MCS : Multicloning sites (Điểm chép đa dòng) MLL ; Mixed lineage Leukemia NCI ; National Cancer Institute (Viện nghiên ung thư quốc gia Hoa Kỳ) NMCT : Nhồi máu tim PBSCT : Peripheral blood stem cell transplant (Cay te bào gốc máu ngoại vi) RNA : Ribonucleic acid SEER : The Surveillance, Epidemiology, and End Results (TỔ chức điều tra dịch tễ học Hoa Kỳ) WHO ; World Health Organisation (Tổ chức Y tế giới) x-gal : 5-bromo 4-cloro 3-indolyl P"D galactopyranoside Yeu tố đông : Christmas máu IX Yếu tố đông : Proaccelerin máu V Yếu tố đông : Proconvertin máu VII Yếu tố đông máu VIII : Yếu tố chống hemophilia A DANH MỤC BẢNG • Bảng 1.1 : Tỷ lệ mắc ALL tỷ lệ tử vong theo độ tu ổ i 15 Bảng 1.2 : Sự phân loại FAB theo hình thái tế bào 16 Bảng 1.3 : Các type ALL tỷ lệ m ắc .17 Bảng 1.4 : So sánh loại Asparaginase 46 Bảng 1.5: So sánh loại Asparaginase thời gian bán thải 47 thải trừ ! 47 Bảng 1.6: So sánh tỷ lệ gặp ADR Pegaspargase Asparaginase tự nhiên 49 Bảng 1.7 : Các mức độ phản ứng dị ứng 49 Bảng 1.8; Một số sản phẩm sản xuất theo công nghệ 52 DNA tái tổ h ọ p 52 Bảng 1.9: Một số sản phẩm hết hạn patent 54 DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 : Phản ứng Asparaginase cắt liên kết nhóm amino carbon Asparagin Hình 1.2: Phân loại Asparaginase Hình 1.3 :Sơ đồ sinh vật có Asparaginase type vi khuẩn Hình 1.4; Sơ đồ sinh vật có Asparaginase type thực vật Hình 1.5; Chuỗi acid amin Asparaginase Hình 1.6 : Sơ đồ mơ tả cấu trúc EcA II (hình ảnh từ NCBI) Hình 1.7 ; a.cấu trúc phân tử Asparaginase.b cấu trúc đầu tận N c 10 Hình 1.8 : Cơ chế xúc tác Asparaginase với chất L-asparagin 12 Hình 1.9 : Phân nhóm tế bào m áu 14 Hình 1.10; Kỹ thuật DNA tái tổ hợ p 36 Hình 1.11 : Đặc điểm Vector pGEX-2T 38 Hình 1.12: Tóm tắt bước sản xuất Asparaginase 38 ĐẶT VẤN ĐÈ • Ung thư trở thành vấn nạn lớn xã hội Trên giới, năm có khoảng 11 triệu người bị ung thư triệu người tử vong ung thư Hiện nay, ung thư ngày nguy hiểm người mắc ung thư giai đoạn thời gian sống Ung thư bạch cầu cấp dòng lympho bệnh phổ biến tất loại ung thư trẻ em Hàng năm Hoa kỳ có khoảng 2400 trẻ em thiếu niên độ tuổi 20 chẩn đoán mắc bệnh Việt nam, năm 2009 có khoảng 1163 ca số lượng bệnh nhân tăng nhanh năm gần giới nói chung Việt Nam nói riêng Asparaginase nghiên cứu phát triển tác nhân hóa trị liệu hữu hiệu Thuốc sử dụng điều trị giai đoạn công cho bệnh nhân mắc ung thư bạch cầu cấp dòng lympho Asparaginase thủy phân Lasparagin, triệt tiêu nguồn dinh dưỡng tế bào ung thư khiến bị tiêu diệt Hiện nay, Asparaginase nghiên cứu sản xuất công nghệ DNA tái tổ hợp cho hiệu suất cao hon tương đương sinh học với Asparaginase tự nhiên Các hãng dược phẩm hàng đầu cho sản phẩm Pegasparagase (polyethylen glycol Asparaginase) ưu việt Asparaginase tự nhiên Việt Nam, tỷ lệ mắc ung thư bạch cầu cấp dòng lympho gia tăng nên3 nhu cầu sử dụng Asparaginase để điều trị tăng theo Nhưng nay, nước ta chưa sản xuất Asparaginase mà sử dụng L-aspargainase nước ngồi Chính vậy, thực đề tài: “Tổng quan Asparaginase, ứng dụng làm thuốc điều trị ung thư” với mục tiêu: • Tìm hiểu đặc điểm cấu trúc phân tử, nguồn gốc, vai trị, tính chất Asparaginase • Hướng ứng dụng Asparaginase làm thuốc điều trị ung thư bạch cầu cấp dịng lympho • Tóm tắt quy trình sản xuất Asparaginase dược dụng công nghệ DNA tái tổ hợp 49 Bảng 1.6: So sánh tỷ lệ gặp ADR Pegaspargase ĐỘC TÍNH PEGASPARGASE (%)(N=21) ASPARAGINASE TỤ NHIÊN(%)(N=87) Viêm tụy 15 Độc vó’i gan 71 59 Tăng thời gian Prothrombin 15 18 Tăng thời gian partial thromboplastin 34 11 Giảm fibrinogen 29 44 Rối loan TK 18 24 24 • Tăng đường huyết Dị ứng nhẹ (grade 1-2) Dị ứng nặng (grade 3-4) Bảng 1.7: Các mức độ phản ứng dị ứng Grade Grade Grade Grade Grade Khơng có phản ứng dị ứng Phản ứng cục nhẹ (< 10 cm, < 24 giờ) Mày đay Co thăt phê quản, serum sickness, phản ứng dị ứng mãnh liệt (> 10 cm, > 24 hours) Tụt huyêt áp, sock phản vệ 50 Như vậy, Pegaspargase có tác dụng khơng mong muốn tương tự Asparaginase tự nhiên mức độ tỷ lệ khác Một số phản ứng bất lợi nghiêm trọng viêm tụy, tăng đường huyết, dị ứng nặng sock phản vệ, tỷ lệ mắc phải giảm đáng kể dùng Pegaspargase so với dùng Asparaginase tự nhiên Tuy nhiên, số tác dụng không mong muốn tăng thời gian partial thromboplastin độc tính gan Pegaspargase chiếm tỷ lệ cao Asparaginase tự nhiên Năm 1994, FDA cơng nhận Pegaspargase thay Asparaginase trường hợp bệnh nhân tiếp tục dùng Asparaginase Tuy nhiên, đến năm 2006, FDA công nhận Pegaspargase liệu pháp hữu hiệu, thay Asparaginase điều trị bệnh nhân mắc trẻ em người lớn 2.2 v ề sản xuất Asparaginase công nghệ DNA tái tổ hợp Công nghệ DNA tái tổ hợp công nghệ mới, xuất từ năm đầu thập kỷ 70 Lần đầu tiên, năm 1972 Paul Berg tổng hợp phân tử DNA tái tổ hợp từ gene virus gây ung thư khỉ với gene vi khuẩn năm sau đó, Stanley Cohen Herbert Boyer tạo thể sinh vật tái tổ họp Năm 1978, hormone tái tổ hợp Somatostatin sản xuất Cho đến nay, công nghệ DNA tái tố họp ngày đạt thành tựu to lóm nơng nghiệp, y học dược phẩm Công nghệ DNA tái tổ hợp cho phép nâng cao hiệu suất sản xuất protein có chất lượng tương đương snh học với protein tự nhiên Asparaginase nghiên cứu kỹ triển khai để sản xuất cơng nghệ DNA tồn giới Các phịng thí nghiệm khắp quốc gia từ Brazil, Ấn độ đến Mv nghiên cứu phương thức sản xuất Asparginase tối ưu Từ chủng vi khuẩn lấy gene vật chủ, vector biểu hiện, chủng nhân dòng, tất nghiên cứu kỹ Asparaginase có nguồn gốc từ nấm men, 51 nấm, vi khuẩn, nhiên tiến hành lấy mẫu gene gốc, người ta thường lấy từ vi khuân Escherichia coli, Erwinia chrysanthemỉ đặc tính Asparaginase vi khuẩn tiết có tính đặc thù với chất cao, thích họfp để điều trị ung thư Chọn lựa vật chủ để biểu gene chọn lựa quan trọng Đối với Asparaginase có nguồn gốc từ vi khuẩn nên vi khuẩn chọn lựa tốt để làm vật chủ Đặc biệt Escherichia coli gene E.coli nghiên cứu kỹ nên có tương đối đầy đủ liệu cần thiết để tiến hành sản xuất Ngồi ra, E.coli cịn có khả biểu gene cao dễ kiểm soát, vector chuyển dịng lựa chọn đa dạng, sản phẩm điều khiển để tiết môi trường nuôi cấy Tế bào E.coli BL21 sử dụng rộng rãi cơng nghệ DNA tái tổ hợp có khả biểu gene mạnh Các vector chuyển dòng chọn lựa dựa thể vật chủ Thông thường vector hay chọn pưC19, pBR322 Ngày nay, vector chuyển dịng thiết kế khơn khéo để thuận tiện việc sử dụng Một vector đạt chuẩn có vùng gene đánh dấu, điều hịa vùng đa nhân dịng Đe kiểm sốt q trình biểu gene, người ta chèn thêm vào plasmid gen ức chế hay cảm ứng việc phiên mã Các tác nhân cảm ứng thường dùng arabinose, lactose, IPTG cảm ứng nhiệt Để đảm bảo hiệu suất dịch mã, người ta thiết kế vùng liên kết với ribosom plasmid Nhờ vậy, protein đích luân phiên phiên mã dịch mã Đen nay, hàng trăm protein tái tổ hợp đưa vào sản xuất công nghiệp cho sản lượng lớn với mặt hàng protein, enzyme sử dụng ngành y 52 Bảng 1.8; Một số sản phẩm đưọc sản xuất theo công nghệ DNA tái tổ hợp Hãng Doanh số Mỹ (Tỷ USD) Doanh số giới (Tỷ USD) Biogen 260 724 Genentech 245 625 Hormon tăng trưởng người Genetech 270 575 u tơ hoạt hóa plasminogen mơ Genetech 180 230 Vaccin viêm gan B Insulin Các số thống kế bảng cho thấy lợi nhuận khổng lồ công ty kiếm từ sản phẩm protein tái tổ hợp đồng thời nói lên vai trò quan trọng protein tái tổ hợp việc điều trị bệnh cho người 2.3 Hưóng ứng dụng cơng nghệ DNA để sản xuất protein, enzyme trị liêu Viêt Nam • • Cơng nghệ sinh học lĩnh vực công nghệ cao Đảng Nhà nước ưu tiên phát triển Nghị 18/CP Thủ tướng phủ khẳng định: “ Cùng với ngành công nghệ mũi nhọn khác (công nghệ thơng tin, cơng nghệ tự động hóa cơng nghệ vật liệu mới), Cơng nghệ sinh học góp phần khai thác tối ưu nguồn nhân lực đất nước phục vụ phát triển sản xuất nâng cao chất lượng sống” Tuy nhiên, công nghệ sinh học Việt Nam giai đoạn đầu phát triển có số bước tiến khả quan 53 Các công ty viện nghiên cứu nghiên cứu săn xuất loại vaccin cần thiết viêm gan B, viêm não Nhật Bản, vaccin tả uống, vaccin phòng dại nhiều loại vaccin khác thưong hàn, ho gà, uốn ván Từ năm 1995, kỹ thuật sinh học đại nghiên cứu lập đồ gen, chẩn đoán phân tử, tạo vi sinh vật tái tổ hợp, chuyển gen động, thực vật, tạo vaccin tái tổ họp triển khai nghiên cứu Viện nghiên cứu trường đại học khắp đất nước: • Năm 1997, hồn thiện quy trình cơng nghệ chuyển gen hormon sinh trưởng người vào cá vàng (Carassius aurantus) • Năm 2001, thành công việc chuyển gen hormon sinh trưởng người vào cá Chạnh (Misgumus angullicaudantus) vi tiêm • Năm 2005, viện công nghệ sinh học chuyển gen hormon sinh trưởng người vào cá chép (Cyprinus carpió) để cá có tốc độ tăng trưởng nhanh Như vậy, CNSH Việt Nam nói chung có bước phát triển định lĩnh vực nuôi cấy mô, công nghệ enzyme, thu nhận sinh khối vi tảo, sản xuất vaccin, kháng sinh Công nghệ gen bắt đầu số lương thực, số động vật Tuy nhiên, việc sản xuất thuốc điều trị công nghện gen, Việt Nam không đầu tư đủ vào chiến lược phát triển công nghệ sinh học Với điều kiện khó khăn thiếu đội ngũ khoa học trình độ cao, vổn đầu tư, máy móc thiết bị khoa học đại, hưĨTig phát triển công nghệ sinh học Việt Nam chủ yếu nhằm vào chế phẩm hết hạn bảo hộ độc quyền sản phẩm (patent) (thường từ 15-20 năm) 54 r ^ r Bảng 1.9: Một sô sản phâm hêt hạn patent TÊN SẢN PHẩM BỆNH ĐIÈU TRỊ NĂM HẾT HẠN PATENT Insulin Tiều đường 2001 Interferon a Interferon ß Hormon tăng trưởng người tPA(tissue-type plasminogen) GCSF(GranuIocytecolony stimulating factor) Viêm gan siêu vi c, mụn cóc qua đường sinh dục Viêm gan siêu vi c, mụn cóc qua đường sinh dục, ung thư, xơ cứng Thiêu tăng trưởng (Growth defiency) 2002 2003 2003 NMCT cấp, nhồi máu phổi 2004 Chemotherapy-induced neutropenia 2006 Với bước tiến công nghệ sinh học nước, Việt nam hồn tồn có khả chủ động nghiên cứu sản xuất Asparaginase từ quy mơ phịng thí nghiệm đến quy mơ lón đáp ứng nhu cầu điều trị nước, giảm giá thành thuốc 55 KÉT LUẬN VÀ ĐÈ XUẤT b Tìm hiểu cấu trúc phân tử, nguồn gốc vai trị Asparaginase ❖ Asparaginase enzyme thuộc nhóm hydrolase, cấu trúc phức tạp, khối lượng phân tử 140 kDa, gồm tiểu phân có cấu trúc tương đồng trung tâm hoạt động Mỗi cặp tiểu phân (A-C, B-D) kết hợp với tạo thành dimer trung tâm hoạt động, cấu trúc tetramer thiết yếu cho hoạt động enzym Asparaginase triệt tiêu nguồn dinh dưỡng tế bào ung thư cách thủy phân Asparagin thành Aspartat Amonia ❖ Asparaginase có nguồn gốc đa dạng, phân thành nhóm: type thực vật, type vi khuẩn type Rhizobium elti Nhưng có Asparaginase Escherichia coỉi Erwinia chrysanthemi có khả tiêu diệt tế bào ung thư ❖ Tìm hiểu yếu tố liên quan đến hoạt động Asparaginase: khoảng pH hoạt động đến 8,5, khoảng nhiệt độ hoạt động 20°c đến 60 nhiệt độ hoạt động tối ưu 50 °c, chất ức chế: 5-diazo-4-oxo-Lnorvaline, giá trị Km 0,0125 mM ứng dụng điều trị ung thư bạch cầu cấp dòng lympho ❖ Asparaginase làm tăng tỷ lệ thuyên giảm bệnh nhân mắc tới 90% bệnh nhân tái phát (trước chưa sử dụng Asparaginase) 62,5% với liều 12000 lU/m^ Tuy nhiên, Asparaginase gây nhiều tác dụng không mong muốn nguy hiểm viêm, chảy máu tụy, rối loạn chức gan, sock phản vệ ❖ Chế phẩm Pegaspargase Asparaginase gắn thêm phân tử polyethylene glycol 5000 liệu pháp hữu hiệu thay Asparaginase tự nhiên Pegaspargase làm giảrPx liều dùng giảĩĩi đáng kể tác dụng không mong muốn mẫn cảm, sock phản vệ 56 Sản xuất Asparaginase công nghệ DNA tái tổ hợp Tóm tắt quy trình sản xuất Asparaginase công nghệ DNA tái tổ hợp cách chọn vector, sinh vật nhân dòng sinh vật chuyển gen ❖ Việt Nam không đủ điều kiện trang thiết bị đại sở xác định yếu tố thiết yếu quy trình sản xuất Asparaginase máy móc, nguồn nguyên liệu tại, tiến hành nghiên cứu sản xuất Asparaginase ĐỀ NGHỊ Từ nghiên cứu trên, chúng tơi có đề nghị sau: ^ Nghiên cứu, thu thập thông tin sử dụng Asparaginase Pegaspargase lăm sàng viện Việt Nam ^ Tạo chế phẩm Asparaginase công nghệ DNA tải tố hợp quy mơ phịng thỉ nghiệm TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng V iệt Bernard r.glick, jack j.pastemak (2007), Công nghệ sinh học phân tử nguyên lý ứng dụng công nghệ tái tổ hợp, NXB khoa học kỹ thuật, tr 56-74 Bernard R.glick, Jack j.pasternak (2007), Công nghệ sinh học phân tử, NXB khoa học kỹ thuật, tr 17, 301-303 Lê Trần Bình, Phan văn Chi, Nông văn Hải, Trương Nam Hải, Lê Quang Huấn (2003), Áp dụng kỹ thuật phân tử nghiên cứu tài nguyên vi sinh vật Việt Nam, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, tr 114-169 Bộ mơn Hóa sinh (2002), Hóa sinh học giáo trĩnh Trường đại học Dược Hà Nội, tr 51 -192 Bộ môn Hóa sinh (2002), Thực tập hóa sinh, Trường đại học Dược Hà Nội, tr 23-43 Bộ môn vi sinh sinh học (2008), Vỉ sinh /7ỌC,Trường đại học Dược HàNội(2008) tr 30-44 Bộ y tê (2002), Dược thư Quốc gia Việt Nam Trl 57-159 Phạm Thị Châu, Phan Tuấn Nghĩa (2006), Công nghệ sinh học: enzym ứng dụng, NXB giáo dục tr 99-100 Hồ Huỳnh Thùy Dương (1997) ,Sinh học phân tử , Nhà xuất giáo dục 10 Trịnh Đình Đạt (2006), Cơng nghệ sinh học, NXB giáo dục tập tr.7-33, 51-61 11 Nguyễn Bá Đức (2009), ưng thư học đại cương, Nhà xuất Giáo Dục 12 Phạm Đình Hổ (2006), Dì truyền học, Nxb giáo dục tr378-399 13 Nguyển thị Hương (2007), “ Nghiên cứu khả biểu gen tổng hợp Interferon escherỉchìa coli BL21 tái tổ hợp” KL tốt , nghiệp dược sĩ khóa 2002-2007 14 Lê Đình Lưong, Phan Cự Nhân (2003), Cơ sở di truyền học, NXB giáo dục tr 92-97 15 Lê Đình Lương, Quyền Đình Thi (2003) Kỹ thuật di truyền ứng dụng NXB Đại học quốc gia Hà nội tr 64-66 16 Phan Tuấn Nghĩa, Bùi Phương Thuận (2004), Bài giảng kỹ thuật công nghệ sinh học, Nhà xuất Đại học khoa học tự nhiên- Đại học quốc gia Hà Nội 17 Khuất Hữu Thanh (2006), Kỹ thuật gen - nguyên lỷ ủng dụng, NXB khoa học kỹ thuật, tr 127-137, 221-228 18 Nguyễn Văn Thanh (2007), Hỏa sình phân tử Nhà xuất Giáo Dục, tr 102-140 Tiếng A nh 19 Aghaiypour K., Wlodawer A., and Lubkowski J.(2001), '^Structural basis for the activity and the substrate speci_city o f Erwinia Chrysantemi L-asparaginase”, Biochem Vol.40 pp.5655-5664 20 Aghaiypour K, Wlodawer A, Lubkowski J (2001), ''Structural basis for the activity and substrate specificity o f Erwinia chrysanthemi LAsparaginase” Biochemistry; 40: 5655-64 21 Asselin BL, Whitin JC, Coppola DJ, Rupp IP, Sallan SE and Cohen HJ (1780-1786) Comparative pharmacokinetic studies o f three Asparaginase preparations ” Journal of Clinical Oncology, Vol 11 22 Aung HP, Bocola M, Schleper S, Rohm KH (2000), “Dynamics o f a mobile loop at the active site o f Escherichia coli Asparagines ”, Biochim Biophys Acta 1481: 349-359 23 Avramis VI, Panosyan EH {2005) , “Pharmacokinetic/ Pharmacodynamic Relationships o f Asparaginase Formulations”, Clin Pharmacokinet; 44: 367-93 24 Avramis Vassilios I, Tiwari Prakash Nidhi Asparaginase (native ASNase or pegylated ASNase) in the treatment o f acute lymphoblastic leukemia”, Int J Nanomedicine 2006; 1(3):241-54 25 Borek D, Jaskolski M (2001): “Sequence analysis o f enzymes with Asparaginase activity” Ado Biochim Pol 2001;48(4):893-902 26 Broome JD (1961), “Evidence that the L-asparaginase activity o f guinea pig serum is responsible for its antilymphoma effects ”, J Exp Med 1963 July 1; 118(1): 99-120 27 Broome JD (1968) ''Studies on the mechanism o f tumor inhibition by LAsparaginase: effects o f the enzyme on Asparagine levels in the blood, normal tissues, and 6C3HED lymphomas o f mice: differences in Asparagine formation and utilization in Asparaginasesensitive and -resistant lymphoma cells”, J Exp Med; 127:1055-72 28 C P Cornea, I Lupescu, I Vatafu, T Caraiani, V G Savoiu, GH Campeanu, I Grebenisan , GH P Negulescu, D Constantinescu (2002), ''Production o f L-asparaginase II by Recombinant Escherichia Coli Cells”, Roum, Bioteclmol lett Vol 7,No 3, 716722 29 Duval M., Suciu S., Ferster A., Rialand X., Nelken B., Lutz P., Benoit Y., Robert A., Manel A-M., Vilmer E., Otten J., and Philippe N.(2002), ''Comparison o f Escherichia coli -Asparaginase with Erwinia-Asparaginase in the treatment o f childhood lymphoid malignancies: results o f a randomized European Organisation for research and treatment o f cancer-children's leukemia group phase trial” Blood Vol.99, No.8, pp.2734-2739 , 30 Enzon, Inc Pegaspargase Oncaspar® (PEG-L-asparaginase) prescribing information Piscataway, NJ; 1998 Nov 31 Ertel IJ, Nesbit ME, Hammond D, Weiner J, Sather H,(1979) ‘ ‘^Effective dose o f L-asparaginase for induction o f remission in previously treated children with acute lymphocytic leukemia ” , Cancer Res Oct;39(10):3893-6 32 Frederick R Blattner (1997), ''The complete genome sequence o f Escherichia coli k l2 ”, Science 277, 1453 33 Gerald K McEvoy (2004), AHFS Drug Information - American Society of Health System, Asparaginase 10:00 34 Ho PPK, Milikin EB, Bobbitt JL, et al (1970), "Crystalline Lasparaginase from Escherichia coli B, I Purification and chemical characterization”, J Biol Chem; 245: 3708-15 35 Kenneth E Rudd (1999), "eco gene: a genom sequence database for Escherichia coli k l2 ” Nucleic Acids Research, 2000, Vol 28, No 60-64 36 Kozak M, Jaskolski M, Rohm KH (2000), ‘Preliminary crystallographic studies o f Y25F mutant o f periplasmic Escherichia coli L Asparaginase ”, Acta Biochim Pol 2000;47(3):807-14 37 Lubkowski J, Palm GJ, Gilliland GL, Derst C, Rohm KH, Wlodawer A (1996), “Crystal structure and amino acid sequence o f Wolinella succinogenes L-asparaginase” , Eur J Biochem 1996 Oct l;241(l);201-7 38 Lubkowski J, Wlodawer A, Ammon HL, Copeland TD, Swain AL (1994), “Refined crystal-structure o f acinetobacter glutaminasificans glutaminase Asparaginase” Acta Crystallogr D b; 50: 826-32 , 39 Lubkowski J, Wlodawer A, Housset D, Weber IT (1994), Structural characterization o f Pseudomonas 7a glutaminase-Asparaginase Biochemistry 1994 Aug 30;33(34); 10257-65 40 Magdy M Youssef, Mohammed A Al-Omair (2008) ‘^Cloning, Purification, Characterization and Immobilization of L- asparaginase II from E coli W3110” , Asia Jounal of Biochemistry 3(6): 337-350 41 Mario Sanchesl, Sandra Krauchencol and Igor Polikarpov,l Bentham Science Publishers Lt, “Structure, Substrate Complexation and Reaction Mechanism o f Bacterial Asparaginases”, Current Chemcial Biology, 2007, 1, 75-86 751872-3136/07 42 Michalska K, Bujacz G, Jaskolski M (2006), “Crystal structure o f plant Asparaginase”, J Mol Biol 2006 Jun 30;360(1):105-16 Epub 2006 May 15 43 Michalska K, Jaskolski M.( 2006): ""Structural aspects o f Lasparaginases, their friends and relations” ,Acta Biochim Pol 2006;53(4):627-40 44 Ortega JA, Nesbit ME Jr, Donaldson MH, L-asparaginase, Vincristin, and prednisone for induction o f first remission in acute lymphocytic leukemia”, Cancer Res 1977; 37: 535-540 45 Ortlund E, Lacount MW, Lewinski K, Lebioda L (2000), ''Reactions o f Pseudomonas 7A glutaminase-Asparaginase with diazo analogues o f glutamine and Asparagine result in unexpected covalent inhibitions and suggests an unusual catalytic triad ThrTyr-Glu” Biochemistry; 39: 1199-1204 46 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc Oncaspar® (pegaspargase) comprehensive product profde 1994 Dec 47 Robert J Esterhay, Jr., Peter H.Wiemik, William R.Grove, Susan D.Markus, and Margaret N.Wesley, "Moderate dose methotrexate, Vincristin, Asparaginase, and Dexamethason for Treatment o f Adult Acute Lymphocytic Leukemia” Blood, Vol.59, No.2 (February), 1982 48 Sanches M, Barbosa JARG, Oliveira RT, Abrahao-Neto J, Polikarpov (2003), '"‘Structural comparison o f Escherichia coli L' asparaginase in two monoclinic space groups ” Acta Crystallogr D; , 59:416-22 49 Stephan Surzycky (2000), "Basic techniques in Molecular Biology”, Springer- Verlag, p 101-119, 163-192, 406-423 50 Swain AL, Jaskolski M, Housset D, Rao JK, Wlodawer A (1992): “Crystal structure o f Escherichia coli L-asparaginase, an enzyme used in cancer therapy” ,Proc Natl Acad Sci U S A 1993 Feb 15;90(4): 1474-8 51 Vellard M.(2003), ‘The enzyme as drug: application o f enzymes as pharmaceuticals” Biotechn Vol.14, pp 1-7 52 Wikman L., Krasotkina J., Kuchumova, A., Sokolov, N., an Papageorgiou, crystallographic (2005), analysis “Crystallization and preilirninary o f L-asparaginase from Erwinia Carotovora”, Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun 2005 April 1; 61(Pt 4): 407^09 Andersson, Trang web 53 http://bloodjournal.hematologylibrary.org 54 http://www.cancer.gov/ 55 http://www.cancer.org 56 http://emedicine.medscape com 57 http://gib.genes.nig.ac.jp 58 http://pubmed.org 59 http://seer.cancer.gov 60 http://trimer.tamu.edu http://www.bccancer be ca 62 http://www.leukemia-lymphoma.org 63 http://www.lls.org 64 http://www.molecularstation com Http://www ungthuvn org 66 Http://Brenda-enzymes info ... nay, nước ta chưa sản xuất Asparaginase mà sử dụng L-aspargainase nước ngồi Chính vậy, chúng tơi thực đề tài: ? ?Tổng quan Asparaginase, ứng dụng làm thuốc điều trị ung thư? ?? với mục tiêu: • Tìm... tử, nguồn gốc, vai trị, tính chất Asparaginase • Hướng ứng dụng Asparaginase làm thuốc điều trị ung thư bạch cầu cấp dòng lympho • Tóm tắt quy trình sản xuất Asparaginase dược dụng công nghệ DNA... tác nhân kháng ung thư khác giai đoạn điều trị thuyên giảm ALL Asparaginase kết hợp với tác nhân kháng ung thư khác hóa trị liệu thu kết khả quan nhiên việc điều trị gặp phải tác dụng không mong